<h2>항암확성 측정</h2><p>인간 세포주믈 이용한 항암활성의 평가는 천연물 및 식품의 추출물에 대하여 널리 이용되고 있으며, 본 연구에서는 직접계수법으로 세포수를 평가하였다. 암세포로는 HepG2, HeLa, SNU 601 및 폐암세포 (CCL-185, ATCC)를 \( 10 \% \) FBS, 5\% \( \mathrm{CO}_{2} \) incubator, \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 조건으로 DME배지 (DMEM : Dulbeco's Modified Eagle's Medium)에서 배양한 후, 적정농도의 세포를 T-flask에 부착 후 농도별로 조제된 시료를 첨가하여 이틀 후 trypsinization하여, 역상현미경을 이용하여 haemocytometer로 세포수를 축정하였다.</p><h2>미백효과(Tyrosinase 저해활성) 측정</h2><p>천연물의 미백효과를 관찰하기 위하여 tyrosinase활성저해를 측정하는 방법을 많이 사용하고 있다. Tyrosine을 기질로 이용한 tyrosinase 효소 활성의 저해는 Ishihara 등의 방법으로 변형시켜 실험하였다. Test tube 에 \( 0.1 \mathrm{M} \) so-dium phosphate buffer ( \( \mathrm{pH} 6.8) 0.8 \mathrm{ml}, 1.5 \mathrm{mM} \) Tyrosine solution \( 0.8 \mathrm{ml} \), 시료용액 \( 0.4 \mathrm{ml} \) 의 혼합 액에 호소액 ( 200 units/ml) \( 0.2 \mathrm{ml} \) 를 첨가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 10 분간 반옹시켜 475 \( \mathrm{nm} \) 에서 UV-Vis spectrophotometer를 이용하여 흡광도를 측정한 후 계산식 \( \{ \) 저해율(%) \( =[1-(\mathrm{S}-\mathrm{B}) / \mathrm{C}] \times 100\} \) 에 따라 ty-rosinase 효소활성 저해율을 구하였으며, 각 반응은 2회 측정하였다. 앞의 식에서 \( \mathrm{S} \) 는 시료 첨가 반응, \( \mathrm{B} \) 는 효소가 없는 반웅, \( \mathrm{C} \) 는 시료가 없는 반응을 나타낸 것이다.</p><h2>Melanin 생성 저해활성 측정</h2><p>근래 세포배양를 이용한 천연물의 melanin 색소 침착 저해효과에 대한 연구가 밚이 진행되고 있다. Melanin은 표피 기저층에 존재하는 melanocyte의 세포내 melanosome에서 tyrosinase 효소의 현속적 산화반응으로 생합성 되어진다. Tyrosinase (E.C.1.14.18.1)은 melanine 생합성 과정의 key en-zyme으로 페놀화합물을 기질로 이용하는 구리 함유 호소이다. Tyrosinc은 tyrosinase에 의하여 L-3,4 dihydroxyl-L-phenylalanine(L-DOPA)로, L-DOPA를 dopaquinone으로 산화가 되고 이것이 다시 5,6-dihydroxy indole, indole 5,6-qui-none으로 산화되어 최종적으로 중합에 의해 mclaninc이 생합성 된다. 현재 의학계나 화장품 업계에서는 mclanine 과잉 생성을 억제하기 위해 많은 연구가 이루어지고 있으며, 지금까지 알려진 tyrosinase의 저해제로 hydroquinone, 4-hydroxyanisole, ascorbic acid, kojic acid, azelaic acid 등이 있으나, 피부 안정성, 제형 안정성 등의 문제로 제한된 양만 사용되고 있다.</p><p>Melanin 생성 저해활성을 측정하기 위하여 먼저 ATCC에서 분양반은 human melanoma cell (HTB 67, ATCC)을 10\% FBS, \( 1 \% \) antibiotics를 첨가한 DMEM에서 \( 37^{\circ} \mathrm{C}, 5 \% \mathrm{CO}_{2} \) 조건에서 배양하였다. 이 melanoma Cell을 \( 1.0 \times 10^{5} \) cells/mlof 농도로 \( 10 \% \) FBS을 포함하는 DMEM에 현탁 하였다. 이 현탁 세포 \( (1 \mathrm{ml}) \)를 Tissue culture flask에 넣은 후 검정 시료믈 최종 \( 10 \mathrm{ug} / \mathrm{ml} \)이 되게 첨가 한 후 \( 5 \% \mathrm{CO}^{2} \) 조건으로 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 5일간 배양한 후 원심분리 \( (1,500 \mathrm{rpm}) \)하였으며 phosphate buffered saline (PBS)으로 2회 세척하였다. 다시 이 세포를 corning tube에 \( 1 \times 10^{6} \) 세포수당 \( 1 \mathrm{~N} \mathrm{NaOH} \) 용액 \( 1 \mathrm{ml} \) 을 넣어 세포를 녹인 다음, UV spectrophotometer를 이용하여 490 \( \mathrm{nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 계산식 \{Inhibition of melano-genesis(\%)= [1-(ABS \( 490 \mathrm{~nm} \) Sample/ ABS \( 490 \mathrm{~nm} \) Control)] \( \times 100 \) 에 따라 melanogenesis 저해율을 구하였다.</p>
항암활성의 평가는 무엇을 이용해?
인간 세포주