<h1>재료 및 방법</h1><h2>사용균주, 배지 및 배양</h2><p>본 실험에 사용된 Pseudoxanthomonas sp. WD12와 WD32균주는 부패한 나무에서 분리한 균주를 사용하였고, 배양은 LB 배지(sodium chloride \( 0.5 \% \), tryptone \( 1.0 \% \), yeast extract \( 0.5 \% \); Duchefa biochemie, Netherlands)에 \( 0.1 \% \) Difco skim milk (BD, Sparks, MD, USA)를 첨가하여 만든 배지를 사용하였다. 균주는 \( 37{ }^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 최고활성을 보인 배양시간 (WD 12는 \(100\) 시간, WD32는 \(80\) 시간) 동안 배양하고 균의 성장은 흡광도 \( 600 \mathrm{~nm} \) 에서 측정하였다.</p><h2>효소활성 측정</h2><p>단백질 분해효소의 활성 측정은 배양액을 \( 4{ }^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \( 8,000 \mathrm{rpm} \) (Micro \( 17 \)R, Hanil, Kimpo, Korea)에서 \( 5 \)분간 원심분리 하여 균체를 제거한 상등액을 조효소액으로 사용하였다. 효소의 활성 측정은 기질로 \( 0.5 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) azocasein을 사용한 조 등의 방법에 의거하여 측정하였다. 단백질 분해효소의 활성 결과 값은 모두 \( 3 \) 회 반복 측정하여 평균값과 표준편차로 표시하였다.</p><h2>최적 \( \mathrm{pH} \), 온도조건 및 금속이온</h2><p>최적 \( \mathrm{pH} \) 측정을 위해 \( \mathrm{pH} 6.0 \) 에서 \( \mathrm{pH} 7.0 \) 까지는 \( 0.5 \mathrm{M} \) phosphate 완충용액, \( \mathrm{pH} 8.0 \) 에서 \( \mathrm{pH} 9.0\) 까지는 \( 0.5 \mathrm{M} \) Tris-\( \mathrm{HCl} \) 완충용액, \( \mathrm{pH} 10.0 \) 에서 \( \mathrm{pH} 11.0\) 까지는 \( 2.0 \mathrm{M} \) glycine-\( \mathrm{NaOH} \) 완충용액을 사용하였다. 효소 반응온도는 \( 10{ }^{\circ} \mathrm{C} \) 에서부터 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \) 까지 이용하며 \( 5^{\circ} \mathrm{C} \) 간격으로 조정하여 효소활성을 측정하였다. 금속이온은 \( \mathrm{AgNO}_{3}\), \(\mathrm{KCl}\), \(\mathrm{NaCl}\), \(\mathrm{CaCl}_{2}\), \(\mathrm{CuSO}_{4}\), \(\mathrm{MgCl}_{2} \), \( \mathrm{MnSO}_{4}\), \(\mathrm{AlCl}_{3}\), \(\mathrm{FeCl}_{3} \) 을 최종농도가 \( 1 \mathrm{mM} \) 또는 \( 5 \mathrm{mM} \) 의 되도록 효소 반응액에 첨가하였다.</p>
\( 55{ }^{\circ} \mathrm{C} \)에서 효소활성을 측정했어?
YES