<h1>재료 및 방법</h1><h2>식물재료 및 배양조건</h2><p>강원대학교 학술림 내에서 야생으로 자생하고 있는 더덕 (Codonopsis lanceolata) 식물체를 채취하여 기내배양을 위해 줄기 절편을 잘라 증류수로 수세한 후 \( 70 \% \) 에탄올로 30초 간 소독하였으며, \( 1 \% \) sodium hypochlorite에 10분 동안 침지 하여 표면살균 하였다. 이후 멸균수로 3회 세척 후 줄기 절간 부분을 약 \( 1 \mathrm{~cm} \)로 절단하여 식물체를 유도하였다. 식물체 유도 배지는 \( 1 / 2\) MS 배지에 \(3\%\) sucrose, \( 0.3 \% \) gelrite를 사용하였으며, \(\mathrm{pH} 5.8\)로 조정한 후 \( 121^{\circ} \mathrm{C} \)에서 20분간 멸균하여 플라스틱 Petri-dish에 각각 \( 20 \mathrm{~mL} \)씩 분주 하였다. 배양실 조건은 \( 40 \mu \mathrm{mol} \mathrm{m}^{-2} \mathrm{~s}^{-1} \), 백색 형광등으로 16시간 명조건, 8시간 암조건으로 온도는 \( 25 \pm 2^{\circ} \mathrm{C} \)로 배양실에서 수행하였다.</p><h2>부정근 유도 및 증식</h2><p>상기 식물체의 부위별 부정근을 유도하기 위하여 잎 \( 5 \times 5 \mathrm{~mm}^{2} \)의 크기로 절단하여 사용하였고, 줄기와 뿌리 각각 \( 5 \mathrm{~mm} \)의 크기로 \(1/2\) MS 기본배지에 \( 1 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \) NAA (IBA 또는 IAA를 첨가한 부정근 유도 배지에 치상하여 4주간 배양한 후에 유도된 부정근 수를 조사하였다. 또한 유도된 부정근의 증식은 NAA는 0.1, 0.5, 1.0 및 \( 2.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L} \)로 그리고 IBA는 0.01, 0.05, 0.1, 0.3 및 \( 0.5 \mathrm{mg} /\mathrm{L} \)로 달리하여 첨가한 \( 1 / 2\) MS 고체배지에 약 \( 1 \mathrm{~cm} \) 크기의 부정근을 Petri-dish 당 10개씩 3개의 Petri-dish에 치상하였으며, 4주간 배양 한 후, 절편체 당 유도된 부정근 수 및 길이를 조사하여 증식률을 비교하였다.</p><h2>액체 현탁 배양</h2><p>액체 배양을 통한 부정근의 증식에 있어서 배지농도 농도 및 오옥신 처리 조건을 조사하였다. 고체배지에서 유도된 부정근 \( (0.2 \mathrm{~g}) \)을 MS, \(1 / 2\) MS 및 \( 1 / 3\) MS으로 농도를 달리한 액체 배지에 각각 \( 0.1 \mathrm{mg} / \mathrm{L}\) IBA와 \( 3 \% \) sucrose를 첨가된 배지에 접종하였다. 배양용기는 \( 250 \mathrm{~mL} \) 삼각플라스크를 이용하였으며 \( 100 \mathrm{~mL} \)씩 분주하였다. 한편 적절한 오옥신 (IBA)농도를 조사하기 위해 \( 1 / 2\) MS 액체배지에 IBA (0.1, 0.5 및 \( 1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L}) \)를 넣고 상기 같은 방법으로 접종하였다. 사용된 배양용기는 \( 250 \mathrm{~mL} \) 크기의 삼각 플라스크를 이용하였으며 4주간 \( 100\mathrm{rpm} \)으로 진탕배양 하였으며, 배양 후 생체중을 측정하였다.</p><h2>생물반응기 배양</h2><p>삼각플라스크에서 증식된 더덕 부정근 (생체중 \( 10 \mathrm{~g} \) )을 3 \( \mathrm{L}\) \(1 / 2\) MS 배지가 첨가된 \( 5 \mathrm{~L} \) 용량의 공기부양식 생물반응기 (air-lift bioreactor)에 접종하였다. 이때 오옥신의 농도는 삼각 플라스크와 같이 0.1, 0.5 및 \( 1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{L}\) IBA를 달리하여 부정근 생산에 적절한 오옥신 농도를 조사하였다. 이때 생물반 응기의 공기 주입량은 \( 0.1 \mathrm{vvm} \) (air volume/culture volume/min)으로 조절하였으며, 배양은 암조건에서 상기한 동일한 배양 조건에서 4주간 배양한 다음 생중량 및 건중량 증식을 조사 하였다.</p>
더덕을 기내배양 하기위해서 처음에는 어떻게 해야하니?
줄기 절편을 잘라 증류수로 수세한 후 \( 70 \% \) 에탄올로 30초 간 소독