<h2>Real-time quantitative \( \mathrm{PCR} \)</h2><p>SOCS-3의 mRNA 발현을 측정하기 위하여 dou-ble-stranded DNA dye인 SYBR Green PCR master mix (Finnzyme, Espoo, Finland)를 이용하여 real-time PCR (ABI PRISM 7700 system) (Applied Biosystems Inc., Foster City, CA)을 실시하였다. 사용한 primer sequence는 Table 1에 제시하였으며, 모든 Primer는 코스모사(Cosmo Genetech, Korea)에서 제작 및 구입하여 사용하였다. 모든 샘플은 3회 반복 실험하여 합성시킨 \( \mathrm{cDNA} \) 를 2 회 이상 반복 측정하였다. \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 15 초, \( 60^{\circ} \mathrm{C} 30 \) 초간 40 cycle을 측정하여 CT 값을 얻어내고, 융해 곡선 확인을 위해 40 cycle 이후 dissociation stage를 추가하여 \( 95^{\circ} \mathrm{C} 15 \) 초, \( 60^{\circ} \mathrm{C} 1 \) 분의 조건을 2 번 반복하여 현광신호의 크기를 측정하였다. 반응이 완료된 후 증폭곡선의 \( \mathrm{S} \) 커브가 급격히 올라가는 지점과 CT 값의 추출 지점이 일치하였음을 확인하고, 융해 곡선 그래프의 단일 증폭 곡선을 확인한 뒤 최종적으로 CT 값을 데이터 처리 하였다. 결과는 단순 \( \mathrm{CT} \) 값 비교 분석 방법을 사용하였으며, mRNA 발현양은 glyc-eraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)의 CT값으로 상대 정량하여 보정하였다.</p><h2>자료처리</h2><p>IGF-I 처리에 따른 \( \mathrm{C} 2 \mathrm{C} 12 \) 세포에서의 SOCS-3 유전자의 단백질 발현과 mRNA 발현의 유의성 검증을 위하여 SPSS \( 12.0 \) for window를 이용하여 일원배치분산분석(one-way ANOVA)을 실시하였으며, 농도 및 시간 별로 유의한 차이가 있는지를 검증하기 위하여 Tukey's 사후검정을 실시하였다 \( (p<0.05) \).</p>
실험에 사용한 모든 primer의 제작 및 구입처는 어디야?
코스모사