<h2>DPPH radical 소거 활성</h2><p>Blois 방법을 사용하여 다음과 같이 즉정하였다. 즉 \( 1.0 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}\), \(2.0 \mathrm{mg} / \mathrm{ml}\), \(4.0 \mathrm{mg} / \mathrm{ml} \) 농도의 각 시료 \( 0.1 \mathrm{ml} \)에 DPPH 라디칼 \( 1.5 \times 10^{-5} \mathrm{M} \) 에탄올 용액 \( 4 \mathrm{ml} \)을 첨가하여 실온에서 30분간 반응시킨 후, \( 520 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정하였다. 소거효과는 다음 식에 의해 %로 산출하였다.</p><p>Radical scavenging activity \( (\%)=\left\{\left(\mathrm{OD}_{\text {control }}-\mathrm{OD}_{\text {sample }}\right) /\right. \)\( \mathrm{OD}_{\text {control }} \times 100 \)</p><h2>간보호 효과</h2><p>실험동물은 ICR mouse (6주령, 수컷) 8 마리씩을 1개군으로 나누어 실험하였다. 실험군은 각각의 시료를 \( 500 \mathrm{mg} / \mathrm{kg} \)으로 하여 DMSO에 녹여 6일간 경구투여하였으며 3일 간격으로 시료투여 30분 후 \( 25 \% \mathrm{~CCl}_{4} \)의 olive oil을 \( 4 \mathrm{ml} / \mathrm{kg} \) 용량으로 경구투여하였다. 대조군은 6일간 정상사육 중 3일 간격으로 \( 25 \% \mathrm{~CCl}_{4} \)의 olive oil을 \( 4 \mathrm{ml} / \mathrm{kg} \)으로 경구투여하였으며 마지막 투여 24시간 후 마취상태에서 혈액을 채취하였다. 정상군도 같은 시간에 마취하여 채혈하였으며 혈중 AST와 ALT의 활성은 Sigma사(St. Louis, MO, USA) kit (MAK055, MAK052)를 사용하였다.</p><h2>알코올 분해 효과</h2><p>알코올 분해효과는 알코올 투여 후 혈중 알코올의 함량을 측정하는 방법을 사용하였다. ICR mouse (6주령, 수컷) 9마리씩 군을 나누어 실험군은 각 시료를 \( 10 \mathrm{ml} / \mathrm{kg} \)의 양으로 만들어 \( 0.1 \mathrm{ml} \)를 1회 경구투여 하였으며 대조군은 증류수를 \( 0.1 \mathrm{ml}\) 1회 경구투여하였다. 시료투여 30분 후 \( 40 \% \) 에탄올 \( 0.1 \mathrm{ml} \)을 1회 경구투여하고 투여 한시간 후에 혈액을 채취하였으며, 혈중 알코올 농도는 전문검사기관인 의료법인 삼광의료재단(서울)에 의뢰하여 측정하였다.</p><h2>세포독성</h2><p>세포배양은 온도 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \( 100 \%, \mathrm{CO}_{2} \) 농도 \( 10 \% \)를 유지하였다. 시료투여 전일 24-well plate에 혈청 \( 10 \% \) D-MEM을 각 well 마다 \( 1.0 \mathrm{ml} \)씩 넣은 다음, 배양중의 세포를 trypsin 처리하여 수확하여 cell counter로 세포농도를 계산하였다. D-MEM으로 농도별로 희석하여 세포수를 달리하여 각각의 well에 plating 하였다. 시료의 투여는 cell plating 18시간 후, medium을 흡인하여 버린 후, serum-free D-MEM을 well당 \( 1.0 \mathrm{ml} \)씩 넣고 시료를 serum-free D-MEM으로 농도별로 희석하여 각 well에 투여하였다. 투여 4시간 후, medium을 모두 제거한 뒤, 다시 serum \( 10 \% \) D-MEM을 well당 \( 2.0 \mathrm{ml} \)씩 넣었다. 시료투여 6일 후, medium을 모두 제거하고 crystal violet으로 3분간 염색하여 건조시킨 후, 해부현미경으로 관찰, colony수를 파악하고 plating한 cell의 수와 비교하여 생존율을 계산하였다. 사용한 암세포는 한국화학연구원에서 배양중인 세포주를 사용하였으며 A549 (lung), SK-OV-3 (ovary), SK-MEL-2(melanoma), HCT-15 (colon) 등 네 종류이다.</p>
DPPH radical 소거 활성 실험에서 빛을 흡수하는 정도를 측정하기 위해 각 시료에 에탄올 용액을 첨가한 후 어떻게 하였어?
실온에서 30분간 반응