<h2>무기염의 영향</h2><p>무기염이 분리한 항균미생물인 B. licheniformis KJ-9의 생육에 미치는 영향은 Fig. 7과 같다. M9 minimal medium에 탄소원은 \( 1.5 \% \)의 soluble starch, 질소원은 yeast extract \( 0.5 \% \)을 첨가하고 11종류의 무기염 각각에 대한 영향을 검토한 결과 \( \mathrm{CaCl}_{2}\), \(\mathrm{NaCl}\), \(\mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \( \mathrm{K}_{2} \mathrm{HPO}_{4}\), \(\mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \)는 B. licheniformis KJ-9의 생육에 약간의 영향을 미쳤으나, \( \mathrm{CoCl}_{2} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(\mathrm{ZnCl}_{2}\), \(\mathrm{HgCl}_{2}\), \(\mathrm{FeSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(\mathrm{AgNO}_{3} \)과 같은 중금속 염은 B. licheniformis KJ-9의 생육을 오히려 저해하는 것으로 나타나 최적 무기염은 \( \mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\) \(0.05 \% \)로 결정하였다.</p><h2>온도의 영향</h2><p>배양온도가 분리한 항균미생물인 B. licheniformis KJ-9의 생육에 미치는 영향을 검토하여 Fig. 8에 나타내었다. 배양온도를 \( 25 \sim 65^{\circ} \mathrm{C} \) 범위로 변화시키면서 배양한 결과 배양온도가 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)로 높아짐에 따라 균체의 증식이 급격하게 이루어졌으나 \( 35^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 55^{\circ} \mathrm{C} \)까지는 서서히 증가하였다. 그러나 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)이상에서는 B. licheniformis KJ-9의 생육이 현저하게 저해를 받아 생육이 늦은 것으로 나타나 생육 최적온도를 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)로 결정하였다. Han 등이 분리한 B. amyloliquefaciens 7079는 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 생육이 가장 활발하게 나타났고, Kim 등이 분리한 Bacillus sp. SS279는 \( 25 \sim 30^{\circ} \mathrm{C} \)에서 최적온도를 나타낸 결과 보다는 상당히 높은 온도에서 생육이 가능하고 또한 생육가능 온도의 범위가 넓은 것으로 판단된다.</p><h2>초기 \( \mathrm{pH} \) 영향</h2><p>초기 \( \mathrm{pH} \)가 항균미생물인 B. licheniformis KJ-9의 생육에 미치는 영향을 검토하여 Fig. 9에 나타내었다. \( \mathrm{pH} 5.0 \) 이하와 \( \mathrm{pH} 10 \) 이상에서는 생육이 급격히 떨어지는 현상을 보였으나 \( \mathrm{pH} 5\)에서 \( \mathrm{pH} 10 \)까지는 생육이 왕성하여 거의 일정한 O.D.값을 나타내었다. 이상의 결과로 분리한 항균미생물인 B. lichen-iformis KJ-9의 생육가능 배지의 초기 \( \mathrm{pH} \)는 상당히 넓은 것으로 생각되어 미생물의 배양 시 배지를 제조하였을 때 \( \mathrm{pH} \)를 조절하지 않은 \( \mathrm{pH} 7.0 \)으로 결정하였다. 이와 같이 생육 \( \mathrm{pH} \)범위가 넓은 것은 중성 경작지뿐만 아니라 약산성 경작지에서도 생육에 크게 영향을 받지 않을 것으로 추정되었다. Jung은 배지의 초기 \( \mathrm{pH} \)를 \( \mathrm{pH} 4 \sim 9 \)까지 조정하여 최적 \( \mathrm{pH} \)를 조사한 결과 초기 \( \mathrm{pH} 6\)과 \( \mathrm{pH} 8 \)사이에서 효소활성이 높게 나타나 최적 \( \mathrm{pH} \)를 7로 보고하였고, Han 등은 B. amyloliquefaciens 7079의 최적 \( \mathrm{pH} \)를 \( \mathrm{pH} 6 \sim 7 \), Lee 등은 Bacillus sp. HW-002의 최적 \( \mathrm{pH} \)는 6.5로 보고한 결과와 유사하였다.</p><h2>진탕 속도의 영향</h2><p>진탕 속도가 항균미생물인 B. licheniformis KJ-9의 생육에 미치는 영향을 검토하여 Fig. 10에 나타내었다. 배지의 초기 \( \mathrm{pH} \)는 배지를 제조하여 조절하지 않은 \( \mathrm{pH} 7.0 \)으로 하고 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)의 배양온도에서 진탕 속도를 100, 140, 180, 260 \(\mathrm{rpm} \)으로 변화시키면서 배양한 결과 진탕 속도를 증가 시킬수록 미생물의 증식은 왕성하였다. 특히 \( 100 \mathrm{rpm} \)에서 \( 180 \mathrm{rpm} \)까지는 직선적으로 O.D.값이 증가하였으며 \( 180 \mathrm{rpm} \) 이상에서는 거의 일정한 값을 나타내었다. 이상의 결과로 B. licheniformis KJ-9의 배양을 위한 최적 진탕 속도는 \( 180 \mathrm{rpm} \)으로 결정하였다. Kim은 방선균에 의한 Bacillus sp.에 유효한 항균물질 생산 보고에서 진탕 속도를 \( 120 \mathrm{rpm} \)으로 배양하였을 때 최고의 생산성을 나타내었다는 보고보다는 조금 높은 진탕속도를 나타내었다.</p><h2>배양시간에 따른 항균활성</h2><p>이상의 최적 배양조건으로 분리한 B. licheniformis KJ-9를 배양할 때 배양시간이 항균물질의 생산에 미치는 영향을 검토하여 Fig. 11에 나타내었다. 잿빛 곰팡이병을 유발하는 Botrytis cinerea에 대해서는 배양시간이 길어질수록 항균활성이 약간씩 증가하여 배양 60시간째의 시료에서 가장 높은 항균활성을 나타내었지만, 잎마름병의 원인균인 Corynespora cassicola, 시들음병을 유발하는 Fusarium oxysporum, 잘록병의 원인균인 Rhizoctonia solani의 식물병원성 균주에 대하여는 \( 24\sim 60 \mathrm{hr} \) 째의 모든 시험구에서 거의 유사한 항균활성을 나타내 었다. 결과는 나타내지 않았지만 배양 \( 12 \mathrm{hr} \)째의 시료에서는 4종류의 모든 병원성 균주에 대하여 아주 미약한 항균활성을 나타내었다. 이상의 결과로 본 연구에서 분리한 항균미생물을 이용한 기능성 퇴비생산 시에는 B. licheniformis KJ-9를 \( 48 \sim 60 \mathrm{hr} \) 정도 배양하여 사용하는 것이 적당한 것으로 판단된다. Jung이 분리한 Bacillus sp. P16는 \( 96 \mathrm{hr} \) 동안 배양한 결과 균의 생장은 \( 24 \mathrm{hr} \) 이후에 일정하게 유지되는 반면 효소활성은 \( 12 \mathrm{hr} \) 이후에 서서히 증가하였는데 본 논문과 유사한 것으로 생각되었다. 이상의 연구결과를 종합해볼 때 항균활성이 우수한 B. licheniformis KJ-9는 톱밥 발효퇴비 생산뿐만 아니라 미생물제제 개발을 위한 깊이 있는 연구가 필요한 것으로 판단된다.</p>
B. licheniformis KJ-9의 생육에 초기 \( \mathrm{pH} \)가 미치는 영향을 조사할 때 Jung은 어떤 실험과정을 거쳤는가?
초기 \( \mathrm{pH} \)를 \( \mathrm{pH} 4 \sim 9 \)까지 조정하여 최적 \( \mathrm{pH} \)를 조사