<h1>재료 및 방법</h1><h2>YHM 제조</h2><p>호로파 추출물은 호로파 종자를 \( 70 \% \) 에탄올로 \( 60-80^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 3 시간 동안 추출한 후 여과시켜 농축한 다음, \( 95^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 1시간 동안 살균 후 분무건조기를 사용하여 분말로 제조하였다. 야관문 추출물은 잎과 줄기를 사용하였으며 추출방법은 호로파 추출물과 동일하게 실시하였다. 시험에 사용한 호로파 및 야관문 추출혼합물 중 호로파와 야관문 추출분말이 \(8:2\) 로 혼합한 것을 YHM이라 명명하였다.</p><h2>세포배양 및 산화적 스트레스 유발</h2><p>Mus musculus (mouse)의 Leydig cell인 TM3 cell은 한국세포주은행(Seoul, Korea)에서 구입하였다. \( 10 \% \) fetal bovine serum 및 antibiotics (Gibco BRL, Life Technologies Co., New York, NY, USA)가 포함된 DMEM 배지(Gibco BRL, Life Technologies Co.)에 3일에 한번씩 계대배양 하였다. 세포는 \( 5 \%\) \(\mathrm{CO_{2}} \) 가 유지되는 \( 37^{\circ} \mathrm{C} \) 배양기에서 배양하면서 사용하였다. 세포를 분주하고 24시간 후, \( 50 \mu \mathrm{M} \) 과산화수소(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)를 침가한 serum free 배지에서 4 시간 배양하는 방법으로 세포에 산화적 스트레스를 유발시키고, 이후 시료가 농도 별로 포함된 배양배지에서 추가로 20 시간 배양한 뒤 세포 및 배지를 수거하여 사용하였다.</p><h2>세포생존율 측정</h2><p>96well에 \( 7.5 \times 10^{3} \mathrm{cells} / 0.1 \mathrm{~mL} / \mathrm{well} \) 이 되도록 세포를 분주하고 24 시간 후, YHM이 농도별로 포함된 배양배지로 교환하여 24 시간 배양하였다. 과산화수소로 유도된 산화적 스트레스에서는 96well에 \( 1 \times 10^{4} \mathrm{cells} / 0.1 \mathrm{~mL} / \mathrm{well}\)로 분주하였다. CCK-8 (Dojindo, Kamimashiki-gun, Kumamoto, Japan) \( 10 \mu \mathrm{L} \) 을 첨가하고 \( 37{ }^{\circ} \mathrm{C}\) \(\mathrm{CO_{2}} \) 배양기에서 1 시간 추가 배양한 후, ELISA leader (PowerWave XS, BioTek, Winooski, VT, USA)를 이용하여 \( 450 \mathrm{~nm} \) 에서 흡광도를 측정하여 용매대조군 대비 세포생존률을 구하여 시험에 사용할 농도를 결정하였다.</p><p>Survival rate \( (\%)=\frac{\text { Absorbance }_{\text {sample }}-\text { Absorbance }_{\text {sample blank }}}{\text { Absorbance }_{\text {Vehicle }}-\text { Absorbance }_{\text {Vehicle blank }}} \)</p>
호로파와 야관문 추출분말이 \(8:2\) 로 혼합한 것을 어떻게 명명했어 ?
YHM