<h2>Caspase의 활성에 미치는 HDAC 지해제 TSA의 영향</h2><p>Caspase protease 역시 apoptosis 유발에 중요한 조절인자로, 이들은 세포 내에서 핵과 mitochondria의 외막에 불활성 상태로 존재하며, Bcl-2 family 발현의 변화에 따라 이들의 활성도가 조절될 수 있다. 이들은 proenzyme 형태로 존재하다가 apoptosis 유도를 활성화시키는 신호에 의해 활성화된 protease로 전환되어 직접 또는 간접적으로 세포내에 존재하는 많은 표적 단백질의 분해에 관여한다. 현재까지 알려진 약 14 종의 caspase는 크게 3가지의 부류로 나누어질 수 있는데, 본 연구에서는 inflammatory mediator에 속하는 caspase- 1 , activator caspase에 속하는 caspase-8 및 -9 그리고 executioner caspase에 속하는 caspase-3을 대상으로 TSA 처리에 따른 활성 변화를 조사하였다. Fig. 3A에나타낸 바와 같이 caspase-1의 경우 TSA 처리 농도의 증가에 따라 비활성형의 감소나 활성형 caspase-1의 발현 증가는 관찰할 수 없었다. 그러나 나머지 조사된 caspase-8, -9 및 -3은 모두 TSA의 처리 농도가 증가할수록 활성형 단백질의 발현이 모두 증가되거나 비활성형의 발현이 감소되었다. 이러한 Western blot 분석에 의한 결과의 재확인을 위하여 각 caspase에 해당되는 기질을 이용한 in vitro caspase 활성을 측정결과에서도 이와 유사하게 나타났으며, 특히 caspase-3의 활성이 가장 높게 나타났으며, caspase-8 및 -9는 서로 유사한 활성도를 보여주었다. 이러한 TSA 처리에 따른 caspase-3 활성의 증가로 인하여 caspase-3의 기질 단백질들[poly(ADP-ribose)-polymerase, \( \beta \)-catenin 및 laminin B]의 분해 현상도 TSA 처리 농도 및 시간의 증가에 따라 현저히 증가되었다. 그리고 TSA에 의하여 증가된 caspase-3 및 -8은 활성을 다양한 caspase 선택적 저해제들에 의하여 다시 감소되었으나, caspase-9는 큰 영향이 없었다. 그러나 caspase-9와는 달리, caspase-3의 경우 caspase-1 및 -2의 저해제에 의하여서도 활성이 감소된 결과와, caspase-8의 경우 다양한 저해제들에 의하여 활성이 모두 감소된 결과에 대한 의문의 해결을 위하여 각각의 caspase에 대한 좀 더 구체적인 연구를 더 해야 할 필요성을 있음을 보여주었다. 하지만 caspase-8의 활성에 대한 결과로 미루어 267B1 세포에서 TSA에의한 apoptosis 유도에는 death receptor 경로가 관여할 가능성이 매우 높음을 시사하여 주었으며, 이는 선행 연구의 결과를 잘 뒷받침하여 주는 것이다.</p><h2>NF-\(\kappa\)B의 활성에 미치는 HDAC 저해제 TSA의 영향</h2><p>최근까지 전사조절인자 NF-\(\kappa\)B는 apoptosis가 유도된 많은 경우에 활성이 저하될 것으로 보고되어져 왔다. 이는 아마도 NF-\(\kappa\)B가 대부분의 세포증식 촉진이나, anti-apoptotic 인자들의 발현 조절을 전사수준에서 조절가능하다는 보고들에 기초를 둔 것이며, 많은 항암활성을 가지는 약물들에 의한 apoptosis 유도에 NF-\(\kappa\)B의 활성 감소가 관여하는 것으로 보고되어지고 있다. 하지만 최근 연구들에 의하면 NF-\(\kappa\)B는 오히려 종양억제인자로서 작용할 가능성도 있으며, HDAC 저해제를 포함한 항암제 후보 약물들에 의한 apop-tosis 유도에 NF-kB 활성의 증가에 대한 관한 구체적 증거들이 제시되어져 오고 있다. 따라서 특정 세포의 apoptosis 유도에서 NF-\(\kappa\)B는 대상 세포 및 약물의 종류에 따라 NF-\(\kappa\)B 활성은 정반대의 결과를 보여 줄 수 있음을 의미 한다. 따라서 본 연구에서 267B1 세포에서 TSA에 의한 apoptosis 유도에 NF-\(\kappa\)B의 활성 변화 여부를 조사하기 위하여 먼저 NF-\(\kappa\)B의 핵내 이동 여부를 Western blot 분석 방법으로 조사하였으며, Fig. 4A에 나타낸 바와 같이 TSA의 처리 농도 및 시간이 증가할수록 세핀질에서 핵으로의 NF-\(\kappa\)B 이동이 증가하였음을 알 수 있었고, 이와는 반대로 I\(\kappa\)B-\(\alpha\) 의 발현은 상대적으로 분해가 많이 일어나 발현의 경도가 매우 감소되었음을 알 수 있었다. 핵 내로 전이된 NF-\(\kappa\)B의 전사활성 정도를 조사하기 이하여 EMSA 및 NF-\(\kappa\)B promoter assay를 실시한 결과, Fig. 4B 및 C에서 알 수 있듯이 TSA의 처리 시간 및 농도가 증가할수록 NF-\(\kappa\)B의 binding의 정도나 promoter의 활성이 매우 증가하였음을 알 수 있었다. 이러한 결과는 일부 선행연구의 결과와 상반되거나 유사한 경향성이기도 하기 때문에 HDAC 저해제에 의한 apoptosis 유도에서 NF-\(\kappa\)B의 활성에 대한 보다 폭 넓은 연구가 지속되어야 할 것으로 생각된다.</p>
Caspase protease는 apoptosis 유발에 중요한 조절인자가 맞니?
YES