<h1>재료 및 방법</h1><h2>실험동물과 성장판의 분리</h2><p>실험동물은 집토끼(Oryctolagus cuniculus)를 암수 구별없이 4주된 어린 토끼 50마리(효창실험동물연구소)를 구입하여 7일 동안 실험실 환경(온도 \(22\)-\( 25^{\circ} \mathrm{C} \), 습도 \(60\)-\(80\%\))에서 사육하였다. 사육한 어린 토끼는 후이개정맥에 \( \mathrm{kg} \) 당 \( 50\mathrm{mg} \) 의 ketamine(유한양행)을 주사하여 마취시키고 경골과 대퇴골로부터 성장판을 분리하였다. 대퇴골과 경골의 성장판은 골단의 골외막과 골외막륜을 조심스럽게 절개한 다음 대퇴골 원위부와 경골의 근위와 원위부 골단을 Salter I 골절을 만들어 성장판을 얻었다.</p><h2>연골세포의 분리</h2><p>연골은 대퇴골과 경골의 성장판을 취하여 연골세포를 분리하였다. 멸균상태하에서 채취한 성장판은 Ham F12 Medium(Gibco BRL), 10% fetal calf serum (Gibco BRL), \( 100 \mathrm{U} / \mathrm{m \ell} \) penicillin (Gibco BRL), \( 100 \mu \mathrm{mg} / \mathrm{m} \ell \) streptomycin (Gibco BRL),\( 1.25 \mu \mathrm{g} / \mathrm{m \ell} \) fungizone (Gibco BRL), \( 50 \mathrm{ng} / \mathrm{m \ell} \) gentamycin(Sigma, St. Louis, MO, USA), \( 100 \mathrm{ng} / \mathrm{m \ell} \) kanamycin (Gibco BRL)을 포함한 연골세포분리액에 담구었다.</p><p>성장판은 즉시 멸균 petridish로 옮기고 화소희석액을 부어 멸균된 칼로 잘게 썰어서 멸균된 뚜껑이 있는 시험관에 넣었다. 효소는 Ham F-12 medium내에 20mM HEPES(Gibco BRL), 14mM sodium bicarbonate (Gibco BRL, \(\mathrm{pH}\) \(7\)-\(7.5\))를 포함한 효소희석액으로 희석하였다. \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 하에서 교반시키면서 \( 0.25 \% \) trypsin (Gibco BRL)용액 \( 2 \mathrm{ml} \) 를 가하여 30분간 처리한 다음 다시 \( 0.25 \% \) trypsin용액 \( 4 \mathrm{ml} \) 를 가하여 15분간 처리한 후 원심분리하여 trypsin을 제거하였다. 효소희석용액 \( 5 \mathrm{ml} \) 를 가하여 교반시키면서 2회 세척하고 원심분리하여 효소희석용액을 제거하였다. 제거 후 \( 200 \mathrm{U} / \mathrm{ml} \) collagenase (Sigma, St. Louis, MO, USA) \(2 \mathrm{ml}\)를 가하여 1시간 교반시키면서 두었다가 상등액을 제거하고 collagenase 용액 \( 4 \mathrm{~ml} \) 을 다시 가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1시간 둔 다음 상등액을 제거한 후 다시 조직에 collagenase \( 4 \mathrm{ml} \) 을 가하여 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1시간동안 효소소화를 시켰다. 상층액을 제거하고 \( 600 \mathrm{~g} \) 로 8분간 원심분리하여 연골세포 peilet을 만들어 연골세포분리액 \( 8 \mathrm{ml} \) 에 넣어 \( 180 \mathrm{~g} \) 에서 10 분동안 원심분리하여 소화되지 않은 기질 입자들을 제거한 후 상층액을 다른 시험관에 옮겨 \( 600 \mathrm{~g} \) 에서 10 분간 원심분리하여 연골세포를 얻었다.</p>
본문의 실험에서 실험대상으로 삼은 동물은 무엇인가?
집토끼