<h2>SDS-PAGE 분석</h2><p>생산된 alginate lyase의 응집정도를 알아보기 위해 배양이 끝난 세포만을 모아 초음파 파쇄를 한 뒤 \( 4000 \times \mathrm{g} \) 에서 10분 동안 원심 분리하여 가용성(soluble)과 불용성(insoluble) 분획으로 나눈 뒤 각각의 시료를 Laemmi 등의 방법에 따라 수행된 SDS-PAGE (\( 8\% \) gel)로 분석하였다. Alginate lyase와 chaperone protein은 Coomassie brilliant blue에 의해 염색 확인하였고, gel은 Image Analyzer (Image Master VDS, Pharmacia Biotech., NJ, USA)로 scanning하여 분석하였다.</p><h2>Alginate lyase 활성 측정</h2><p>Alginate lyase 활성 측정은 다음의 방법을 사용하였다. 각 검정반응 산물은 반응시간과 효소의 농도에 비례하여 증가하는 것을 측정하였다. Alginate lyase는 \( 0.2 \% \) sodium alginate (Sigma, USA)를 포함하는 \( 1 \mathrm{M} \) \(Tris-\mathrm{HCl} \) \( \, \) ( \( \mathrm{pH} \, 7.5\) ), \( 0.3 \mathrm{M} \, \mathrm{NaCl} \)의 완충용액에서, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 5분 동안 반응시켜 효소의 유무에 따라 \( 235 \, \mathrm{nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 효소의 1.0 unit는 1 분당 \( 235 \, \mathrm{nm} \) 에서 흡광도를 1.0 씩 증가시키는 효소의 양으로 정하였다.</p><h2>Alginate lyase 발현 콜로니 선별</h2><p>E. coli 균주로부터 생산되는 alginate lyase는 \( 1 \% \) agarose, \( 1 \% \) sodium alginate를 포함하는 LB 고형배지에서 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \), 5일간 배양하였다. 이후 \( 10 \% \) cetylpyridinium chloride로 상온에서 20 분간 잠기게 하여 반응하였다.</p>
SDS-PAGE는 어떻게 수행하는거야?
Laemmi 등의 방법