<h1>결과 및 고찰</h1><h2>두 가지 형광물질의 \( \mathrm{pH} \) 에 다른 형광변화</h2><p>용액의 \( \mathrm{pH} \) 를 변화시키며 4-MU와 fluorescein의 형광을 측정한 결과 \( 4-\mathrm{MU} \) 의 형광변화는 \( \mathrm{pH} 7 \sim 8 \) 사이에 제한된 반면 fluorescein의 형 광변화는 \( \mathrm{pH} 5 \sim 8 \) 의 넓은 범위에서 관찰되었다. 4-MU를 이용한 lipase 활성측정 방법은 이전에 Rietz와 Guilbault에 의해 소개되었었다. 그들의 방법에 의하면 반응용액 부피 \( 2.3 \) \( \mathrm{ml} \) 에서 반응속도를 측정함으로써 77.8~389 units/liter의 범위에서 lipase 활성을 측정할 수 있는 것으로 되어 있지만 충분한 데이터가 없고 unit에 대한 정의가 나타나 있지 않기 때문에 다른 방법과 민감도를 비교하는 것은 어렵다. 또한 \( 4-\mathrm{MU} \) 를 \( \mathrm{pH} \) 측정용 헝광물질로 사용할 때 가장 큰 단점은 \( \mathrm{pH} \) 변화가 7~8 사이로 제한되기 때문에 lipase의 특성에 따른 \( \mathrm{pH} \) 조건을 조정할 수 없다는 점이다. 예를 들어 양의 pre-gastric lipase나 Aeromonas sobria LP004 또는 Aspergillus ni-dulans 등에서 분리된 lipase는 최적 \( \mathrm{pH} \) 가 6 근처이고 \( \mathrm{pH} 8.0 \) 에서는 활성이 \( 20 \% \) 이하로 감소하는 것으로 나타났기 때문에 \( 4-\mathrm{MU} \) 를 이용하여 활성을 측정하는 것이 어렵다. 따라서 넓은 \( \mathrm{pH} \) 범위에서 형광의 변화를 보여주는 fluorescein은 다양한 \( \mathrm{pH} \) 조건에서 lipase 활성을 측정할 수 있도록 해주는 대안이 될 수 있다.</p><h2>Sonication의 영향</h2><p>처음에 올리브 오일의 농도를 \( 0.2 \% \) 로 하여 반응 용액을 만들고 시간에 따른 형광 변화를 측정하였다. 나머지 조건은 표준 활성 측정 방법과 동일하였고 \( \mathrm{pH} \) 는 7.0으로 하였다. 그 결과 형광 값의 변화가 일정하지 않았으며 그와 같은 경향은 낮은 lipase 농도에서 더욱 심하였다. 특히 반응 이후에 microplate를 관찰하였을 때 표면에 미세한 오일 방울들이 관찰되었는데 오일 에멀션을 만들어 보관할 때 시간이 지나면서 에멀션이 서로 융합되어 형성된 것으로 보인다. 이와 같은 오일 방울들은 효소와 접촉면적을 감소시켜 반응속도를 느리게 할 뿐만 아니라 표면에서 빛을 반사하여 형광 측정값을 불안정하게 할 수 있을 것이다. 이와 같은 문제점을 해결하기 위하여 혼합용액을 만들고 다시 한 번 10초 동안 sonication 함으로써 다시 에멀션 상태로 전환시킨 후 효소를 넣고 반응을 시작하도록 하였다. 그 결과 반응속도가 빨라졌으며 시간에 따른 형광이 규칙적으로 변하는 것을 볼 수 있었다.</p>
\( 4-\mathrm{MU} \) 를 \( \mathrm{pH} \) 측정용 헝광물질로 사용할 때 가장 큰 단점은 뭐야?
lipase의 특성에 따른 \( \mathrm{pH} \) 조건을 조정할 수 없다는 점