<p>Scotti등은 다양한 분비 서열 ( \( \alpha \)-factor, invertase, acid phospatase)을 사용하여 B. subtilis 유래의 levansucrase에 대한 효모에서의 분비 효율을 조사한 연구결과에 따르면 in-vertase 분비 서열(MLLQAFLFLLAG FAAKISA) 하류에 ma-ture levansucrase의 N-말단 아미노산 서열을 GSKETNQKPY 에서 GSTQTNQTPY으로 치환하여 negative net charge를 neutral net charge로 바꾸었을 때 endoplasmic reticulum(ER)의 lumen으로 levansucrase가 효과적으로 수송되지만 배지 내로의 분비는 미약하였음을 보고하였다. 성숙 단백질 N-말단의 net charge와 효모 분비 서열의 소수성 core 영역은 효모 분비경로의 첫 단계인 ER로의 수송과 분비 서열의 절단에서 효과적으로 기능을 하나, 성숙 단백질 전체의 net charge 등이 개선되어야 ER에서 Golgi체로, Golgi체에서 분비과립으로, 분비과립에서 budding cell wall 또는 세포밖으로 일련의 분비능을 향상시킬 수 있는 것으로 보고되었다. Thermus caldophilus GK24 유래의 \( \alpha \)-glucosidase는 효모 \( \alpha \)-factor 분비 서열을 이용하여 S. cerevisiae 에서 분비 발현이 시도된 바 있다. 따라서 성숙단백질 전체의 net charge 등을 개선함과 동시에 INU1의 분비서열을 사용하게 되면 일련의 분비경로 중 율속 단계를 해결하여 이종 단백질의 분비능을 \( 80 \% \) 이상으로 향상시킬 수 있을 것으로 사료된다.</p><h2>당쇄 부가 양상</h2><p>S. cerevisiae 2805/pYInu-CT1의 발효조 회분배양 말기의 배양액 및 효모 균체 단백질을 SDS-PAGE와 SDS-PAGE 후의 활성염색을 행하였다. 배지 분획에서는 \( 100 \mathrm{kDa} \) 이상의 분자량에서 단백질 밴드가 보였다. 야생형 cel A는 SDS-PAGE 상에서 \( 52 \mathrm{kDa} \) 분자량을 나타내며, celA에는 총 6개의 N-linked 당쇄부가 위치(Asn-Xaa-Ser/Thr)가 있으며 그 중 당쇄부가 확률이 \( 95 \% \) 이상인 부위가 2개(Asn-Gly-Ser, Asn-Ser-Thr)와 \( 87 \% \) 의 당쇄부가 위치가 2 개(Asn-Gly-Ser, Asn-Ser-Ser) 존재한다. 이와 같은 점을 고려해 볼 때 당쇄부가에 의해 \( 100,150,180 \mathrm{kDa} \) 이상의 활성 단백질 밴드가 나타난 것으로 사료된다. 또한 이 활성 밴드는 전형적인 당단백질의 분산된(dispersed) 밴드를 보여주었다. 효모 균체 단백질에서는 야생형의 크기인 \( 52 \mathrm{kDa} \) 에서 활성 밴드가 나타났다. 이는 당쇄부가를 받지 않은 형태로도 세포내에 endoglucanase A가 존재함을 의미한다.</p><p>이상의 당쇄부가 형태를 고려해 볼 때 재조합 endogluca-nase A 는 효모에서 GAL10 promoter와 exoinulinase 분비 신호를 이용하여 효율적으로 과발현 분비생산이 되며, 분비 시에는 분자량 대비 \( 100 \% \) 이상의 비율로 당쇄가 부가됨을 알 수 있었다.</p>
Thermus caldophilus GK24 유래의 \( \alpha \)-glucosidase는 효모 \( \alpha \)-factor 분비 서열을 이용하여 S.cerevisiae 에서 분비 발현이 시도된 적이 전혀 없지?
NO