<h1>재료 및 방법</h1><h2>천식유발</h2><p>천식유발은 BALB/c 마우스와 BALB/c IL-4 KO 마우스와 IL-10 KO 마우스를 대상으로 각 실험군 당 12마리씩 사용하여 유발하였다. BALB/c 마우스는 (주)오리엔트바이오에서 생후 7 주령 암컷을 구입하였으며, IL-4 KO 마우스와 IL-10 KO 마우스는 한국생명공학연구원에서 분양받아 건국대학교 수의과대학 동물실험실에서 사육한 후 실험에 사용하였다. 천식을 유발시키기 위해 실험 1일에 \( 20 \mu \mathrm{g} \) 의 ovalbumin(Sigma)을 aluminum hydroxide를 부형제로 하여 PBS에 녹여 복강 내로 투여하여 14일 후 동일한 방법으로 다시 복강내에 주입하여 재감작을 실시하였다. 실험 28일, 29일 및 30일에 각기 \( 30 \mathrm{ml} \) PBS에 ovalbumin \( (1 \%) \)을 녹여 ultrasonicnebulizer (Sunrise medical, Pulmo-Aide \( { }^{\circledR} \), LT compressor)를 사용하여 aerosol 상태로 만들어 하루에 20분씩 3번 감작시켰다(Fig. 1). 실험 30일째 마지막으로 감작시킨 후 24시간 지나 안락사를 시켰고 실험에 필요한 시료들을 채취하였다.</p><h2>기관지 폐포 세척술</h2><p>기관지폐포 세척술은 Kagan 등이 실시한 방법을 따랐으며, 수집된 세포는 \( 1000 \mathrm{rpm} \) 에서 10분간 원심 분리를 실시하였다. 기관지 폐포 세척술로 수집된 세포를 원심분리 후, 폐세포들은 Cytospin \( { }^{\circledR}\) 3 cytocentrifuge (Shandon, Pittsburgh,PA)을 사용하여 slide glass위에 부착하였다. 부착된 세포는 완전히 건조한 후 Diff-Quik \( { }^{\circledR} \) stain (Dade Behring Inc.,Newark, DE) 염색을 실시하였다. 염색 후 세포구성비율을 현미경을 통하여 조사하였다.</p><h2>폐조직의 면역화학염색</h2><p>실험동물에서 폐와 기관지를 절제해 낸 후 \( 10 \% \) 포르말린 \( 3 \mathrm{ml} \) 을 주입하여 고정한 후 파라핀 블록을 만든다. 파라핀 블록은 \( 5 \mu \mathrm{m} \)의 절편으로 만든 후 \( 56^{\circ} \mathrm{C} \) incubator에 30분 처리하여 파라핀을 녹인 후 xylene으로 제거한다. \( 100 \%\), \(90 \%\), \(80 \% \), \( 70 \% \) 알콜을 단계별로 거쳐 함수과정을 거친 후 조직의 내인성 peroxidase 활성을 제거하기 위해 \( 0.3 \%\) \(\mathrm{H}_{2} \mathrm{O}_{2} \) 로 15 분간 처리하였다. PBS로 washing 한 후 항체의 비특이성 결합을 억제하기 위해 \(3\%\) bovine serum albumin (BSA)을 함유한 PBS를 이용하여 1시간 동안 반응시켰다. 이후 anti-mouse IL-4(\( 500 \mu \mathrm{g} \) at \( 1\mathrm{mg} / 1 \mathrm{ml}\), ENDOGENE\(^{\circledR} \)) 와 anti-mouse IL-10(\( 500 \mu \mathrm{g}\) at \( 0.5 \mathrm{mg} / 1 \mathrm{ml} \), Biolegend \( \left.{ }^{\circledR}\)) 를 각각 \( 1: 40 \)으로 희석하여 \( 4^{\circ} \mathrm{C} \) 에 24시간 처리하였다. DAKO LSBA 2kit로 이차 항체와 streptavidin-conjugated peroxidase (DAKO, Carpinteria, CA)을 부착시켰다. 발색은 3, 3'-diaminobenzidine (DAB, Sigma Chemical Co.)를 사용하였다. Slide glass를 완전히 건조한 후 Harris's hematoxylin (Sigma Chemical Co.)으로 대조염색을 실시하였다.</p><h2>통계처리</h2><p>통계 프로그램인 SPSS (Ver 10.0 for windows)를 사용하여 실험설계에 대한 분산분석은 ANOVA로, 각 처치군들간의 비교는 Dunkun test를 실시하여 유의성을 검정하였다. 각 자료는 3 번 이상의 반복된 실험을 통하여 얻어진 결과를 평균 \( \pm \) 표준오차로 표시하였고, \( \mathrm{p} \) 값이 \( 0.05 \) 이하인 경우 통계적 유의성이 있는 것으로 판정하였다.</p>
본 논문에서는 BALB/c 마우스와 BALB/c IL-4 KO 마우스와 IL-10 KO 마우스를 대상으로 각 실험군 당 12마리씩 사용하여 무엇을 유발했는가?
천식