<h2>기기</h2><p>본 연구의 실험기기는 다음과 같다. Rotary evaporator (Rotavapor R-\(114\); Büchi \( \mathrm{AG} \), Flawil, Switzerland), microplate reader (Synergy HT; BioTek Instruments, Winooski, VT, USA), auto clave (Dae Han Bio Link Co., Ltd., Eumseong, Korea), shaking incubator (VS-8480SF; Vision Scientific Co., Ltd., Daejeon, Korea), \( \mathrm{CO}_{2} \) incubator (MCO-175; Sanyo Electric Co., Ltd., Osaka, Japan), centrifuge (Union \(32\)R; Hanil Science Industrial Co., Ltd., Gimpo, Korea), micro high speed centrifuge (Micro \(17\)TR; Hanil Science Industrial Co., Ltd.), shaker (BF-\(350\)SK; BioFree, Seoul, Korea) 등이 사용되었다.</p><h2>시료의 추출</h2><p>본 연구의 시료들인 개복숭아꽃과 흰매화, 분홍매화 각 \( 100 \mathrm{~g} \) 씩 에 \( 85 \% \) ethanol \( 1 \mathrm{~L} \) 를 첨가하고 빛을 차단시킨 후 하루 동안 보관하였다. 이후 감압 여과와 농축 과정을 통해 추출물을 얻었고 이를 \(3\)회 반복 시행하여 \(1\)차 추출물을 수거하였다. 추출물에 chloroform \( \left(\mathrm{CHCl}_{3}\right) \) 과 disital water \( (\mathrm{DW}) \) 를 각 \( 300 \mathrm{~mL} \) 씩 가하고 분별 깔때기를 통해 \( \mathrm{CHCl}_{3} \) 층(클로로포름층)과 \( \mathrm{DW} \) 층(증류수층)으로 분획하였다. 이어서 \( \mathrm{DW} \) 층에 ethyl-acetate \( (\mathrm{EtOAc}) \) 를 \( 300 \mathrm{~mL} \) 더하여 \( \mathrm{EtOAc} \) 층(에틸아세테이트층)과 \( \mathrm{DW} \) 층을 분리하여 최종 추출물들을 얻었다.</p><h2>항균 활성</h2><p>항균 활성 실험은 다음과 같이 진행하였다. LB 배지를 시험관에 \( 5 \mathrm{~mL} \) 씩 담아 Auto clave에서 멸균하였다. 박테리아들을 멸균된 LB 배지에 접종하고 \( 24 \mathrm{~h} \) 동안 배양하였다. 배양된 박테리아를 고체 배지에 처리하여 다시 \( 24 \mathrm{~h} \) 동안 배양한 후 single strain를 따서 LB배지에서 \( 18 \mathrm{~h} \) 동안 배양하였다. 멸균 처리된 시험관 마다 배양된 박테리아들을 \( 5 \mu \mathrm{L} \) 씩 처리하였고 시료들을 \( 0.1,0.2,0.5 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) 의 농도로 하였다. 시험관의 배지와 박테리아, 시료를 고루 섞은 후 이를 \( 100 \mu \mathrm{L} \) 씩 \( 96 \) well에 담아 microplate reader의 \( 600 \mathrm{~nm} \) 에서 \( 0 \mathrm{~h} \) 의 흡광도 값을 얻었다. 시험관들은 shaking incubator에서 보관하고 접종한 박테리아가 성장하는 \( 6 \mathrm{~h} \) 부터 \( 3 \mathrm{~h} \) 간격으로 \( 24 \mathrm{~h} \) 동안 흡광도를 측정하였다. 항균 활성은 \( 0 \mathrm{~h} \) 에서 대조군의 흡광도에 대한 각 시간대별 시료 처리군들의 흡광도로 나타내어 농도와 시간대에 따른 변화를 관찰할 수 있었다. 측정 흡광도 값을 대조군 값에 대해 계산하되, 시료들의 색채값을 공제한 값을 효과값으로 하였다.</p><p>Relative activity \( (\%)=\left(\mathrm{A}_{\mathrm{t}}-\left[\mathrm{A}_{0}-\mathrm{B}_{0}\right] / \mathrm{B}_{0}\right) \times 100 \) \( \mathrm{A}_{\mathrm{t}} \) : 시료 처리군(균 접종 후 시간별 상태)의 흡광도 \( \mathrm{B}_{0} \) : 시료 무처리된 \( \mathrm{DMSO} \) 용매 대조군의 흡광도 \( (0 \mathrm{~h}) \) \( \mathrm{A}_{0} \) : 시료 처리군(균이 없는 상태 \( ) \) 만의 흡광도 \( (0 \mathrm{~h}) \)</p>
LB 배지를 멸균하기 위해서는 어떤 장비가 필요한가?
Auto clave