<h2>재조합 endoglucanase A 과발현과 분비</h2><p>사용하는 숙주세포에 따라 또한 하나의 숙주세포에서 얻어진 형질전환체들 사이에서도 외래 유전자의 발현은 크게 달라짐이 보고되어 있어, 평판배지에서의 활성에 의해 선별된 pYEG-CT1과 pYInu-CT1의 효모 형질전환체는 다시 시험관 배양을 통해 선별하였다. 선별된 균주의 플라스크 배양을 통해 균체증식, endoglucanase A 발현율과 분비 국재성 및 plasmid 안정성 등을 정밀 분석하여 재조합 endo-glucanase A 대량 분비생산을 위한 최적의 host-vector 계를 선택하고자 하였다. Endoglucanase A 의 발현은 dextrose 소모 후 galactose를 이용하는 12 시간 이후부터 발현되어 48 시간까지 계속 발현량이 증가하는 양상을 보였다. 자체 분비 서열을 사용한 S. cerevisiae SEY2102/pYEG-CT1과 S. cerevisiae 2805/pYEG-CT1의 경우는 48 시간 때의 endoglucanase A 총활성이 각각 \(219 \mathrm{unit}/\mathrm{l}\), \(304 \mathrm{unit}/\mathrm{l}\)이고 세포밖 배지에서 \(91 \mathrm{unit}/ \mathrm{l}\), \(141 \mathrm{unit}/\mathrm{l}\)로서 \( 41 \% \) 와 \( 46 \% \) 의 분비 효율을 나타내었다. INU1 분비 서열을 사용한 S. cer-evisiae SEY2102/pYInu-CT1과 S. cerevisiae 2805/pYInu-CT1 은 endoglucanase A 총활성이 각각 \(318 \mathrm{unit}/\mathrm{l}\), \(361\mathrm{unit}/\mathrm{l}\) 이고 세포밖 배지에서 \(216 \mathrm{unit}/\mathrm{l}\), \(254 \mathrm{unit}/\mathrm{l}\)로서 \( 68 \% \) 와 \( 70 \% \)의 분비 효율을 나타내었다. 이로서 Congo-red 활성염색에 이어 플라스크 배양에서도 INU1 분비 서열의 분비능이 cel A 자체 분비 서열보다 높음이 확인되었다. 효모 숙주세포를 비교하면 S. cerevisiae SEY2102보다 S. cerevisiae 2805에서 높은 발현양상을 보였는데, 이는 S. cerevisiae 2805 숙주세포의 proteases 결손 (pep4::HIS3 prb1) 때문인 것으로 사료된다. 또한 2805 균주의 경우 galactose permease를 code하는 GAL2 유전자를 가지고 있기 때문에 galactose의 수송이 용이하게 이루어 질 수 있다. 이들 형질전환체의 48 시간 때의 plasmid 안정성을 확인한 결과 \( 80 \% \) 이상의 높은 안정성을 보였다.</p><p>이상의 플라스크 배양 결과로부터 endoglucanase A 발현율과 분비 국재성 및 plasmid 안정성 등을 고려하여 INU1 분비 서열을 함유하는 S. cerevisiae 2805/pYInu-CT1을 최적의 host-vector 계로 선택하여 발효조 회분배양을 수행하였다. 그 결과 48 시간 때의 endoglucanase A 총활성이 \(418 \mathrm{unit}/\mathrm{l}\)이고 세포밖 배지에서 \(306 \mathrm{unit}/\mathrm{1}\)로서, \( 73 \% \) 의 분비 효율을 나타내어 발효조 회분배양을 통한 endoglucanase A의 과발현과 분비가 효율적으로 이루어졌음을 확인하였다. 이는 INU1 분비 서열을 이용하여 분비 발현시킨 lipocortin-Ⅰ (\( 80 \% \) 분비효율)와 levansucrase (\( 50 \% \) 분비 효율), 그리고 \( \alpha_{1} \)-antitrypsin (\( 70 \% \) 분비 효율)에 비해서도 비교적 높은 분비 효율을 나타냄을 알 수 있었다.</p>
숙조세포에서 얻어진 형질전환체들 사이에도 외래 유전자의 발현은 달라지니?
YES