<h1>결과 및 고찰</h1><h2>HUVECs의 생존 및 증식에 미치는 글루타민 및 혈청 결핍의 영향</h2><p>HUVECs의 생존 및 증식에 미치는 글루타민의 영향을 조사하기 위하여 정상배지에서 배양된 HUVECs를 글루타민이 없는 조건에서 24시간 및 48시간 배양한 후 hemocytometer counting을 이용하여 생존한 세포의 수 및 MTT assay를 이용한 증식율의 변화를 측정하였다. Fig. 1에 나타낸 바와 같이 글루타민이 결핍된 조건에서 HUVECs는 시간의 경과에 따라 세포의 생존율 및 증식율이 글루타민 결핍 시간의 증가에 따라 모두 감소되었다. HUVECs의 증식에 혈청이 필수적으로 요구되며, 혈청이 결핍되었을 경우 apoptosis가 일어난다는 것은 잘 알려진 바 있다. 또한 HUVECs에서는 정확한 비교 선행 연구가 없지만, in vitro 조건에서 글루타민의 결핍도 세포의 증식을 억제하며 apoptosis를 유발할 수 있음이 Drogat et al.에 의하여 보고된 바 있다. 그러나 동일 조건에서 혈청 결핍보다는 글루타민의 결핍에서 HUVECs의 증식율은 현저히 낮게 나타났으며, 혈청과 글루타민가 동시에 결핍된 조건에서 배양된 HUVECs의 증식율은 더욱 더 낮게 나타났다.</p><p>이러한 글루타민 및 혈청의 단독 및 동시 결핍에 의한 HUVECs의 증식율의 저하 현상이 apoptosis 유발과 연관성이 있는지를 조사하기 위하여 DAPI staining을 한 후 핵의 형태변화 및 flow cytometry 분석에 의한 sub-G1기에 속하는 세포의 빈도를 비교하였다. Fig. 3의 결과에서 알 수 있듯이 글루타민 또는 혈청이 결핍된 조건에서 배양된 HUVECs는 전형적인 apoptosis가 일어났을 경우 관찰되는 염색질의 응축에 의한 apoptotic body 현상이 뚜렷하게 증가되었으며, 글루타민 및 혈청이 모두 결핍된 조건에서 배양된 HUVECs에서는 이러한 현상을 오히려 관찰할 수 없었다. 아울러 sub-G1기에 속하는 세포의 빈도 역시 글루타민 또는 혈청이 결핍된 조건에서 배양된 HUVECs에서는 각각 \( 18 \% \) 및 \( 29 \% \) 정도로 관찰되어 각각의 단독 결핍에 의한 생존율 저하 현상과 연관성이 있었으나, 글루타민과 혈청이 동시에 결핍된 조건에서 배양된 HUVECs에서는 \(5\%\) 정도로 정상배지에서 배양된 세포의 자연적 apoptosis 유발 빈도인 \(3\%\)에 유사한 빈도를 보여주었다. 즉 글루타민과 혈청이 동시에 결핍된 조건에서 HUVECs의 증식 및 생존율이 저하되었지만, 각각의 결핍에 의하여 나타나는 apoptosis 유발은 오히려 차단되었음을 알 수 있었다. 또한 글루타민과 혈청이 동시에 결핍된 조건에서 배양된 세포의 경우 G1기에 해당되는 세포의 빈도가 다소 증가되었으며, 이러한 현상 세포주기 교란과 연관이 있는지의 여부에 대해서는 추후 연구가 필요할 것으로 생각된다.</p>
HUVECs의 생존 및 증식에 미치는 글루타민의 영향을 조사하기 위하여는 어디에서 배양된 HUVECs가 필요해?
정상배지