<h1>재료 및 방법</h1><h2>강화 사자발약쑥 추출물의 제조, 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량</h2><p>강화산 사자발약숙(Isthere사, Ilsan, South Korea)의 분말에 \(50 \%\)\( (\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 에탄올 용액을 10 배 \( (\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) 넣고 \(50{ }^{\circ} \mathrm{C} \) 항온진탕조에시 2시간 동안 추출한 후 원심분리 (\(3,000 \times g \), 10 분)하여 사자발약쑥 추출물을 얻었다.</p><p>사자발약쑥 추출물의 폴리페놀 함량은 Folin과 Denis의 방법으로 확인하였고, 약쑥 추출물과 Folin 용액을 혼합하여 실온에서 5분 반응시킨 후 \(10\%\) \( \mathrm{Na}_{2} \mathrm{CO}_{3} \) 용액을 가하여 실온에서 1시간 정치한 다음 \(725 \mathrm{~nm} \) 의 흡광도를 측정하였다. 사자발약쑥 추출물의 플라보노이드 함량은 Davis의 방법으로 확인하였고, 악쑥 추출물에 diethylene glycol과 \(1 \mathrm{N}\) \(\mathrm{NaOH} \) 용액을 가하고 \(37 ^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1 시간 반응시킨 후 \(420 \mathrm{~nm} \) 의 흡광도를 측정하였다.</p><h2>강화 사자발약쑥 추출물의 항산화 활성</h2><p>사자발약쑥 추출물의 2,2'-azinobis-(3-ethyl-benzothiazoline)-sulfonic acid (ABTS) 양이온라디칼에 대한 소거활성은 Re 등의 방법으로 확인하였고, 악쑥 추출물에 \(7.5 \mathrm{mM}\) ABTS 용액(\(\text{흡광도} =1.500 \pm 0.02 \)) 을 넣고 실온에서 90 분 반응시킨 후 \( 414 \mathrm{nm} \)의 흡광도를 측정하였다. 사자발약쑥 추출물의 2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl (DPPH) 유리라디칼에 대한 소거활성은 Blois의 방법으로 확인하였고, 약쑥 추출물에 \( 0.2 \mathrm{mM} \) DPPH 용엑을 넣고 실온에서 30 분 반응시킨 후 \(517 \mathrm{~nm} \) 의 흡광도를 측정하였다.</p><p>또한, 사자발약숙 추출물의 아질산염에 대한 소거활성은 Gray와 Dugan의 방법으로 확인하였고, \(0.2 \mathrm{M} \) citrate 완충엑 (\( \mathrm{pH} 1.2\)) 에 약쑥 추출물과 \( 1 \mathrm{mM} \) sodium nitrite을 혼합하여 \(37 ^{\circ} \mathrm{C} \) 에 실온에서 1시간 반응시키고 \( 2\%\) acetic acid와 Griess 시약을 첨가하여 실온에서 15 분 정치한 후 \(520 \mathrm{~nm} \) 의 흡광도를 측정하였다. 양이온라디칼, 유리라디칼 및 아질산염 소기능(\(\%\))은 \([1-(\text{실험군의 흡광도}/\text{대조군의 흡광도}) ] \times 100 \) 로 계산하였다.</p><p>사자발약쑥 추출물의 환원력은 Oyaizu의 방법으로 확인하였고, \(0.2 \mathrm{M} \) phosphate 완충액 (\( \mathrm{pH} 6.68\))에 약쑥 추출물과 \(1\%\) potassium ferricyanide (III)를 혼합하여 \(50 { }^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 20분 반응시켜 얻어진 반응액에 \(10\%\) trichloroacetic acid를 처리하여 원심분리 (\( 3,000 \times g \), 10 분 ) 한 후, 상등엑에 0.1% ferric chloride를 넣고 \(700 \mathrm{~nm} \) 의 흡광도를 측정하였다. 사자발약쑥 추출물의 지질과산화 억제활성은 Nakatani와 Kikuzaki의 방법으로 확인하였고, \(50 \mathrm{mM} \) phosphate 완충액 (\( \mathrm{pH} 7.0\))에서 약쑥 추출물과 \(2.5 \mathrm{mg} / \mathrm{mL} \) linoleic acid를 혼합하여 \(45 ^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 72 시간 산화시키고 \(30\%\) ammonium thiocyanate와 혼합하여 5 분 정치시킨 후 \(20 \mathrm{mM} \) ferrous chloride 용액을 넣어 \(500 \mathrm{nm} \) 의 흡광도를 측정하였다.</p><h2>강화 사자발약쑥 추출물의 혈장 항응고 활성</h2><p>사자발약쑥 추출물의 혈장 항응고 활성은 Fox 등의 방법에 따라 blood coagulation analyzer (CM2, Behnk Elektronik, Norderstedt, Germany)를 사용하 activated partial thromboplastin time ( aPTT), prothrombin time (PT) ) 및 thrombin time (TT)을 측정하였다. 이때 사람의 표준 혈장, thromboplastin, aPTT-XL 용액 및 thrombin은 Thermo Fisher Scientific사(Middletown, VA, USA)의 제품을 사용하였다. PT는 사람의 표준 혈장에 약쑥 추출물을 넣고 \(37 ^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 3분 정치시킨 후 thromboplastin 용액을 넣어 측정하였고, aPTT 는 사람의 표준 혈장에 약쑥 추출물과 aPTT-XL 용액을 넣고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 3 분 정치시킨 후 \(20 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{CaCl} \) 를 넣어 측정하였다. TT는 사람의 표준 혈장에 약쑥 추출물과 \(20 \mathrm{mM}\) \(\mathrm{CaCl}{ }_{2} \) 를 넣고 \(37 ^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 3분 정치시킨 후 \(0.5 \mathrm{U} \) thrombin을 넣어 측정하였다.</p>
강화산 사자발약쑥 분말로 사자발약쑥 추출물을 얻을때 \(50 \%\)\( (\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) 에탄올 용액을 몇 배 넣어야 하는가?
10 배