<h1>재료 및 방법</h1><h2>사용균주, 균주의 배양방법 및 조건</h2><p>주정증류 폐기물의 성상을 연구하기 위해서 사용한 시료는 부산 소재의 주정 생산업체에서 나온 타피오카 (tapioca) 주정증류 폐기물로서 Table 1과 같은 구성성분으로 이루어져 있었다. 본 실험에서 사용한 균주는 American Type Culture</p><p>Collection (ATCC)에서 분양받은 A. niger ATCC 9142로서 균주의 활성을 유지하기 위하여 potato dextrose agar (PDA, Difco Lab., Detroit, U.S.A.) 배지에서 7일 마다 한번씩 계대 배양하였다. 전배양은 \( 300 \mathrm{ml} \) 의 진탕플라스크에 폐액을 100 \( \mathrm{ml} \)정도 넣고 면전을 한 후, \( 121^{\circ} \mathrm{C} \)에서 15분간 멸균하여 실온으로 냉각한 다음 무균실에서 PDA 배지로부터 포자를 접종하여 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \( 200 \mathrm{rpm} \) 의 조건으로 진탕배양기에서 2일간 배양하였다. 전배양액은 본 배양 배지 부피비의 \( 2 \% \)이내가 되도록 접종시켰다. 타피오카 주정증류 폐기물을 발효기질로 사용하여 총 환원당 농도가 \( 50 \mathrm{~g} / 1 \)가 되도록 농축한 후, 진탕배양기에서 플라스크배양을 행하였다. 발효실험 장치는 플라스크 진탕배양기(Philip Harris Co.)를 사용하였으며, 회전속도는 200 strokes/min, 온도는 \( 30^{\circ} \mathrm{C} \)로 유지하였다.</p><h2>분석</h2><p>본 실험에 사용된 시료분석법은 미국 공중보건협회의 표준시험법을 기준으로 하였으며, 측정방법과 기기는 Table 2에 나타내었다.</p><h3>구연산의 분석방법</h3><p>구연산 분석은 Marier와 Boulet 방법을 이용했다. 즉 \( 1 \mathrm{ml} \) 의 시료에 \( 1.3 \mathrm{ml} \) 의 pyridine을 넣어 세게 흔들어 준 후, \( 5.7 \mathrm{ml} \) acetic anhydride를 넣고 교반한 후, \( 30^{\circ} \mathrm{C} \) 항온조에서 1 시간 반응시켜 발색시킨다. 발색된 시료의 흡광도는 자외선 분광광도계 (Shimadzu Model U-3210, Japan)를 이용하여 \( 420 \mathrm{~nm} \)에서 측정하였다.</p><h3>환원당의 분석방법</h3><p>환원당 분석은 Dinitrosalicylic acid (DNS)법[3]에 의하여 측정했으며, 이 방법은 \( 0.25 \mathrm{~g} \) 의 3,5-Dinitrosalicylic acid와 Rochelle Salt \( 75 \mathrm{~g} \) 을 \( 2 \mathrm{M} \mathrm{NaOH} \) (4 \( \mathrm{g} \mathrm{NaOH} \) 를 \( 5 \mathrm{ml} \) 증류수에 녹임) \( 50 \mathrm{ml} \)에 첨가하여 녹인 후, 증류수로 \( 250 \mathrm{ml} \) 가 되게 희석해서 DNS시약을 만든다. \( 1 \mathrm{ml} \)의 시료에 DNS 시약 \( 1 \mathrm{ml} \) 를 혼합하여 \( 100^{\circ} \mathrm{C} \)에서 10분 동안 가열하여 발색시킨 후, 실온으로 급냉하여 \( 570 \mathrm{~nm} \)에서 자외선 분광광도계를 이용하여 흡광도를 측정하고 그에 따른 환원당의 농도를 구하였다.</p><h3>건조균체의 중량 측정방법</h3><p>균체 건조무게의 측정은 배양액중에서 시료를 취하여 원심분리한 후, 침전된 균체를 다시 \( 0.85 \% \mathrm{NaCl} \) 용액으로 2 3번 세척하여 원심분리하고, 증류수로 다시 \( 2 \sim 3 \) 번 세척하여 \( 105^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 24 시간 건조한 다음, 데시케이터에서 30분간 방냉하여 무게를 측정하였다.</p>
Dinitrosalicylic acid 방법을 사용해 DNS시약을 만들 때 어떤 과정을 거치나요?
\( 0.25 \mathrm{~g} \) 의 3,5-Dinitrosalicylic acid와 Rochelle Salt \( 75 \mathrm{~g} \) 을 \( 2 \mathrm{M} \mathrm{NaOH} \) (4 \( \mathrm{g} \mathrm{NaOH} \) 를 \( 5 \mathrm{ml} \) 증류수에 녹임) \( 50 \mathrm{ml} \)에 첨가하여 녹인 후, 증류수로 \( 250 \mathrm{ml} \) 가 되게 희석