<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험 재료</h2><p>본 실험에 사용한 감나무잎은 경북상주소재의 감 농장에서 수확하여 건조 후 분쇄하여 저온저장하면서 이용하였다.</p><h2>감잎추출물의 조제</h2><p>감잎 분말 \( 1 \mathrm{~g} \) 을 물과 \( 60 \% \) ethanol \( 100 \mathrm{ml} \)에 넣고 6시간 동안 추출한 후 상징액을 Whatman No. 1로 여과하여 여액을 시료로 사용하였다.</p><h2>Phenol성 화합물 정량</h2><p>시료 \( 1 \mathrm{~ml} \) 를 \( 95 \% \) ethanol \( 1 \mathrm{~ml} \)와 증류수 \( 5 \mathrm{~ml} \)를 첨가하고 1 N Folin-ciocalteu reagent \( 0.5 \mathrm{~ml} \)를 넣어 잘 섞어주고, 5 분간 방치한 후, \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} 1 \mathrm{~ml} \)를 가한 후, 흡광도 \( 725 \mathrm{~nm} \)에서 1 시간 이내에 측정하여 gallic acid를 이용한 표준곡선으로 양을 환산하였다.</p><h2>Tyrosinase 저해활성 측정</h2><p>Tyrosinase 저해활성 측정은 Yagi 등의 방법에 따라 측정하였다. 반응구는 \( 0.175 \mathrm{~M} \) sodium phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} \) 6.8) \( 0.5 \mathrm{~ml} \)에 \( 10 \mathrm{~mM} \) L-DOPA를 녹인 기질액 \( 0.2 \mathrm{~ml} \) 및 시료용액 \( 0.1 \mathrm{~ml} \)의 혼합액에 mushroom tyrosinase (\( 110\mathrm{~unit} / \mathrm{ml} \)) \( 0.2 \mathrm{~ml} \)을 첨가하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 2분간 반응시켜 반응액 중에 생성된 DOPA chrome을 \( 475 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다. Tyrosinase 저해활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p><p>저해율(\( \% \))=(1- \( \left.\frac{\text { 시료첨가군의 흡광도 }}{\text { 대조구의 흡광도 }}\right) \times 100 \)</p><h2>Melanoma cell (B16F10)에서의 melanin 생합성 저해율 측정</h2><p>피부 멜라노마 세포로부터의 melanin 생합성 저해 측정은 Hosoi 등의 방법에 따라 측정하였다. DMEM 배지로 배양 된 멜라노마 세포를 \( 100 \mathrm{mm} \) culture dish에 \( 2 \times 10^{6} \mathrm{cell} / \mathrm{dish} \) 가 되게 분주하고 24시간 배양 후 시료를 농도별로 조제하여 \( 2 \mathrm{ml} \) 첨가하고, 48시간 후에 인산완충액( \( \mathrm{pH} \) 7.4)으로 세척하였다. 그. 다음 \( 0.25 \mathrm{M} \) trypsin-EDTA 용액으로 세포를 탈착한 후 수확한 세포를 \( 1 \times 10^{6} \) 세포 당 \( 1 \mathrm{ml} \)의 \( 5 \% \) TCA로 처리하고, 2,500 rpm으로 2회 원심분리한 후 분리된 melanin을 인산완충액으로 세척한 뒤 ether:ethanol (1:3) \( 1 \mathrm{ml} \) 를 가하여 2회 원심분리 한 후 ether \( 1 \mathrm{ml} \)로 세척 건조시켰다. 건조된 melanin에 \( 1 \mathrm{~N} \) \( \mathrm{NaOH} \)를 \( 1 \mathrm{~ml} \) 가하여 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 반응시킨 후 분광 광도계 \( 405 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. Melanin 생합성 저해는 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.</p><p>Melanin 생합성 저해율(\( \%\)) \(= 1- \left(\frac{\text { 시료첨가군의 흡광도 }}{\text { 대조구의 흡광도 }}\right) \times 100 \)</p>
본 논문의 실험에서 사용한 감나무잎은 분쇄 전 무엇을 하였는가?
건조