<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험재료</h2><p>본 실험의 약용식물 원료 \( 67 \)종은 경동 한약도매시장(Seoul,Korea)에서 건조된 것을 구입하였다. 항통풍 대사 효소활성의 측정을 위한 xanthine, uric acid 및 xanthine oxidase (E.C.\( 1.1.3.2 \))는 Sigma-Aldrich사(St. Louis, MO, USA)의 제품을, 그외 시약은 \( 1 \) 급 이상을 사용하였다.</p><h2>약용식물의 추출물 제조</h2><p>약용식물 원료는 \( 60^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 5 \) 시간 동안 재건조한 후 \( 5 \)-\( 10 \)\(\mathrm{~mm} \)의 크기로 절단하였다. 각각의 원료 \( 5 \mathrm{~g} \)에 증류수 \( 100 \mathrm{~mL} \)를 넣고 \( \mathrm{pH} 7.0 \)으로 조정한 후 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \)의 항온진탕수조(Jeio Tech, Daejeon, Korea)에서 \( 8 \)시간 추출하였다. 각 추출혼합액은 \( 10 \)분간 원심분리 \( (2,000 \times \mathrm{g}) \)하여 상징액을 얻고 \( 0.45 \mu \mathrm{m} \)의 막여과지 (Whatman International, Springfield Mill, England)로 거른 후 xanthine oxidase 저해 효과 확인을 위한 추출물 시료로 사용하였다.</p><h2>약용식물 추출물의 xanthine oxidase 저해 효과 확인</h2><p>Xanthine oxidase의 활성은 반응생성물인 요산의 농도를 분광광도계로 측정하는 Stirpe와 della Corte의 방법으로 확인하였다. 효소반응은 \( 0.1 \mathrm{M} \) potassium phosphate 완충용액 (\(\mathrm{pH} 7.5\))에 xanthine을 녹여 \( 2 \mathrm{mM} \)의 농도로 만든 기질 용액 \( 1.5 \mathrm{~mL} \)를 기반으로 하여 시료구에는 각 추출물 시료 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)와 \( 0.5 \mathrm{U} / \mathrm{mL} \) xanthine oxidase \( 0.05 \mathrm{~mL} \)를 넣었고, 대조구에는 추출물 시료 대신 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)의 증류수와 \( 0.5 \mathrm{U} / \mathrm{mL} \) xanthine oxidase \( 0.05 \mathrm{~mL} \)를 넣었다. 시료구와 대조구 모두 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \)의 항온기에서 \( 5 \)분간 반응시킨 다음 \( 0.5 \mathrm{~mL} \)의 \( 20 \% \) trichloroacetic acid를 첨가하여 효소반응을 정지시켰다. 반응액은 \( 10 \)분간 원심분리 \( (2,000 \times \mathrm{g}) \)하여 단백질을 제거한 후 \( 292 \mathrm{~nm} \)에서 흡광도를 측정함으로써 요산의 생성억제 정도를 확인하였다. Xanthine oxidase 저해 활성(%)은 [\( 1 \)-(시료구-시료구 blank)/대조구 \( ] \times 100 \)으로 계산하였다.</p><h2>하수오 추출물의 안정성 및 xanthine oxidase 활성 저해 효과</h2><p>하수오 뿌리 \( 5 \mathrm{~g} \)에 증류수 \( 100 \mathrm{~mL} \)를 넣고 \( (\mathrm{pH} 7.0\))으로 조정한 후 \( 40 \)-\( 90 \) \( { }^{\circ} \mathrm{C} \)에서 \( 8 \)시간 동안 추출하여 xanthine oxidase에 대한 저해 활성을 측정하였다. 또한 \( 80^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 \( 8 \)시간 동안 추출하여 얻어진 하수오 뿌리의 물 추출물을 \( 0.01 \mathrm{~N} \mathrm{HCl} \)을 이용하여 \( \mathrm{pH} 2.0\)으로 조정한 후 실온에서 \( 4 \)시간 방치하면서 추출물의 xanthine oxidase 활성을 측정하였다.</p><p>\( 0.1 \mathrm{M} \) potassium phosphate 완중용액 (\(\mathrm{pH} 7.5\))에 xanthine을 녹여 \( 2 \mathrm{mM} \)의 농도로 만든 기질 용액 \( 1.5 \mathrm{~mL} \)에 \( 0, 0.25, 0.5, 1.0 \), 및 \( 2.0 \mathrm{mg} / 0.1 \mathrm{~mL} \) 농도의 하수오 뿌리 추출물을 각각 \(0.1 \mathrm{mL} \) 첨가한 후 \( 0.5 \mathrm{U} / \mathrm{mL} \) xanthine oxidase를 \( 0.05 \mathrm{~mL} \) 부가하여 xanthine oxidase 활성을 측정하였다. 또한 \( 0.1 \mathrm{M} \) potassium phosphate 완충용액 \( (\mathrm{pH}7.5 \) )에 xanthine을 녹여, \( 28.5, 33.3, 40.0, 50.0 \mu \mathrm{M} \)의 농도로 만든 각각의 기질 용액 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)에 시험구는 \( 1.0 \mathrm{mg} / 0.1 \mathrm{~mL} \)의 하수오 뿌리 추출물을 \( 0.1 \mathrm{~mL} \) 첨가하였고, 대조구는 증류수 \( 0.1 \mathrm{~mL} \)를 첨가한 후 시험구와 대조구 모두에 \( 0.5 \mathrm{U} / \mathrm{mL} \) xanthine oxidase를 \( 0.05 \mathrm{~mL} \) 부가하여 xanthine oxidase 활성을 측정하였다.</p><h2>통계 분석</h2><p>세 번 반복하여 수행한 실험의 평균값은 SPSS \(2.0 \) (SPSS Inc, Chicago, IL, USA)을 사용하여 평균 \( \pm \) 표준편차로 나타내었고, t-test를 실시하여 \( p<0.05 \) 인 경우 통계적으로 유의하다고 판정하였다.</p>
약용식물의 추출물을 제조할 때 원료를 몇 도에서 재건조 했어?
\( 60^{\circ} \mathrm{C} \)