La fraction membranaire est remise en suspension dans 200 µl du tampon de lyse ( Hansra G . et al . , 1999 ) . Tous les échantillons sont dilués au tiers par une solution échantillon ( cf . annexe 1 ) et les milieux sont dénaturés pendant 10 minutes dans un bain-marie à 100°C . L'électrophorèse , adaptée pour le système PROTEAN II ( Biorad ) , est réalisée à 20°C sur un gel de polyacrylamide à 10 % en présence de sodium dodécyl sulfate ( SDS-PAGE ) ( Laemmli U . K . , 1970 ) . Dans chaque puits il est déposé l'équivalent de 130 µg de protéines soit 90 µl de la fraction membranaire et 100 µl de la fraction cytoplasmique . La migration électrophorétique se fait à 50 V et pour une durée d'environ 15 heures , en fait c'est le front de migration formé par le bleu de bromophénol qui indique le moment où l'électrophorèse doit être arrêtée . Les protéines contenues dans le gel sont ensuite transférées sur une membrane de nitrocellulose . Pour cela le gel et la membrane sont mis en sandwiches entre deux feuilles de papier Whatman et deux tampons en fibre , puis l'ensemble est traversé par un courant électrique afin que les protéines se fixent sur la membrane . Cette étape se fait à 24 V pendant 3 heures et à température ambiante . La qualité du transfert est vérifiée en colorant la membrane avec une solution de rouge de Ponceau à 1% , ce qui permet de visualiser l'ensemble des protéines présentes sur la membrane de nitrocellulose . Cette membrane est incubée pendant 1 , 5 heure avec une solution pour western blot ( cf . annexe 1 ) contenant du lait à la concentration de 10 % , ceci permettra d'éviter des liaisons non spécifiques des anticorps utilisés par la suite . La solution pour western blot est ensuite employée pour laver la membrane 4 fois 10 minutes .