<h1>재료 및 방법</h1><h2>시료 및 추출</h2><p>본 연구에 사용된 고추 잎은 (주)고추와 육종에서 고추잎분말로 수령하였으며, \( 70 \% \) ethanol과 혼합 후, \(1\)시간 동안 sonication하고 \(24\)시간 냉침하였다. 이후, paper filter로 여과하고 감압농축하여 조추출물 CP\(1\)을 조제하여 실험에 사용하였다.</p><h2>Sepbox chromatography separation</h2><p>Sepbox 시스템은 HPLC와 SPE의 장점을 결합하고 HPLC/SPE/ HPLC 설정과 결합되어 \(2\)차원 분리가 가능한 기술이다. 본 연구에서는 Sepbox \(2\)D-\(250\)시스템(Sepiatec GmbH, Berlin, Germany)을 이용하여 고추 잎 추출물(CP\(1\))을 분리하였으며, sepbox 분획과정은 다음과 같다. \( \mathrm{C} 4 \) reverse-phase resin (Sepiatec) \( 0.8 \mathrm{~g} \)에 추출물 \( 0.25 \mathrm{~g} \)을 흡착시킨 후, C\( 4 \) reverse-phase HPLC column을 사용하여 \(12\)개의 분획으로 분리하였으며, 이후 분획물은 \(12\)개의 SPE trap column으로 이동하게 되고, 각 SPE column의 분획물은 C\(18\) RP HPLC 컬럼에서 최종적으로 분리된다. 이들은 UV \( (254 \mathrm{~nm}) \) 및 ELSD 검출기를 통해 분석되었으며, 총 \( 288 \)개의 소분획(\(1\)~\(12\)T-\(1\)~\(24\)로 명명)을 확보하였다. 분리 조건은 Table \(1\), \(2\)에 나타내었다.</p><h2>HPLC 및 LC-MS, UHPLC-HRMS analysis</h2><p>HPLC 분석을 위해 Agilent \(1200\) HPLC/MS (Agilent Co., Santa Clara, CA, USA) 장비를 사용하였으며, column은 Phenomenex \( 5 \mu \mathrm{m} \mathrm{C} 18\), \(150 \times 4.6 \mathrm{~mm} \)을 사용하였다. 분석조건은 \( 0.05 \% \mathrm{FA} \) (formic acid)를 함유한 water와 acetonitrile을 사용하여, \( 0.7 \mathrm{mL} / \mathrm{min} \)의 유속, \( 10 \mu \mathrm{L} \)의 시료를 주입하여 gradient 조건( \( \mathrm{ACN} 10-100 \%) \)으로 \(30\)분 동안 분석하였다. UHPLC-HRMS 분석을 위해 Vanquish Flex UHPLC/Q-exactive Orbitrap MS (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA)를 사용하였고 \( 0.3 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) 유속으로 \(10\)분간 \( \mathrm{HPLC} \)와 동일한 용매조건으로 분석하였다.</p><h2>\( \alpha \)-Glucosidase inhibitory activity assay</h2><p>\( \alpha \)-Glucosidase는 장의 말단에 존재하는 당분해효소로서 이들의 저해제는 탄수화물의 포도당으로 소화를 지연시킴으로써, 혈당치를 감소시키는 역할을 한다. \( \alpha \)-Glucosidase inhibitory activity의 측정방법은 다음과 같다. 샘플 \( 2 \mu \mathrm{L} \)에 \( 125 \mathrm{nM} \alpha \)-glucosidase 효소액(Sigma-Aldrich, St. Louis, MA, USA) \( 40 \mu \mathrm{L}\), \(200 \mathrm{mM} \) potassium phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} 7.0)\) \(38 \mu \mathrm{L} \)를 혼합하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(10\)분간 배양한 후 \( 2.5 \mathrm{mM} \) p-nitrophenyl \( \alpha \mathrm{D} \)-glucopyranoside (Sigma-Aldrich) \( 20 \mu \mathrm{L} \)를 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \(20\)분 간 반응시켰다. 이후, \( 0.2 \mathrm{M} \) sodium carbonate (Sigma-Aldrich) \( 75 \mu \mathrm{L} \)로 반응을 정지시켜 \( 405 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 저해활성은 다음과 같이 계산하였다.</p>
Agilent \(1200\) HPLC/MS는 어느 나라에서 제조했어?
USA