<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험 재료</h2><p>본 실험의 공시 재료인 해홍나물(Suaeda maritima)은 2006년 5월에서 8월까지 제주도 해안가에서 채집하여 뿌리, 줄기, 열매로 나누어 실험에 이용하였다. 식물분류는 한국식물도감과 제주식물도감 인터넷 사이트(http://www.nfc.co.kr)를 참고하였다.</p><h2>사용 균주</h2><p>본 연구에 사용된 균주는 Table 1에 나타낸 바와 같이 한국 미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganism, KCCM), 한국생물자원센터(Korean Collection for Type Cultures, KCIC) 그리고 American Type Culture Collection (ATCC)에서 그람 양성균 5종과 그람 음성균 7종으로 총 12종을 분양받아 사용하였다. 사용 배지는 Tryptic soybean agar (TSA), Tryptic soybean broth (TSB), Brain hcart infusion agar (BHIA), Brain heart infusion broth (BHIB), Marine agar(MA), Marine broth (MB), Nutrient agar (NA), Nutrient broth (NB) Difco (USA)사의 제품을 사용하여 stab culture하여 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 보관하면서 3주마다 계대하여 실험에 사용하였다.</p><h2>시료 추출 방법</h2><p>생체로 채집된 해홍나물은 멸균수를 이용하여 모래, 흙 그리고 식물 외부에 묻어 있는 염분과 같은 이물질은 제거한 후 뿌리, 줄기, 열매 부위로 나누어서 바람이 통하는 음지에서 5일 이상 건조하여 수분을 충분히 제거하였다. 음건된 식물체는 각 부위별로 마쇄기를 이용하여 마쇄하여 추출용 시료로 사용하였다.</p><p>해홍나물의 부위별 항균 효과를 알아보기 위한 추출물 조제는 각각 부위별로 증류수 \( 300 \mathrm{ml} \) 당 \( 10 \mathrm{~g} \)의 식물시료를 혼합하여 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕 상에서 약 30분간 중탕한 다음 Whatman No.2 여과지를 사용하여 1차 여과과정을 거친 후 pore size \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) syringe용 멸균 필터를 사용하여 무균적으로 식물열수 추출액을 조제하였다. 위 과정을 3회 반복하여 얻어진 시료는 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕 상에서 감압 농축하여 얻은 물질을 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에 보관하면서 필요한 농도로 희석하여 실험에 사용하였다.</p><p>해홍나물의 부위별 메탄올 추출물은 시료 \( 10 \mathrm{~g} \)에 메탄올 \( 300 \mathrm{ml} \)로 24시간 동안 상온에서 교반 침출 시킨 후 1차 추출한 후 Whatman No. 2 여과지를 사용하여 1차 여과과정을 거친 후 pore size \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) syringe용 멸균 필터를 사용하여 무균적으로 추출액을 조제하였다. 위 과정을 3회 반복하여 얻어진 시료는 \( 40^{\circ} \mathrm{C} \) 수욕 상에서 감압 농축하여 얻은 물질을 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에 보관하면서 필요한 농도로 희석하여 실험에 사용하였다.</p><h2>항균활성 측정</h2><p>추출물에 대한 항균활성 측정은 Murry 등의 방법을 응용하여 측정하였다. 각 균주는 \( 10 \mathrm{ml} \)의 액체배지에서 18시간 정도 배양하여 세균 배양액을 \( 650 \mathrm{~nm} \)에서 Optical Density (O.D) 값 \( 0.4\left(10^{6} \mathrm{CFU} / \mathrm{ml}\right) \)가 되게 조절한 후 멸균된 면봉을 사용하여 Muller Hinton agar (Difco, USA)에 회전하면서 배지 전면에 균액을 골고루 도말하였다. 항균측정용 시료액은 \( 0.1,0.5,1,2,3,5 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 로 희석하여 멸균된 \( 8 \mathrm{~mm} \) paper disc (ADVANTEC, Japan)에 \( 50 \mu \mathrm{l} \)를 흡수 건조시켜 시험용 평판배지위에 놓아 밀착시켜서 각 시험균의 최적 배양온도에서 24시간 배양 후 disc 주변에 생성된 생육저해환(clear zone, \(\mathrm{mm}\))을 측정하여 물 추출물과 메탄올 추출물의 항균활성을 비교 분석하였다.</p>
해당 실험에 사용된 균주는 한국생물자원센터에서 분양받아 사용되었는가?
YES