<h2>발효조 회분배양에서의 균체 증식과 CGTase 발현</h2><p>재조합 균주 B. subtilis DB431/pJH-CGT1를 flask 배양 결과를 토대로 LBG 밋 \( [10 \% \) molasses+5\% CSL] 배지를 사용하여 \( \mathrm{pH} 7.0, 37^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 발효조 회분배양 하면서 균체증식과 CGTase 발현량을 조사하였다. Fig. 3에서 보는 바와 같이 두 배지에서 배양 9 시간까지는 균체증식이 활발히 일어났으며 그 이후에는 일정 수준에 도달하는 양상을 나타네었다. [10\% molasses \( +5 \% \) CSL]베지에서의 균체증식은 LBG 배지에서보다 2 배 정도 높은 균체농도를 나타내었다. 반면 세포밖의 CGTase 발현량은 \( 1.5 \) 배 정도 증가한 값인 \( 4.2 \mathrm{unit} / \mathrm{ml} \) 과 \( 90 \% \) 의 분비 효율을 나타내었다.</p><p>LBG 배지의 경우 세포밖의 CGTase 발현량은 \( 2.8 \mathrm{unit} / \mathrm{ml} \) 와 \( 90 \% \) 의 분비 효.율을 나타내었다. [10\% molasses+5\% CSL] 배지에서는 균체증식에 비해 CGTase 발현량은 상대적으로 낮은 값을 나타내었다. 잔존환원당의 경우 포도당보다 낮은 당 소모를 나타내었는데, 이는 molasses의 주 당인 sucrose 를 효율적으로 이용 못하고 비 발효성 당이 많이 포함되어 있기 때문으로 사료된다. 효모의 invertase의 경우 폐당밀에는 sucrose가 고농도로 함유되어 있어 이를 이용하기 위헤서는 효모 세포내 invertase의 활성이 높아야함이 보고된 바 있다. 회분배양시 flask 배양보다 균체증식과 CGTase 발현량이 2 배 증가된 값을 나타내었는데 이는 본 연구에 사용된 구성적 promoter의 특성인 growth-associated expression (균체 증식과 유전자 발현이 연관됨) 때문으로 사료된다. Plasmid 안정성은 LBG와 \( [10 \% \) molasses+\(5\%\) CSL]배지에서 배양초기와 말기까지 \( 90 \% \) 이상의 수준으로 유지하여 비교적 안정하게 유지되었다(Fig. 3). 숙주세포로 B. subtilis NA-1이 사용된 CGTase의 발현과 비교 시 본 연구에서 사용된 숙주 세포인 B. subtilis DB431에서 발현된 CGTase가 8배 정도 발현율이 높게 나왔으며 분비효율도 2 배이상 높게 나옴을 관찰 할 수 있었다. 본 실험에서의 재조합 CGTase의 경우 분비 효율이 매우 높음을 알 수 있는데, 이는 B. macerans 균주로부터 cloning된 CGTase의 발현에서도 관찰할 수 있었다.</p><p>결론적으로 산업용 배지인 molasses와 CSL을 이용한 발효조 배양을 통해 최대 발현량 \( 4.2 \mathrm{unit} / \mathrm{ml} \), 분비효율 \( 90 \% \), plasmid 안정성 \( 90 \% \) 를 얻었으며, 저럼한 산업용 배지를 이용한 고농도 세포 유가 배양을 할 경우 CGTase를 세포밖으로 대량 분비 생산할 수 있음을 알 수 있었다.</p>
저럼한 산업용 배지를 이용한 고농도 세포 유가 배양을 할 경우 CGTase를 세포밖으로 대량 분비 생산할 수 있음을 알 수 있었나요?
YES