النيوكليازات هي أنزيمات تقطع خيوط الحمض النووي عن طريق تحفيز هيدروليز الروابط الفوسفوديسترية. النيوكليازات التي تحلل النيوكليوتيدات من أطراف خيوط الحمض النووي تسمى النيوكليازات الخارجية، في حين أن النيوكليازات الداخلية تقطع داخل الخيوط. النيوكليازات الأكثر استخدامًا في علم الأحياء الجزيئية هي النيوكليازات التقييدية، التي تقطع الحمض النووي في تسلسلات محددة. على سبيل المثال، يُشير إنزيم EcoRV المعروض على اليسار إلى تسلسل 6 قواعد 5′-GATC-3′ ويجري قطعًا على الخط الأفقي. في الطبيعة، تحمي هذه الإنزيمات البكتيريا من العدوى الفاجية عن طريق هضم الحمض النووي الفاجي عند دخوله الخلية البكتيرية، كجزء من نظام التقييد. في التكنولوجيا،
تسلسل 6 قواعد 5′-GATATC-3