<h1>재료 및 방법</h1><h2>식물재료</h2><p>옥수수 (Zea mays) 종자 \( 100 \mathrm{~ml} \) 을 흐르는 물에 10 분간 담가 수분을 공급한 후 1 liter의 vermiculite가 \( 4 \mathrm{~cm} \) 두께로 깔린 플라스틱 상자에 고루 펴서 뿌리고 다시 1 liter의 vermiculite를 고루 펴서 넣은 후 1 liter의 2차 증류수를 고루 부어 적셨다. 플라스틱 상자의 뚜껑을 덮은 후 이를 다시 어둠상자에 넣고 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 가 유지되는 적색광실에서 4 일간 키우고 1 분간 뚜껑을 열어 적색광을 처리하여, 다시 15-18 시간 키운 후 실험재료로 사용하였다.</p><h2>옥수수 자엽초 박편의 채취</h2><p>옥수수 자엽초 정단으로부터 \( 7 \mathrm{~mm} \) 아랫부분에서 \( 6 \mathrm{~mm} \) 또는 \( 10 \mathrm{~mm} \) 의 절편을 얻어낸 후 해부 바늘을 이용하여 내부의 잎을 제거하였다. 다음 자엽초의 관속 조직 사이의 조직을 slit 반대편에서 \( 1 \mathrm{~mm} \) 폭으로 잘라내어 \( 6 \mathrm{~mm} \times 1 \mathrm{~mm} \) 또는 \( 10 \mathrm{~mm} \times 1 \mathrm{~mm} \) 의 조직 박편을 얻었다.</p><h2>옥수수 자엽초 박편의 옥신반응 측정</h2><p>옥수수 자엽초 박편을 6-10개씩 옥신이 포함되거나, 포함되지 않은 \( 5 \mathrm{ ~ml} \) 의 \( 5 \mathrm{~mM} \) potassium phosphate buffer (\(\mathrm{pH} 5.5\))에 띄워 실험 목적에 필요한 시간만큼 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 조건하에서 진탕배양 하였다\((30 \mathrm{cycles}/\mathrm{min})\). 배양 후 조직이 굽어진 각도를 측정하였으며, 밖으로 굽어지는 각도를 (+), 안으로 굽어지는 각도를 (-)로 표시하여 방향성을 구분하였다.</p><h2>활성 물질의 추출</h2><p>5일된 옥수수 자엽초와 중배축 사이의 마디를 잘라 자엽초와 내부의 잎을 포함하는 부위를 그대로 \( 100 \% \) 메탄올에 담가 24 시간 동안 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 추출하거나, 조직을 액체질소 존재하에 분쇄하여 \( 100 \% \) 메탄올로 추출하였다. 이렇게 얻은 시료를 \( 13,000 \mathrm{~rpm} \) 에서 30 분간 원심분리하여 (Sorvall, GSA rotor) 입자 성분을 제거한 다음, 정제 과정에 재료로 사용하였다. 추출물의 농도는 검정에 사용한 추출물이 원재료로 사용한 식물 몇 \( \mathrm{g} \)에 해당하는지 계산하여 계산하여 \( \%\)농도 (\( \mathrm{g.f.w./ml} \) )로 표시하였다.</p><h2>활성 물질의 분리</h2><p>일회용 \( \mathrm{C}_{18} \) 컬럼 (Waters, No 051910)을 컬럼 부피의 3-5배에 해당하는 \( 100 \% \) 메탄올로 세척한 후 다시 5 배 부피에 해당하는 \( 20 \mathrm{~mM} \) Tris 완충용액 ( \( \mathrm{pH} 9.5\))으로 평형시켜 준비하였다. 준비된 시료에 \( 1 \mathrm{~M} \) Tris 용액을 첨가하여 \( \mathrm{pH} \) 를 \( 9.5 \)로 조절한 후 \( \mathrm{C}_{18} \) 컬럼에 유속 \( 5 \mathrm{~ml} / \mathrm{min} \) 로 유입하여 흡착시키고 여러 농도의 메탄올 용액으로 용출 시험한 뒤 \( 50 \% \), \( 80 \% \) 용리 조건을 확립하였다. 용리된 시료는 \( \mathrm{N}_{2} \) 가스 흐름하에 농축하였으며, 시료의 양이 많을 때에는 다시 일회용 \( \mathrm{C}_{18} \) 컬럼에 흡착한 후 \( 100 \% \) acetonitrile로 용리하여 \( \mathrm{N}_{2} \) 가스흐름으로 농축하였다. HPLC 분석을 위하여는 동일한 Nucleosil RP- \( \mathrm{C}_{18} \) 분석용 컬럼을 사용하였으며 유속은 동일하게 \( 0.8 \mathrm{~ml} / \mathrm{min} \) 으로 조절하였다. 메탄올 농도는 50 분간 \( 40 \% \) 에서 \( 95 \% \) 까지 직선적으로 높여가며 시료를 용리하였고, 용액의 \( \mathrm{pH} \)를 낮추기 위해 \( 0.3 \% \) acetic acid를 사용하였다. 메탄올에 의해 용리되어 나오는 물질은 photodiode array detector로 측정하였다.</p>
옥수수종자를 물에 담그고 무엇을 공급했어?
수분