<h1>결과 및 고찰</h1><p>공시재료로 사용된 자가화합성 양배추 계통을 이용하여 self-pollination을 시킨 후 화분관 검경을 실시한 결과 Fig. 1에서와 같이 화분관이 신장한 자가화합성(Self-compatible, SC)을 나타내었다. 이 양배추 자가화합성 계통의 주두측 자가불화합성 인자 SLG 영역과 SRK 영역의 전장을 증폭하기 위하여 Park 등 및 Nishio 등이 사용한 여러 조합의 primer를 합성하였으며 이들 primer들을 이용하여 PCR을 수행하였다. 우선 SLG영역을 증폭하기 위하여 ishio 등이사용한 primer를 이용하여 약 \( 1.3 \mathrm{~kb} \) 의 단편을 증폭시켜 cloning하였다. SLG영역은 S-유전자 좌에는 연쇄되어 있지 않지만 유전자 발현 양상이 유사한 SLR 유전자와 매우 높은 염기 유사성을 갖는다. 그러므로 이 primer들을 이용하여 증폭된 DNA 단편들은 SLG 유전자뿐만 아니라 SLR 유전자도 같이 증폭될 가능성이 높다. 그러나 Brace 등은 이들 primer를 이용하여 증폭된 PCR 산물을 Sty Ⅰ 제한효소로 처리하였을 때 SLR1 유전자는 3개의 밴드로 분획 되고 SLR2 유전자는 분획 되지 않으며 SLG 유전자는 이들과 밴드 양상이 다르게 분획된다고 보고하였다. 실제로 본 실험에서 증폭된 SLG 단편을 cloning하여 얻은 다수의 clone들의 plasmid DNA를 추출하여 PCR을 수행한 후 Sty Ⅰ으로 제한효소 처리한 결과 분획되지 않는 SLR2 단편들이 많았으며, 분획 되었더라도 Brace 등이 보고한 SLR1 유전자의 분획 단편과 비슷한 분획 양상 을 보이는 clone들이 다수 존재하였다. 그러므로, 이들 SLR 유전자의 clone들은 제외시키고 sequencing하여 SC-SLG (self-compatible S locus glycoprotein) 염기를 결정하였다.</p><p>또한, SRK 유전자의 전장은 약 \( 2.5 \mathrm{~kb} \) 정도이지만 6개의 크기가 각기 다른 intron이 삽입되어 있어서 genomic 상태에서의 크기는 약 \( 5.3 \mathrm{~kb} \) 정도로 크다. 따라서 이들 모두를 증폭시키기 위하여 S-domain, transmembran domain 및 kinase domain 영역에서 Nishio 등과 Park 등이 이용한 여러 조합의 primer를 합성하였다. 이들 primer들을 이용한 PCR 실험은 단일 DNA 단편들을 증폭시켰으며, 증폭된 SC-SRK (self-compatible S-locus receptor kinase) DNA 단편들을 cloning 및 sequencing하여 결정된 염기들을 이미 보고된 SRK의 염기들과 비교 분석하였다.</p><p>SLG 및 SRK의 S-domain은 \( 77 \% \sim 97 \% \)의 매우 높은 염기유사성을 나타내고, 이들 영역의 일반적인 특징은 여러 개의 potential N-glycosylation site와 12개의 cysteine 잔기가 보존되어 있으며, 3개의 hyperveriable 영역을 갖는다고 보고되었다. 이 실험에서 동정된 SC-SLG와 SC-SRK의 S-domain의 염기 유사성의 비교 분석에 있어서, SC-SLG 및 SC-SRK 의 S-domain 영역의 염기들은 개시 코돈을 포함하여 SC-SLG는 436 아미노산 코돈으로 구성되었으며, SC-SRK는 1 개의 threonine 잔기가 삽입되어 437 아미노산 코돈으로 구성되어 있었다. SC-SLG 및 SC-SRK의 S-domain 간의 염기 유사성은 아미노산 수준에서 약 \( 92 \% \)로 매우 높았고 12개의 cysteine 잔기가 모두 보존되어 있어 이들 유전자들은 이미 보고된 SLG 및 SRK 의 S-domain의 일반적인 특징들을 모두 나타내었다. 또한, 이들 SC-SLG 및 SC-SRK 유전자의 발현을 확인하기 위하여 RT-PCR을 수행하였다. 그 결과 PS5와 PS15 primer를 사용한 SC-SLG 및 PK1과 PK4를 이용한 SC-SRK의 발현 또한 정상적임을 확인할 수 있었다.</p><p>Gaude 등은 Brassica oleracea의 자가화합성 계통에 있어서, 자가화합성 SLG 영역은 자가불화합성이 약한 class Ⅱ 그룹에 속하는 \( S L G^{2} \)에 염기 유사성이 더 높다고 보고하였으나, Watanabe 등은 자가화합성 B. campestris L. var yellow sarson (C636) 계통의 SLG 영역은 자가불화합성이 강한 class Ⅰ 그룹의 SLG들에 더 높은 염기 유사성을 나타낸다고 보고하였다. 그리고, Goring 등은 자가화합성 B. napus의 SLG와 SRK의 S-domain 영역의 염기 비고에 있어서 S-domain 영역 의 염기 \( 1 \mathrm{bp} \)가 삭제됨으로써 shift reading frame이 일어나 ORF내에 1개의 종지 코돈이 생겨 불완전한 receptor 산물을 만들었다고 보고하였고, B. oleracea 계통 S-f1의 SRK 유전자는 많은 영역이 삭제 및 발현되지 않았다. 또한, B. campestris의 yellow sarson 역시 SRK 유전자가 발현되지 않았다. 그러나 이 실험에서 동정된 SC-SLG 영역의 DNA염기들은 자가불화합성이 강한 class Ⅰ 그룹의 SLG DNA염기들에 더 높은 염기 유사성을 나타내었다. 또한 SC-SRK의 S-domain 영역의 DNA 염기들 역시 class Ⅰ 그릅의 SRK DNA염기들에 더 높은 염기 유사성을 나타내었으며, 삽입 또는 삭제에 의한 shift reading frame은 일어나지 않았다. 그 밖에, transmembran domain 및 kinase domain 영역을 분석한 결과, 이들 영역 역시 class Ⅰ 그룹의 SRK 염기들에 더 높은 염기 유사성을 나타내었다.</p><p>자가화합성을 나타낸 양배추 계통에서 동정된 MOD 유전자의 아미노산 염기들을 분석하였다. 식물에 있어서, MOD 유전자는 tonoplast 고유의 단백질들을 부호화하는 유전자들을 포함할 뿐만 아니라, Arabidopsis의 RD28-PIP, PIP1A, PIP1B, PIP2 유전자들과 같은 plasma membrane 고유의 단백질들을 부호화하는 유전자들을 포함하므로, 이 실험에서 동정된 MOD 유전자의 아미노산 염기들을 Arabidopsis의 PIP1A, PIPB 유전자와 비교하였다. 그 결과, 동정된 SC-MOD 유전자는 MIP (major intrinsic protein) 유전자군에 보존된 잔기들을 포함하고 있었으며, PIP 유전자의 subgroup에 속하는 PIP1A 유전자와 \( 97 \% \) 의 높은 상동성을 나타내었다. 또한 자가화합성을 나타내는 양배추 계통의 SC-MOD 유전자의 물리적 특이성은 발견할 수 없었다.</p><p>이 실험에 있어서 자가화합성을 나타내는 양배추 계통의 주두측 자가불화합성 유전자인 SLG와 SRK의 염기 분석 결과, 이들 영역에서의 특이성은 발견할 수 없었고, 수화작용에 관여하는 MOD 유전자 역시 특이성을 발견할 수 없었다. 따라서, 자가화합성이 일어나는 이유가 주두측 자가불화합성 유전자에 이상이 있는 것이 아니라 최근 동정된 화분측 자가불화 합성 유전자의 이상 그리고/또는 S-locus에 연쇄되어 있지 않지만 자가불화합성에 관여하는 유전자의 변이에 의해 자가불화합성이 타파되었다고 생각되며, 이 계통의 화분측 자가불화 합성 유전자(SCR/SP11) 동정 실험을 수행하고 있다.</p>
배열하다를 영어로 어떻게 쓸 수 있는가?
sequencing