<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료 및 기기</h2><p>실험재료 식물인 곤달비는 경주시 산내면 산내농업협동조합에서 제공받았다. 효능시험에 사용된 모든 시약은 Sigma사 (St. Louis, MO, USA) 제품을 사용하였으며 유기용매 및 무기 시약들은 국산특급을 사용하였다. 실험동물은 대한바이오링크(충북)에서 구입한 외관상 건강한 ICR계 웅성 mouse \( (30 \pm 1 \)\( \mathrm{g}) \)를 본 대학 동물사육실에서 일정한 조건으로 사육하여 실험에 사용하였다. 사육조건은 온도는 \( 22 \pm 1^{\circ} \mathrm{C} \), 습도는 \( 55 \pm 5 \% \) 그리고 명암은 12시간 light/dark cycle을 유지시켰다. 실험동물을 1주일간 사육실에서 적응시켰으며 실험개시 전 24시간 동안 물만 먹이고 절식시켰다. 동물처치는 효소활성의 일중변동을 고려하여 오전 10-12시 사이에 실시하였다. 수동회피시험(Passive avoidance task) 기기는 Gemini Avoidance System(San Diego Instruments, San Diego, CA, USA)을 이용하였고, 성분분석을 위한 GC-MS 기기는 Agillent 5975C를 이용하였다.</p><h2>추출물 제조</h2><p>곤달비 잎과 뿌리를 잘 건조하여 분말로 만든 다음, 각 600\( \mathrm{g} \)을 메탄올 2 \( \mathrm{l} \)로 2시간 가온 추출하였다. 추출액을 감압 농축하여 용매를 완전 제거하고 냉동건조기로 추출물 시료를 제조하였다. 잎과 뿌리 추출물의 수득율은 각각 \( 10.25 \% \)와 \( 15.79 \% \)이었다. 잎의 향기성분을 분석하기 위하여 건조된 잎 분말 50\( \mathrm{g} \)에 \( n \)- 헥산 \( 100 \mathrm{ml} \)을 넣고 2일간 실온에 방치한 다음, 용매를 제거하고 분석시료로 하였다.</p><h2>지질과산화 억제 활성</h2><p>Ohkawa 방법에 따라 다음과 같이 과산화지질의 함량을 측정하였다. 먼저 \( 0.1 \mathrm{M} \) potassium phosphate 완충액 \( (\mathrm{pH} 7.4\)) \( 0.65 \mathrm{ml} \), 시료 \( 0.05 \mathrm{ml} \) (농도 \( 1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}\), \(2.0 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}\), \(4.0 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) ), homogenate \( 0.1 \mathrm{ml} \) 을 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1시간 동안 incubation 하였다. 1 시간 후 반응액에 \(8.1\%\) SDS \( 0.2 \mathrm{ml} \), acetate 완충액( \( \mathrm{pH} 3.5\) ) \( 1.5 \mathrm{ml}\), \(0.8 \% \) 2-thiobarbituric acid \( 1.5 \mathrm{ml} \) 을 첨가하고, \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 반응시킨 다음 실온으로 냉각하였다. 이 반응액에 \( n \) 부탄올: pyridine \( 15: 1\) \((\mathrm{v} / \mathrm{v})\) \(5 \mathrm{ml} \) 을 첨가하여 3,000 rpm에서 10분간 원심분리한 후 상징액을 취하여 532 \( \mathrm{nm} \) 에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조물질은 a-tocopherol (vitamin E)을 사용하였으며 시료 대신 DMSO를 가하여 반응 시킨 용액을 대조군으로 하여 저해율(\( \%\))을 계산하였다.</p><h2>Superoxide anion 억제 활성</h2><p>Gotoh 등의 방법을 일부 변형하여 다음과 같은 방법으로 측정하였다. 먼저 \( 1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}\), \(2.0 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}\), \(4.0 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도의 시료 \( 30 \mu \mathrm{l} \)에 \( 30 \mathrm{mM} \) EDTA ( \( \mathrm{pH} 7.4\) ) \( 100 \mu \mathrm{l} \), \( 30 \mathrm{mM} \) hypoxanthine \( 10 \mu l,1.42 \mathrm{mM} \) NBT \( 200 \mu \mathrm{l} \)를 가한 다음 실온에서 3분 반응시킨 후, \( 0.5 \mathrm{U} / \mathrm{ml} \) xanthine oxidase \( 100 \mu \mathrm{l} \)를 첨가하고 \( 50 \mathrm{mM} \) phosphate 완충액 \( (\mathrm{pH} 7.4) \)으로 총 용량을 \( 3 \mathrm{ml} \)로 맞추고 반응용액을 실온에서 20분간 반응시킨 후, \( 560 \mathrm{~nm} \) 파장에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조물질은 ascorbic acid (vitamin C)를 사용하였으며 시료 대신 DMSO를 가하여 반응 시킨 용액을 대조군으로 하여 저해율(%)을 산출하였다.</p>
과산화지질의 함량 측정을 위해 사용한 방법은 무엇인가?
Ohkawa 방법