<h1>재료 및 방법</h1><h2>세포주 및 세포배양</h2><p>본 실험에서는 mice 유래 Wt, DNA-PKcs-null (\(DNA-PKcs^{-/-} \))와 Ku80-null (\( Ku80^{-/-} \) ) mice 유래 세포주를 Dr. Lee (Indiana university, USA)로부터 제공받아 사용하였다. 세포배양을 위해서 \( 10 \% \) fetal bovine serum이 포함된 Dulbecco's modified essential medium (DMEM; Gibco BRL, Gaithersburg, MD, USA) 배양액과 \( 5 \% \mathrm{~CO}_{2} \)를 공급 하고 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)로 유지하였다. 배양세포는 3일마다 \( 0.05 \% \ trypsin \) \(0.02 \% \ EDTA \)로 부착한 세포를 뗴어내고 분할한 다음 refeeding 하여 계대배양 하면서 실험에 사용하였다.</p><h2>MTT assay를 사용한 adriamycin의 세포주 성장 억제 효과 실험</h2><p>Wt, \( DNA- PKcs^{-/-} \) 그리고 \( Ku80^{-/-} \) mice 유래 세포주들에 대한 adriamycin, mitomycin 그리고 cisplatin의 세포독성을 측정하기 위하여 MTT assay를 실시하였다. MTT assay를 이용하여 세포의 효소활성을 측정하였다. 세포들은 96 well plate에 \( 1 \times 10^{4} \) cells/well 이 되게 \( 200 \mu \ell \)씩 분주하여 24시간 배양하였다. 각 well에 시약을 농도별로 처리한 후 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{~CO}_{2} \ Incubator \)에서 72시간 배양하였다. \( Stock MTT \ 10 \mu \ ell \ (0.5 \mathrm{~g} / \mathrm{L}) \)을 첨가하고 4시간 더 배양한다음 \( HCI \ 0.04 \mathrm{~mol} / \mathrm{L} \)가 함유된 isopropanol \( 100 \mu \ell \)을 첨가하여 O/N 하였다.</p><p>\( 570 \mathrm{~nm} \)에서 microplate reader를 이용하여 흡광도를 측정하였고, 성장억제효과(Growth inhibitory effect (\( \% \)) = [(대조군의 흡광도 - 시표처리구의 흡광도) / 대조구의 흡광도)] \( \times 100 \))를 구하여 death ratio(\( \% \))로 나타내었다.</p><h2>세포주기 분포측정</h2><p>세포주기의 \( \mathrm{G}_{0} / \mathrm{G}_{1}, \mathrm{S} \) 그리고 \( \mathrm{G}_{2}/ \mathrm{M} \ phase \) 구성은 flow cytometric analysis로 측정하였다. 세포에 trypsin을 처리하여 96-well plate로부터 분리한 다음 PBS로 한번 세척하고 \( 70 \% \) ethanol로 고정하였다. 여기에 RNase를 첨가하여 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \)에서 4시간 배양하였다. Propidium iodide (Boehringer Mannheim, Germany)으로 염색 한 후 FACScan flow cytometer을 이용하여 측정하였다.</p>
세포주 성장 억제 효과 실험에서 실험군으로 사용된 시약은 뭐야?
adriamycin