<h2>Alginate lyase의 Image 분석</h2><p>E. coli 세포에서 발현된 alginate lyase의 양을 분석하기 위하여 세포 용해물(cell lysates)을 가용성 분획과 불용성 분획으로 나누고 SDS-PAGE 후 나타난 단백질 밴드들을 scanning하여 분석하였다. 각 분획의 단백질 밴드 총 비율을 \( 100 \% \)로 보고, alginate lyase 밴드만의 비율을 측정하여 비교하였다. Fig. 2의 gel을 scanning 한 결과, alginate lyase를 단독 발현했을 때 가용성 분획에서의 alginate lyase 밴드 비율은 \( 3 \% \)에 그쳤다. 그러나 DnaK/DnaJ/GrpE chaperone과 alginate lyase를 공발현시켰을 경우, \( 34 \% \) 이상의 alginate lyase가 가용성 분획에서 생산되었다. 실제로 Larabinose 농도를 \( 0.05 \, \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 까지 증가시킴에 따라 alginate lyase 효소 활성이 \( 1.4 \) unit/g-soluble protein에서 \( 20.0 \, \mathrm{unit} / \mathrm{g} \)-soluble protein으로 14배나 증가함을 확인하였다(data not shown).</p><p>결론적으로 GroEL/ES chaperone 보다 오히려 DnaK/DnaJ/GrpE chaperone과의 공발현이 가용성 활성형 alginate lyase의 생산에 더 효과적이었으며, 다른 재조합 단백질을 활성형 및 수용성 형태로 생산하는 데에도 활용될 수 있을 것으로 사료된다.</p><h2>Alginate lyase의 depolymerization 분석</h2><p>숙주세포 E. coli BL21 (DE3), alginate lyase를 단독 발현하는 형질전환체(BL21/pALP4), alginate lyase와 DnaK/DnaJ/GrpE chaperone을 공발현하는 형질전환체(BL21/pALP4+pG-KJE6)들은 alginate를 함유한 LB 배지에서 5일간 배양한 후, \( 10 \% \) cetylpyridinium chloride으로 콜로니가 잠길 수 있도록 붓고, 20 분간 상온에서 shaking하여 반응하였다. 그 결과, BL21/ pALP4의 단독 발현 콜로니와 비교하면 BL21/pALP4+pG-KJE6의 공발현 형질전환 콜로니 주위에 투명환이 뚜렷이 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 이와 같은 공발현 콜로니 주위에 투명환 생성은 alginate의 분해에 의한 것으로 생각되며, 이런 alginate 고형배지를 사용하면 낭포성 섬유증 환자의 치료제 효소인 alginate lyase 생산 미생물의 선별에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 사료된다.</p>
Alginate lyase의 Image 분석과정에서, 알긴산분해효소 양에 대해 최종적으로 단백질 밴드들에 대해서 어떻게 분석했어?
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