Spermatogenese in vitro chez la souris impact sur la qualite nucleaire du spermatozoide, sur le developpement et l'epigenetique de l'embryon issu d'ICSI
Depuis quelques annees, une biopsie testiculaire suivie d'une congelation du tissu testiculaire est proposee aux enfants atteints de cancer avant introduction d'un traitement gonadotoxique. Cette procedure de preservation de la fertilite est proposee avec l'espoir qu'une methode de restauration de la fertilite soit developpee. Le tissu testiculaire decongele pourrait ainsi etre utilise afin d'effectuer une maturation in vitro, evitant la reintroduction de cellules tumorales, pour produire des spermatozoides. Ce travail de these a consiste, dans un premier temps, a evaluer la mise en place de la methylation de l'ADN au sein du tissu testiculaire prepubere de souris au cours de la spermatogenese in vitro. La culture de tissu testiculaire frais ou decongele de souris prepubere permet le maintien des niveaux d'expression des ADN methyltransferases 1 et 3a dans les spermatogonies et les spermatocytes. De plus, la methylation de l'ADN est retrouvee jusque dans les spermatozoides produits in vitro. Par la suite, la qualite nucleaire des spermatozoides ainsi obtenus a ete analysee. La culture de tissu testiculaire n'a pas d'impact sur le taux d'aneuploidie, la condensation de la chromatine et la fragmentation de l'ADN spermatique. Cependant, la congelation suivie par la culture organotypique augmente la proportion de spermatozoides avec un ADN oxyde. Enfin, la fonctionnalite des spermatozoides produits in vitro a ete analysee par micro injection ovocytaire et la dynamique de differentes marques epigenetiques a ete etudiee au cours du developpement preimplantatoire. Les taux de developpement embryonnaire sont diminues par l'utilisation de spermatozoides produits in vitro. Les niveaux des histones H3K4me3, H3K27me3 et H3K9ac sont peu modifies dans les embryons issus de spermatozoides generes in vitro alors que la methylation et demethylation de l'ADN sont plus impactees. La production de spermatozoides apres culture de tissu prepubere frais ou decongele dans le modele murin a permis de mettre en evidence que cette procedure n'est pas sans impact sur l'embryon precoce bien que la qualite des spermatozoides produits soit peu alteree.