<h1>결과 및 고찰</h1><h2>Genistein과 daidzein 처리에 의한 농도 의존적 세포생존율 억제 및 세포형태변화 관찰</h2><p>콩의 대표적인 isoflavone인 genistein과 daidzein 처리에 의한 HCT116 세포의 생장에 미치는 영향을 확인하기 위하여, genistein과 daidzein의 각각의 최종 처리 농도가 \( 25\), \(50\), \(100 \) \( \mu \mathrm{M} \)이 되도록 처리하였다. 그 후 24시간 동안 배양한 다음, MTS 용액을 이용하여 cell viability assay를 수행하였다. 그 결과 genistein을 처리한 경우 처리한 genistein 농도 의존적으로 세포 생존율이 감소함을 확인하였다(Fig. 1A). 그러나 daidzein을 처리한 경우, \( 25 \mu \mathrm{M} \)와 \( 50 \mu \mathrm{M} \) 처리농도에서는 세포 생존율에 영향이 없었으나, \( 100 \mu \mathrm{M} \) 처리농도에서는 세포 생존율의 감소를 확인할 수 있었다(Fig. 1B). 이러한 연구 결과는 세포의 형태학적 변화의 결과와 일치하는 것으로, Fig. 2A에서 보는 바와 같이 genistein을 농도별로 처리한 경우, genistein 에 의한 세포독성 효과가 농도 의존적임을 확인할 수 있다. 이에 반해 daidzein의 경우 MTS assay 결과와 동일하게, \(25 \mu \mathrm{M} \)와 \( 50 \mu \mathrm{M} \) daidzein을 처리한 경우는 세포독성효과를 관찰할 수 없었으며, \( 100 \mu \mathrm{M} \)의 daidzein을 처리한 경우 약한 세포 독성 효과를 확인할 수 있었다(Fig. 2B).</p><h2>RT-PCR을 통한 유전자 발현변화 분석</h2><p>Genistein의 처리에 의한 유전자 발현 변화를 확인하고자 oligo DNA microarray 실험을 수행하였다. 즉, 대조군은 HCT 116에 DMSO를 처리하고, 실험군은 HCT116에 genistein \( 50 \mu \mathrm{M} \)을 24시간 동안 처리하였다. 실험결과에 의해 발현이 2배 이상 up-regulation된 유전자는 71개, 2배 이상 down-regulation된 유전자는 64개로 각각 분류 되었다(unpublished data). DNA microarray 분석 결과를 검증하기 위하여, 2배 이상 up-regulation 되는 유전자 중에 DKK1, ATF3 그리고 NAG-1 유전자를 선택하여 RT-PCR을 수행하였다. 한편 internal control로서 GAPDH를 사용하였다. 그 결과 Fig. 3에서 보는 바와 같이 모든 유전자의 발현이 genistein을 처리 하였을 때, 대조군에 비해 발현이 증가됨을 확인하였다.</p><p>이 중 NAG-1 유전자는 항암 기능이 있는 것으로 알려져 있는 유전자로서, genistein의 처리에 의해 대표적인 암 억제 유전자인 p53을 경유하여 증가된다는 것이 보고 되었다. 또한, 파이토케미칼인 resveratrol에 의해서도 p53 의존적으로 NAG-1 유전자의 발현을 증가시킬 수 있는 것으로 보고되었다. 하지만, cyclooxygenase inhibitors에 의해서는 전사조절인자인 EGR-1을 경유하여 NAG-1 유전자의 발현이 증가됨이 보고되었다. 이러한 항암 유전자인 NAG-1은 여러 가지 다양한 chemopreventive agents에 의해서 발현이 유도되며, 이러한 발현은 여러 가지 기전에 의해 이루어진다. 본 연구에서는 genistein과 daidzein의 병합처리에 의해 NAG-1 유전자 발현의 변화를 확인하였다.</p>
genistein과 daidzein은 무엇에 포함돼?
isoflavone