<h1>재료 및 방법</h1><h2>분석재료</h2><p>본 실험에 사용한 동충하초는 신농생명공학(광주광역시 광산구)에서 제공받은 자실체와 균사체를 이용하여 분석을 진행하였다. 추출물은 표면의 불순물을 증류수로 깨끗이 세척, 제거한 동충하초 자실체 \( 100 \mathrm{~g} \) 을 증류수 \( 1,000 \mathrm{ml} \) 와 함께 가정용 소형약탕기(대웅 DWP-3800P)에 넣고 \( 100 \sim 120^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 120 분간 가열하여 얻은 추출액을 면포로 여과한 후 \( 3,000\mathrm{rpm} \) 으로 15분간 원심분리하고 상층액을 감압농축하여 동결건조 과정을 거쳐 분말로 만들어 시료로 사용하였다. 균사체는 \( 3,000\mathrm{rpm} \)에서 15 분간 원심분리한 침전물을 동결건조하여 시료로 사용하였다.</p><h2>일반성분의 분석</h2><p>동충하초의 추출물과 균사체의 수분, 회분, 탄수화물, 조지방, 조단백질의 함량을 분석하기 위하여 시료를 식품공전의 일반성분 시험법에 따라 측정하였고 시료당 3 번씩 반복수행 하였다.</p><h2>무기성분의 분석</h2><p>식품공전의 미량영양성분시험법에 따라 시료 \( 7.5 \mathrm{~g} \) 에 증류수 \( 500 \mathrm{ml} \) 을 가하여 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간 가열 교반하여 여과 한 후 용액화된 시료의 주원소 및 미량원소의 농도를 측정할 수 있는 flame and furnace, 4-lamp turret, Quadline background correction, GFTV로 된 원자 흡광 분광분석기(UNICAM 989)를 이용하여 분석을 하였다.</p><h2>유리아미노산의 분석</h2><p>시료 \( 200 \mathrm{mg} \) 을 absolute ethanol \( 1 \mathrm{ml} \) 에 첨가하여 혼합한 후 상온에서 24시간 동안 교반하여 유리아미노산을 추출한다. 혼합액을 원심분리하여 상층액 \( 0.5 \mathrm{ml} \) 을 취하여 Dowex 50-X 8 resin (200-400 mesh) column (made in a Pasteur pipette)을 통과시킨 다음 10 X column volumn의 증류수로 column washing하고, 10 X column volumn의 absolute eth-anol로 protein, phenolic compound, carbohydrates, lipid를 제거하고, 10 X column volumn의 2N ammonium hydroxide로 유리아미노산을 용출한다. Column 용출액은 rotary evap-orator를 이용하여 evaporation 시키고, 건조된 시료는 \( \mathrm{pH} \) \( 2.2 \) lithium citrate loading buffer를 이용하여 녹인 후 \( 0.2 \mu \mathrm{m} \) filter로 여과하였다.</p><p>이 중 \( 20 \mu l \) 을 취하여 HPLC (Waters 510)를 이용하여 분석하였고, column은 High Resolution Column Bio 20 PEEK Lithium이며 유속은 buffer \( 20 \mathrm{ml} / \mathrm{hr} \), ninhydrin \( 20 \mathrm{ml} / \mathrm{hr} \), 압력은 buffer \( 75 \mathrm{bar} \), ninhydrin \( 14 \mathrm{bar} \) 의 조건으로 유리 아미노산 분석을 하였다.</p><h2>비타민 분석</h2><p>시료 \( 1 \mathrm{~g} \) 을 식품공전의 미량 영양성분 시험법 [4]에 따라 처리하여 이 중 \( 20 \mu l \) 을 취하여 HPLC(Waters 510)로 분석하였다. HPLC 분석조건은 \( \mathrm{C}_{18} \) column ( \( \mu \) Bondapak \( \mathrm{C}_{18}, 0.39 \) \( \times 30 \mathrm{~cm}, 10 \mu \mathrm{m} \) )이며 유속은 solvent \( 30 \mathrm{ml} / \mathrm{hr} \), ningydrin \( 20 \mathrm{ml} / \mathrm{hr} \) 이고, 압력은 solvent \( 55 \mathrm{bar} \), ninhydrin 12 bar이었다.</p>
혼합액을 어떠한 방법을 통해 유리아미노산으로 용출했는가?
혼합액을 원심분리하여 상층액 \( 0.5 \mathrm{ml} \) 을 취하여 Dowex 50-X 8 resin (200-400 mesh) column (made in a Pasteur pipette)을 통과시킨 다음 10 X column volumn의 증류수로 column washing하고, 10 X column volumn의 absolute eth-anol로 protein, phenolic compound, carbohydrates, lipid를 제거하고, 10 X column volumn의 2N ammonium hydroxide로 유리아미노산을 용출한다.