<p>4일간의 EGCG 처리가 C2C12 myoblast 세포를 형태적 관점에서 보았을 때 smooth muscle의 형태로 변화시켰으며, 이러한 결과를 분자적으로 검증하기 위하여 smooth muscle의 지표로 널리 알려진 smooth muscle a-actin 단백질의 발현정도를 immunofluorescent staining 방법을 이용하여 알아보았다. Fig. 2의 d에 나타난 것과 같이 초록색(화살표)으로 나타난 부분이 smooth muscle a-actin 항체에 의해 염색된 smooth muscle a-actin 단백질이다. Fig. 2의 a와 b에서 보듯이 대조군에서는 세포 증식에 의해 핵이 많이 증가하였지만, smooth muscle \( a \)-actin 단백질은 전혀 찾아볼 수 없다. 반면, EGCG로 4일 동안 처리된 C2C12 myoblast 세포에서는 smooth muscle \( \alpha \)-actin 단백질의 발현을 확연히 관찰할 수 있었다. 또한 EGCG의 농도가 증가하면 할수록 plate 상에서 세포의 증식은 점점 줄어드는 반면, smooth muscle a-actin의 발현 빈도는 증가하였다. 이러한 결과는 EGCG가 C2C12 myoblast 세포에서 smooth muscle로의 분화를 촉진함을 분자적 수준에서 보여주는 것이다. smooth muscle \( \alpha \) -actin은 혈관벽 또는 smooth muscle을 가지고 있는 여러 조직에서 발견된다. smooth muscle \( \alpha \)-actin은 사실상 발아기의 심장근이나 골격근의 분화(embryonic differentiation)과정에서 일시적으로 나타나지만 성인의 심장이나 골격근에서는 나타나지 않는다. Springer 등은 C2C12 골격근 myoblast로부터 기인된 myotube에서 smooth muscle a-actin 단백질이 일시적으로 발현된다고 보고하였다. 따라서 본 연구에서 관찰된 smooth muscle \( \alpha \)-actin의 발현으로서 smooth muscle로 분화가 되었다고 단정하기는 어려울 것이라는 가능성을 배제할 수 없었다. 하지만 형태학적으로는 물론 골격근 my-otube의 가장 큰 특징 중 하나인 다핵(multinucleated)을 가진 세포 또한 관찰할 수 없었다. smooth muscle \( \alpha \)-actin을 발현하는 세포들에서 한 개 또는 두 개의 핵이 존재하였으며, 이러한 한 개 또는 두 개의 핵 수는 smooth muscle에서 나타나는 전형적인 특징 중 하나이다. 또한, 세포의 형태로 보았을 때 EGCG를 처리한 초기에는 길어지는 elongation 현상이 일어났으며, 시간이 점점 더 흐름에 따라 주위의 세포들과 fusion 현상이 일어나면서 형태가 매우 커지는 것을 관찰할 수 있었다. 이러한 현상은 근육 myotube가 형성될 때에도 나타나지만, myotube 형성 시에는 굵지만 길고 긴 형태의 tube 모양이 일반적으로 나타난다. 하지만 본 연구에서의 세포 형태는 일반적인 공통점을 찾기 어려울 만큼 다양한 형태의 세포가 형성되었다. 즉, 세포의 형태, 핵의 수, smooth muscle a-actin의 발현을 종합해 볼 때 EGCG가 C2C12 myoblast 세포를 smooth muscle로 분화시킴을 검증할 수 있었다.</p><p>본 연구에서는 한층 더 나아가 smooth muscle의 marker인 transgelin과 smooth muscle a-actin mRNA의 변화를 살펴보았다. 그 결과 4일간의 EGCG를 처리한 C2C12 myoblasts 세포에서 transgelin과 smooth muscle \( \alpha \)-actin mRNA의 발현이 최대 약 9배와 5배 정도 각각 대조군에 비해 증가함을 나타냈다. 시간적인 개념으로 보았을 때 24시간 동안의 \( 50 \mu \mathrm{M} \mathrm{EGCG} \) 는 transgelin과 smooth muscle \( \alpha \)-actin mRNA 발현에 영향을 미치지 않았으나, \( 50 \mu \mathrm{M} \) 의 EGCG를 48시간, 72시간동안 C2C12 myoblast 세포에 처리한 후 transgelin과 smooth muscle a-actin mRNA는 약 5-6배 정도 대조군에 비해 높게 발현됨을 나타내었다. 이러한 결과를 바탕으로 볼 때 식이성 폴리페놀인 EGCG가 mouse C2C12 myoblast 세포에서 중요한 후천적(epigenetic) 유전자 발현기전인 DNA 메틸화를 조절함으로써 골격근으로의 분화가 아닌 smooth muscle로의 분화를 유도함을 다시 한 번 검증할 수 있었다.</p><p>Smooth muscle 세포는 혈관의 발달과 혈관질환의 형성과 진행에 있어서 중요한 역할을 하지만, smooth muscle의 분화를 조절하는 기전에 대한 이해는 매우 부족한 실정이다. 이러한 smooth muscle의 분화기전에 대한 연구가 어려운 가장 큰 이유 중 한 가지는 골격근 발달과 분화 초기단계의 연구에 주로 사용되는 C2C12 세포와 \( 10 \mathrm{~T} 1 / 2 \) 세포에 상응하는 좋은 in vitro 분화 시스템이 부족하기 때문이다. 이러한 문제를 해결하기 위하여 몇몇 학자들이 mouse embryonal carcinoma(p19)세포, 신경관 줄기세포(neural crest stem cell), mouse embryonic 10T1/2 세포를 smooth muscle로 전이분화(transdifferentiation)를 유도함으로써 초기 분화단계에 대한 기작연구를 수행하기에 이르렀다. 따라서 본 연구에서 보고한 mouse C2C12 세포가 녹차 추출성분인 EGCG에 의해 smooth muscle로의 전이분화는 smooth muscle의 형성과 분화초기의 연구에 있어서 훌륭한 시스템을 제공할 것으로 사료된다.</p>
smooth muscle \( \alpha \) -actin은 어디에서 발견할 수 있어?
혈관벽 또는 smooth muscle을 가지고 있는 여러 조직