<h1>재료 및 방법</h1><h2>함초 시료 및 추출물 조제</h2><p>함초의 채취 시기별 이화학적 특성을 검토하기 위하여 함초가 생육하고 있는 남해안 지역에서 6월, 8월 및 10월에 시료를 직접 채취하여 사용하였다. 시기별로 채취한 함초는 음건시킨 후 분쇄하여 사용하였으며, 이들 함초 분말을 증류수 및 \( 50 \% \) 에탄올에 각각 \( 2 \%(w / v) \) 농도로 첨가하여 상온에서 1시간 교반한 후 여과시킨 여액을 실험에 사용하였다.</p><h2>함초의 채취시기에 따른 추출물의 총당 측정</h2><p>함초의 채취 시기별 수용성 및 에탄올 추출물의 총당은 phenol-sulfuric acid법으로 측정하였다. 즉, 시험관에 \( 2 \% \) 함초 추출물을 각각 \( 0.5 \mathrm{ml} \) 씩 취하고, 동시에 표준용액을 \( 0.5 \) \( \mathrm{ml} \)씩 각각 취하여 \( 5 \% \) 정제페놀수를 \( 0.5 \mathrm{ml} \) 가해 잘 혼합시켰다. 여기에 농황산 \( 2.5\) \(\mathrm{ml} \)를 순간적으로 가하여 발열반응에 의하여 발색시켜 20분 경과후 \( 490 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 검량선으로부터 구해진 전당량의 비율로 총당 함량을 계산하였다.</p><h2>함초의 채취시기에 따른 추출물의 총 폴리페놀 함량 측정</h2><p>총 폴리페놀 화합물의 함량은 페놀성 물질이 phosphomolybdate와 반응하여 청색을 나타내는 현상을 이용한 Folin-Denis법을 약간 변형시켜 측정하였다. 즉, 함초의 채취시기별 수용성 및 에탄올 추출물 \( 2\) \( \mathrm{ml} \)에 Folin-ciocalteu phenol reagent \( 2\mathrm{ml} \)를 첨가하여 잘 혼합하고 3분간 실온에서 방치하였다. 정확히 3분 동안 반응시킨 후 \(\mathrm{Na}_{2}\mathrm{CO}_{3} \) 포화용액 \( 0.4\mathrm{ml} \)을 가하여 혼합하고 증류수를 첨가하여 \(4 \mathrm{ml} \) 로 만든 다음, 실온에서 1시간 방치하여 상층액을 취하여 \( 725 \mathrm{~nm} \)에서 OD값을 측정하였다. 이때 총 폴리페놀 화합물은 tannic acid를 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 함량을 구하였다. 표준곡선은 tannic acid \( 1 \mathrm{~g} \)을 \( 50 \% \) 메탄올용액 \( 1 \mathrm{~mL} \)에 녹이고 최종농도가 \(0\), \(50\), \(100\), \(150\), \(200\), \(300\) 및 \( 500 \mu \mathrm{g} / \mathrm{ml} \) 용액이 되도록 취하여 시료 측정과 동일한 방법으로 \( 725 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하여 작성하였다.</p><h2>함초의 채취시기에 따른 추출믈의 가용성 고형분, \( \mathrm{pH} \), 산도 및 색도 측정</h2><p>함초의 채취 시기별 수용성 및 에탄올 추출물의 가용성 고형분(Soluble solid)은 디지털 당도계(Refractometer PR-101a, Atago Co., Ltd. Japan)로 측정하여 \( { }^{\circ} \) Brix로 표시하였다. 함초의 채취 시기별 수용성 및 에탄을 추출물의 \( \mathrm{pH} \)는 \( \mathrm{pH} \) meter (Methrohm 691, Swiss)로 직접 측정하였고, 산도는 시료 용액 \( 10 \mathrm{ml} \)에 각각 증류수 \( 50 \mathrm{ml} \)를 가한 후 잘 흔들어 \(1\%\) phenolphtalein 용액을 4~5 방울 떨어트리고 \( 0.1 \mathrm{~N} \) \( \mathrm{NaOH} \) 로 적정한 후 그 소모량을 측정하여 아래의 식으로 총산도를 환산하였다. 총 산도는 citric acid 값인 \(0.0064\)를 계산식에 적용하였다.</p><p>Total acidity \( (\%)=( \) Consumed \( 0.1 \mathrm{~N}\) \(\mathrm{NaOH}\) \( \mathrm{ml} \times 0.0064 \) \( \times \) factor \( \times 100 \) ) / sample \( \mathrm{ml} \)</p><p>함초의 채취 시기별 수용성 및 에탄을 추출물의 색도는 색차계(Handy colorimeter NR-3000, Nippon enshoku, Japan)를 이용하여 hunter's value \( L^{*} \) (명도), \( a^{*} \) (적색도), \( b^{*} \) (황색도) 값으로 측정하였다.</p>
발열반응에 의해 발색시킨 용액은 어떤 방법을 이용해서 전당량의 비율을 구해?
흡광도를 측정