<h1>재료 및 방법</h1><p>본 연구에서 사용한 시약은 모두 특급시약을 사용하였고 각 용매와 반응물질은 반드시 문헌의 방법에 따라 정 제하여 사용하였다.</p><p>초기반응속도 실험에 사용된 HexTCh chloride, HepTCh iodide, OctTCh chloride은 위에서 설명한 방법으로 합성 하여 정제하였다. 효소 BChE 는 더 이상의 정제 없이 직접 사용하였는데 V-S급의 냉동건조된 분말로 순도가 \( 70 \% \) 이다. ATCh, PrTCh, BuTCh과 발색제인 5,5'-Dithiobis-(2nitrobenzoic acid)(DTNB)와 효소는 특급시약으로 Sigma Chemical Co.에서 구입하였다. 기질과 효소, DTNB는 \( p \mathrm{H} \) 7.3인 \( 0.1 \mathrm{M} \) sodium phosphate buffer NaCl 첨가로 \( \mu=0.2) \) 에 각각 녹였다. 실험에 사용된 효소를 제외한 모든 용액 은 0.25 0.45 \( \mu \mathrm{m} \) 의 주사기용 필터(Gelman Sciences Co.)로 여과하였고, 필요한 경우 효소도 여과하여 사용하였다. 완충용액 제조용 물은 증류하였고 탈이온화 시켜 사용하였다 (18 \( \mathrm{K} \Omega / \mathrm{cm} \) resistance, Millipore Co.). \( p \mathrm{H} \)-rate profile에 사용된 용액 제조 시약은 초기반응속도 실험과 동일하다. \( p \mathrm{H}- \) rate profile 실험에서 넓은 범위의 \( p \mathrm{H} \) 완충용액은 인산염 완충용액 \( (p \mathrm{H} \) 5.75 7.95)과 sodium acetate 완충용액 \( (\mathrm{pH} \) \( 3.98 \) \(5.56\))을 대략 \( p \mathrm{H} \) 가 \( 0.2 \) 정도 차이가 생기도록 각각 제조하였으며 이 완충용액들로 각각의 용액을 만들었다. 반응속도 측정의 UV-Visible 스펙트럼은 Hewlett Packard 사의 HP8452A Diode Array UV-Visible spectrophotometer에 peltier temperature controller를 사용하여 \( 25 \pm 0.1^{\circ} \mathrm{C} \) 로 유지하며 분석하였고 cuvette은 \( 1000 \mu l \) 용량의 석영 재 질이었다. 마이크로리터 단위의 시료 채취는 Gilson사의 pipetman autopipettes 을 사용하였다. 완충용액의 \( p \mathrm{H} \) 와 \( p \mathrm{D}(p\mathrm{H}+0.4) \) 값은 유리전극을 갖춘 Istek사의 Model-720P \( p \mathrm{H} \) 측정기를 사용하였다.</p><h2>Acylthiocholine 기질에 대한 속도상수의 측정</h2><p>(1) BChE에 의한 Choline ester의 가수분해 반응 측정법</p><p>ACh 와 유사한 기질인 ATCh 는 AChE 에 의해 acetic acid 와 thiocholine으로 가수분해된다.</p><p>Fig. 2와 같이 thiocholine이 DTNB (5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)와 반응했을 때 생기는: 노란색의 5-thio-2nitrobenzoate에 의한 흡광도 증가를 관찰함으로써 측정이 가능하다(Ellman's coupled enzyme assay).</p>
효소 BChE 는 순도가 어느 정도였어?
\( 70 \% \)