ضع الشريحة تحت المجهر الضوئي. تتفاوت أحجام البكتيريا بشكل كبير، لذا ستختلف درجة التكبير المستخدمة بين ×400 و×1000.  عند استخدام درجات التكبير الأعلى ينصح باستخدام عدسة الزيت لوضوح أكبر. قم بوضع قطرة زيت على الشريحة وتجنب الحركة أثناء وضع الزيت لتجنب تكون الفقاعات.  حرك برج الميكروسكوب حتى تصبح العدسة في مكانها وتلامس الزيت.  يمكن استخدام تقنية الغمر بالزيت مع عدسات خاصة وليس العدسات العادية "الجافة". قم بفحص الشريحة باستخدام الميكروسكوب لمشاهدة الأحياء الدقيقة تحت المجهر الضوئي. تبدو البكتيريا موجبة الغرام بلون بنفسجي، نتيجة احتجاز صبغة كريستال البنفسجية بداخل جدرانها الخلوية السميكة. بينما تبدو البكتيريا سالبة الغرام زهرية اللون أو بلون أحمر، بعد أن تم غسل اللون البنفسجي منها نتيجة لجدرانها الرقيقة ومن ثم تقوم الصبغة المضادة بدخول الجدار وتلوينه.   إن كانت العينة سميكة قد تشعر خطًا بان النتيجة موجبة. قم بإعداد شريحة جديدة إن وجدت أن كل البكتيريا موجبة الغرام للتأكد من صحة النتائج. إن تم وضع مزيل اللون لفترة طويلة فقد تأتي النتائج خطأ سالبة. قم بصبغ شريحة جديدة إن وجدت كل البكتيريا سالبة الغرام للتأكد من صحة النتائج. إن كنت غير متأكدً من نوع البكتيريا التي تراها فانظر إلى عدد من الصور المرجعية، المقسمة تبعًا للشكل ونوع الغرام. يمكنك أن تجد قاعدة بيانات لها عبر الإنترنت من خلال الروابط التالية: National Microbial Pathogen Database، Bacteria in Photos وغيرها من المواقع. ولتسهيل التفرقة بين النوعين تم وضع بعض الأمثلة التوضيحية بالأسفل بحسب نوع الغرام والشكل. البكتيريا مصنفة تبعًا لأشكالها تحت المجهر إلى كرويّة (دائرية) وعصويّة (أسطوانية). هنا بعض الأمثلة الشائعة للبكتيريا موجبة الغرام (باللون البنفسجي) مقسمة تبعًا للشكل:   "البكتيريا موجبة الغرام" هي إما "مكوّرات عنقودية" (أي تعيش في مستعمرات عنقودية الشكل) أو عنقوديات (أي تعيش في سلاسل). البكتيريا العصوية موجبة الغرام تشمل "الباسيلس"، "الكلوسترديوم"، "كوراينيبكتريام"، "اللستريا". أما "أكتينومايسس" فعادة ما تمتلك فروعًا أو خيوط. البكتيريا سالبة الغرام (وردية اللون) تقسم عادة إلى ثلاث مجموعات. المكورات وهي بكتيريا كروية الشكل، العصويات وهي طولية رفيعة الشكل والمكورات العصوية وتجمع بين صفاتيهما.   المكورات سالبة الغرام الأكثر شهرة هي "النايسيريا". تشمل العصويات سالبة الغرام "إي كولاي"، "إنتيروباكتر"، "كلابسيلا"، "سيتروباكتر"، "بروتيوس"، "سالمونيللا"، "شيجيللا"، "سودوموناس" وغيرها الكثير. يمكن أن تظهر فيبريو كوليرا " بشكلها العصوي العادي أو المعقوف.     العصويات المكورة سالبة الغرام  تشمل "بوردوتيللا"، "بروسيللا"، "هيموفيليس" ، "باستوريللا". من الصعب أحيانًا صبغ بعض البكتيريا لتعطي لونًا محددًا نتيجة رقة أو شمعية جدارها الخلوي. فتظهر بلون مختلط بين البنفسجي والوردي في نفس الخلية أو بداخل الخلايا المختلفة في نفس الشريحة. يمكن أن تحدث هذه المشكلة لأي عينة مضى عليها أكثر من 24 ساعة، إلا أن بعض الأنواع يصعب صبغها أيا كان عمر الشريحة. تحتاج هذه الأنواع إلى المزيد من الاختبارات المتقدمة للتعرف عليها مثل الصبغة المقاومة للحوامض وملاحظة نمو المزرعة أو الزراعة في وسط TSI أو الفحص الجيني.   تعد كلا من "أكتينومايسس"، "أرثوباكتر"، "كوراينبكرتيام"، "مايكوبكتريام"، "بروبيونيباكتريام" من البكتيريا موجبة الغرام ولكنها تظهر عادة بشكل غير واضح ما إذا كانت موجبة أم سالبة.   البكتيريا الصغيرة الأسطوانية مثل "تريبونيما" و"الكلاميديا" و"الركتيسيا" يصعب صبغها بالغرام. تختلف عملية التخلص من النفايات بين مختبر وآخر بحسب المواد المستخدمة، عادةً ما يتم التخلص من السائل المستخدم في طبق الصبغة في زجاجات مغلقة ومُعلّمة كمواد خطرة. ويتم غمر الشريحة في 10% من محلول منظف، ثم التخلص منها في حاويات النفايات الحادة.
إعداد الميكروسكوب الضوئي. افحص البكتيريا سالبة وموجبة الغرام. راجع الصور المرجعية. قسم البكتيريا موجبة الغرام بحسب الشكل. للتعرف على البكتيريا سالبة الغرام. تقييم النتائج المختلطة. التخلص من المواد.