<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>본 실험에 사용한 미생물은 Aureobasdium pullulans KFCC (Korean Foundation of Culture Collection) 10245로 사면배지에 보관하였으며 사면배지로부터 종균배양을 하여 미생물의 활성을 증가시킨 다음 성장배지에서 배양했다. A. pullulans는 호기적 조건에서만 성장한다. 본 실험에서는 \( 300 \mathrm{ml} \) 삼각플라스크에 멸균된 배지 \( 100 \mathrm{ml} \)를 넣고 호기성 상태를 유지하기 워해 통기성 실리콘마개로 막아 멸균한 후, 접종원을 피펫을 이용하여 접종하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)의 진탕배양기에서 \( 150 \mathrm{rpm} \)으로 각각 72, 48시간 동안 배양하였다. 미생물을 회수하기 위해 \( 3,000 \mathrm{rpm} \) 으로 20 분간 원심분리한 다음, 상등액을 버리고 pellet은 같은 양의 증류수로 재 현탁시켜 다시 원심분리하는 과정을 3차례 실시하였다. 여기서 얻어진 미생물을 이온이 제거된 초순수 증류수에 현탁시켜 흡착실험에 사용하기 전까지 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 냉장 보관하였다. 실험에 사용된 중금속은 납, 니켈, 카드늄, 크롬으로 특급시약인 \( \mathrm{Pb}\left(\mathrm{NO}_{3}\right)_{2} \), \( \mathrm{Ni}\left(\mathrm{NO}_{3}\right)_{2} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(\mathrm{Cd}\left(\mathrm{NO}_{3}\right)_{2} \cdot 4 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(\mathrm{Cr}\left(\mathrm{NO}_{3}\right)_{2} \cdot 9 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \)를 탈이온화된 초순수 증류수(Millipore, Milli-Q)에 용해시켜 원하는 농도로 희석하여 사용하였다.</p><h2>실험방법</h2><p>미생물 현탁액 \( (50 \mathrm{ml}) \) 와 원하는 농도의 2배가 되도록 준비한 중금속 용액 \( (50 \mathrm{ml}) \) 을 \( 300 \mathrm{ml} \) 플라스크에서 1:1로 섞은 후, 진탕배양기에서 \( 30^{\circ} \mathrm{C}\), \(150 \mathrm{rpm} \) 으로 교반하였다. 일정한 시간간격으로 \( 1.5 \mathrm{ml} \) 시료를 재취하여 \( 10,000 \mathrm{rpm} \)에서 10분간 원심분리한 후, 상등액을 희석하여 중금속의 농도를 측정하였다. 균체건조무게는 균체용액의 흡광도 \( (660 \mathrm{~nm}) \)를 측정하여 구하였으며, 잔류 납농도와 초기 납농도의 차이를 균체 건조무게로 나누어 흡착된 납의 양을 계산하였다. 그리고 진탕배양기의 온도를 \( 20 \sim 50^{\circ} \mathrm{C} \) 범위에서 \( 10^{\circ} \mathrm{C} \) 간격으로 설정해서 미생물 현탁액과 납 용액을 혼합한 \( 300 \mathrm{ml} \) 삼각플라스크를 교반하면서 흡착실험 과정과 동일하게 실험하였다. 일정한 납 용액에 \( 0.1 \mathrm{M}-\mathrm{HNO}_{3} \) 와 \( 0.01 \mathrm{M}-\mathrm{NaOH} \) 용액으로 \( \mathrm{pH} \) 를 다양하게 조절한 후, 농도가 일정한 미생물 현탁액과 혼합했다. 이 후, 실험방법도 흡착실험 과정과 동일하게 하였다. 농도의 영향에 대한 실험은 위에서 구한 최적온도와 \( \mathrm{pH} \) 조건에서 미생물 농도를 일정하게 유지하고 초기 납용액의 농도를 \( 50 \sim 500 \mathrm{mg} / \mathrm{l} \) 범위 내에서 다양하게 변화시키며 흡착실험을 하였다. 흡착시 초기 미생물 농도의 영향은 초기 납용액의 농도를 일정하게 두고 미생물의 농도를 변화시키며 흡착실험을 했다. 이때 A. pullulans를 \( 1 \mathrm{~g} / \mathrm{l} \) 이하의 농도에서 실시하였다.</p>
본 실험은 실험에 쓰이는 미생물을 보관한 곳은 어디인가?
사면배지