تتحلل صبغة كريستال البنفسجية في المحلول المائي إلى أيونات كريستال البنفسجية الموجبة وأيونات الكلوريد السالبة. هذه الأيونات تخترق جدار الخلية والغشاء الخلوي لكلا نوعي البكتيريا "سالبة الغرام وموجبة الغرام". وتتفاعل أيونات كريستال الموجبة مع المكونات سالبة الشحنة الموجودة في جدار الخلية لتقوم بصبغ الخلية باللون البنفسجي.  تستخدم عدة معامل صبغة كريستال "هوكر" البنفسجية والتي يضاف إليها أوكسالات الأمونيوم لمنع الترسيب. قم بإمالة الشريحة واستخدم زجاجة غسل لرشّ تيار من الماء المقطر أو ماء الصنبور أعلى الشريحة، سيجري الماء إلى الأسفل على سطح الشريحة ولكنه لن يكون مصوبًا بشكل مباشر عليها.  لا تغسل الشريحة بشكل زائد عن الحد، مما قد يزيل البقعة من عينة غرام الموجبة، فيجب عليك التعرف على الفارق بين البكتيريا والفيروسات. استخدم قطّارة لتغطية الشريحة باليود. دعه يستقر فوقها لمدة 60 ثانية على الأقل، ثم اغسلها بنفس الطريقة المذكورة سابقًا.  يتفاعل اليود في صورة أيونات سالبة الشحنة مع أيونات كريستال البنفسجية الموجبة ليكون مركب كبير من أيوديد كريستال البنفسجية في الطبقات الداخلية والخارجية من الخلية. مما يحجز اللون البنفسجي في الخلية.  اليود مادة كاوية فتجنب استنشاقه أو بلعه أو ملامسته للجلد. يستخدم عادةً مزيج بنسبة 1:1 من الأسيتون والإيثانول في هذه الخطوة الهامة والتي لابد أن يتم ضبط توقيت إجرائها بدقة. أمسك الشريحة بزاوية ثم أضف مزيل اللون حتى يختفي اللون البنفسجي من ماء الشطف. يستغرق هذا عادة أقل من 10 ثوان أو حتى أقل إن كان مزيل اللون يحتوي على تركيز أعلى من الأسيتون. توقف مباشرة وإلا سيقوم مزيل اللون بإزالة صبغة كريستال البنفسجية من الخلايا موجبة وسالبة الغرام وسيكون علينا إعادة وضع الصبغة. اشطف الكمية الباقية من مزيل اللون بسرعة باستخدام الطريقة السابق ذكرها.   يمكن استخدام الأسيتون النقي (الذي يبلغ تركيزه 95%) بدلًا من هذا.  كلما زادت كمية الأسيتون المستخدمة كلما كانت عملية إزالة اللون أسرع مما يستدعي ضبطًا أكثر للتوقيت. إن كنت تعاني من صعوبة في ضبط توقيت هذه الخطوة قم بإضافة مزيل اللون قطرة بعد قطرة. عادة ما تكون الصبغة المضادة السفرانين أو الفوكسين وتستخدم لإعطاء مزيد من التباين بين البكتريا السالبة الغرام والموجبة الغرام وذلك بإعطاء البكتيريا سالبة الغرام لونًا زهريًا أو أحمر.  اتركها لمدة 45 ثانية ثم قم بشطفها.  يعمل الفوكسين على صبغ الكثير من البكتيريا سالبة الغرام بلون أكثر حدة مثل "الهيموفيليس" و"اللجيونيللا". يشكل هذا خيارًا أفضل للمبتدئين. يمكنك ترك الشريحة لتجف في الهواء أو تجفيفها باستخدام ورق تجفيف يباع لهذا الغرض.  انتهت تجربة فحص العينة بملون غرام الآن.
أغرق الشريحة بسائل كريستال البنفسجي، استخدم القطّارة لإغراق البكتيريا في عدة قطرات من صبغة كريستال البنفسجية والتي تسمى أحيانًا صبغة جنتيان البنفسجية. اغسل صبغة كريستال برفق. أغرق الشريحة باليود ثم اشطفها. أضف مزيل اللون ثم اشطف بسرعة. أغرق الشريحة بالصبغة المضادة، ثم اشطفها. جفف الشريحة.