<h1>2. 실험재료 및 방법</h1><h2>2.1 균주 및 배양배지</h2><p>실험에 사용된 미생물은 Clostridium autoethanogenum(DSM 10061)을 German Collection of Microorganisms and Cell Culture 에서 구입하였다. 균주 배양을 위한 기본 배지의 조성은 본 연구진의 기존 연구와 동일하며, 배지는 시약용 화합물을 사용하여 제조하였다. Vitamin 성분은 vitamin용액을 별도로 제조한 후, 최종 배양 배지 \( 1 \mathrm{L} \)에 준비된 vitamin 용액 \( 1 \mathrm{mL}\) (\(\times\)1,000배 희석)를 첨가하여 사용하였다. 본 연구에서 제시한 vitamin의 농도는 배양 배지 내 최종 농도로 표기하였다. 또한 실험에 사용된 합성가스는 MS 동민가스(Pyeongtaek, Gyeonggi-Do, Korea)에 제조 의뢰하여 공급되었으며 부피비 조성은 \( 20 \% \mathrm{CO} \), \( 20 \% \mathrm{CO}_{2}\), \(10 \% \mathrm{H}_{2}\), \(50 \% \mathrm{N}_{2} \)으로 이루어져있다.</p><h2>2.2 배지조성 변화 배양실험</h2><p>배양 실험은 \( 150 \mathrm{mL} \) serum bottle을 배양기로 사용하여 \( 25 \mathrm{mL} \)의 배양 배지를 넣은 후, 고무마개와 알루미늄캡을 이용하여 외부 공기와 접촉을 차단시킨 상태에서 합성가스를 주입하여 절대 혐기 조건을 만들었다. C. autoethanogenum 균주는 절대 혐기성 균주이므로 완벽한 혐기조건의 유지는 매우 중요하다. 준비된 serum bottle에 계대배양에서 10일간 배양된 미생물 배양액을 접종액으로 사용하였으며, 배지 부피의 \( 10 \mathrm{vol} \% \)를 접종하였다. 균주 접종 후, 탄소원 공급을 위해 serum bottle의 head space 부분에 합성가스를 5분 동안 주입하였으며, bottle내 내부압력은 약 \( 240 \mathrm{kPa} \)을 유지하도록 하였다. 준비된 serum bottle은 배양 온도 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)와 교반속도 \( 200 \mathrm{rpm} \)조건의 진탕배양기에서 배양하였다. 균주 성장과 대사산물 분석을 위한 시료는 48시간마다 고무마개 부분에 주사기를 통과시켜 배양액을 채취하였다.</p><p>균주 성장과 에탄올 생산에 대한 영향을 알아보기 위해 사용된 vitamin 성분의 농도는 각각 biotin 0.2, 2, 20, \(100\mu \mathrm{g} / \mathrm{L} \), thiamine-HCl 0.5, 5, 50, \(250 \mu \mathrm{g} / \mathrm{L} \), folic acid 0.2, 2, 20, \(100 \mu \mathrm{g} / \mathrm{L} \) 이다.</p><h2>2.3 분석 방법</h2><p>균주의 성장을 분석하기 위하여 UV-vis 분광광도계(Optizen POP, Mecasys Co., Korea)를 이용하여 파장 \(600\mathrm{nm}\) 에서 배양액의 광밀도(optical density)를 측정하였다. 에탄올과 아세트산 농도 분석은 배양액을 원심분리하여 얻은 균주가 없는 상등액을 기공 크기가 \(0.45\mu\mathrm{m}\)인 syringe filter(6784-1304, Whatman, Germany)로 여과하여 분석시료를 준비하고, gas chromatograph (Agilent 7890B), Santa Clara, CA, USA)를 이용하여 측정하였다. 컬럼은 capillary coulumn (HP-5 column, \( 30 \mathrm{m} \times 0.32 \mathrm{mm} \times 0.25 \mu \mathrm{m} \)), 검출기는 flame ionization detector(FID)를 이용하였고 이동상기체로 헬륨을 사용하였다.</p>
균주의 성장을 분석하기 위해 사용한 방법은?
UV-vis 분광광도계(Optizen POP, Mecasys Co., Korea)를 이용하여 파장 \(600\mathrm{nm}\) 에서 배양액의 광밀도(optical density)를 측정