<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>금잔화(Calendula arvensis) 지상부에 대현 추출물은 국립원예특작과학원 인삼특작부 추출물은행에서 분양받은 시료를 실험에 이용하였으며 제시된 추출방법은 Kim의 연구시료를 Ahn의 연구에서 명기된 방법에 의해 수행되었다.</p><h2>세포독성평가</h2><p>세포독성 시험은 Kim의 연구에서 명기된 방법에 의해 수행하였다. 즉, 세포내의 미토콘드리아 수소제거효소에 의해 수용 테트라졸륨염(water soluble tetrazolium salts) (WST-1)에서 불용성의 포마진(formazan)결정으로 변환되는 원리를 이용하였다</p><h2>산화방지력 측정</h2><p>DPPH 라디칼(Radical) 소기능 실험은 Kim의 연구에서 명기된 방법에 의해 수행하였다. 산화방지력은 [1-(시료침가구의 흡광도/무침가구의 흡광도 \( )] \times 100 \)의 계산식에 의해 활성\((\%\))을 구하였다.</p><h2>Tyrosinase 억제활성측정</h2><p>타이로시네이즈 저해활성 측정은 Kim의 연구에서 명기된 방법에 의해 수행하였다.</p><h2>멜라신 생성 저해 측정</h2><p>멜라닌 정량은 Kim의 연구에서 명기된 방법에 의해 수행하였다. 추출물을 처리하지 않은 시료군을 대조군으로 하고 결과는 \(\%\)로 환산하였다.</p><h2>Western blot 분석</h2><p>금잔화 추출물에 의한 tyrosinase 단백질 발현을 분석하기 위하여 western blot을 시행하였으며 방법은 Kim의 연구에서 명기된 방법에 의해 수행하였다. 1차 항체(mouse anti-tyrosinase: 1:200, Abcam, Cambridge, UK; mouse anti- \( \beta \)-actin: 1:1000, Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA)와 2차 항체(rabbit anti-mouse IgG-HRP: 1:5000, Santa Cruz Biotechnology, Carlsbad, CA, USA)를 반응시켰다. 단백질밴드는 광 이미지 시스템(Chemi-Doc image system) (BIO-RAD, Hercules, CA, USA)기기를 사용하여 정량하였다.</p><h2>항균활성 측정</h2><p>시간별로 항균작용이 어떤 변화를 보이는지 알아보기 위해 time-curve를 작성하였다. 방법은 Ahn 등에 명기된 방법에 의해 수행하였다. 각각 균주 배양액에 금잔화 추출물 최종농도가 100 \( \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) 이 되도록 처리한 후, 일정 시간별로 배양액을 채취하여 평편배지에 접종 후, 셍성되는 군락(colony)의 수를 측정하고 \( \mathrm{cfu} / \mathrm{mL} \)로 환산하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>모든 실험은 독립적으로 3회 반복 시행하고 실험결과는 평균 \( \pm \)표준편차로 표기하였으며, 통계처리는 Kim의 연구에서 명기된 방법에 의해 수행하였다. 즉, GraphPad Prism 5 program(GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA)을 이용하여 \( p \)값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의 하다고 판단하였다. 일원배치 분산분석(one-way analysis of varience)을 한 후, 각 시료 간의 통계적 유의성은 Bonferroni's multiple comparison test를 이용하여 수행하였다.</p>
실험에 필요한 금잔화는 어디서 구했어?
국립원예특작과학원 인삼특작부 추출물은행