<h1>초 록</h1><h2>가물치(Channa argus) 젖산탈수소효소 동위효소들의 정제 및 특성</h2><p>가물치(Channa argus) 조직의 젖산탈수소효소 동위효소(EC 1.1.1.27, lactate dehydrogenase, LDH)를 정제하고 생화학적, 면역학적 및 역학적 방법으로 특성을 연구하였다. LDH 활성은 골격근이 \( 380.4\mathrm{ units}\) 로 가장 높고 심장 \( 13.4 \), 눈 \(3.5\), 뇌 조직 \( 5.4 \mathrm{units}\) 이었으며, 심장의 CS 활성은 \( 20.7 \mathrm{units}\) 로 가장 높고, LDH/CS는 골격근 \( 172.9 \), 심장 \( 0.6 \), 눈 \( 0.32 \), 뇌 \( 0.47 \) 이고, 단백질 양은 골격근 \( 14.7 \mathrm{mg} / \mathrm{g} \) 이며, 특이활성 \( (\mathrm{units} / \mathrm{mg}) \) 은 골격근 \( 25.88 \), 심장 \( 0.79 \), 눈 \( 0.31 \), 뇌 \( 1.38 \mathrm{units}\)\( / \mathrm{mg} \) 이었으므로 골격근은 혐기적이고, 심장은 호기적이었다. LDH \( \mathrm{A}_{4}, \mathrm{~B}_{4} \), eyespecific \( \mathrm{C}_{4} \) 에 대한 항혈청을 사용한 Western blot, 면역침강반응 및 native- polyacrylamide gel electrophoresis에 의해 \( \mathrm{A}_{4}, \mathrm{~A}_{3} \mathrm{~B}, \mathrm{~A}_{2} \mathrm{~B} \) \( \mathrm{AB}_{3} \) 및 \( \mathrm{B}_{4} \) 가 모든 조직에서 확인되었고, 눈 조직에서 \( \mathrm{C}_{4} \) 와 \( \mathrm{AC}_{3}, \mathrm{~A}_{2} \mathrm{C}_{2}, \mathrm{AC}_{3} \), 뇌 조직에서 \( \mathrm{A}_{3} \mathrm{C} \) 도 확인되었다. LDH \( \mathrm{A}_{4}, \mathrm{~A}_{3} \mathrm{~B}, \mathrm{~A}_{2} \mathrm{~B}_{2}, \mathrm{AB}_{3}, \mathrm{~B}_{4} \), eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 동위효소는 affinity chromatography와 Preparative PAGE Cell에 의해 정제되었다. LDH \( \mathrm{A}_{4} \) 동위효소는 \( \mathrm{NAD}^{+} \)유입 후 정제되었고, eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 는 \( \mathrm{A}_{4} \) 에 이어 용출되기 시작하였으며 \( \mathrm{B}_{4} \) 는 buffer 유입 후 용출되었다. 정제한 결과 \( \mathrm{A}_{4} \) 는 \( \mathrm{B}_{4} \) 및 eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 와 분자구조의 일부가 유사하였지만 \( \mathrm{B}_{4} \) 와 \( \mathrm{C} \) 는 서로 다른 것으로 나타났으므로, 하부단위체 A는 보존적이고, 하부단위체 B 는 A 보다 더 빠르게 진화된 것으로 보인다. 피루브산 \( 10 \mathrm{mM} \) 에서 \( \mathrm{A}_{4} \) 동위효소 \( 39.98 \%\), \(\mathrm{~A}_{2}\mathrm{~B}_{2}\) \( 21.28 \%\), \( \mathrm{~B}_{4}\) \(19.67 \% \) 및 eye-specific \( \mathrm{C}_{4}\) \( 16.87 \% \) 의 활성이 남아있었고, 피루브산에 대한 \( \mathrm{Km}^{\text {PYR }} \) 은 \( \mathrm{A}_{4}\) \( 0.17 \mathrm{mM}\), \(\mathrm{B}_{4}\) \( 0.27 \mathrm{mM} \), eye-specific \( \mathrm{C}_{4}\) \( 0.133 \mathrm{mM} \) 였다. \( \mathrm{A}_{4}, \mathrm{~B}_{4} \), eye-specific \( \mathrm{C}_{4}, \mathrm{~A}_{2} \mathrm{~B}_{2}, \mathrm{~A}_{3} \mathrm{~B} \) 및 \( \mathrm{AB}_{3} \) 의 최적 \( \mathrm{pH} \) 는 각각 \( \mathrm{pH}\ 6.50\), \( \mathrm{pH} \ 8.5\), \(\mathrm{pH}\ 5.5\), \(\mathrm{pH}\ 6.0-6.5,5.0 \) 및 \( \mathrm{pH}\ 7.5 \) 였고, 동질사량체 \( \mathrm{A}_{1} \) 와 이질사량체 동위효소들은 넓은 \( \mathrm{pH} \) 영역에서 안정하였다. 특히 골격근은 LDH 활성이 크므로 활동성이 크며, 눈조직에서 피루브산 친화럭이 강한 eye-specific \( \mathrm{C}_{4} \) 에 의해 피루브산 대사가 빠르게 일어나고, 이어서 \( \mathrm{A}_{4} \) 에 의해 젖산이 산화되어지는 것으로 사료되므로, 종의 생태환경 및 먹이 획득 양식에 따라 LDH-C 발현, 기질에 대한 친화도 및 대사 시간이 다른 것으로 사료된다.</p>
가물치 조직의 무엇을 정제하는가?
젖산탈수소효소 동위효소