<h2>Zymogram 분석</h2><p>CMC-SDS-PAGE와 xylan-SDS-PAGE는 Lee 등(2016)에 의해 기술된 방법을 따라 수행하였다. 단백질의 전기영동은 \( 0.4 \% \) CMC 또는 xylan을 포함하고 있는 \( 10 \% \) SDS-PAGE를 이용하여 실시하였다. 전개된 단백질의 refolding을 위하여, \( 1 \%(\mathrm{v} / \mathrm{v}) \) Triton X-100이 첨가된 \( 10 \mathrm{mM} \) sodium acetate buffer \( (\mathrm{pH} 5.0) \)의 \( 200 \mathrm{mL} \)를 첨가하여 45 shacking 인큐베이터에서 밤새도록 배양하였다. 다음날 아침 \( 10 \mathrm{mM} \) sodium acetate buffer \( (\mathrm{pH} \mathrm{5.0}) \)를 이용하여 \( 50^{\circ} \mathrm{C}\), \(120 \mathrm{rpm} \)이 유지되는 인큐베이터에서 CMCase를 위해서는 8시간, xylanase를 위해서는 14시간 배양 하였다. 그 후 상온에서 \( 0.5 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) Congo red 로 30분간 SDS-PAGE gel을 염색하고, \( 1 \mathrm{M}\) \(\mathrm{ NaCl}\)을 이용하여 붉은 색의 배경을 가진 gel에서 옅은 붉은 색의 가수분해 zone이 나타날 때까지 탈색하였다. 최종적으로 선명한 결과 사진을 얻기 위하여 \( 0.1 \mathrm{M}\) \(\mathrm{HCl}\)을 gel의 배양액에 조금씩 첨가하여 배경색을 변화시켜가며 가수분해 zone이 선명하게 나타날 때 사진을 촬영하였다.</p><h2>효소활성 측정</h2><p>CMCase와 xylanase 활성은 환원당 정량에 널리 사용되는 DNS법(Nelson, 1994)을 사용하였다. Bacillus sp. GJY의 조효소액을 이용하여 CMCase 또는 xylanase의 효소활성은 \( 50{ }^{\circ} \mathrm{C} \)에서 30분간 xylan 또는 CMC를 기질로 첨가하여 배양하는 동안 생성되는 환원당의 양을 측정하는 것에 의하여 결정하였다. 효소의 1 unit는 분당 \( 1 \mu \mathrm{mol} \)을 생성하는데 필요한 효소의 양으로 정의하였다. 반응액은 \( 50 \mathrm{mM} \) sodium acetate buffer \( (\mathrm{pH} 5.0) \), \( 1 \%(\mathrm{w} / \mathrm{v}) \) xylan 또는 CMC, 조효소액 0.5 unit가 되게 최종 볼륨을 \( 1 \mathrm{mL} \)로 준비하였다. 30분간 반응 후 생성된 환원당은 동량의 \( 1 \% \) dinitrosalicyclic acid (DNS) 첨가한 후 \( 100{ }^{\circ} \mathrm{C} \)에서 5분간 끓여 반응물을 발색 시킨 후 분광광도계를 이용하여 \( 540 \mathrm{nm} \)에서 측정하였다. CMCase 또는 xylanase의 적정반응온도를 결정하기 위하여 각 각의 반응액은 \(20, 30, 40, 50, 60, 70{}^{\circ} \mathrm{C} \)의 온도에서 30분간 반응하여 효소활성을 측정하였다. CMCase 또는 xylanase의 열 안정성은 각기 다른 온도 (\(40, 50, 70{}^{\circ} \mathrm{C} \))에서 효소를 전 배양한 후 남아있는 효소 활성을 측정하였다. CMCase 또는 xylanase의 적정 \( \mathrm{pH} \)를 결정하기 위하여 \( \mathrm{pH} 3.0-6.0\)은 \( 50 \mathrm{mM} \) sodium acetate 버퍼, \( \mathrm{pH} 7.0-8.0\)은 \(50 \mathrm{mM} \) sodium phosphate 버퍼, \( \mathrm{pH} 8.0-9.0\)은 \( 50 \mathrm{mM} \) Tris-\(\mathrm{ HCl}\) 버퍼를 이용하여 측정하였다.</p>
\( 10 \mathrm{mM} \) sodium acetate buffer 는 산성이지?
YES