Background and objective : Pediatric brain tumor is the second most common cancer after leukemia. Multidrug resistance is a problematic issue worldwide resulting in poor prognosis. Molecular and biological research on cancer cells is essentially required to understand the nature of cancer cells but the most effectiveness of different enzyme cocktail conditions for primary cell line establishment has not been conclusive. This study tests the hypothesis that different enzyme cocktail conditions differently affect the quality of cell line establishment. Materials and Methods: Primary cell line establishment of pilomyxoid astrocytoma tissues was performed using 7 different enzyme cocktail conditions (C: collagenase, H: hyaluronidase, D: DNase I, C+D: collagenase + DNase I, C+H: collagenase + hyaluronidase, D+H: DNase I + hyaluronidase, and C+D+H: collagenase + DNase I + hyaluronidase) for cell dissociation. To compare the effectiveness of 7 enzyme cocktail conditions, a degree of cell dissociation, clump cell size, percentage of live cells, cell proliferation rate and time of 80% cell confluency from each condition were investigated. Results: All of the 7 enzyme cocktail conditions provided similarly effective cell dissociation. All conditions displayed a high percentage of live cells after dissociation, ranging from 80-95%. Although, most of studied conditions could proliferate to reach 1.5x105 cells within 96 hours after seeding. D, H and C+D conditions could not proliferate to reach the expected number within 120 hours. However, all conditions effectively grew to produce 80% cell confluency within 120 hours. Conclusion: The present data indicate that in primary cell line establishment of brain pilomyxoid astrocytoma, different standard enzyme cocktail conditions similarly provide the effectiveness of cell line establishment.
หลักการและวัตถุประสงค: มะเร็งสมองในเด็กเปนมะเร็งที่พบมากเป็นอันดับสองรองจากมะเร็งเม็ดเลือดขาว (leukemia) ภาวะการดื้อยาหลายชนิดของมะเร็งสมองในเด็กพบวา เปนปญหาทั่วโลกสงผลใหมีพยากรณโรคที่แยการศึกษาเซลลมะเร็งในระดับโมเลกุลและระดับชีววิทยาเพื่อใหเขาใจ ถึงธรรมชาติของเซลล์มะเร็งยังมีความจําเป็น แต่ปัจจุบันยังไม่มีการสรุปวาเอ็นไซมผสมชนิดใดที่มีประสิทธิภาพมากที่สุด ในการผลิตเซลล์เพาะเลี้ยงมะเร็ง การศึกษานี้ทดสอบสมมติฐานที่วาเอ็นไซมผสมตางชนิดกันจะมีผลตอคุณภาพของเซลลเพาะเลี้ยงแตกต่างกัน วิธีการศึกษา: การเพาะเลี้ยงเซลลจากเนื้อเยื่อมะเร็งสมอง ที่ไดจากผู้ปวยมะเร็งสมองชนิด pilomyxoid astrocytoma โดยใชเอ็นไซมผสมที่แตกต่างกัน 7 ชนิด (C: collagenase, H: hyaluronidase, D: DNase I, C และ D: collagenase และ DNase I, C และ H: collagenase และ hyaluronidase, D และ H: DNase I และ hyaluronidase, และ C และ D และ H: collagenase และ DNase I และ hyaluronidase) สําหรับการแยกเนื้อเยื่อมะเร็งสมองใหเปนเซลลเดี่ยวในการศึกษา เปรียบเทียบประสิทธิภาพของเอ็นไซมผสมแตละชนิด จะศึกษาเปรียบเทียบในแงความสามารถในการแยกเซลล ใหเปนเซลลเดี่ยว (degrees of cell dissociation) จํานวนและ ขนาดของกลุ่มเซลล์ (number and size of clump cells) สัดสวนของเซลลที่มีชีวิต (percentage of live cells) ความสามารถในการเจริญเติบโต (rate of cell proliferation) ความสามารถในการเจริญเติบโตใหไดรอยละ 80 (time of 80% cell confluency) ผลการศึกษา: เอ็นไซมผสมทั้ง 7 ชนิด มีความสามารถในการแยกเนื้อเยื่อมะเร็งสมองให้เป็นเซลล์เดี่ยวโดยมีเซลล์กลุ่มอยู้บางไดอยางมีประสิทธิภาพเทาๆ กัน ทุกชนิดของเอ็นไซม ผสมมีสัดสวนของเซลลที่มีชีวิตในสัดสวนที่สูงในทุกชนิด ของเอ็นไซมผสมประมาณรอยละ 80 ถึง 95 เซลลที่แยกโดย เอ็นไซมผสมเกือบทุกชนิดสามารถเจริญเติบโตใหมีจํานวน 1.5x105 เซลลไดภายในเวลา 96 ชั่วโมง หลังจากใสเซลลลง ไปเพาะเลี้ยงมีเพียงเอ็นไซมผสมชนิด D, H และ C+D ที่ไมสามารถเจริญจนมีจํานวนที่กําหนดภายในเวลา 120 ชั่วโมง แต่อยางไรก็ตามเอ็นไซม์ผสมทุกชนิดเซลล์ สามารถเจริญเติบโต จนถึงความหนาแนนรอยละ 80 ไดภายใน 120 ชั่วโมง สรุป: ข้อมูลจากการศึกษานี้บ่งชี้ว่า ในการผลิตเซลล์เพาะเลี้ยงมะเร็งสมองจากมะเร็งสมองชนิด pilomyxoid astrocytoma เอ็นไซม์ผสมต่างชนิดกันมีประสิทธิภาพในการผลิตเซลล์เพาะเลี้ยงไดเหมือนกัน