<h1>재료 및 방법</h1><h2>애기장대의 돌연변이 유기</h2><p>본 연구에 공시된 애기장대는 생태형이 Wassilewskija(Ws)로서 Arabidopsis Biological Resource Center (ABRC)로부터 제공받았으며 돌연변이 유기원인 1,2:3,4-die-poxybutane (DEB)은 Sigma (USA)에서 구입하여 사용하였다. 애기장대 씨앗을 16시간 동안 수침 시킨 후 DEB가 \(18 \sim 22 \mathrm{mM} \)로 조절된 용액에 \( 25^{\circ} \mathrm{C}\), 4시간 동안 처리한 다음 5회 수세하여 vermiculite와 peatmoss가 \( 1: 1 \)로 혼합된 배양토를 넣은 플라스틱 파종상 \( (70 \times 40 \mathrm{~cm}) \)에 \( 4-5 \)립 \( / \mathrm{cm}^{2} \)의 밀도로 파종하고 \( 26^{\circ} \mathrm{C}\), 24간 연속광\( (8,000 \mathrm{Lux}) \) 상태의 생장실하에서 생육시켰다. 애기장대의 생장에 필요한 관수는 플라스틱 받침대를 이용하여 3일 간격으로 하부 관수를 하였으며 6일 간격으로 하이포넥스 용액을 희석하여-지비하였다. \( \mathrm{M}_{1} \) 개체에서 수확된 종자 중 일부를 포트 \( (15 \times 15 \mathrm{~cm}) \) 에 49립 파종하고 주요 형질별로 돌연변이의 출현정도를 조사하고 선발하였다. 선발된 돌연변이체는 다음 세대에서 개체별로 포트에 심어 돌연변이 형질이 계속 유전되는지를 조사하였다. 돌연변이가 유기된 주요 형질별로 \( \mathrm{M}_{2} \) 세대를 자식 시키고 \( \mathrm{M}_{3} \) 체대에서 돌연변이체와 야생형과의 상호교배를 수행하여 그들의 \( \mathrm{F}_{1} \) 및 \( \mathrm{F}_{2} \) 집단을 양성하고 주요 형질별로 야생형과 돌연변이체의 분리비를 조사하였다.</p><h2>실체 현미경적 관찰</h2><p>야생형, im1, gev, yev mutants의 잎을 \( 0.8 \% \) agarose 고체 배지 위에 두고 Zeiss stemi 200-C 실체현미경을 사용하여 \( 1.6 \times 10 \)과 \( 4 \times 10 \)의 배율로 관찰하고 사진촬영을 하였다.</p><h2>주사 전자현미경적 관찰</h2><p>애기장대를 파종하고 2 주 후에 잎을 채취하고 가로 \( 1\mathrm{~mm} \)와 세로 \( 3 \mathrm{~mm} \) 크기로 잘라 사용하였다. 식물 재료는 \( 2.5 \% \) glutaraldehyde \( (\mathrm{v} / \mathrm{v}) \)를 \( 0.1 \mathrm{M} \) 용액에 고정한 후 phosphate buffer (\(\mathrm{pH} \) 7.2)로 2회 세척하였다. 그리고 \(0.1\%\) osmium tetraoxide \( (\mathrm{w} / \mathrm{v}) \)를 \( 0.1 \mathrm{M} \) phosphate buffer (\(\mathrm{pH} \) 7.2) 용액에 밤새 두어 고정하였다. 그리고 초순수 물을 사용하여 20 분간 세척하고 에탄올 농도를 \( 10 \%, 20 \% \) 에서 \( 90 \% \) 까지 점차 증가시키고 \( 100 \% \) 에서 overnight하여 탈수시켰다. 그 다음 에탄올을 \( 100 \% \) 에서 아세톤 : 에탄올의 비율을 \( 4: 1,3: 1,2: 1,1: 1 \) 로 하여 각각 1시간씩 둔 다음 \( 100 \% \) 아세톤에 overnight시켰다. 아세톤을 제거하기 위하여 아세톤과 epon araldite를 \( 1: 1 \) 로 혼합한 용액에 over-night 시켜 튜브의 뚜껑을 열어 아세톤을 증발시키고 \( 100 \% \) Epon Araldite 용액에 옮겼다. 그리고 2,3,6-tri-dimethy laminoethyl phenol과 혼합하고 mold에 넣고 \(37^{\circ} \mathrm{C} \) 에 over-night시키고 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 48시간 두어 완전히 결정화시킨 다음 ultramicrotome으로 section하여 관찰하였다.</p><h2>엽록체 돌연변이체의 유전분석</h2><p>애기장대를 파종하고 약 3 주 후에 꽃이 피게 되는데, 완전히 개화하지 않은 꽃을 선택하여 제웅하였다. 상호교배를 통하여 \( \mathrm{F}_{1} \) 종자를 얻고 이를 파종하여 \( \mathrm{F}_{1} \) 식물체를 얻은 다음, 이들을 자가수분 되도록 두어 \( \mathrm{F}_{2} \) 종자를 얻었다. \( \mathrm{F}_{2} \) 종자를 파종하고 4 주 후에 분리비를 조사하였다. 그리고 야생형 : 돌연변이체의 분리가 \( 3: 1 \) 로 되는지 알기 위하여 \( \chi^{2} \) 검정을 통하여 분리비가 유의성이 있는지를 검정하였고, 신뢰한계는 \( 95 \% \) 이었다.</p>
애기장대를 파종하고 2 주 후에 잎을 채취하고 어떤 크기로 잘랐어?
가로 \( 1\mathrm{~mm} \)와 세로 \( 3 \mathrm{~mm} \) 크기