<p>이화누룩의 항혈전 활성 평가를 위해 혈소판 응집 저해활성을 평가하였으며, 그 결과는 Table 3에 나타내었다.</p> <table border><caption>Table 3. Platelet aggregation activities of the ethanol extract and its solvent fractions of ehwa nuruk</caption> <tbody><tr><td>Chemicals/Samples (mg/ml)</td><td>Amplitude (Ω)</td><td>Slope (Ω/min)</td><td>Lag time (sec)</td><td>Area under</td><td>PAR \( ^{\text {a) }} \) (%)</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>22</td><td>4</td><td>20</td><td>153.7</td><td>100</td></tr><tr><td>Aspirin (1.0)</td><td>4</td><td>1</td><td>82</td><td>25.0</td><td>16.3</td></tr><tr><td>Aspirin (0.5)</td><td>4</td><td>1</td><td>82</td><td>25.0</td><td>16.3</td></tr><tr><td>Aspirin (0.25)</td><td>14</td><td>3</td><td>27</td><td>98.1</td><td>63.8</td></tr><tr><td>Ethanol extract</td><td>24</td><td>4</td><td>14</td><td>190.4</td><td>123.9</td></tr><tr><td>Hexane fraction</td><td>28</td><td>9</td><td>3</td><td>264.6</td><td>172.2</td></tr><tr><td>Ethylacetate fraction</td><td>27</td><td>4</td><td>10</td><td>217.9</td><td>141.8</td></tr><tr><td>Butanol fraction</td><td>28</td><td>4</td><td>17</td><td>210</td><td>136.6</td></tr><tr><td>Water residue</td><td>18</td><td>2</td><td>22</td><td>124.9</td><td>81.3</td></tr></tbody></table> <p>혈소판은 다양한 혈구세포와 함께 내피세포의 손상으로 노출된 collagen 등과 결합하여 1 차 지혈 플러그(primary hemostatic plug)를 형성하여 혈전생성을 개시하는 중요한 세포로, 혈소판의 비정상적인 응집은 혈전 생성을 촉진시켜 정상적인 혈액순환을 저해한다. 본 연구에서의 혈소판 응집저해 활성은 미세전극에 혈소판이 부착되어 응집됨에 따라 발생하는 전기 저항값의 변화를 측정하는 impedance 법을 사용하여 평가하였다. 인간 농축 혈소판(platelet rich plasma: PRP)은 적십자로부터 공급받았으며 PRP의 전처리 및 수세과정은 기존의 보고[6]와 동일하게 하였으며, 최종 혈소판 농도가 \( 5 \times 10^{8} / \mathrm{ml} \)이 되도록 조정하였다. 혈소판 응집은 Whole Blood Aggregometer (Chrono-log, PA, USA)를 사용해 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 측정하였으며, \( 10 \mathrm{mM} \mathrm{CaCl} 250 \mu \mathrm{l} \), suspending buffer \( 147.5 \mu \mathrm{l} \), 시료 \( 5 \mu \mathrm{l} \)가 포함된 반응 cuvette에 혈소판 \( 50 \mu \mathrm{l} \)을 넣은 후 3분 동안 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)로 가온 후 응집유도제로 collagen \( (1 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}) \)을 \( 2.5 \mu \mathrm{l} \)를 넣고 혈소판 응집을 측정하였다. 응집반응은 collagen 첨가 후 12분간 측정하였으며 amplitude, slope, area under를 측정하여 평가하였다. 이때, amplitude \( (\mathrm{ohm}) \) 는 혈소판에 응집유도제를 첨가하였을 때 일어나는 최대 응집정도를 나타내며, slope는 응집유도제를 첨가한 직후부터 1 분 동안의 응집곡선의 기울기를 나타내며, area under는 전체적인 혈소판 응집 정도를 표시하는 것으로 전기저항 증가에 따른 slope 곡선의 하강면적을 나타낸다. 이화누룩 시료의 혈소판 응집 저해 활성은 시료 대신 DMSO를 첨가한 대조구와의 상대적인 area under 값의 비를 백분율로 나타내었다. 먼저, 대조구로 사용된 혈소판 응집저해제인 아스피린은 농도의존적인 혈소판 응집 저해 활성을 나타내었으며, \( 0.25 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도에서 무첨가구에 비해 63.8%의 응집율을 나타내었다(Table 3). 반면 이화누룩의 ethanol 추출물 \( (0.25 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}) \)은 혈소판 응집율이 123.9%로 증가되었으며, 물 잔류물을 제외한 분획물들도 혈소판 응집 촉진을 나타내었다. 물 잔류물의 경우, 무첨가구에 비해 81.3%의 혈소판 응집을 나타내어 동일농도의 아스피린에 비해 약한 응집저해를 나타내었다(Table 3). 따라서 이화누룩의 ethylacetate 분획은 혈액응고효소 및 혈액응고인자 저해를 통한 항혈전 활성이 나타남을 확인하였다. 최근 일본 청주 및 국내 전통주와 이들의 주박에서 미백 및 주름 개선 활성, 보습효과, 항당뇨, 항산화 및 nitrite 소거활성 및 혈압강화효과 등이 보고됨을 고려할 때, 누룩에서도 이와 유사한 활성이 나타나리라 예상되며, 향후 이화누룩의 추가적인 유용활성 평가가 필요하다고 판단된다. 본 연구결과는 이화누룩의 항혈전 활성에 대한 최초의 보고이며, 이화누룩 ethanol 추출물의 ethylacetate 분획물이 혈액 응고저해제로 이용가능하며, 활성물질의 정제를 통해 위장 장애 등의 부작용을 나타내는 아스피린을 대치할 수 있는 항혈전제로 사용 가능함을 제시하고 있다.</p>
DMSO의 Amplitude (Ω)는 얼마인가?
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