<h2>YHM이 테스토스테론 합성과 관련된 유전자 발현에 미치는 영향</h2><p>산화적 스트레스로 인해 감소된 테스토스테론 분비가 YHM 처리 시 다시 정상상태로 회복되는 결과(Fig. 3)에 관여하는 효소를 확인하기 위해, 테스토스테론 합성에 관여하는 유전자들의 발현을 real-time PCR로 확인하였다. Pregenenolone과 andro-stenediol을 progesterone과 테스토스테론으로 변환시키는 3\( \beta \)-HSD4는 과산화수소를 처리하였을 때 control에 비해 \( 46 \% \) 가 감소하였다. 반면 3\( \beta \)-HSD4의 발현은 YHM을 \( 20 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 처리하였을 때 control 수준으로 회복되고 \( 40 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 을 처리하면 control에 비해 1.9배까지 증가하였다(Fig. 4A). 또한 17-OHprogesterone를 dehydroepiandrosterone (DHEA)과 androstenediol로 변환시키는 17,20-desmorase의 경우 과산화수소를 처리하였을 때 control에 비해 \(30 \%\) 감소하였는데, YHM을 \( 20 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 처리하면 control 수준으로 회복되고 처리하면 \( 40 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 을 처리하면control에 비해 1.7배까지 증가하였다(Fig. 4B)</p><p>이러한 결과는 Fig. 3에서 산화적 스트레스에 의해 감소되었던 테스토스테론이 YHM 처리 시 다시 증가하여 정상수준 이상으로 회복된 이유를 잘 설명해주고 있다. 즉 산화적 스트레스로 인해 발현이 감소되었던 테스토스테론 합성 유전자들이 YHM에 의해 그 발현이 다시 왕성해질 수 있도록 해주는 역할을 하고 있음을 의미하는 것이다.</p><h2>YHM이 테스토스테론 분해에 관련된 유전자 발현에 미치는 영향</h2><p>산화적 스트레스를 받은 TM3 세포에서 감소된 테스토스테론의 양을 YHM이 다시 회복시킬 수 있는 가능성의 하나로, 테스토스테론을 다른 물질로 전환시켜 테스토스테론의 양을 감소시키는 효소에 대한 영항을 분석하였다. 본 연구에서는 테스토스테론과 androstenedione를 estradiol로 분해하는 aromatase와 testosterone을 dihydrotestosterone (DHT)로 전환시키는 5 \( \alpha- \) reductase2의 발현을 조사하였다. aromatase 유전자의 발현은 과산화수소를 처리하였을 때 control 보다 2.8 배 증가되는데, YHM을 \( 10\),\(20\),\(40 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 을 처리하면 과산화수소만 처리하였을 때보다 \( 76.5\),\(77.1\),\(79.0 \% \) 감소하였다. 또한 control에 비해서는 각각 \( 33.7\),\(35.3\),\(40.6 \% \) 감소하였다(Fig. 5A). 또한 aromatase 효소의 양은 산화적 스트레스를 주었을 경우 \( 549.5 \pm 56.0 \mathrm{pg} / \mathrm{mL} \) 로 control의 \( 295.4 \pm 76.8 \mathrm{pg} / \mathrm{mL} \) 보다 약 1.9배 증가하였다. 하지만 YHM 처리군에서는 과산화수소에 의해 증가된 aromatase의 양이 control 수준으로 감소하였다(Fig. 5C).</p><p>테스토스테론을 DHT로 전환시키는 5 \( \alpha \)-Reductase2의 경우, 과산화수소에 의해 mRNA의 발현이 control에 비해 2.7배 증가한 반면 YHM을 \( 10\),\(20\),\(40 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 처리하였을 때는 과산화수소만 처리하였을 때보다 각각 46.2,60.6 그리고 \( 68.9 \% \) 감소하였으며, \( 20\),\(40 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 처리 시의 값은 control 수준으로 회복되는 것으로 나타났다(Fig. 5B). 또한 5\( \alpha \)-Reductase2 효소의 양은 과산화수소를 치리하였을 때 \( 352.9 \pm 24.4 \mathrm{pg} / \mathrm{mL} \) 로 control의 \( 129.0 \pm 17.5 \mathrm{pg} / \mathrm{mL} \) 에 비해 2.7배로 증가하였고, YHM을 \( 10\),\(20\),\(40 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 치리하였을 때는 각각 \( 280.0 \pm 43.7\),\(207.9 \pm 46.6\),\(60.4 \pm 21.0 \mathrm{pg} / \mathrm{mL} \) 로 농도 의존직으로 감소하였으며, 특히 \( 40 \mu \mathrm{g} / \mathrm{mL} \) 처리하였을 때는 control 보다 약 \( 50 \% \) 감소한 것으로 나타났다(Fig. 5D).</p><p>이러한 결과는 Fig. 3 에서 본 것치럼 스트레스에 의해 발현이 감소된 테스토스테론 합성환련 유전자를 YHM이 원상태로 회복시킬 뿐만 아니라, YHM은 스트레스에 의해 발현이 증가된 테스토스테론 전환환련 유전자를 원상태로 다시 감소시키는 작용을 하여 양적으로 이상이 생긴 테스토스테론의 양을 원상태로 되돌리는 탁월한 역할을 해주는 것으로 보인다.</p><p>최근 YHM을 4주간 투여한 동물실험의 경우 대조군에 비해 약 \( 30 \% \) 정도 혈중 테스토스테론이 증가한다는 보고가 있다. 상기의 논문에서는 YHM에 의한 혈중 테스토스테론 증가의 원인으로 호로파에 다량 함유되어 있는 것으로 알려진 생리활성 성분인 diosgenin이 체내에서 DHEA로 전환되어 테스토스테론의 전구체로 작용할 수 있다는 보고에 기인한다고 추정하였으나, 본 연구의 결과에 의하면 YHM이 테스토스테론의 합성과 전환에 관여하는 유전자의 발현을 조절하는 요인으로 보인다. 이 결과는 YHM 투여가 생체 내에서도 감소된 테스토스테론의 분비를 다시 회복시킬 수 있음을 시사함으로써, 테스토스테론 감소로 인해 야기되는 남성갱년기의 증상 완화에 도움이 될 수 있을 것으로 판단된다.</p>
aromatase 유전자의 발현량은 YHM 처리 시 줄어든다.
YES