<h2>항균활성</h2><p>항균활성 측정은 PDA평판배지 중앙에 corker borer NO.5 (직경 \( 7 \mathrm{~mm} \) )를 이용하여 식물 병원성균주를 블록형태로 접종한 다음 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)의 항온기에서 접종한 곰팡이의 균사가 평판배지의 1/3정도를 덮을 때까지 배양하였다. 이때 성장하는 곰팡이 균사의 끝으로부터 \( 1 \mathrm{~cm} \) 정도 떨어진 지점에 corker borer NO .5 (직경 \( 7 \mathrm{~mm} \) )를 이용하여 평판배지 상에 구멍을 뚫은 다음 순수분리한 항균미생물의 배양용액을 \( 0.2 \mu \mathrm{m} \) membrane filter로 여과한 시료용액 \( 150 \mu \mathrm{l}\) 접종한 후 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 24 \sim 72\)시간 대치배양하면서 식물 병원성균주의 균사성장 억제정도(inhibition zone)를 관찰하였다.</p><h2>최적 배지성분</h2><p>분리균주의 최적배지 성분은 M9 minimal medium를 기준으로 탄소원은 mannitol, fructose, glucose, D-sorbitol, cellobiose, sorbose, xylose, galactose, maltose, soluble starch, arabinose, lactose 및 raffinose를 각각 \( 1 \% \) 농도로 첨가하고 분리균주의 전 배양액을 \( 2 \% \) 씩 접종한 후 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 20시간, \( 180 \mathrm{rpm} \)으로 진탕 배양한 다음 배양액의 탁도를 \( 660 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다. 탄소원 첨가농도의 영향은 선정된 탄소원을 0, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0 및 \( 5.0 \% \) 씩 각각 첨가하여 동일조건에서 검토하였다. 그리고 질소원은 yeast extract, malt extract, beef extract, \( \mathrm{NaNO}_{3}\), \(\mathrm{NH}_{4} \mathrm{NO}_{3} \), L-asparagine, peptone, \( \left(\mathrm{NH}_{4}\right)_{2} \mathrm{HPO}_{4} \) 및 \( \mathrm{NH}_{4} \mathrm{Cl} \) 등을 각각 \( 0.5 \% \) 씩 첨가한 후 탄소원의 검토 방법과 동일하게 행하였다. 무기염은 \( \mathrm{CoCl}_{2} \cdot 6 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(\mathrm{CaCl}_{2}\), \(\mathrm{NaCl}\), \(\mathrm{ZnCl}_{2}\), \(\mathrm{FeSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O}\), \(\mathrm{AgNO}_{3}\), \(\mathrm{HgCl}_{2} \), \( \mathrm{MgCl}_{2} \cdot 6 \mathrm{H} 2 \mathrm{O}\), \(\mathrm{K}_{2} \mathrm{HPO}_{4}\), \(\mathrm{ZnSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) 및 \( \mathrm{MgSO}_{4} \cdot 7 \mathrm{H}_{2} \mathrm{O} \) 등을 각각 \( 0.05 \% \)씩 첨가하여 탄소원의 검토방법과 동일하게 행하였다.</p><h2>최적배양조건</h2><p>분리균주의 최적배양조건은 \( 500 \mathrm{ml} \) 삼각플라스크에 액체 배지를 \( 200 \mathrm{ml} \) 첨가한 다음 분리균주의 전 배양액을 \( 2.0 \% \)씩 접종하여 검토하였다. 최적배양온도는 배양온도를 \( 25 \sim 65^{\circ} \mathrm{C} \)의 범위로 변화시키면서 \( 180 \mathrm{rpm} \)에서 20시간 배양한 후 \(660 \mathrm{nm} \)에서 배양액의 흡광도를 측정하였다. 배지의 초기 \( \mathrm{pH} \)는 \( 0.1 \mathrm{~N} \mathrm{HCl} \)과 \( 0.1 \mathrm{~N} \mathrm{NaOH} \)를 첨가하여 초기 \( \mathrm{pH} \)를 \(4 \sim 10\)범위로 조절한 다음 행하였고, 진탕속도의 영향은 최적배지의 초기 \( \mathrm{pH} \)를 7.0으로 조절한 후 진탕 속도를 100, 140, 180, 220 및 \( 260 \mathrm{rpm} \)으로 변화시키면서 \( 50^{\circ} \mathrm{C} \)에서 20시간 배양하여 배양액의 흡광도를 \( 660 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다.</p><h2>배양시간에 따른 항균물질의 생산</h2><p>배양시간이 항균물질의 생산에 미치는 영향은 최적배지에 분리균주의 전 배양액 \( 2 \% \)를 접종하고 최적 배양 조건으로 배양하면서 24, 36, 48 및 60 시간째에 시료를 채취하여 \( 8,000 \times g,\) 20분간 원심분리하여 얻어진 상징액을 \( 0.45 \mu \mathrm{m} \) membrane filter로 무균 여과한 다음 식물 병원성균주에 대한 항균활성을 측정하였다.</p>
분리균주의 최적배지 성분은 M9 minimal medium를 기준으로 탄소원을 각각 몇 % 농도로 첨가했지?
\( 1 \% \)