<h1>재료 및 방법</h1><h2>재료</h2><p>다시마는 (주)청호씨푸드에서 구입하여 사용하였다.</p><h2>실험동물 및 식이</h2><p>실험동물은 체중 \( 170 \sim 180 \mathrm{~g} \) 내외의 암컷 흰쥐(Sprague-Dawley계 생후 7주)를 대구 효창 사이언스로부터 제공받았고 7일 동안 적응시켰다. 실험동물은 cage에 각각 분리시키고 고형사료와 물을 자유롭게 섭취하도록 하였다. 실험동안 동물들은 \( 22 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \) 의 온도와 \( 60 \pm 5 \% \) 상대습도로 유지시켰고 총 21 마리의 횐쥐를 7 마리씩 3 군으로 나누었다(Table 1.). 정상군(NOR group)과 대조군(CON; \( \mathrm{CCl}_{4} \)-treated group)은 \( 0.9 \% \) saline을, 시료군(LFC; Laminaria japonica fucoidan extract and \( \mathrm{CCl}_{4} \)-treated group)은 다시마 푸코이단 추출물 \( (100 \mathrm{mg} / \mathrm{kg}) \)을 \( 1.5 \mathrm{ml} / \mathrm{kg} \) 씩 복강 내에 14 일간 매일 투여하고 15일 째 되는 날에 대조군과 시료군에서 실험동물의 간 손상을 유도하기 위해 \( \mathrm{CCl}_{4} \) 를 olive oil에 1:1 비율로 용해시켜 \( 3.3 \)\( \mathrm{m \ell} / \mathrm{kg} \) 의 용량을 복강 내로 투여하여 간 독성을 유발시켰다. \( \mathrm{CCl}_{4} \) 를 투여하고 절식 시킨 뒤 12 시간 후에 ether로 마취하고 희생시켜서 혈액을 채취하고 간을 적출하여 실험하였다.</p><h2>푸코이단 추출</h2><p>푸코이단은 Tako 방법을 변형하여 추출하고 동결 건조하여 사용하였다.</p><h2>혈액 채취 및 간 적출</h2><p>시료 투여 기간 종료 후 실험동물을 ether 마취 하에서 심장에서 채혈하여 실온에서 30분 간 방치한 후 \( 3000 \mathrm{rpm}, 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 10 분간 centrifuge하여 혈청을 분리하여 실험에 사용할 용량을 각각 분주하여 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \) deep freezer에 보관하여 실험에 사용하였고, 간은 4 엽을 전부 적출하여 \( 0.9 \% \) 생리 식염수로 세척 여지로 흡착한 후 \( -70^{\circ} \mathrm{C} \) deep freezer에 보관하여 실험에 사용하였다.</p><p>간 무게 10 배의 solution (\( 10 \mathrm{mM} \) tris, \( 0.07 \mathrm{M} \) saccharose, \( 0.1 \mathrm{mM} \) EDTA, \( 0.2 \mathrm{M} \) mannitol, in dissolved \( 0.1 \mathrm{~N} \mathrm{~HCl} \) )을 넣어 균질화한 후, \( 600 \times \mathrm{g}\), \(4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \( 10 \mathrm{~min} \) 원심분리한 상등액을 다시 \( 8,000 \times \mathrm{g}\), \(4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \( 10 \mathrm{~min} \) 원심분리하여 얻은 pellet에 \( 0.1 \mathrm{M} \) phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} 7.0 \) ) \( 5 \mathrm{ml} \) 넣어 mitochon-drial fraction으로 사용하였다.</p>
Pellet에 0.1M phosphate buffer (pH7.0) 의 양은?
pellet에 \( 0.1 \mathrm{M} \) phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} 7.0 \) ) \( 5 \mathrm{ml} \)