<h1>결과 및 고찰</h1><h2>HDAC 저해제 TSA에 의한 267B1 세포의 apoptosis 유발</h2><p>HDAC 저해제인 TSA의 처리에 의한 267B1 세포의 증식 억제가 apoptosis 유도와 연관성이 있는지의 여부를 조사하기 위하여 선행연구의 조건에 준하여 적정시간 또는 다양한 농도의 TSA를 처리하여 267B1 세포의 증식억제 여부를 조사하였다. 본 연구 조건에서도 선행연구의 결과에서와 유사하게 \( 400 \mathrm{ng} / \mathrm{ml}\) TSA의 24 시간 동안 처리에 의하여 정상 배지에서 배양된 대조군에 비하여 약 \( 50 \% \) 이상의 증식억제 현상을 관찰할 수 있었다(data not shown). 이러한 TSA 처리에 따른 267B1 세포의 증식억제가 apoptosis 유도에 의한 것임을 제시하기 위하여 apoptosis 일어난 세포에서 전형적으로 관찰되는 염색질의 응축 및 DNA 단편화 현상의 여부를 조사하였다. 이를 위하여 200 및 400 \(\mathrm{ng} / \mathrm{ml} \) 의 TSA가 24시간 처리된 세포를 대상으로 DAPI 염색을 실시하여 핵의 형태변화를 관찰하였으며, 다양한 조건에서 TSA가 처리된 배지에서 배양된 세포들의 핵 내 DNA를 분리하여 DNA 단편화 여부 조사를 위하여 agarose 전기영동을 실시하였다. Fig. 1A 및 B에서 알 수 있듯이 TSA의 처리 농도 및 시간의 증가에 따라 염색질의 응축에 의한 핵의 깨짐 현상 및 DNA 단편화의 증가 현상을 관찰할 수 있었다. 이러한 TSA 처리에의한 267B1 세포의 apoptosis 유발의 정도를 정량화하기 위하여 flow cytometry 분석을 실시한 결과는 Fig. 1C에 나타낸 바와 같으며, 이와 같은 연구결과들은 TSA에 의한 267B1 세포의 증식 억제가 apoptosis 유발과 직접적인 연관성이 있 음을 보여 주는 것이다.</p><h2>Bcl- 및 IAP family 인자들의 발현에 미치는 HDAC 저해제 TSA의 영향</h2><p>이상에서 관찰된 TSA 처리에 의한 267B1 세포의 apoptosis 유발에 관여하는 기전 해석의 시도를 위하여 먼저 Bcl-2 및 IAP family에 속하는 몇 가지 단백질들의 발현 변화를 조사하였다. Bcl-2 family에 속하는 몇 가지 인자들은 apoptosis 유발 조절에 가장 대표적인 유전자로 알려져 있는데, 그중 Bcl-2는 anti-apoptotic 분자로서 apoptosis의 유발을 억제하는 기능을 가지며, Bax는 pro-apoptotic 분자로 Bax 단백질 발현의 증가는 apoptosis의 유발을 유도한다. 이들 두 유전자는 세포 내 소기관 중 mitochondria로부터의 cytochrome c를 유리시켜 cysteine-related protease인 caspase, 종양억제 유전자인 p53, DNA의 단편화와 연관된 endonuclease 등의 활성을 상호 조절한다. 이들은 서로 dimer의 형태로 존재하며 그들의 발현 수준에 변화가 초래되면 apoptosis가 유발되는 것으로 알려져 있다. 그러나 Fig. 2에 나타낸 바와 같이 본 실험의 조건에서 TSA의 처리에 따라 Bax 및 Bcl-2의 단백질 발현 변화는 유의적인 차이를 보여주지 않았다. 그리고 IAP family에 속하는 여러 유전자 산물은 세포 내 anti-apoptotic 활성을 지니는데, 이들은 caspase와의 직◦간접적인 결합을 통하여 그들의 apoptotic 활성을 억제할 수 있을 것으로 밝혀져 있다. 특히 이들 IAP family의 발현은 전사 조절인자인 nuclear factor kappa B (NF-\(\kappa\)B)에 의해 조절 받는 것으로 밝혀져 apoptosis의 신호전달 연구에서 많은 표적인자로 관심을 받고 있다. Bcl-2 family와는 달리, TSA 처리 농도 및 시간의 증가에 따라 조사된 두 가지 IAP family 중, c-IAP-1은 현저하게 감소되었으며 c-IAP-2의 발현도 다소 감소되었다. 이상의 결과에서 TSA 처리에 따른 267B1 세포의 apoptosis 유발에Bax 및 Bcl-2의 발현 변화보다는 IAP family 인자의 발현 감소가 더 직접적인 원인이 될 수 있을 것 같으며, IAP family의 발현 감소는 caspase 활성을 유도할 것으로 추정되어진다. 그러나 Bax 및 Bcl-2의 경우 총 단백질에 대한 발현의 양적 변화만을 조사한 것이므로 미토콘드리아로의 이동과 관련된 세포 내에서의 분포 변화에 대한 추가적인 연구가 수행되어져야할 것으로 생각된다.</p>
본 연구는 어떤 물질을 처리한 267B1 세포의 증식 억제가 apoptosis 유도와 연관성이 있는지 조사했어?
TSA