<h2>p53 및 Cdk inhibitors의 발현에 미치는 sulforaphane 의 영향</h2><p>Cdk inhibitors는 cyclin/Cdk complex와 결합하여 그 활성을 억제하는 것으로 알려져 있는데, 특히 CIP/KIP군에 속하는 p21은 종양 억제유전자인 p53에 의하여 활성화되어 G1기뿐만 아니라 G2/M기를 포함한 전체 세포주기의 진행을 억제하는 주요한 조절인자이다. p21의 활성화에는 p53이 관여하는 것이 일반적이지만 세포의 종류나 항암제 및 후보물질의 종류에 따라서 p53 비의존적인 경로를 통하여 p21이 활성화된다고도 알려져 있다. 그러나 p16의 경우 일반적으로 G1기 arrest에만 관여하는 것으로 알려져 있으며, p27 역시 G1기 arrest에 중요하지만 부분적으로 G2/M기 arrest에도 관여할 수 있는 것으로 보고되어지고 있다. 따라서 본 연구에서는 sulforaphane의 처리에 의한 인체 자궁경부암세포의 G2/M기의 억제 유발에 종양 억제 유전자 p53 및 p16, p21 그리고 p27과 같은 Cdk inhibitors들의 관련 여부를 조사하였다. Fig. 5A 및 B의 결과에서 알 수 있듯이 종양 억제 유전자 p53의 경우 전사수준에서의 큰 변화 없이 \( 10 \mu \mathrm{M} \) 및 \( 15 \mu \mathrm{M} \) 처리군에서 부분적인 단백질의 축적 현상을 관찰할 수 있었으나 sulforaphane 처리 농도의존적으로 발현 자체가 증가하는 것은 아닌 것으로 판단된다. Cdk inhibitor 중에서 p27은 sulforaphane 처리에 의하여 큰 변화가 없었으나, p21의 경우 sulforaphane이 처리된 배지에서 배양된 세포에서 전체적으로 다소 높게 나타났다. 그리고 p16의 경우 단백질의 발현이 다소 증가되어 특히 최고농도 처리군에서는 대조군에 비하여 매우 높은 발현을 보여주었다. 그러나 Fig. 5에 나타낸 바와 같이 조사된 p53 및 Cdk inhibitor 모두가 전사수준에서는 발현의 양상에 큰 변화 없이 단백질 발현이 sulforaphane 처리에 따라 다소의 차이를 보이는 것으로 보아 아마도 이들 단백질들은 sulforaphane의 처리에 의한 번역 후 다른 기전에 의하여 조절 받을 가능성도 있기 때문에 이에 관한 추가적인 연구가 이루어 져야할 것으로 생각된다.</p><h2>Prostagandin 생성 및 telomere 조절인자들의 발현에 미치는 sulforaphane의 영향</h2><p>염증을 포함한 다양한 생체 반응에서 prostaglandin 계열 물질들은 세포분열이나 증식에 영향을 줌으로서 각종 인체 질병의 유발과 진행에 중요한 역할을 함이 최근 밝혀지고 있다. Prostaglandin의 합성에서 2가지의 cyclooxygenases (COXs) isoform이 관여하고 있는데, 대부분의 조직에서 일정한 수준으로 발현되는 COX-1의 경우 인체의 항상성 유지와 연관된 기능에 관여한다. 반면 COX-2는 성장인자, cytokines, 종양 촉진인자 등의 자극에 의한 유도성 isoform으로서 COX-2의 활성화는 세포성장 촉진을 유발하고 apoptosis를 억제하며 세포의 유동성 및 부착성을 강화시키는 것으로 알려져 있다. 또한 COX-2의 과발현에 의해 암조직에서의 혈관신생 및 전이능이 높아지고 apoptosis를 막는다는 점과 COX-2 저해제에 의한 angiogenesis와 종양형성의 억제 등의 결과에서 이 유전자의 선택적 조절에 의한 암 예방전략이 대두되고 있다. 따라서 본 연구에서는 sulforaphane 처리에 의한 인체암세포의 증식억제가 COX-2의 선택적 발현 억제와 관련이 있는지의 여부를 조사하였다. 상기에서와 동일 조건에서 얻어진 암세포들을 대상으로 COX-1 및 COX-2의 발현에 미치는 \(\beta\)-lapachone의 영향을 조사하였으나, Fig. 6 의 결과에서 알 수 있듯이 sulforaphane의 처리에 따른 COX-1 또는 COX-2의 선택적 발현 저하 현상을 관찰할 수 없었다. 한편 telomere는 모든 진핵세포의 염색체 말단에 존재하는 간단한 DNA 절편으로서 인간의 경우에는(TTAGGG \( )_{n} \)의 염기서열이 계속 반복되는 구조를 가지고 있으며 비정상적인 DNA 재조합을 억제하며 염색체가 핵막으로 부착되는 것을 돕고, mitotic clock으로서의 기능을 할 것이라는 사실이 밝혀짐에 따라 종양 형성(tumorigenesis)의 이해와 그 예방에 이용될 가능성을 제시해 주고 있으며, telomere의 손실은 p53의 발현과 세포주기 교란에도 관여를 하는 것으로 알려져 있다. 따라서 본 연구에서는 sulforaphane의 처리가 이러한 telomere 조절 관련 유전자들의 발현에 영향을 미칠 수 있을 지의 가능성을 조사하여 보았다. Fig. 7에서 보여주는 바와 같이 telomere와 관련된 human telomere reverse transcriptase (hTERT), human telomerase RNA (hTR), mammalian telomerase-associated protein-1 (TEP-1), 그리고 transcription control factor인 c-myc 등을 조사해 보았으나, 유의적인 차이점은 관찰할 수 없었다. 이상의 결과에서 sulforaphane의 처리에 의한 HeLa 세포의 중식 억제에는 prostagandin 및 telomere 조절인자들의 발현변화와는 무관함을 알 수 있었다. 그러나 Raw 264.7 murine macrophages를 대상으로 염증유발인자인 lipopolysaccharide에 의한 COX-2의 발현 증가는 sulforaphane의 처리에 의하여 매우 효과적으로 억제되었다는 선행연구의 결과를 고려해 볼때 sulforaphane이 HeLa 세포의 COXs 발현 자체를 조절할 수는 없지만 잠재적인 염증유발 억제 효능이 있는 것으로 추정되어지기 때문에 암세포증식 억제 뿐 만 아니라 정상세포에서 강력한 항암효능이 있을 것으로 생각되어진다.</p>
지문에서 언급한 CIP/KIP군에 속하는 것은 뭐야?
p21