<h1>결과 및 고찰</h1><h2>섬유소 분해 박테리아의 분리와 동정</h2><p>도심공원 토양으로부터 셀룰로오스 가수분해가 가능한 박테리아를 분리하기 위해 LB-CMC trypan blue agar 선발 방법을 이용하였다. 도심공원으로부터 채취한 토양을 \(2-\mathrm{mm} \) 직경 체를 이용하여 큰 부피의 토양을 제거한 후 멸균수에 10배씩 희석하여 LB-CMC trypan blue agar 배지 plate에 도말 하여 30도 배양기에서 배양하였다. 배양 48시간 후 균의 주변에 생기는 halo의 유무에 따라 섬유소 분해 균주를 구분하였다. 그 중에 상대적으로 넓은 범위의 halo를 보이는 약 50여개의 박테리아를 동일 배지에 계대배양 하였으며, 상대적으로 높은 활성을 보이는 10개의 박테리아를 순수 분리하였다. 10개의 박테리아는 \( 2 \mathrm{mL} \) LB 액체 배지를 담고 있는 각각의 시험관 \( (20 \times 150 \mathrm{mm}) \)에 접종하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)에서 밤샘 배양하였다. 다음 날 원심분리를 통하여 상등 액을 회수하여 CMC를 기질로 하여 반응한 후 DNS 방법으로 효소활성을 측정하였고 여기서 상대적으로 높은 활성을 보이는 박테리아를 선발하여 다음 실험에 이용하였다.</p><p>API kit (bioMerieux. Vitek, Marcy l'Etoile, France)의 그람 양성 API 50CH kit를 이용하여 분리한 균주의 생화학적 특성을 분석하였다. 그 결과 본 균주는 \( \beta \)-xylosidase, leucine arylamidase, phenylalanine arylamidase, \( \beta \)-galactosidase, L-pyrrolydonyl-arylamidase, \( \alpha \)-galactosidase, alanine arylamidase, tyrosine arylamidase, \( \beta \)-glucosidase, \( \beta \)-mannosidase, \( \alpha \)-glucosidase, esculin hydrolyase 등과 같은 효소활성을 가지는 것으로 나타났다. 또한 본 균주는 \( 6.5 \% \) 의 \( \mathrm{NaCl} \) 용액에서 생장이 가능한 반면, kanamycin과 oleandomycin에 대한 저항성은 없었다. 이상의 생화학적 특성에 기초하여 분석한 결과 본 균주는 Bacillus subtililis/amyloquefaciens/atrophaeus 종일 가능성이 약 \( 98 \% \) 이상이었다. 이에 부가적으로 \( 16 \mathrm{S} \) rRNA 유전자의 염기서열을 이용하여 균을 동정하였다. 분리한 균주의 게놈DNA를 주형으로 하여 리보솜의 소단위체를 코딩하는 \( 16 \mathrm{S} \) rRNA 유전자 부분을 PCR을 통하여 증폭하였으며, PCR 산물을 pGEMT-easy 벡터(promega)에 클로닝 하여 염기서열을 분석하였다. 염기서열을 이용하여 NCBI site의 Basic Local Alignment Search Tool (BLAST)에 탑재되어 있는 blastn프로그램을 이용하여 \( 16 \mathrm{S} \) ribosomal RNA sequences의 데이터베이스와 비교하여 분리된 균을 동정하였다. 그 결과 산림토양으로부터 분리된 균주는 Bacillus subtilis strain IAM 12118 \((99\%)\), Bacillus mojavensis strain IFO15718 \((99\%)\), Bacillus subtilis strain 168\((99 \%) \), Bacillus mojavensis strain ifo 15718 \((100\%)\), Bacillus axarquiensis strain LMG 22476 \((100\%)\), Brevibacterium halotolerans strain DSM 8802\((100 \%) \) 등과 높은 상동성을 보였다. 게다가 Phylogenetic 분석에 의하면 분리된 균주는 Brevibacterium halotolerans LMG 21660T (AJ620368), Bacillus mojavensis IFO 15718T (AB021191), Bacillus subtilis subsp. spizizenii NRRL B-23049T (AF074970), Bacillus sp. JMY 1와 같은 계통에 속하였다. 이러한 결과들은 분리된 박테리아는 Bacillus 종에 속하는 것임을 강력하게 시사한다. 따라서 본 연구에서 분리한 균주는 Bacillus sp. GJY으로 명명하였다.</p>
실험을 통해 토양에서 분리한 균주는?
Bacillus sp. GJY