<h1>결과 및 고찰</h1><p>딱지꽃 뿌리 추출물의 독성평가. 딱지꽃 뿌리 추출물을 피부세포에 처리하여 여러가지 활성을 확인하기 전에 세포독성에 대한 평가를 먼저 실행하였다. MTT assay를 통해서 추출물을 \(1\), \(2.5\), \(5\), \(10\), \(20 \% \)로 HaCaT 세포에 각각 처리함에 따라 보이는 독성을 평가하였다. 실험결과 \( 10 \% \) 이상의 추출물 농도부터 약한 독성 \( (80 \% \) of cell viability)이 확인됨에 따라 그 이하의 농도에서만 나머지 활성테스트를 수행하였다(Fig. \(1\)).</p><p>딱지꽃 뿌리 추출물의 항염증 효과. 딱지꽃 뿌리 추추물의 항염즘 효과를 확인하기 위해 염증반응의 대표적인 단백질인 cyclooxygenase-\(2\) (COX-\(2\))의 발현양을 real time PCR을 통하여 확인하였다. HaCaT 세포에 UV를 조사함에 따라 염증반응을 유도하여 COX-\(2\) 발현이 증가 할 때, 딱지꽃 뿌리 추추물의 처리 여부에 따라 HaCaT 세포에 미치는 영향을 확인하였다. 추출물의 농도가 높아짐에 따라 COX-\(2 \) 발현양이 줄어드는 것을 확인할 수 있었으며 \( 2.5 \% \) 이상의 추출물 농도 처리시 대조군과 비교하여 약 \( 30 \% \) 정도 COX-\(2 \) 발현양이 감소함을 확인할 수 있었다(Fig. \(2\)). 이는 positive control로 사용한 \( 10 \mu \mathrm{M} \) 농도의 dexamethasone (dex)이 COX-\(2\)의 발현양을 저해하는 수준과 비슷한 수준임을 확인할 수 있었다.</p><p>딱지꽃 뿌리 추출물의 주름개선 효과. 딱지꽃 뿌리 추출물의 주름개선 효과를 확인하기 위해 피부세포의 콜라겐과 엘라스틴 합성에 미치는 영향을 실험적으로 확인하였다. 콜라겐과 엘라스틴은 피부를 구성하는 주된 요소로 이들의 양이 줄어들게 되면 주름형성과 아주 밀접한 관계를 가지고 있다고 알려져 있다. 따라서 콜라겐과 엘라스틴의 합성량이 증가하거나 유지가 되면 주름개선에 효과적이라 할 수 있다. 본 실험에서는 콜라겐 합성양을 조절하는 단백질인 Procollagen C-endopeptidase enhancer (PCOLCE)의 발현양과 엘라스틴 발현양을 real time PCR을 통해 확인하였다. 위와 같은 방법으로 콜라겐 합성양을 판단하는 실험이 여러 문헌에서 시도된 적이 있다. 또한, 콜라겐 분해에 중요한 Matrix Metallopeptidase-\(1\) (MMP-\(1\))의 발현양을 확인함으로써 추출물이 콜라겐 분해억제 효과가 있는지 확인하였다. 실험 결과 딱지꽃 뿌리 추출물을 CCD\(986\)sk 세포에 처리시 콜라겐 형성에 작용하는 PCOLCE 발현양은 큰 변화가 없는 반면 콜라겐 분해에 관여하는 MMP-\(1 \)의 발현량이 대조군과 비교 시 \( 2.5 \% \) 이상 농도에서 \( 40 \% \) 정도 감소하였음을 알 수 있다(Fig. \(3\)A, B). 이는 콜라겐 분해효소의 발현양이 억제됨에 따라 콜라겐 유지에 영향을 미친다는 것을 알 수 있다. 또한 추출물 \( 1 \% \) 이상 농도에서 대조군에 비해 약 \(3 \)배정도의 엘라스틴 발현양이 증가됨을 확인되었다(Fig. \(3\)C). 따 라서 MMP-\(1\) 발현양을 억제시키고 엘라스틴 발현양을 증가시킴에 따라 딱지꽃 뿌리 추출물의 주름개선 효과에 대한 가능성을 확인하였다</p>
딱지꽃 뿌리 추출물을 피부세포에 처리하여 여러가지 활성을 확인하기 전에 먼저 무엇을 해야 해?
세포독성에 대한 평가