<h1>서 론</h1><p>Lipase (triacylglycerol acylhydrolase, EC3.1.1.3)는 tri-acylglycerol (TAG)을 가수분해할 수 있는 효소이다. TAG를 비롯한 지방산 에스테르들은 다른 esterase에 의해서도 가수분해 될 수 있지만 lipase는 물과 오일 사이의 계면에서 높은 활성을 보여준다는 점에서 다른 esterase들과 구별된다. li-pase는 식품, 화장품, 계면환성제, 약품 등을 만드는데 응용될 수 있으며 여러 가지 질병에도 연관되어 있다. 따라서 세로운 특성을 갖는 lipase를 찾거나 lipase의 활성을 조절할 수 있는 물질을 찾는 연구들이 활발하게 이루어지고 있으며 이러한 연구를 위해서는 편리하고 신뢰할 수 있는 활성 측정방법이 매우 중요하다.</p><p>지금까지 lipase 활성을 측정하기 위한 여러 가지 방법들이 연구되어 사용되고 있다. 발색단 또는 형광발색단을 지닌 기질을 이용하는 측정방법은 매우 편리하기 민감하며 high-throughput assay가 가능하다는 장점을 지니고 있다. 그러나 이들은 모두 기질 유사물질이기 때문에 lipase 이외의 다른 esterase에 의한 비특이적인 반응이 일어날 수 있는 가능성을 지니고 있다. 우리는 이전 연구에서 기질 유사물질인 2,3-dimercapto-1-propanol tributyrate가 lipase에 의해 분해될 때 생성되는 thiol 생성물을 5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)로 정량하는 high-throughput assay 방법을 개발하였다. 이 방법은 매우 넓은 범위에서 lipase 활성을 민감하게 빠른 속도로 측정할 수 있게 해주기 때문에 lipase 정제 과성에서 편리하게 사용될 수 있지만 DTNB의 이황화 결합을 환원시키는 환원물질의 존재에 의해 오차가 발생하는 단점이 있다.</p><p>적정 법(titrimetry)은 lipase의 자연적인 기질인 오일 에멀션을 기질로 하여 lipase의 고유 활성인 물-오일 계면에서의 활성을 측정하기 때문에 가장 신뢰할 수 있는 특이적인 li-pase assay 방법으로 인정되고 있다. 이 방법의 원리는 li-pase에 의해 오일 에멀션으로부터 방출된 지방산의 양을 측정하는 것인데, 일반직으로 방출된 지방산의 양을 적정으로 측정하는 것보나는 반응이 진행되는 동안 \( \mathrm{pH} \) 를 일정하게 유지하도록 하기 위해 첨가되는 염기의 양을 측정하는 pII-stat 방법이 사용된다. 그거나 이 방법은 동시에 여러 개의 시료를 분석할 수 없는 단점을 가지고 있다.</p><p>Rietz와 Guilbault 연구팀은 \( \mathrm{pH} \) 변화에 의해 형광의 강도가 변하는 4-methylumbelliferone (4-MU)을 이용하여 지방산의 방출 정도를 측정하는 lipase 활성 측정법을 개발하였다. 이 방법은 오일 에멀션을 기질로 이용할 수 있기 때문에 lipase에 대한 특이적인 assay 방법이 될 수 있으며 flu-rescence plate reader를 사용하여 형광변화를 측정하면 high-throughput assay가 가능하다. 그러나 4-MU의 형 광변화가 \( \mathrm{pH} \) 7-8의 좁은 뱀위에서만 이루어지기 때문에 반응물의 \( \mathrm{pH} \) 가 8 로 고정될 수밖에 없는 단점을 가지고 있다.</p><p>이번 연구의 목적은 fluorescein을 이용한 high-through-put lipase assay 방법을 개발하는 것이다. 이 방법은 fluo-rescein의 형 광변화가 4-MU에 비해 더욱 넓은 pI 범위에서 이루어진다는 사실에 착안한 것이다. 우리는 이번 연구를 통해 오일 에멀션과 fluorescein을 포함하는 반응용액에 lipase 를 넣고 반응시키면 lipase의 양에 비례하여 형광 세기의 감소 속도가 증가한다는 사실을 확인할 수 있었다. 또한 반응물의 \( \mathrm{pH} \) 를 8 로 조정하였을 때뿐만 아니라 6이나 7로 조정하였을 때에도 그와 같은 상관관게를 관찰할 수 있었다.</p>
식품, 화장품, 계면환성제, 약품 등을 만드는데 응용될 수 있으며 여러 가지 질병에도 연관되어 있는 효소는 lipase야?
YES