<h1>재료 및 방법</h1><h2>균주의 분리</h2><p>경북 영덕군 남정면 남호리 18-4번지에 소재하는 일성수산의 꽁치과메기 시판제품을 구입하여 \(5 \sim 7\)일 동안 냉장보관하였다. Histamine 분해능을 가진 균을 분리하기 위하여 Satake 등이 사용한 histamine 제한배지를 제조하여 과메기의 육질부를 면봉으로 도말한 후 증식하는 균을 분리하였다.</p><h2>시혐균주의 선정</h2><p>Histamine 제한배지에 증식한 균을 FDA, Bergey's manua 및 Yoguchi 등의 보고를 참고로 하여 형태 및 생화학적 시험과 \( \mathrm{NaCl} \) 농도 \( \left(25^{\circ} \mathrm{C}\right) \)에 따른 성장도 시험을 거쳐 최종 10종의 시험균주를 선정하였다.</p><h2>16S rDNA 염기서열 분석에 의한 시험균주의 동정</h2><p>시험균주를 LB broth (Luria-Bertani broth, \( 10 \mathrm{~g} \) of tryptophane; \( 5 \mathrm{~g} \) of yeast extract; \( 10 \mathrm{~g} \) of \( \mathrm{NaCl} \); pre-adjusted to \( \mathrm{pH} 7.0)\)에서 \( 35^{\circ} \mathrm{C}\), 18시간 동안 증균 배양한 후, 세포로부터 genomic DNA를 추출하였다.</p><p>PCR (Polymerase chain reaction) 반응은 DNA therminal cycler (Perkin Elmer Cetus co., USA)를 사용하여 수행하였고, primer는 16S-F (5'AGAATTCTNANACATGCAAGTCGAICG-3')와 16S-R (5'-GTGGATCCGGYTACCTTGTTACGACTT-3')을 사용하였다. 염기서열 분석은 ABI 310 Auto- matic Sequencer (Perkin Elmer co., U.S.A.)와 Big Dye Ter-minator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit (Perkin Elmer co., U.S.A.)를 사용하여 실시하였고, 분석된 염기서열은 NCBI (National Center for Biotechnology Information)의 World Wide Web Blast DNA database search service(blastn 2.0)로 검색하였다.</p><h2>시험균주의 histamine 분해능 재 확인</h2><p>시험균주의 histamine 분해능을 다시 확인하기 위하여 nutrient broth에 \(3\% \mathrm{~NaCl}, 1.4 \% \) histamine dihydrochloride (Sigma Chemical co., U.S.A)를 첨가하여 배지를 제조하여 균주를 접종한 후 세균의 농도와 histamine의 농도를 측정하여 생육곡선과 histamine 분해능의 상관관계를 관찰하였다.</p><p>먼저 세균의 농도 측정은 시험균주를 배지에 각각 접종하여 \( 25^{\circ} \mathrm{C} \) 에서 56시간 동안 배양하면서 4시간 간격으로 증균한 배양액을 \( 2 \mathrm{ml} \)씩 취한 후 분광광도계(Ultrospec 3000, Pharmacia Biotech., U.S.A)의 \( 600 \mathrm{~nm} \)파장에서 흡광도를 측정하였다.</p><p>Histamine의 농도 측정은 Lerke 등과 Summer와 Taylor의 효소법에 따라 시약을 준비하고 세균의 농도를 측정한 배양액을 원심분리 \( (3000 \mathrm{rpm}, 10 \mathrm{~min}) \)한 것을 시료로 하여 효소 실험을 시행하였다. 각 시료 \( 0.5 \mathrm{ml} \)에 buffer \( (\mathrm{pH} \) 6.8) \( 1 \mathrm{ml} \)와 diamine oxidase, peroxidase를 각각 \( 0.5 \mathrm{ml} \)를 넣어 충분히 섞은 후, \( 0.1 \mathrm{ml} \)의 Leucocrystal violet 용액을 넣고 배양한 후 \( \left(37^{\circ} \mathrm{C}, 2 \mathrm{hr}\right) \) 분광광도계의 \( 596 \mathrm{~nm} \) 파장에서 흡광도를 측정하였다.</p>
꽁치과메기를 구입한 후 몇 일간 냉장보관하였어?
\(5 \sim 7\)