<h2>추출 및 분리</h2><p>Malonyl ginsenoside의 수율을 최대화하기 위하여 백삼 \( 3 \mathrm{~kg} \) 를 \( 70 \%\) \(\mathrm{EtOH} \) 수용액에 24시간 담가서 \( 10^{\circ} \mathrm{C} \) 이하의 저온 추출을 2 회 반복하였다. 얻어진 여액을 합쳐 저온 (\( 30^{\circ} \mathrm{C} \)) 에서 감압 농축하여 \( \mathrm{EtOH} \) 추출물 (\( 330 \mathrm{~g} \)) 을 얻었다. 얻어진 EtOH 추출물을 Diaion \( \mathrm{HP}-20 \) c.c. (\( \varphi 10 \times 40 \mathrm{~cm}\), \(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \rightarrow \mathrm{MeOH} \)) 를 실시하여 각 \( 500 \mathrm{~mL} \) 식 분취하였다. 각 분취액을 \( \mathrm{SiO}_{2} \)TLC 로 당이 제거되었는지를 화인하고, 비슷한 여액을 합친 후, 감압 농축하여 분획물 (\( 40 \mathrm{~g} \)) 을 얻었다. 분획 (\( 20 \mathrm{~g} \)) 에 대하여 \( \mathrm{SiO}_{2} \) c.c. ( \( \Phi 6.0 \times 22.0 \mathrm{~cm}\), \(\mathrm{CHCl}_{3}-\mathrm{MeOH}-\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}=15: 3: 1 \rightarrow 7: 3: 1 \rightarrow 6: 4: 1 \), 총 \( 30 \mathrm{~L} \) 사용)를 실시하여 총 17개의 분획물(PG-1-PG-17)을 얻었다. 그 중 PG-4-7 분획, PG-9 분획, PG-10 분획 및 PG-11-14 분획에 대하여 중압분취장비(Medium Pressure Liquid Chromatography, YMC LC-Forte/R)를 이용-하여 분리를 진행하였다. PG-4-7분획에 대하여 MPLC를 진행하였다. 이때 사용된 컬럼은 YMC-pack pro \( \mathrm{C} 18(20 \mathrm{~mm} \times 250 \mathrm{~mm}, 10 \mu \mathrm{m}) \) 를 사용하였으며 이동 상의 용매는 \( \mathrm{A}\left(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\right) : \mathrm{B} (\mathrm{MeCN}) \) 를 사용-하였고, \( \mathrm{A}: \mathrm{B}(85: 15 \), \( 0-2 \mathrm{~min})\), \(\mathrm{A}: \mathrm{B} (80:20, 2-4 \mathrm{min})\), \(\mathrm{A}: \mathrm{B} (80:20, 4-10 \mathrm{min})\), \( \mathrm{A}: \mathrm{B} (70:30, 10-25 \mathrm{min})\), \(\mathrm{A}:\mathrm{B} (40:60, 25-45 \mathrm{min})\), \(\mathrm{A}:\mathrm{B} (10:90 45-52 \mathrm{min})\), \(\mathrm{A}: \mathrm{B} (10:90, 60 \mathrm{~min}) \) 의 조건에서 \( 5 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) 의 유속으로 \( 203 \mathrm{~nm} \) 파장에서 분리를 하였으며 총 4 개의 분획물을얻었다. 그중 PG-4-7-1 분획 \( (310 \mathrm{mg}) \) 에 대하여 직경 \( \Phi 10 \mathrm{~mm} \)의 분취컬럼(YMC-pack pro \( \mathrm{C} 18\),\(10 \mathrm{~mm} \times 250 \mathrm{~mm}\), \(5 \mu \mathrm{m} \) )을 사용하였으며 이동상의 기울기 조건은 \( \mathrm{A}: \mathrm{B} (90:10, 0-0.15 \mathrm{min} )\), \(\mathrm{A}: \mathrm{B} (65:35, 0.15-5 \mathrm{min})\), \(\mathrm{A}:\mathrm{B} (50:50, 5-25 \mathrm{min})\), \(\mathrm{A}:\mathrm{B} (0: 100,25-30 \mathrm{~min}) \) 의 조건에서 \( 2 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) 의 유속으로 \( 203 \mathrm{~nm} \) 파장에서 분리를 하였다. 총 7개의 분획(PG-4-7-1-1 PG-4-7-1-7)을 얻었다. PG-4-7-1-2 분획(\(420 \mathrm{mg}\))은 앞 분획과 동일한 컬럼을 사용하였고 이동상의 기울기 조건은 \( \mathrm{A}: \mathrm{B} (90:10, 0-0.15 \mathrm{min})\), \(\mathrm{A}: \mathrm{B}(80: 20,0.15-5 \mathrm{~min})\), \(\mathrm{A}: \mathrm{B}(50: 50,5-30 \mathrm{~min})\), \(\mathrm{A}: \mathrm{B} (40:60, 30-40 \mathrm{min})\)의 조건에서 \( 3 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) 의 유속으로 \( 203 \mathrm{~nm} \) 파장에서 분리를 하였으며, 총 11개의 분획물(PG-4-7-1-2-1-PG-4-7-1-2-11)을 얻었다. PG-4-7-1-4 분획(520 mg)은 앞 분획과 동일한 컬럼을 사용하였고 이동상의 기울기 조건은 \( \mathrm{A}: \mathrm{B} (80:20, 0-0.15 \mathrm{~min})\), \(\mathrm{A}: \mathrm{B}(50: 50,40 \mathrm{~min})\), \(\mathrm{A}: \mathrm{B}(0: 100,45 \mathrm{~min}) \) 의 조건에서 \( 2 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) 의 유속으로 \( 203 \mathrm{~nm} \) 파장에서 분리를 하였으며, 총 7개의 분획물(PG-4-7-1-4-1-PG-4-7-1-4-7)을 얻었다. 위에서 얻은 분획물 중 TLC로 확인 시 malonyl ginsenoside가 존재할 것으로 예상되는 PG-4-7-1-7, PG-4-7-2-11, PG-4-7-4-7 분획(총\(85.7 \mathrm{mg}\))을 합쳐서 앞 분획과 같은 MPLC조건으로 분리를 진행한 결과 화합물 1 (\(26.6 \mathrm{mg}\))를 분리하였다(Fig. 1). PG-9 (\(287 \mathrm{mg}\))에 대하여 분취컬럼 (\( \Phi 10 \mathrm{~mm} \)) 및 이동상의 기울기는 \( \mathrm{A}: \mathrm{B} (90:10, 0-15 \mathrm{min})\)의 조건에서 \( 2 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) 의 유속으로 \( 203 \mathrm{~nm} \) 파장에서 분리를 하였고 총 7개의 분획물(PG-9-1-PG-9-7)을 얻었다. PG-9-3 (\(40 \mathrm{mg}\))에 대하여 앞 분획과 동일한 컬럼을 사용하였으며 이동상의 기울기는 \( \mathrm{A}: \mathrm{B}\left(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}: \mathrm{MeOH}\right. \), \( 28: 72,60 \mathrm{~min}) \) 의 조건에서 \( 2.5 \mathrm{~mL} / \mathrm{min} \) 의 유속으로 \( 203 \mathrm{~nm} \) 파장에서 분리를 하였으며 총 4개의 분획물을 얻었고, 그중 화합물 3(\(13.5 \mathrm{mg} \)) 를 분리하였다.</p>
Malonyl ginsenoside의 수율을 최대화하기 위해서는 백삼 얼마를 저온 추출을 해?
\( 3 \mathrm{~kg} \)