markdown:
|Hôm nay, Thứ 5 17/04/14 23:22
|[Xem bài viết chưa trả lời](./search.php?search_id=unanswered&sid=63ecd6d9a62ea12cad2fa3d4ff128a6f) | [Xem chủ đề đang hoạt động](./search.php?search_id=active_topics&sid=63ecd6d9a62ea12cad2fa3d4ff128a6f)
|
|
Thời gian được tính theo giờ UTC + 8:45 Giờ
Các điều hành viên:
[minhtuan99bk](./memberlist.php?mode=viewprofile&u=2482&sid=63ecd6d9a62ea12cad2fa3d4ff128a6f), [Baros3004](./memberlist.php?mode=viewprofile&u=205&sid=63ecd6d9a62ea12cad2fa3d4ff128a6f)
|
|![]()
|
|
|Người gửi||Nội dung|
|
|cuixalui
|
|Tiêu đề bài viết:
|Kỹ sư|
|
|![]()
|
|![]()
|
|
LỜI MỞ ĐẦU
Ngày nay, cùng với sự phát triển mạnh mẽ của Công nghệ sinh học, các chế phẩm enzyme được sản xuất càng nhiều và được sử dụng trong hầu hết trong các lĩnh vực như: chế biến thực phẩm, nông nghiệp, chăn nuôi, y tế… Hàng năm lượng enzyme được sản xuất trên thế giới đạt khoảng trên 300.000 tấn với giá trị trên 500 triệu USD, được phân phối trong các lĩnh vực khác nhau [4].
Phần lớn enzyme được sản xuất ở quy mô công nghiệp đều thuộc loại enzyme đơn cấu tử, xúc tác cho phản ứng phân hủy. Khoảng 75% chế phẩm là enzyme thủy phân được sử dụng cho việc thủy phân cơ chất tự nhiên [4].
Protease là enzyme được sử dụng nhiều nhất hiện nay trong một số ngành sản xuất như: chế biến thực phẩm (đông tụ sữa làm pho mát, làm mềm thịt, bổ sung để làm tăng chất lượng sản phẩm trong sản xuất bia, xử lý phế phụ phẩm trong chế biến thực phẩm…), sản xuất chất tẩy rửa, thuộc da, y tế, nông nghiệp…
Qua nhiều năm, việc gia tăng sử dụng vi sinh vật như là một nguồn cung cấp protease đã cải thiện đáng kể hiệu quả sản xuất và sản phẩm được tạo ra nhiều hơn. Tuy nhiên giá thành chế phẩm protease còn khá cao, do đó cũng hạn chế việc sử dụng rộng rãi enzyme trong sản xuất. Các chế phẩm thu được sau quá trình nuôi cấy sản xuất enzyme chưa phải là chế phẩm có độ tinh khiết cao vì protein chỉ chiếm 20-30% [6]. Vì vậy, việc nghiên cứu cải tiến phương pháp tách và tinh chế enzyme nhằm thu được chế phẩm có độ tinh khiết cao rất cần thiết. Để tách và tinh chế enzyme nói riêng và protein nói chung thường có một loạt phương pháp hóa-lý và hóa học khác nhau. Có thể chia làm ba nhóm phương pháp sau:
- Phương pháp kết tủa
- Phương pháp sắc ký
- Phương pháp phân tách hệ hai pha nước
Protease phân bố ở thực vật, động vật, vi sinh vật. Tuy nhiên nguồn enzyme ở vi sinh vật phong phú nhất, có ở hầu hết các vi sinh vật như vi khuẩn, nấm mốc và xạ khuẩn… Có thể nói vi sinh vật là nguồn nguyên liệu thích hợp nhất để sản xuất enzyme ở quy mô lớn dùng trong công nghệ và đời sống.
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. Tình hình nghiên cứu enzyme.
1.1.1. Vấn đề nghiên cứu enzyme ở nước ta
Hầu như mọi phản ứng hoá học trong cơ thể sống đều cần phải có vai trò xúc tác của enzyme - chất xúc tác sinh học. Chính vì vậy, các nghiên cứu về enzyme đã thu hút sự quan tâm của các cán bộ hoá sinh học, sinh học thực nghiệm và nhiều nhà nghiên cứu ở các lĩnh vực liên quan khác. Các nghiên cứu nhằm theo hướng tách, tinh sạch enzyme, tạo các chế phẩm có độ sạch khác nhau, nghiên cứu cấu trúc, mối liên quan giữa cấu trúc và hoạt tính sinh học của enzyme, khả năng ứng dụng enzyme trong thực tế. Nghiên cứu về công nghệ enzyme đã được tiến hành bởi nhiều tác giả như sử dụng phủ tạng của lò mổ để sản xuất pancrease, pepsin, trypsin... sử dụng mầm mạ để sản xuất amylase. Đã có những thử nghiệm công nghệ như sản xuất amino acid từ nhộng tằm bằng protease, bột protein thịt bằng bromelain từ đọt dứa, lên men rượu bằng enzyme cố định trên cột. Cũng đã có những nghiên cứu sử dụng peroxydase, cyt-P450 trong chế tạo biosensor và thuốc phát hiện chất độc... Trong lĩnh vực y dược, việc nghiên cứu sâu về cơ chế tác dụng của một số enzyme nhằm mục đích kiến tạo nên một số thuốc dùng điều trị một số bệnh đặc biệt là tạo ra một số chế phẩm thuốc chống suy dinh dưỡng ở trẻ em, đồng thời đã tiến hành sản xuất đại trà. Đây là một đóng góp rất thiết thực và kịp thời trong việc phòng chống suy dinh dưỡng ở nước ta.
1.1.2. Công nghệ sản xuất enzyme Protease trên thế giới.
Trong những năm gần đây, giá trị thương mại của các enzyme công nghiệp trên toàn thế giới đạt khoảng 1 tỷ USD, trong đó chủ yếu là các enzyme thủy phân (75%), và protease là một trong ba nhóm enzyme lớn nhất sử dụng trong công nghiệp (60%) [4].
1.2. Tổng quan về enzyme Protease.
1.2.1. Giới thiệu chung.
Nhóm enzyme protease (peptit – hidrolase 3.4) xúc tác quá trình thuỷ phân liên kết liên kết peptit (-CO-NH-)n trong phân tử protein, polypeptit đến sản phẩm cuối cùng là các axit amin. Ngoài ra, nhiều protease cũng có khả năng thuỷ phân liên kết este và vận chuyển axit amin.
H2N- CH- CO- NH- CH- CO- …- NH- CH- COOH
R1 R2 RX
+H2O
H2N- CH- COOH + H2N- CH- CO … NH- CH- COOH
R1 R2 RX
Hình 1.1. Mô hình enzyme Protease thủy phân phân tử Protein.
Protease cần thiết cho các sinh vật sống, rất đa dạng về chức năng từ mức độ tế bào, cơ quan đến cơ thể nên được phân bố rất rộng rãi trên nhiều đối tượng từ vi sinh vật (vi khuẩn, nấm và virus) đến thực vật (đu đủ, dứa...) và động vật (gan, dạ dày bê...). So với protease động vật và thực vật, protease vi sinh vật có những đặc điểm khác biệt. Trước hết hệ protease vi sinh vật là một hệ thống rất phức tạp bao gồm nhiều enzyme rất giống nhau về cấu trúc, khối lượng và hình dạng phân tử nên rất khó tách ra dưới dạng tinh thể đồng nhất.
Cũng do là phức hệ gồm nhiều enzyme khác nhau nên protease vi sinh vật thường có tính đặc hiệu rộng rãi cho sản phẩm thuỷ phân triệt để và đa dạng.
Hình 1.2. Cấu trúc không gian enzyme Protease.
1.2.2. Phân loại Protease
Protease (peptidase) thuộc phân lớp 4 của lớp thứ 3 (E.C.3.4) .
Sơ đồ phân loại được tóm tắt trên hình 1.1:
Protease được phân chia thành hai loại: endopeptidase và exopeptidase.
* Dựa vào vị trí tác động trên mạch polypeptide, exopeptidase được phân chia thành hai loại:
+ Aminopeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide ở đầu N tự do của chuỗi polypeptide để giải phóng ra một amino acid, một dipeptide hoặc một tripeptide.
+ Carboxypeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide ở đầu C của chuỗi polypeptide và giải phóng ra một amino acid hoặc một dipeptide.
* Dựa vào động học của cơ chế xúc tác, endopeptidase được chia thành bốn nhóm:
+ Serin proteinase: là những proteinase chứa nhóm –OH của gốc serine trong trung tâm hoạt động và có vai trò đặc biệt quan trọng đối với hoạt động xúc tác của enzyme. Nhóm này bao gồm hai nhóm nhỏ: chymotrypsin và subtilisin. Nhóm chymotrypsin bao gồm các enzyme động vật như chymotrypsin, trypsin, elastase. Nhóm subtilisin bao gồm hai loại enzyme vi khuẩn như subtilisin Carlsberg, subtilisin BPN. Các serine proteinase thường hoạt động mạnh ở vùng kiềm tính và thể hiện tính đặc hiệu cơ chất tương đối rộng.
+ Cysteine proteinase: Các proteinase chứa nhóm –SH trong trung tâm hoạt động. Cystein proteinase bao gồm các proteinase thực vật như papayin, bromelin, một vài protein động vật và proteinase ký sinh trùng. Các cystein proteinase thường hoạt động ở vùng pH trung tính, có tính đặc hiệu cơ chất rộng.
+ Aspartic proteinase: Hầu hết các aspartic proteinase thuộc nhóm pepsin. Nhóm pepsin bao gồm các enzyme tiêu hóa như: pepsin, chymosin, cathepsin, renin. Các aspartic proteinase có chứa nhóm carboxyl trong trung tâm hoạt động và thường hoạt động mạnh ở pH trung tính.
+ Metallo proteinase: Metallo proteinase là nhóm proteinase được tìm thấy ở vi khuẩn, nấm mốc cũng như các vi sinh vật bậc cao hơn. Các metallo proteinase thường hoạt động vùng pH trung tính và hoạt độ giảm mạnh dưới tác dụng của EDTA.
Ngoài ra, protease được phân loại một cách đơn giản hơn thành ba nhóm:
- Protease acid : pH 2-4
- Protease trung tính : pH 7-8
- Protease kiềm : pH 9-11
CHƯƠNG II. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.
2.1.Đối tượng nghiên cứu.
Vi sinh vật: chủ yếu vi khuẩn, nấm mốc, xạ khuẩn.
Vi khuẩn
Lượng protease sản xuất từ vi khuẩn được ước tính vào khoảng 500 tấn, chiếm 59% lượng enzyme được sử dụng [6].
Protease của động vật hay thực vật chỉ chứa một trong hai loại endopeptidase hoặc exopeptidase, riêng vi khuẩn có khả năng sinh ra cả hai loại trên, do đó protease của vi khuẩn có tính đặc hiệu cơ chất cao. Chúng có khả năng phân hủy tới 80% các liên kết peptide trong phân tử protein [6].
Trong các chủng vi khuẩn có khả năng tổng hợp mạnh protease là Bacillus subtilis, B. mesentericus, B. thermorpoteoliticus và một số giống thuộc chi Clostridium. Trong đó, B. subtilis có khả năng tổng hợp protease mạnh nhất (Nguyễn Trọng Cẩn và cs, 1998). Các vi khuẩn thường tổng hợp các protease hoạt động thích hợp ở vùng pH trung tính và kiềm yếu.
Các protease trung tính của vi khuẩn hoạt động ở khoảng pH hẹp (pH 5-8) và có khả năng chịu nhiệt thấp. Các protease trung tính tạo ra dịch thủy phân protein thực phẩm ít đắng hơn so với protease động vật và tăng giá trị dinh dưỡng. Các protease trung tính có khả năng ái lực cao đối với các amino acid ưa béo và thơm. Chúng được sinh ra nhiều bởi B. subtilis, B. mesentericus, B. thermorpoteoliticus và một số giống thuộc chi Clostridium [2].
Protease của Bacillus ưa kiềm có điểm đẳng điện bằng 11, khối lượng phân tử từ 20.000-30.000. Ổn định trong khoảng pH 6-12 và hoạt động trong khoảng pH rộng 7-12 .
Nấm
Nhiều loại nấm mốc có khả năng tổng hợp một lượng lớn protease được ứng dụng trong công nghiệp thực phẩm là các chủng: Aspergillus oryzae, A. terricola, A. fumigatus, A. saitoi, Penicillium chysogenum)… Các loại nấm mốc này có khả năng tổng hợp cả ba loại protease: acid, kiềm và trung tính. Nấm mốc đen tổng hợp chủ yếu các protease acid, có khả năng thủy phân protein ở pH 2,5-3 [2].
Một số nấm mốc khác như: A. candidatus, P. cameberti, P. roqueforti… cũng có khả năng tổng hợp protease có khả năng đông tụ sữa sử dụng trong sản xuất pho mát.
Xạ khuẩn
Về phương diện tổng hợp protease, xạ khuẩn được nghiên cứu ít hơn vi khuẩn và nấm mốc. Tuy nhiên, người ta cũng đã tìm được một số chủng có khả năng tổng hợp protease cao như: Streptomyces grieus, S. fradiae, S. trerimosus… [2].
Các chế phẩm protease từ xạ khuẩn được biết nhiều là pronase (Nhật) được tách chiết từ S. grieus, enzyme này có đặc tính đặc hiệu rộng, có khả năng thủy phân tới 90% liên kết peptide của nhiều protein thành amino acid. Ở Liên Xô (cũ), người ta cũng tách được chế phẩm tương tự từ S. grieus có tên là protelin.
Từ S. fradiae cũng có thể tách chiết được keratinase thủy phân karetin. Ở Mỹ, chế phẩm được sản xuất có tên là M-Zim dùng trong sản xuất da [2]. Protease từ S. fradiae cũng có hoạt tính elastase cao, do đó chúng được dùng trong công nghiệp chế biến thịt.
Hầu hết các protease phân cắt protein ở các liên kết đặc hiệu, vì thế có thể sử dụng các enzyme này theo chiều phản ứng tổng hợp để tổng hợp các liên kết peptide định trước. Yếu tố tăng cường quá trình tổng hợp bao gồm pH, các nhóm carboxyl hoặc nhóm amine được lựa chọn để bảo vệ, khả năng kết tủa sản phẩm, phản ứng trong hệ hai pha lỏng.
2.2. Phương pháp nghiên cứu.
Quá trình sản xuất các chế phẩm enzyme vi sinh vật bao gồm các giai đoạn chủ yếu:
2.2.1. Tuyển chọn và cải tạo giống vi sinh vật cho enzyme có hoạt lực cao.
Để chọn giống vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp enzyme cao, người ta cóthể phân lập từ môi trường tự nhiên hoặc có thể dùng các tác nhân gây đột biến tác động lên bộ máy di truyền hoặc làm thay đổi đặc tính di truyền để tạo thành các biến chủng có khẳ năng tổng hợp đặc biệt hữu hiệu một loại enzyme nào đó, cao hơn hẳn chủng gốc ban đầu.
2.2.1.1. Phương pháp gây đột biến.
Đây là phương pháp hay được dùng nhất nhằm để:
-Tạo những đột biến bị giảm khả năng sinh tổng hợp repressor hoặc tổng hợp repressor có ái lực thấp với gene opertor.
-Tạo những đột biến tổng hợp enzyme có cấu trúc bậc 1 thay đổi do đó có thể giảm độ thay đổi với kiểu kìm hãm theo cơ chế liên hệ ngược.
Nếu sự thay đổi cấu trúc bậc 1 xảy ra ở vùng trung tâm hoạt động hoặc ở gần đó thì có thể làm thay đổi rõ rệt hoạt tính của enzyme.
-Gây đột biến ở đoạn gene hoạt hóa promotor để làm tăng áp lực của nó đối với ARN-polymerase do đó làm tăng tốc độ sao chép mã…Dùng biện pháp này có thể làm tăng lượng glucoza-6-phosphatdehydrogenaza lên 6 lần.
Hiện tượng đột biến thường liên hệ với sự thay đổi một gene, chẳng hạn bị “lồi” một bazo khi tái tạo phân tử ADN.[1]
Để tạo một đột biến gene có thể dùng tác nhân vật lý (tia tử ngoại, tia phóng xạ) hay hóa học (các hóa chất) tác dụng lên tế bào sinh vật.
2.2.1.2. Phương pháp biến nạp.[1]
Là sự biến đổi tính trạng di truyền của một nòi vi sinh vật dưới ảnh hưởng của ADN trong dịch chiết nhận nhận được từ tế bào của vi sinh vật khác. Ở đây yếu tố biến nạp là AND. Sự chuyển vật liệu di truyền (ADN) từ tế bào cho đến tế bào nhận có thể xảy ra trong ống nghiệm (invitro) khi cho tế bào nhận tiếp xúc với dịch chiết từ tế bào cho mà không có sự tiếp xúc giữa các tế bào.
Các tế bào có thể nhận bất kỳ loại ADN nào chớ không đòi hỏi phải là ADN từ các giống họ hàng. Tuy nhiên tế bào chỉ có thể nhận một số đoạn ADN nhất định, thường không quá 10 đoạn. Các đoạn ADN được di truyền trong biến nạp có M=106-107 và phải có cấu trúc xoắn kép. Hiện tượng biến nạp phổ biến ở nhiều loài vi khuẩn như: Diplococus, Staphylocus, Hemophilus, Agrobacterium, Rhizobium, Bacillus, Xantomonas.
2.2.1.3. Phương pháp tiếp hợp gene.[1]
Khác với biến nạp, ở đây vật liệu di truyền chỉ được truyền từ tế bào cho đến tế bào nhận khi hai tế bào tiếp xúc với nhau. Do vậy các vi sinh vật có khả năng biến nạp thì sẽ không có khả năng tham gia tiếp hợp gene nữa. Hiện nay quá trình tiếp hợp gene đã được nghiên cứu ở một số loài vi khuẩn như E.coli, salmonella, Pseudomonas aeruginosa.
2.2.1.4. Phương pháp tải nạp[1]
Vật liệu di truyền (ADN) được chuyển từ tế bào cho sang tế bào nhận nhờ vai trò trung gian của thực khuẩn thể (phage). Trong quá trình tải nạp, các đoạn AND được chuyển từ tế bào cho đến tế bào tiếp hợp với AND của tế bào nhận. Do đó làm biến đổi tính chất di truyền của tế bào nhận.
2.2.2. Phương pháp bảo quản giống vi sinh vật.
Khi sử dụng vi sinh vật để sản xuất enzyme cần chọn giống thuần chủng, đã được kiểm tra đầy đủ về các đặc tính hóa sinh, vi sinh, nuôi cấy và cần đặc biệt lưu ý đến điều kiện bảo quản giống. Thực tế khi bảo quản giống gốc trong một thời gian có thể tạo ra các biến dị ngẫu nhiên không mong muốn do đó định kỳ phải cấy chuyền và kiểm tra lại các đặc tính ban đầu.
• Phương pháp cấy chuyền.
Đây là phương pháp phổ biến nhất dễ thực hiện bằng cách giữ giống trên môi trường thạch (thạch nghiêng, hộp petri,…) với thành phần môi trường nuôi cấy và điều kiện nuôi cấy thích hợp cho giống vi sinh vật đó. Sau khi giống đã mọc tốt cần bảo quản ở nhiệt độ lạnh 3-40C và sau mỗi tuần phải cấy chuyền lại. Khi cấy chuyền chỉ lấy bào tử hoặc khuẩn lạc mà không nên lấy cả môi trường dinh dưỡng để đảm bảo không chuyền các sản phẩm trao đổi chất vào môi trường mới (có thể gây biến đổi bất lợi không thể lường hết được). Nếu là xạ khuẩn thì không nên bảo quản giống trên môi trường thạch mà nên giữ trong đất để khử trùng.
Để kéo dài thời gian bảo quản giống từ hàng tháng đến 1 năm, người ta phủ 1 lớp paraphin lỏng để tiệt trùng trên bề mặt giống để hạn chế sự phát triển của nó. Cần lưu ý chỉ phủ lớp dầu sau khi cấy vi sinh vật đạt đến độ chín sinh lý.
Phương pháp cấy chuyền rất có hiệu quả để bảo quản các giống nấm men, vi khuẩn và rất hữu hiệu, dễ dàng triễn khai giống ra sản xuất lớn, hạn chế các tai biến có thể dẫn đến hư hỏng giống gốc.
• Phương pháp làm khô
Bằng cách giữ giống trên cát, đất, silicagen trong điều kiện khô ráo (tất cả đều được khử trùng cẩn thận). Trong điều kiện như vậy sẽ hạn chế sự phát triển tiếp tục của giống khi bảo quản. Phươg pháp này rất hay được sử dụng để bảo quản nấm mốc, xạ khuẩn, một vài loại nấm men, vi khuẩn thời gian giữu giống có thể được 1 năm.
Phương pháp làm khô cũng thực hiện đơn giản, không cần dụng cụ đắt tiền. Tuy nhiên giống như phương pháp cấy chuyền thời gian bảo quản tương đối ngắn.
• Phương pháp đông khô
Đông khô là quá trình mà nước được lấy ra khỏi mẫu khi các mẫu đang ở trạng thái lạnh sâu. Ở đây vi sinh vật được huyền phù trong môi trường thích hợp và được làm lạnh trong môi trường chân không. Thiết bị đông khô sẽ hút nước và cuối cùng mẫu được làm khô đến mức nhất định. Mẫu được hàn kín để cho môi trường chứa mẫu là chân không. Đây là phương pháp phổ biến có hiệu quả cao cho bảo quản các đối tượng vi sinh vật khác nhau như nấm sợi, nấm men, vi khuẩn và một số virut. Tuy nhiên, phương pháp này ít được ứng dụng đối với tảo, động vật nguyên sinh và tế bào động vật.
• Phương pháp bảo quản lạnh sâu:
Đối với phương pháp bảo quản lạnh sâu thì vi sinh vật được bảo quản trong môi trường dịch thể và nước cần cho hoạt động sống của vi sinh vật bị bất hoạt ở nhiệt độ lạnh sâu (-196°C -> -80 °C).
Với phương pháp này, tế bào có thể bị vỡ trong quá trình làm lạnh và làm tan mẫu. Một nguyên nhân dẫn đến làm vỡ tế bào là việc tích luỹ các chất điện giải trong mẫu bảo quản và hình thành các tinh thể nước trong tế bào. Để khắc phục nhược điểm này người ta đã bổ sung các chất làm hạn chế tốc độ lạnh sâu và làm tan nhanh như glycerol, DMSO (dimethyl sulfoxide). Việc bảo quản theo phương pháp lạnh sâu này được thực hiện ở các thang nhiệt độ khác nhau như -20° C, -30° C, -40° C, -70° C, -140°C và -196° C. Nói chung mức nhiệt độ cao hơn -30° C cho hiệu quả thấp do tế bào chịu nồng độ muối cao sinh ra từ các chất điện giải. Phương pháp bảo quản này có hiệu quả với nhiều nhóm vi sinh vật khác nhau như nấm sợi, nấm men, vi khuẩn, xạ khuẩn và virut.
Đặc biệt với phương pháp bảo quản lạnh sâu trong nitơ lỏng là phương pháp vạn năng hơn cả. Phương pháp này thích hợp với nhiều đối tượng vi sinh vật khác nhau như vi khuẩn, nấm sợi, nấm men, virut, tảo và cả các dòng tế bào động vật. Tuy nhiên, phương pháp này cũng bộc lộ một số nhược điểm như đầu tư kinh phí cho thiết bị và điện, nitơ lỏng hoặc rủi ro như cháy nổ... Đặc biệt phương pháp này không thích hợp với các chủng vi sinh vật thường xuyên dùng đến. Nói chung phương pháp này thường được dùng với các chủng vi sinh vật có những đặc tính quí mà không thích hợp với phương pháp đông khô.
2.2.3. Môi trường nuôi cấy vi sinh vật tổng hợp enzyme Protease.
Cần phải chọn môi trường vì thành phần môi trường dinh dưỡng có ảnh hưởng trực tiếp đến sự sinh trưởng và tổng hợp enzyme của vi sinh vật. Trong thành phần môi trường phải có đủ các chất đảm bảo được sự sinh trưởng bình thường của vi sinh vật và tổng hợp enzyme.
Đặc biệt lưu ý là để tăng sự tổng hợp enzyme người ta thường dựa vào hiện tượng cảm ứng. Vì nếu như trong thành phần môi trường có các chất cảm ứng thì chất đó hay sản phẩm phân giải của nó sẽ kìm hãm hoặc làm yếu tác dụng kìm toả của chất kìm hãm nhằm bảo đảm khả năng sinh tổng hợp enzyme đã cho không bị cản trở. Chất cảm ứng tổng hợp enzyme cho thêm vào môi trường nuôi thường là cơ chất tương ứng của enzyme cần tổng hợp.
Thành phần chính của môi trường: C, N, H, O. Ngoài ra các chất vô cơ: Mn, Ca, P, S, Fe, K và các chất vi lượng khác.
2.2.3.1. Nguồn cacbon.
Thường là hợp chất hữu cơ trong đó chủ yếu là gluxit, tùy thuộc vào đặc tính của enzyme và nòi vi sinh vật mà người ta lựa chọn cho thích hợp.
Có nhiều chất hydratcacbon và các hợp chất khác là nguồn cacbon thích hợp đối với nấm mốc sinh ra enzyme protease có hoạt lực cao. Các nguồn cacbon có tác dụng đến sinh tổng hợp proteinase của nấm mốc có thể theo thứ tự:
Đối với Asp. flavus 74: fructoza→ glucoza→ sacaroza→ ramnoza→ manoza→ galactoza→ arabinora→ lactoza.
Đối với Asp. awamori 200: fructoza→ manit→ sacaroza→ arabinoza→ manoza→ galactoza→ lactoza.
Đối với Asp. oryzae 79: fructoza→ sacaroza→ maltoza→ glucoza→ manit→ arabinoza→ galactoza.
Tinh bột là nguồn cacbon của nhiều chủng vi khuẩn sinh tổng hợp enzyme Protease. Ví dụ: Vi khuẩn Bac. Subtilis có khả năng sinh tổng hợp Protease ở môi trường tinh bột >8%.
Nhiều xạ khuẩn ưa nhiệt, trong đó Micromonospora vulgaris 42, mọc tốt và sinh tổng hợp protease cao ở môi trường có tinh bột. Tăng nồng độ tinh bột từ 0,25- 1,5% sinh khối cũng tăng đồng thời với hiệu xuất tổng hợp enzyme.Nếu tăng nồng độ tinh bột hơn nữa sẽ không thu được kết quả dương tính. Tỷ số giữa cacbon và nitơ cần phải là 4: 1. Trên môi trường có maltoza (0,5- 2%) vi sinh vật phát triển bình thường, nhưng tổng hợp protease ngoại bào bị ức chế. Xạ khuẩn không phát triển được ở trên môi trường có các nguồn cacbon duy nhất là sacaroza, lactoza hoặc arabinoza. Glucoza, manoza, fructoza, xyloza có trong môi trường (0,2- 5%) làm ức chế sinh trưởng của xạ khuẩn và sinh tổng hợp enzyme.
Ngoài ra một số loại hydrocacbon cũng có nguồn cacbon có 125 chủng vi sinh vật. Chẳng hạn chủng Ps. Seruginosa có thể đồng hoá hydrocacbon và có khả năng sinh tổng hợp protease có hoạt lực cao trên môi trường n- parafin với 12, 14 và 16 nguyên tử cacbon, dầu nặng hoặc propylenglycol. Chúng không chỉ đồng hoá được cả hydrocacbon béo mà còn đồng hoá cả hydrocacbon thơm.[1]
2.2.3.2. Nguồn nito.
Nguồn nito sử dụng rất phong phú, bao gồm 2 nhóm: vô cơ và hữu cơ.
Đối với một số loài nấm mốc thuộc họ (A. oryzae, A. awamori, A. niger, A. flavus) trên môi trường có các nguồn nitơ hữu cơ sinh tổng hợp protease axit cao. Trên môi trường kzapek NaNO3 được thay bằng cả cazein hoạt lực protease của nấm mốc được tăng lên 3,5 lần, còn khi thay tinh bột bằng glucoza và bổ sung pepton hoạt lực enzyme tăng 6 lần. Nhiều kết quả nghiên cứu cho thấy sinh tổng hợp enzyme được nâng cao khi trong môi trường có đồng thời cả nguồn nitơ hữu cơ và nitơ vô cơ. Cho thêm vào môi trường có cám mì, bột đậu tương đã tách chất béo, các nguồn nitơ và hữu cơ hoạt lực enzyme protease tăng 22- 74%. Còn trường hợp dùng các nguồn nitơ vô cơ duy nhất trong môi trường sẽ dẫn đến ngừng sinh tổng hợp protease nói chung.
Trong quá trình nuôi cấy vi khuẩn, trong đó có B. subtilis và B. mesentericus, các hợp chất nitơ vô cơ và hữu cơ được dùng phối hợp trong môi trường sẽ tạo điều kiện thuận lợi cho sinh tổng hợp protease. Trong số các nguồn nitơ vô cơ thì NH4, H2PO4 là tốt hơn cả. Những muối khác NH4Cl, (NH4)2SO4, NH4NO3, NaNO3, KNO3, Ca(NO3)2 làm giảm hoạt lực protease tới 30- 50% , còn amylaza giảm 7- 10 lần. Còn trong môi trường chỉ có nguồn nitơ hữu cơ hoạt lực protease và amylaza cũng thấp hơn trong môi trường đối chứng (NH4)2HPO4 và nước chiết đậu tương.
Đối với xạ khuẩn ưa nhiệt Actynomyces Vulgaris U2 thì pepton là chất cảm ứng để sinh tổng hợp enzyme protease là tốt nhất.
Các axit amin có ảnh hưởng rõ rệt tới sinh tổng hợp enzyme bằng vi sinh vật. Glyxin, alanin, metionin và lơxin có tác dụng làm tăng hoạt lực protease của chủng đột biến A. oryzae 251- 90 đến 6- 9% và nguyên chủng A. oryzae 132- 63 tới 7- 24%. Nhiều axit amin có tác dụng ức chế đến sinh tổng hợp enzyme, Valin, axit glutamic, izolơxin và valin ức chế tổng hợp enzyme ở B. megaterium 60%. Còn đối với B. subtilis các axit amin ức chế trong quá trình này là glyxin, metionin, axit glutamic, alanin, lơxin,…
Ngoài ra, các bazơ purin như A (adenin), G (guanin) và các dẫn xuất của chúng, ARN và các sản phẩm thuỷ phân cũng làm tăng đáng kể sinh tổng hợp proteinza vi sinh vật.[1]
2.2.3.3. Nguồn các nguyên tố khoáng và các yếu tố (chất) kích thích sinh trưởng
Muối khoáng rất cần thiết cho hoạt động vi sinh vật.
Ion Mg2+ có tác dụng sinh tổng hợp và ổn định các enzyme có hoạt tính ở nhiệt độ cao.
Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đối với môi trường nuôi cấy. Nhiệt độ nuôi cấy thông thường từ 25 - 300C. Trị số pH ban đầu của môi trường (chủ yếu ở môi trường nước) cũng có thể gây ảnh hưởng nào đó đến sự tạo thành enzyme, nhưng khi đó cũng cần tính đến khả năng biến đổi nhanh chóng chỉ số đó bởi vi sinh vật.
Độ thông khí cũng rất cần thiết cho việc sinh tổng hợp enzyme. Vì vậy ở môi trường bề mặt người ta thường thêm chất xốp như trấu vào, còn ở môi trường bề sâu (môi trường dịch thể) , thì người ta thường lắc (nếu enzyme cần lắc thì việc này cực kỳ quan trọng). Độ ẩm cũng rất quan trọng (chỉ có tác dụng ở nuôi cấy bề mặt), phụ thuộc vào thành phần môi trường bề mặt.
Khi lựa chọn môi trường cần chú ý đến cả thành phần định tính và định lượng sao cho quá trình sinh tổng hợp enzyme mong muốn là cao nhất. Muốn vậy người ta có thể sử dụng một số phương pháp:
Phương pháp tối ưu hóa quy hoạch thực nghiệm toàn phần.
Phương pháp toán học mô hình hóa thực nghiêm.
2.2.4. Các loại môi trường nuôi cấy vi sinh vật tổng hợp enzyme.
Có thể chia làm 2 loại: môi trường tổng hợp và môi trường tự nhiên.
• Môi trường tổng hợp: là môi trường bao gồm các chất với liều lượng xác định (qua tìm hiểu, nghiên cứu), chẳng hạn nguồn cacbon có thể là tinh bột, xenluloza, đường, axit, rượu, nguồn nitơ vô cơ và hữu cơ. Loại môi trường này được sử dụng cho mục đích nghiên cứu.[1]
• Môi trường tự nhiên: thường dùng các loại phế liệu, nguyên liệu có chứa các nguồn cacbon, nitơ, khoáng, các yếu tố sinh tổng hợp trưởng. Mặt khác, các nguyên liệu này có sẵn, rẻ tiền nên được sử dụng rất nhiều trong công nghiệp sản xuất các chế phẩm enzyme từ vi sinh vật. Các nguyên liệu để chuẩn bị làm môi trường tự nhiên bao gồm: cám và bột hạt cốc, nước chiết ngô, dịch ép hoa quả, rau, khô dầu, bã rượu, rĩ đường, sản phẩm phân huỷ nấm, men bia, trấu, lõi ngô. Khi lựa chọn sử dụng môi trường cần chú ý đến các chất có tác dụng điều hoà sinh tổng hợp enzyme, đặc biệt các chất cảm ứng.[2]
Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đối với môi trường nuôi cấy. Nhiệt độ nuôi cấy thông thường từ 25 - 300C. Trị số pH ban đầu của môi trường (chủ yếu ở môi trường nước) cũng có thể gây ảnh hưởng nào đó đến sự tạo thành enzyme, nhưng khi đó cũng cần tính đến khả năng biến đổi nhanh chóng chỉ số đó bởi vi sinh vật.
2.2.5. Các phương pháp nuôi cấy vi sinh vật.
• Nuôi cấy bề mặt:
Phương pháp này rất thích hợp để nuôi cấy các loại nấm mốc do khả năng phát triển nhanh, mạnh, nên ít bị tạp nhiễm. Khi nuôi nấm mốc phát triển bao phủ bề mặt hạt chất dinh dưỡng rắn, các khuẩn ty cũng phát triển đâm sâu vào lòng môi trường đã được tiệt trùng, làm ẩm. Đối với một số mục đích đặc biệt, người ta nuôi vi sinh vật trực tiếp trên bề mặt hạt gạo (sản xuất tương), hạt đậu tương (đậu tương lên men- misô) đã được nấu chín trộn hạt cốc còn sống (làm men thuốc bắc, men dân tộc, làm tương).
Người ta thường dùng cám mì, cám gạo, ngô mảnh… có chất phụ gia là trấu. Cám, trấu, có bề mặt tiếp xúc lớn, mông, tạo được độ xốp nhiều, không có những chất gây ảnh hưởng xấu đến sự phát triển của nấm mốc. Tỉ lệ các chất phụ gia phải bảo đảm sao cho hàm lượng tinh bột trong khối nguyên liệu không được thấp hơn 20%, có thể bổ sung thêm nguồn nitơ vô cơ ((NH4)2SO4, (NH4)2CO), photpho, nitơ hữu cơ và các chất kích thích sinh trưởng như malt, nước chiết ngô, nước lọc bã rượu.
Quy trình công nghệ:
Nguyên liệu Trộn Làm ẩm Thanh trùng bằng nhiệt Lam nguội, tơi Gieo giống vsv Chuyển vào dụng cụ nuôi cấy Nuôi cấy, theo dõi, xử lý.
Ưu nhược điểm:
Nồng độ enzyme tạo thành cao hơn nhiều lần so với dịch nuôi cấy chìm sau khi đã tách tế bào vi sinh vật. Trong công nghiệp rượu muốn đường hoá 100kg tinh bột chỉ cần 5kg chế phẩm nấm mốc bề mặt nhưng phải cần đến 100lit nấm mốc chìm để lọc bã và tế bào vi sinh vật.
Chế phẩm dễ dàng sấy khô mà không làm giảm đáng kể hoạt tính enzyme, chế phẩm khô, dễ bảo quản, vận chuyển, nghiền nhỏ hoặc sử dụng trực tiếp nếu không cần khâu tách và làm sạch enzyme.
Tốn ít năng lượng, thiết bị, dụng cụ nuôi cấy đơn giản, có thể thực hiện qui mô gia đình, trang trại cũng như ở qui mô lớn đến 20T/ngày.
Nuôi cấy trong điều kiện vô trùng tuyệt đối và trong quá trình nuôi cấy nếu có nhiễm trùng phần nào, khu vực nào thì chỉ cần loại bỏ canh trường phần đó.
Tuy nhiên phương pháp bề mặt có năng suất thấp, khó cơ khí hoá, tự động hoá, cần diện tích nuôi lớn, chất lượng chế phẩm ở các mẻ không đồng đều.
• Nuôi cấy chìm
Vi sinh vật được nuôi cấy trong môi trường lỏng với cơ chất chủ yếu trong đa số trường hợp là tinh bột. Chỉ có một số ít giống vsv dùng nguồn cơ chất cacbon là đường glucoza, saccharoza. Thực tế, trong một số trường hợp đường hoá sơ bộ tinh bột trước khi thanh trùng. Khi đó đường maltoza được tạo thành là chất cảm ứng tốt, môi trường thường giảm độ nhớt nên dễ dàng cho quá trình khuấy trộn và sục khí.
Phương pháp nuôi cấy bề sâu đòi hỏi phải được vô trùng tuyệt đối ở các khâu vệ sinh tổng hợp, thanh trùng môi trường dinh dưỡng, thao tác nuôi cấy, không khí cung cấp cho quá trình nuôi cấy.
Các giai đoạn của quá trình nuôi cấy chìm 1 bước gồm: chuẩn bị môi trường nuôi cấy, nuôi cấy nấm men giống, nuôi cấy nấm mốc sản xuất.
Ưu nhược điểm
Phương pháp nuôi cấy hiện đại dễ cơ khí hoá, tự động hoá, năng suất cao, dễ tổ chức sản xuất.
Có thể nuôi cấy dễ dàng các chủng vi sinh vật đột biến có khả năng sinh tổng hợp enzyme cao và lựa chọn tối ưu thành phần môi trường, các điều kiện nuôi cấy, enzyme thu được tinh khiết hơn, đảm bao điều kiện vệ sinh, vô trùng.
Tuy nhiên do thu được canh trường và nồng độ enzyme thấp nên khi tách thu hồi enzyme sẽ có giá thành cao. Tốn điện năng cho khuấy trộn, nếu không bảo đảm vô trùng sẽ bị nhiễm hàng loạt, toàn bộ gây tổn thương lớn.
2.2.6. Tách và làm sạch chế phẩm enzyme.
Một điều cần nói thêm nữa là enzyme thường chứa ở các tế bào sinh vật gọi là các enzyme trong tế bào (intracellular), nhưng nó cũng có thể được các sinh vật tiết ra môi trường sống. Đó là các enzyme ngoài tế bào (extracellular). Enzyme vi sinh vật thường chiết là enzyme ngoại bào.[2]
. Các phân tử enzyme không có khả năng đi qua màng của tế bào và màng của các cấu tử của tế bào. Do đó để có thể chiết rút các enzyme nội bào, bước đầu tiên là phải phá vỡ cấu trúc của các tế bào có chứa enzyme và chuyển chúng vào dung dịch.
Có thể phá vỡ cấu trúc của các tế bào bằng các biện pháp cơ học như nghiền với bột thủy tinh hoặc cát thạch anh, làm đồng hóa bằng thiết bị đồng hóa (homogenizator).
Muốn tách được các enzyme trong các cấu tử của tế bào, người ta còn phải dùng các yếu tố vật lý và hóa học khác nhau như sóng siêu âm, dùng các dung môi hữu cơ như butanol, aceton, glycerin, ethyl acetate... và chất detergent. Các hóa chất có tác dụng tốt cho việc phá vỡ các cấu tử của tế bào vì trong các cơ quan này thường chứa mỡ.
Sau khi đã phá vỡ các cấu trúc của tế bào, enzyme được chiết bằng nước cất, bằng các dung dịch đệm thích hợp hoặc các dung dịch muối trung tính.
Có một số yếu tố ảnh hưởng đến quá trình chiết rút cần lưu ý. Trước hết đó là nhiệt độ. Để tránh mất hoạt tính hoặc thậm chí vô hoạt, cần chiết rút và tiến hành kết tủa enzyme ở nhiệt độ thấp (từ 3 đến 50C). Các thao tác phải nhanh. Một số chất điện ly làm tăng quá trình chiết rút enzyme như NaCl, ZnCl2, CaCl2. Tác dụng của chúng còn phụ thuộc vào phương pháp dùng khi chiết rút.
Để loại bỏ muối khoáng và các loại đường... là các tạp chất có phân tử lượng thấp, người ta thường dùng phương pháp thẩm tích (dialysis) đối nước hay đối các dung dịch đệm loãng hoặc bằng cách lọc qua gel sephadex.
Để loại bỏ các protein tạp (protein cấu trúc, protein trơ) và các chất có phân tử lượng cao khác người ta hay dùng kết hợp các phương pháp khác nhau: phương pháp biến tích chọn lọc nhờ tác dụng của nhiệt độ hoặc pH của môi trường, phương pháp kết tủa phân đoạn bằng muối trung tính hoặc các dung môi hữu cơ, các phương pháp sắc ký (sắc ký hấp phụ, sắc ký trao đổi ion), điện di, phương pháp lọc gel.
-Mục đích yêu cầu: Các chế phẩm enzyme được sử dụng ở các dạng khác nhau theo mức độ tinh khiết (hoạt độ riêng). Trong một số trường hợp, canh trường nuôi cấy vi sinh vật có chứa enzyme được sử dụng trực tiếp dưới dạng thô không cần tách tạp chất nếu chúng không gây ảnh hưởng đáng kể đến sản phẩm và quy trình công nghệ sau này (Ví dụ: sản xuất rượu, nước chấm thực vật, da). Cũng có khi người ta cần sử dụng chế phẩm enzyme tinh khiết trong công nghiệp dệt, công nghiệp mạch nha, y học, nghiên cứu khoa học.
Enzyme nói chung rất dễ bị giảm hoạt tính dưới tác dụng của các tác nhân bên ngoài do đó khi tách và tinh chế enzyme để tránh sự biến hình protein ảnh hưởng lớn đến hoạt tính enzyme cần tiến hành nhanh chóng ở nhiệt độ thấp, độ pH thích hợp không có mặt các chất gây biến hình enzyme.
2.2.6.1. Phương pháp kết tủa
Phương pháp kết tủa phân đoạn bằng (NH4)2 SO4 dựa trên cơ sở sự khác nhau về khả năng kết tủa của các protein enzyme ở một nồng độ muối (tính theo phần % nồng độ bão hòa) xác định được dùng phổ biến để loại bỏ bước đầu protein tạp của các dịch enzyme. Các loại muối có thể được dùng là (NH4)2 SO4, Na2 SO4, MgSO4 ... người ta đã nhận thấy muối (NH4)2 SO4 là tốt nhất vì nó không làm hại mà làm ổn định (làm bền) hầu hết các loại enzyme. Loại muối này lại rẻ và phổ biến. Độ hòa tan của nó lại rất lớn (bão hòa 767g/l ở 250C).
2.2.6.2. Phương pháp sắc ký
• Các kỹ thuật sắc ký cột
Dịch chiết enzyme đã được loại bỏ phần lớn các protein tạp nhưng vẫn chưa đảm bảo độ đồng nhất cần thiết. Do đó dịch chiết enzyme được tiếp tục làm sạch bằng phương pháp sắc ký cột.
-Phương pháp dùng chất rây phân tử (lọc gel - gel filtration)
Cơ sở của phương pháp lọc gel là dựa vào sự khác nhau về kích thước hình dạng và phân tử lượng của enzyme có trong hỗn hợp để tách chúng ra.
Để đảm bảo cho việc tách enzyme được tốt, chất rây phân tử phải là chất trơ, không phản ứng với protein enzyme. Chất này cũng không hòa tan và tương đối bền với các yếu tố về cơ học cũng như sinh học. Ngoài ra chất được sử dụng cho mục đích lọc phân tử phải là chất không có tính đàn hồi (không co) và phải là chất ưa nước (hydrophyl).
coarse), hạt trung bình (medium), hạt mịn (fine), hạt siêu mịn, rất mịn (superfine).
-Phương pháp sắc ký trao đổi ion
Phương pháp sắc ký trao đổi ion dựa vào sự khác nhau về điện tích tổng số của các protein enzyme. Hay nói cách khác, phương pháp này được dựa trên cơ sở của phản ứng trao đổi ion giữa protein được tan trong nước hoặc dung dịch đệm loãng và các tác nhân trao đổi ion. Tác nhân (hay nguyên liệu) trao đổi ion có thể là chất nhựa có tích nhóm sinh ion hoặc là chất ionit. Đây là những chất giá trơ, không tan trong nước, có bản chất là cellulose hoặc chất gel dextran có lưới phân nhánh (Sephadex, Molselect) hoặc là chất nhựa polystirol. Chất giá thể này thường kết hợp với các nhóm ion hóa. Các chất trao đổi ion có chất giá là cellulose, sephadex, molselect thông thường được dùng để tách protein enzyme, còn các chất trao đổi ion có chất giá là polystirol (ví dụ như Dowex, Amberlite) chỉ dùng để tách các peptid có trọng lượng phân tử nhỏ hơn.
Anionit DEAE - cellulose (diethylamino - ethyl - cellulose) là dẫn xuất este của cellulose.) C2H5
Đây là chất trao đổi anion
Nếu chất giá là sephadex thì chúng ta có chất trao đổi ion sephadex. Đó là các loại DEAE - sephadex và CM - sephadex. Ưu điểm của loại này là vừa tách được protein enzyme về kích thước và về điện tích tổng số của các protein enzyme. Trường hợp CM - sephadex trên chất giá sephadex có gắn nhóm COO-
Đây là chất trao đổi cation.
Ngoài ra có các phương pháp :
- Phương pháp dùng chất hấp phụ
- Phương pháp dùng chất hấp phụ đặc hiệu sinh học hay là phương pháp sắc ký ái lực (affinity chromatography)
2.2.6.3. Phương pháp tách hệ hai pha nước.[4]
Cơ sở kỹ thuật này dựa vào sự phân bố khác nhau của hỗn hợp trong dung dịch hai pha không hòa tan vào nhau. Các hệ hai pha đặc trưng bằng cách trộn các hệ dung môi vào nhau để tạo thành hai pha riêng biệt. Hệ dung môi được sử dụng trong phương pháp này có thể là polymer/polymer như: polyethylene glycol (PEG) và dextran hoặc polymer/muối như PEG và potassium phosphate, sodium sulphate, sodium phosphate,... Các protein và mảnh vỡ tế bào có khả năng hòa tan khác nhau giữa hai pha, vì vậy phương pháp này có thể được dùng cho cả hai trường hợp: phân tách protein khỏi mảnh vỡ tế bào và phân chia các enzyme trong suốt quá trình tinh sạch protein. Hệ hai pha nước được xem là phương pháp tốt cho việc phân tách và tinh sạch các hỗn hợp, vì phân tách chất lỏng có mật độ khác nhau dễ dàng hơn phân tách các chất rắn ra khỏi các chất lỏng. So với các phương pháp tinh sạch khác thì hệ hai pha nước có một số ưu điểm hơn như: có độ hòa tan trong nước của hai pha lớn (70-80%), đạt độ tinh sạch cao, hiệu suất cao, dễ dàng sử dụng ở quy mô lớn và đặc biệt polymer được tái sử dụng.
Sự phân tách đạt hiệu quả cao tùy thuộc vào các thông số như khối lượng phân tử và điện tích của đối tượng nghiên cứu, nồng độ và khối lượng phân tử của các polymer, nhiệt độ, pH, thời gian, lực ion của hỗn hợp và sự hiện diện của các loại muối đa hóa trị như phosphaste hoặc sulphate...
Hình 2.9. Phương pháp tách hệ hai pha nước
2.3. Enzyme cố định.
Enzyme cố định (hay enzyme không tan) là enzyme có sự tham gia hoạt động trong một không gian bị giới hạn. Sự giới hạn hoạt động vốn linh hoạt của enzyme bằng cách gắn nó vào một pha cách ly tách rời khỏi pha lỏng tự do và ở đó nó vẫn có khả năng tiếp xúc được với các phần tử cơ chất, effector hay inhibitor (chất ức chế). Pha gắn enzyme thường không tan trong nước nhưng cũng có thể là các polyme ưu nước
• Lợi ích của việc sử dụng enzyme cố định.
-Giảm giá thành do enzyme được sử dụng lặp lại nhiều lần với cùng một kiểu phản ứng xúc tác, chế phẩm bền hơn trong các điều kiện pH, nhiệt độ, áp suất thẩm thấu tối ưu, tốc độ phản ứng lớn, dễ tổ chức sản xuất ở mức độ tự động hóa cao.
-Chế tạo enzyme tương đối dễ, đầu tư xây dựng và sản xuất tương đối ít, sản phẩm phản ứng không hòa lẫn lộn với enzyme, có thể dễ dàng tổ chức sản xuất các sản phẩm lên men bằng enzyme ngoại bào như: rược etylic, axit hữu cơ, axitamin, vitamin.
• Một số phương pháp chủ yếu tạo enzyme cố định
-Microencapsulation (gói enzyme vào trong cực nhỏ)
Được nghiên cứu bởi Chang et al(1967-1968)
Cái màng polymer thẩm thấu dày 200A0 (xenluloza, polysacarit, phi tinh bột) tạo thành hạt đứng vững 10- 12M chứa cá phân tử enzyme bên trong. Lớp màng này cho phép cơ chất và sản phẩm phản ứng eyme được qua lại tự do nhưng các phân tử enzyme không thể qua lại được vì các phần tử quá lớn như : polysaccarit, protein cũng không thể qua lại màng được do đó không thể thực hiện phản ứng enzyme được.
Ngoài ra còn có các phương pháp:
-Liên kết enzyme vào chất mang không tan (silman và katchalski-1966)
-Định vị enzyme trong pha lỏng của hệ thống 2 pha (Reese and Mandels 1958)
-Giữ enzyme bằng màng siêu lọc.
• Các thiết bị sản xuất enzyme cố định
Figure 2.11. Sketch of the pilot-scale kinetic mixer
Figure 2.2 Photograph of kinetic mixer after installation at BNL
moisture contents but could not be remedied with the current mixer design.
collection vessel, and rectangular HEPA filter box are clearly discernable in the photograph.
Figure 2.12. Schematic of kinetic mixer off gas system.
Figure 2.13. Photograph of kinetic mixer off gas system.
Figure 2.14. Photograph of kinetic mixer with end flange removed for access to mixing blades.
Figure 2.15. Photograph of mixing blade sleeve.
Figure 2.16. Photograph of Plexiglass containment enclosure.
Figure 2.17. Photograph of enclosure during smoke bomb leak test.
CHƯƠNG III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Khả năng sinh tổng hợp enzyme Protease từ vi sinh vật
Kiểm tra sự tăng trưởng vi sinh vật: lấy ví dụ minh họa kiểm tra bằng hóa chất.
Bảng 3.1. Khả năng sinh tổng hợp protease của XKDNW10 theo thời gian ở 500C.[5]
Thời gian nuôi cấy Vòng phân giải
36 giờ
48 giờ
60 giờ
72 giờ
84 giờ
Từ đường kính vòng phân giải đồ thị về khả năng sinh enzyme protease của chủng XKDNW10 đã được xây dựng (hình 3.1.).
t(h) 24 36 48 60 72 84
D(mm) 0 9 15 22 29 29
Chú thích: t(h)- Thời gian nuôi cấy, d(mm)- Đường kính vòng thủy phân
3.2. Ứng dụng enzyme Protease vào trong công nghiệp.
Protease được sử dụng rộng rãi trong nhiều ngành công nghiệp như công nghiệp thực phẩm, công nghiệp nhẹ, công nghiệp dược phẩm và nông nghiệp…
Trong công nghiệp chế biến thịt, protease được dùng làm mềm thịt nhờ sự thủy phân một phần protein trong thịt, kết quả làm cho thịt có một độ mềm thích hợp và có vị tốt hơn. Protease được sử dụng để làm mềm thịt và tăng hương vị thịt. (ngâm thịt vào dinh dưỡng protease ở pH và nhiệt độ xác định- phương pháp này phổ biến và thuận lợi nhất; Tẩm hỗn hợp làm mềm thịt (enzyme, muối, bột ngọt). Tiêm dung dịch enzyme vào thịt; tiêm dung dịch enzyme vào con vật trước khi giết mổ). Sử dụng protease để sản xuất dịch đạm: từ Streptomyces fradiae tách được chế phẩm keratineza thuỷ phân được keratin rất có giá trị để sản xuất dịch đạm từ da, lông vũ. Nếu dùng axit để thuỷ phân sẽ mất đi hoàn toàn các axit amin chứa lưu huỳnh, nếu dùng kiềm để thuỷ phân sẽ bị raxemic hoá (chuyển dạng L sang D làm giảm giá trị sinh học của axit amin). Để thuỷ phân sâu sắc và triệt để protein (trong nghiên cứu, chế tạo dịch truyền đạm y tế) cần dùng các protease có tính đặc hiệu cao và tác dụng rộng, muốn vậy người ta thường dùng phối hợp cả 3 loại protease của 3 loài: vi khuẩn, nấm mốc, thực vật với tỷ lệ tổng cộng 1- 2% khối lượng protein cần thuỷ phân. Ưu điểm của việc thuỷ phân protease bởi enzyme là bảo toàn được vitamin của nguyên liệu, không tạo ra các sản phẩm phụ, không làm sẫm màu dịch thuỷ phân.
Trong chế biến thuỷ sản: Khi sản xuất nước mắm (và một số loài mắm) thường thời gian chế biến thường là dài nhất, hiệu suất thuỷ phân (độ đạm) lại phụ thuộc rất nhiều địa phương, phương pháp gài nén, nguyên liệu cá. Nên hiện nay quy trình sản xuất nước mắm ngắn ngày đã được hoàn thiện trong đó sử dụng chế phẩm enzyme thực vật (bromelain và papain) và vi sinh vật để rút ngắn thời gian làm và cải thiện hương vị của nước mắm. Tuy nhiên vẫn còn một số tồn tại cần phải hoàn thiện thêm về công nghệ.
Trong công nghiệp sữa, protease được dùng trong sản xuất phomat nhờ hoạt tính làm đông tụ sữa của chúng. Protease từ một số vi sinh vật như A. candidus, P. roquerti, B. mesentericus,… được dùng trong sản xuất pho mát [1]. Trong công nghiệp sản xuất bánh mì, bánh quy... protease làm giảm thời gian trộn, tăng độ dẻo và làm nhuyễn bột, tạo độ xốp và nở tốt hơn.
Trong sản xuất bia, chế phẩm protease có ý nghĩa quan trọng trong việc làm tăng độ bền của bia và rút ngắn thời gian lọc. Protease của A. oryzae được dùng để thủy phân protein trong hạt ngũ cốc, tạo điều kiện xử lý bia tốt hơn [6].
Trong công nghiệp da, protease được sử dụng làm mềm da nhờ sự thủy phân một phần protein của da, chủ yếu là collagen, thành phần chính làm cho da bị cứng. Kết quả đã loại bỏ khỏi da các chất nhớt và làm cho da có độ mềm dẻo nhất định, tính chất đó được hoàn thiện hơn sau khi thuộc da. Trước đây, để làm mềm da người ta dùng protease được phân lập từ cơ quan tiêu hóa của động vật. Hiện nay, việc đưa các protease tách từ vi khuẩn (B. mesentericus, B. subtilis), nấm mốc (A. oryzae, A. flavus) và xạ khuẩn (S. fradiae, S. griseus, S. rimosus...) vào công nghiệp thuộc da đã đem lại nhiều kết quả và dần dần chiếm một vị trí quan trọng [2] .
Trong công nghiêp dệt: Proteinase vi sinh vật được sử dụng để làm sạch tơ tằm, tẩy tơ nhân tạo (các sợi nhân tạo được bằng các dung dịch cazein, gelatin) để sợi được được bóng, dể nhuộm. Protease có tác dụng thủy phân lớp protein serisin đã làm dính bết các sợi tơ tự nhiên, làm bong và tách rời các loại tơ tằm, do đó làm giảm lượng hoá chất để tẩy trắng.
Ngoài ra, protease còn được ứng dụng rộng rãi trong rất nhiều ngành khác như:
- Điều chế dịch đạm thủy phân dùng làm chất dinh dưỡng, chất tăng vị trong thực phẩm và sản xuất một số thức ăn kiêng.
- Protease của nấm mốc và vi khuẩn phối hợp với amylase tạo thành hỗn hợp enzyme dùng làm thức ăn gia súc có độ tiêu hóa cao, có ý nghĩa lớn trong chăn nuôi gia súc và gia cầm.
- Điều chế môi trường dinh dưỡng của vi sinh vật để sản xuất vaccine, kháng sinh,…
- Sản xuất keo động vật, chất giặt tổng hợp để giặt tẩy các chất bẩn protein, sản xuất mỹ phẩm,…
KẾT LUẬN
Trong quá trình thực hiện bài semina: “Công nghệ sản xuất enzyme Protease từ vi sinh vật ứng dụng trong công nghiệp” chúng tôi đã đạt được các kết quả sau:
-Hiểu ý nghĩa,vai trò của VSV trong sản xuất và đời sống xã hội, đặc biệt trong tương lai khi công nghệ sinh học phát triển.
-Nắm được đặc tính sinh lý của vi sinh vật.
-Biết được một số nhóm vi sinh vật chính có thể sản xuất enzyme Protease ứng dụng trong công nghiệp.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
TIẾNG VIỆT
1. Trần Xuân Ngạch (2007), Công nghệ enzym, Trường Đại Học Bách Khoa Đà Nẵng.
2. Nguyễn Trọng Cẩn, Nguyễn Thị Hiền, Đỗ Thị Giang, Trần Thị Luyến (1998), Công nghệ enzyme, Nhà xuất bản nông nghiệp thành phố Hồ Chí Minh.
3. Lương Đức Phẩm (2004), Công nghệ vi sinh vật, Nhà xuất bản Nông nghiệp, Hà Nội.
4. Lưu Thị Nguyệt Minh(2007), “Phân tách Protease của Bacillus Subtilis bằng hệ hai pha Polyethylene glycol/ Potassium phosphate”, Đồ án tốt nghiệp.
5. Phạm Trần Vĩnh Phú (2007), “ Nghiên cứu một số chủng vi sinh vật ưa nhiệt từ quá trình phân hủy tự nhiên rác thải sinh hoạt của thành phố Đà Nẵng”,Đồ án tốt nghiệp.
6. Lê Xuân Phương (2001), Vi sinh vật công nghiệp, NXB Xây dựng, Hà Nội.
TÀI LIỆU MẠNG
1.
2.
4.
5.
_________________
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
Sửa lần cuối bởi
vào ngày Chủ nhật 29/11/09 22:45 với 1 lần sửa trong tổng số.
|
|Dragon_Fr
|
|Tiêu đề bài viết:
|Giáo sư|
|
|![]()
|
|![]()
|
|
Cop bài vào diễn đàn thì phải làm cho đoàn hoàn chứ, chả có cái hinh nào cả chỉ có chú thích thôi.
_________________
Sinh viên khoa lâm nghiệp
Lớp LN 41B
|
|cuixalui
|
|Tiêu đề bài viết:
|Kỹ sư|
|
|![]()
|
|![]()
|
|
đâu nó không hình mà vì tài liệu như thế mà
_________________
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
|
|![]()
|
|
Thời gian được tính theo giờ UTC + 8:45 Giờ
|
|
## Ai đang trực tuyến?
|
|
Đang xem chuyên mục này:
|Bạn
|không thể tạo chủ đề mới trong chuyên mục này.
Bạn
không thể trả lời bài viết trong chuyên mục này.
Bạn
không thể sửa những bài viết của mình trong chuyên mục này.
Bạn
không thể xoá những bài viết của mình trong chuyên mục này.
Bạn
không thể gửi tập tin đính kèm trong chuyên mục này.

Set-Cookie: phpbb3_myl7t_sid=63ecd6d9a62ea12cad2fa3d4ff128a6f; expires=Thu, 24-Apr-2014 14:37:31 GMT; path=/; domain=.huaf.edu.vn; HttpOnly

Cache-Control: private, no-cache="set-cookie"


markdown:
### Các Khóa Đào Tạo
**Địa điểm học** [Chi Nhánh Đống Đa](bando#dongda) [Chi Nhánh Cầu Giấy](bando#caugiay) [Chi Nhánh Hoàng Mai](bando#hoangmai)
### Chủ đề tìm nhiều
[thực hành kế toán](http://ketoanducminh.com/front/search/thực+hành+kế+toán/1), [kế toán thuế](http://ketoanducminh.com/front/search/kế+toán+thuế/1), [nghề kế toán](http://ketoanducminh.com/front/search/nghề+kế+toán/1), [hoc ke toan](http://ketoanducminh.com/front/search/hoc+ke+toan/1), [báo cáo tài chính](http://ketoanducminh.com/front/search/báo+cáo+tài+chính/1), [tin học văn phòng](http://ketoanducminh.com/front/search/tin+học+văn+phòng/1), [dạy thực hành kế toán](http://ketoanducminh.com/front/search/dạy+thực+hành+kế+toán/1), [dạy thực hành kế toán](http://ketoanducminh.com/front/search/+dạy+thực+hành+kế+toán/1), [đào tạo kế toán](http://ketoanducminh.com/front/search/đào+tạo+kế+toán/1), [hoc ke toan thuc hanh](http://ketoanducminh.com/front/search/hoc+ke+toan+thuc+hanh/1), [,](http://ketoanducminh.com/front/search/++/1) [kế toán tổng hợp](http://ketoanducminh.com/front/search/kế+toán+tổng+hợp/1), [kế khai thuế](http://ketoanducminh.com/front/search/kế+khai+thuế/1), [kế toán thực hành](http://ketoanducminh.com/front/search/kế+toán+thực+hành/1), [kiểm tra thuế](http://ketoanducminh.com/front/search/kiểm+tra+thuế/1), [quyết toán thuế](http://ketoanducminh.com/front/search/quyết+toán+thuế+/1), [kế toán xây lắp](http://ketoanducminh.com/front/search/kế+toán+xây+lắp/1), [học kế toán thực tế](http://ketoanducminh.com/front/search/học+kế+toán+thực+tế/1), [chứng từ thực tế](http://ketoanducminh.com/front/search/chứng+từ+thực+tế/1), [báo cáo thực tập.](http://ketoanducminh.com/front/search/báo+cáo+thực+tập./1), [kế toán](http://ketoanducminh.com/front/search/kế+toán+/1), [kế toán thực tế](http://ketoanducminh.com/front/search/kế+toán+thực+tế/1), [phần mềm kế toán](http://ketoanducminh.com/front/search/phần+mềm+kế+toán/1), [tim lop ke toan tong hop](http://ketoanducminh.com/front/search/tim+lop+ke+toan+tong+hop/1), [tim lop hoc ke toan thuc te](http://ketoanducminh.com/front/search/tim+lop+hoc+ke+toan+thuc+te/1), [công tác kế toán](http://ketoanducminh.com/front/search/công+tác+kế+toán/1), [nhân viên kế toán](http://ketoanducminh.com/front/search/nhân+viên+kế+toán/1), [khóa học kế toán](http://ketoanducminh.com/front/search/khóa+học+kế+toán/1), [dạy kế toán thực hành](http://ketoanducminh.com/front/search/dạy+kế+toán+thực+hành/1), [cơ quan thuế](http://ketoanducminh.com/front/search/cơ+quan+thuế/1),
Viện đào tạo kế toán Đức Minh chuyên dạy thực hành kế toán trên chứng từ thực tế, là một trong nhưng trung tâm có tiếng hàng đầu tại Hà Nội, cùng với sự phát triển nhanh chóng của công ty, hiện tại đã mở rộng thêm nhiều địa điểm để thuận tiện cho học viên đến đăng ký và học. Đức Minh luôn cam kết dạy thành nghề mới kêt thúc.
**Thời hạn khuyến mại còn**
Trong xu thế không ngừng phát triển và kết nối như hiện nay, CNTT đã xuất hiện ở mọi lĩnh vực, mọi ngành nghề trong cuộc sống. và điều đó dẫn đến tin học văn phòng là một kỹ năng mềm cần thiết không thể thiếu đối với mỗi một nhân viên văn phòng. Trong yêu cầu của bất kỳ nhà tuyển dụng nào, họ cũng đều đặt cao khả năng sử dụng thành thạo tin học văn phòng của mỗi ứng viên gồm có: Word, Excel, Powerpoint,…Chính vì vậy, để chuẩn bị hành trang và kiến thức giúp mình ghi điểm tốt trong công việc, cần thiết bạn nên trang bị cho mình một nền tảng tin học văn phòng chắc chắn. Trung tâm Tin học và Kế toán Đức Minh không ngừng hỗ trợ các bạn hoàn thiện, đó là mong muốn của chúng tôi.
Viện Đào tạo kế toán Đức Minh hỗ trợ tuyển dụng kế toán cho các đối tác công ty trên địa bàn Hà Nội và các tỉnh lân cận. Với kinh nghiệm và phương thức đã dạy là thành nghề, Chúng tôi tự hào đơn vị hàng đầu cung cấp nhân sự về kế toán cho các doanh nghiệp.
Việc kiểm tra chứng từ sổ sách kế toán cần thiết thực hiện trên Nhật ký chung, bảng cân đối kế toán và các khoản mục như đầu ra đầu vào, thuế...
Địa điểm làm việc: Trụ sở chính - Phường Phúc Thắng, Thị xã Phúc Yên, Tỉnh Vĩnh Phúc HẠN NỘP HỒ SƠ: Đến hết ngày 30/04/2014 Công ty có xe đưa đón nhân viên từ nội thành Hà Nội tới trụ sở chính của công ty.
Với 11 tỷ USD kiều hối trong năm 2013, Việt Nam lọt vào top 10 quốc gia thu hút kiều hối lớn nhất toàn cầu, theo công bố của Ngân hàng Thế giới (WB).
Chúa cho người đàn ông sống 20 năm làm kiếp con người. Kế đó, anh ta lấy vợ và sống 20 năm kiếp con lừa, làm việc quần quật với những gánh nặng trên lưng.
[Đăng ký học thử miễn phí](dang-ky-hoc-thu-ke-toan-free) **Tham khảo giá khóa học đang áp dụng tại Đức Minh** [Bảng giá khóa học](./khoa-hoc/72/Bang-gia-khoa-hoc)
### Hỗ trợ trực tuyến
[
04.668.36.337
Ms Châm:](ymsgr:sendIM?ketoanducminh01) [
0972.711.886
Ms Hoa:](ymsgr:sendIM?ketoanducminh) [
0948.854.888
Mr Dũng:](ymsgr:sendIM?daotaoducminh)

WARC-Type: response

Content-Type: application/http; msgtype=response

Server: Apache/2.2.3 (CentOS)

Cache-Control: no-store, no-cache, must-revalidate, post-check=0, pre-check=0

Pragma: no-cache

Vary: Accept-Encoding

Content-Encoding: gzip

Connection: close

Content-Type: text/html; charset=UTF-8


markdown:
# GDP năm 2010 của Việt Nam vượt 100 tỷ USD
>
[CPI năm 2010 là 11,75%](/tin-tuc/vi-mo/lam-phat-nam-2010-la-1175-2709689.html)
Tổng cục Thống kê vừa công bố số liệu chính thức về tăng trưởng kinh tế của Việt Nam trong năm 2010. Theo đó, tổng sản phẩm quốc nội (GDP), tính theo giá thực tế, đạt 1,98 triệu tỷ đồng. Con số này tương đương khoảng 104,6 tỷ USD (tính theo tỷ giá liên ngân hàng ngày 28/12), nhiều hơn so với năm 2009 khoảng 13 tỷ USD.
![]()
|
|
Mục tiêu tăng trưởng tiếp tục được ưu tiên hơn trong năm 2010. Ảnh:
Nếu so sánh theo kỳ gốc (năm 1994), tốc độ tăng trưởng GDP của Việt Nam trong năm nay đạt khoảng 6,78% so với năm 2009. Con số này cao hơn gần 0,3% so với kế hoạch được Quốc hội phê duyệt đầu năm. Tốc độ tăng trưởng cũng tăng dần đều theo các quý và cao nhất vào quý IV (khoảng 7,3%). Về cơ cấu ngành, khu vực công nghiệp và xây dựng tăng mạnh nhất (7,7%), dịch vụ tăng 7,5% trong khi nông nghiệp chỉ tăng khoảng 2,8%.
Để đạt được mức tăng trưởng nói trên, tổng vốn đầu tư từ ngân sách Nhà nước trong năm 2010 đạt khoảng 140.000 tỷ đồng, giảm khoảng 8% về giá trị tuyệt đối so với năm 2009. Tuy nhiên, con số này vẫn cao hơn khoảng 10% so với kế hoạch đề ra hồi đầu năm.
Về đầu tư trực tiếp nước ngoài, tính đến 21/12 năm nay, cả nước thu hút được 969 dự án với tổng vốn FDI đăng ký là 17,23 tỷ USD. Tuy chỉ có 8 dự án nhưng Quảng Nam lại là địa phương thu hút FDI mạnh nhất cả nước với lượng vốn gần 4,2 tỷ USD, gấp gần 2 lần hai địa phương tiếp theo là Bà Rịa - Vũng Tàu và Quảng Ninh.
**Nhật Minh**
-
[5 năm dư chấn khủng hoảng tài chính thế giới tại Việt Nam](http://kinhdoanh.vnexpress.net/photo/vi-mo/5-nam-du-chan-khung-hoang-tai-chinh-the-gioi-tai-viet-nam-2877946.html)
-
[Cả nước xuất siêu 600 triệu USD trong tháng 8](http://kinhdoanh.vnexpress.net/tin-tuc/vi-mo/ca-nuoc-xuat-sieu-600-trieu-usd-trong-thang-8-2880452.html)

WARC-Truncated: length

Content-Type: text/html

Set-Cookie: device_env=4; expires=Thu, 24-Apr-2014 19:32:07 GMT; path=/; domain=vnexpress.net


markdown:
Mua rẻ
SohaGame
SoLo
Soha News
Copyright © 2008-2010– Công ty cổ phần truyền thông Việt Nam – VC CorpHotline: (84)-4-39743410 (ext 669)Tầng 16,17,18 tòa nhà VTC Online - 18 Tam Trinh, Quận Hai Bà Trưng, Hà NộiGiấy xác nhận cung cấp dịch vụ MXH trực tuyến số 19/GXN-TTĐT Cục QLPT, TH - TTĐT cấp ngày 19/11/2010

Server: Apache/2.2.15 (CentOS)


markdown:
# Duc tin hanh dong-
[Y Ngang - A Hăi](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Y+Ngang+-+A+H%C4%83i)
Sáng tác:
[Minh Sơn](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Minh+S%C6%A1n&t=composer) | | Lượt nghe:
### Hiện chưa có lời bài hát.
Bài hát
[Duc tin hanh dong](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Duc+tin+hanh+dong) do nhạc sĩ [Minh Son](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Minh+Son&t=composer) sáng tác, trình bày bởi ca sĩ [Y Ngang - A Hai](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Y+Ngang+-+A+Hai&t=artist) thuộc thể loại [The loai khac]
Bạn có thể cài đặt nhạc chờ (mạng mobifone, vinaphone, viettel), tải nhạc chuông, set nhạc nền Zing Me ca khúc
[Duc tin hanh dong](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Duc+tin+hanh+dong) - [Y Ngang - A Hai](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Y+Ngang+-+A+Hai&t=artist) ngay trên Zing Mp3. Nâng cấp tài khoản lên Zing VIP để tải nhạc chất lượng cao, lossless.
Bình luận
Chỉ chấp nhận bình luận bằng tiếng Việt có dấu, những bình luận sai
[qui định](http://mp3.zing.vn/huong-dan/Cong-dong/25.html) sẽ bị xóa.
Bình luận Nhấn Shift + Enter để xuống dòng. Bình luận phải dài hơn 50 ký tự. 0 ký tự

Content-Type: text/html; charset=utf-8

X-Cache: MISS from Cache-MP3-13


markdown:
# Kobato- những viên kẹo hạnh phúc-
[Thùy Tiên](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Th%C3%B9y+Ti%C3%AAn)
Sáng tác: Đang cập nhật | Album:
[Kobato- những viên kẹo hạnh phúc OST](/tim-kiem/playlist.html?q=Kobato-+nh%E1%BB%AFng+vi%C3%AAn+k%E1%BA%B9o+h%E1%BA%A1nh+ph%C3%BAc+OST) | Thể loại: | Lượt nghe:
**Lời bài hát Kobato- những viên kẹo hạnh phúc**
Xuân về tới ngàn hoa ngát hương,
Hè sang cho nắng buôn bao la trời cao,
Thu làn gió nhẹ vương tóc mây,
Rồi đông sang tuyết rồi nhớ nhung tháng ngày.
Này/ cơn mưa/ nhẹ rơi/ bên hiên
Mát trong ban mai tôi ngồi nghe tiếng mưa
Trăng vàng thắm nhẹ nâng tiếng ca lời ca như lướt bay xa nơi chân trời.
Lòng tràn ước ao
Cho ngày nắng buông
Tiếng vang lòng rắt lối đưa ta về cùng ước mơ là nụ cười nơi khóe môi
Lời ca tôi cất lên
Lướt bay về /chót xa cùng/ cơn gió.
Dù đời phía sau, vui buồn khổ đau
Vẫn tin và phía trước nơi ươm bao niềm ước mơ,
Niềm tin này còn sáng soi,
Bàn tay tôi chẳng buông,
Ước mơ này lướt xa cùng cơn gió.
Bài hát
[Kobato- nhung vien keo hanh phuc](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Kobato-+nhung+vien+keo+hanh+phuc) do nhạc sĩ [Đang cập nhật](/tim-kiem/bai-hat.html?q=%C4%90ang+c%E1%BA%ADp+nh%E1%BA%ADt&t=composer) sáng tác, trình bày bởi ca sĩ [Thuy Tien](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Thuy+Tien&t=artist) thuộc thể loại
Bạn có thể cài đặt nhạc chờ (mạng mobifone, vinaphone, viettel), tải nhạc chuông, set nhạc nền Zing Me ca khúc
[Kobato- nhung vien keo hanh phuc](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Kobato-+nhung+vien+keo+hanh+phuc) - [Thuy Tien](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Thuy+Tien&t=artist) ngay trên Zing Mp3. Nâng cấp tài khoản lên Zing VIP để tải nhạc chất lượng cao, lossless.
[Xem toàn bộ]Đóng góp lời bài hát chính xác hơn [tại đây].
Bình luận
Chỉ chấp nhận bình luận bằng tiếng Việt có dấu, những bình luận sai
[qui định](http://mp3.zing.vn/huong-dan/Cong-dong/25.html) sẽ bị xóa.
Bình luận Nhấn Shift + Enter để xuống dòng. Bình luận phải dài hơn 50 ký tự. 0 ký tự

X-Cache: MISS from Cache-MP3-150


markdown:
# Liên Khúc Vọng Kim Lang-
[Kiều Oanh & Vũ Hà](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Ki%E1%BB%81u+Oanh+%26+V%C5%A9+H%C3%A0)
Sáng tác:
[Đang cập nhập](/tim-kiem/bai-hat.html?q=%C4%90ang+c%E1%BA%ADp+nh%E1%BA%ADp&t=composer) | Album: [Chưa biết](/tim-kiem/playlist.html?q=Ch%C6%B0a+bi%E1%BA%BFt) | Thể loại: [Cải Lương](/the-loai-bai-hat/Cai-Luong/IWZ9Z0C6.html), [Việt Nam](/the-loai-bai-hat/Viet-Nam/IWZ9Z08I.html) | Lượt nghe:
**Lời bài hát Liên Khúc Vọng Kim Lang**
Ôi! Chứa chan tình quê, trong tiếng ca câu hò.
Xa cách nơi phương trời, lòng em...vẫn yêu thương.
Vẫn luôn.. ước mơ quay về,
Tìm nụ cười thắm trên vành môi...
Trên dòng sông dài..xuôi chèo lơ lững,
Đẩy đưa lục bình, về đây ngắm quê ta.
Nắng mưa đã qua bao ngày,
Mà vẫn còn sắc son thủy chung.
Nhắn ai... có đi nơi nào.
Đừng quên rằng quê hương chờ mong...
(Đoản Khúc Lam Giang)
Nhịp... cầu nào đong đưa, trơn ướt cơn mưa rào cuối thu.
Là bao...nắng mưa giãi dầu,
Bao nhọc nhằn...cho đồng xanh lúa.
Niềm vui đầy trong sắc xuân,
Nghe lá hoa tưng bừng reo ca.
Lễ tơ hồng, cau trầu sánh đôi cùng nhau,
Đón em về...bên đời với bao tình yêu.
Đường...mòn làng... đông vui,
Trai gái...hân hoan...Tay nắm ...tay thẹn thùng, mình nhìn nhau
Nghe thiết tha trào dâng.
Thầm ước...ngày mai...Chung sức mình dựng xây mái nhà,
Vang tiếng cười..tình thương ngút ngàn...
(Phi Vân Điệp Khúc)
Hãy... để cho cuộc đời, thêm hồng tươi.
Thắm đôi môi cười, em và anh...
Hiến dâng cho đời, tình ca... chan hòa ý thơ.
Bao niềm vui...bay theo cùng ước mơ.
Có...biết bao tấm lòng, chung bàn tay.
Góp công xây đời, ngày mai...sáng tươi huy hoàng,
trời quê...yên bình ấm no.
Tình quê...thắm trong lòng chúng ta...
Bài hát
[Lien Khuc Vong Kim Lang](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Lien+Khuc+Vong+Kim+Lang) do nhạc sĩ [Dang cap nhap](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Dang+cap+nhap&t=composer) sáng tác, trình bày bởi ca sĩ [Kieu Oanh & Vu Ha](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Kieu+Oanh+%26+Vu+Ha&t=artist) thuộc thể loại [Cai Luong](/the-loai-bai-hat/Cai-Luong/IWZ9Z0C6.html), [Viet Nam](/the-loai-bai-hat/Viet-Nam/IWZ9Z08I.html)
Bạn có thể cài đặt nhạc chờ (mạng mobifone, vinaphone, viettel), tải nhạc chuông, set nhạc nền Zing Me ca khúc
[Lien Khuc Vong Kim Lang](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Lien+Khuc+Vong+Kim+Lang) - [Kieu Oanh & Vu Ha](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Kieu+Oanh+%26+Vu+Ha&t=artist) ngay trên Zing Mp3. Nâng cấp tài khoản lên Zing VIP để tải nhạc chất lượng cao, lossless.
[Xem toàn bộ]Đóng góp lời bài hát chính xác hơn [tại đây].
Bình luận
Chỉ chấp nhận bình luận bằng tiếng Việt có dấu, những bình luận sai
[qui định](http://mp3.zing.vn/huong-dan/Cong-dong/25.html) sẽ bị xóa.
Bình luận Nhấn Shift + Enter để xuống dòng. Bình luận phải dài hơn 50 ký tự. 0 ký tự


markdown:
# Quảng Bình Trong Câu Hát-
[dang cap nhap](/tim-kiem/bai-hat.html?q=dang+cap+nhap)
Sáng tác: Đang cập nhật | Album:
[Quảng Bình Trong Câu Hát](/tim-kiem/playlist.html?q=Qu%E1%BA%A3ng+B%C3%ACnh+Trong+C%C3%A2u+H%C3%A1t) | Thể loại: [Nhạc Trẻ](/the-loai-bai-hat/Nhac-Tre/IWZ9Z088.html) | Lượt nghe:
**Lời bài hát Quảng Bình Trong Câu Hát**
Ra Bắc vào Nam có nơi đâu ta yêu ta quý. Nơi đây quê mẹ yêu thương, chắt chiu năm nắng mười sương, cho quê ta đẹp mãi câu hò.
Quảng Bình ơi, nước Kiến Giang không bao giờ cạn, sóng vẫn reo Nhật Lệ Bảo Ninh vang câu hò mẹ Suốt. Bến Sông Gianh còn đó, thành Đồng Hới còn đây, một thời đã qua, một thời còn lại, trên quê hương lừng lẫy chiến công những tháng năm đi vào nỗi nhớ. Câu ca xưa còn vọng mãi đất này.
Quảng Bình ơi, tiếng hát ai vui như ngày hội, có phải em cô gái Đại Phong đi trên đồng lúa mới. Bến Phong Nha gió hát, tạc một thuở hồng hoang, một miền nước non, một thời huyền thoại, cho câu ca về thành phố mới để tháng năm hoa hồng thơm ngát. Trên quê hương thắm nghĩa thắm tình.
Quảng Bình ơi!
*huyenhuyenva n
Bài hát
[Quang Binh Trong Cau Hat](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Quang+Binh+Trong+Cau+Hat) do nhạc sĩ [Đang cập nhật](/tim-kiem/bai-hat.html?q=%C4%90ang+c%E1%BA%ADp+nh%E1%BA%ADt&t=composer) sáng tác, trình bày bởi ca sĩ [dang cap nhap](/tim-kiem/bai-hat.html?q=dang+cap+nhap&t=artist) thuộc thể loại [Nhac Tre](/the-loai-bai-hat/Nhac-Tre/IWZ9Z088.html)
Bạn có thể cài đặt nhạc chờ (mạng mobifone, vinaphone, viettel), tải nhạc chuông, set nhạc nền Zing Me ca khúc
[Quang Binh Trong Cau Hat](/tim-kiem/bai-hat.html?q=Quang+Binh+Trong+Cau+Hat) - [dang cap nhap](/tim-kiem/bai-hat.html?q=dang+cap+nhap&t=artist) ngay trên Zing Mp3. Nâng cấp tài khoản lên Zing VIP để tải nhạc chất lượng cao, lossless.
[Xem toàn bộ]Đóng góp lời bài hát chính xác hơn [tại đây].
Bình luận
Chỉ chấp nhận bình luận bằng tiếng Việt có dấu, những bình luận sai
[qui định](http://mp3.zing.vn/huong-dan/Cong-dong/25.html) sẽ bị xóa.
Bình luận Nhấn Shift + Enter để xuống dòng. Bình luận phải dài hơn 50 ký tự. 0 ký tự


markdown:
|
|
* CHUYÊN THANH LÝ TIỆM NÉT - PHÒNG GAME - CTY - TRƯỜNG HỌC ...
* THU MUA MÁY TÍNH - MÁY IN - MÁY FAX - PHOTO - SCAN ...
* MUA LAPTOP CŨ - LAPTOP MỚI - LAPTOP HƯ HỎNG ĐÃ QUA SỬ DỤNG.
|
|
|
|
* CHUYÊN THANH LÝ TIỆM NÉT - PHÒNG GAME - CTY - TRƯỜNG HỌC ...
* THU MUA MÁY TÍNH - MÁY IN - MÁY FAX - PHOTO - SCAN ...
* MUA LAPTOP CŨ - LAPTOP MỚI - LAPTOP HƯ HỎNG ĐÃ QUA SỬ DỤNG.
|
|
|
|
|
|

Server: Apache/2.2.26 (CentOS)


markdown: ï»؟ Anh Sل»£ (Clip) - Cao Thأ،i Sئ،n | Nghe, tل؛£i, lل»i bأ i hأ،t | 21572 Bأ i Hأ،t Ca Sل»¹ Album TRANG CHỦ NHل؛ C Mل»ڑI VIDEO CLIP TOP 20 ALBUM MỚI Anh So (Clip) - Cao Thai Son THأ€NH VIأٹN THỂ LOẠI Nhل؛،c Viل»‡t Nam Nhل؛،c Mل»›i Rap Viل»‡t Viل»‡t Remix Nhل؛،c Hل؛£i Ngoل؛،i Trل»¯ Tأ¬nh - Dأ¢n Ca Nhل؛،c Quل»‘c Tل؛؟ Chأ¢u أپ أ‚u, Mل»¹ DJ - Dance NonStop Video Clip Clip Viل»‡t Nam Clip Quل»‘c Tل؛؟ Clip Tل»•ng Hل»£p Thل»ƒ Loل؛،i Khأ،c Nhل؛،c Phim OST Nhل؛،c Chل؛؟ Nhل؛،c Game Nhل؛،c Playback Nhل؛،c Chuأ´ng Phim Online PT Production Trang Chل»§ > Clip Viل»‡t Nam > Cao Thأ،i Sئ،n Anh Sل»£ (Clip) - Cao Thأ،i Sئ،n Thل»ƒ loل؛،i : Clip Viل»‡t Nam Lئ°ل»£t nghe : 8440[+] -> Download phل؛§n mل»پm ؤ‘ل»ƒ nghe nhل؛،c nhanh hئ،n trأھn ؤ‘iل»‡n thoل؛،i <- Link Bài Hát: Code Blog: Code Forum: Lل»i bأ i hأ،t Anh Sل»£ (Clip) Hiل»‡n chئ°a cأ³ lل»i bأ i hأ،t nأ o cho Anh Sل»£ (Clip) - Cao Thأ،i Sئ،n .Sل؛½ rل؛¥t vui nل؛؟u bل؛،n ؤ‘أ³ng lل»i bأ i hأ،t cho ca khأ؛c nأ y. Vui lòng gửi lời bài hát về email: admin@nhacpro.info Cùng Thể Loại Clip Viل»‡t Nam | Cùng Ca Sỹ Cao Thأ،i Sئ،n Liên Hệ Quảng Cáo Tại Đây Powered by hMedia 4.0 . Author by La Marguerites Ca sĩ muốn liên hệ với NhacPro vui lòng gọi: 0902551442 nhac hay, nghe nhac mp3, clip nhac, video clip, Dien Dan Xuat Nhap Khau Viet Nam, Dien Dan Ca Phe Viet, thoi trang cong so, tin tuc 18+, tin showbiz Nhạc Mới | Album Mới | Video Clip | Bảng Xếp Hạng | Liên Hệ BQT

Server: Apache

Vary: Accept-Encoding,User-Agent


markdown:
Cho khoảng 40 bánh
Phần I/
Bột mì : 500g (2 cups bột đầy)
Đường : 250g (1 cup đường)
Muối: 1muỗng café
Đậu phộng đã rang chín xay : 200g (1cup)
Thuốc muối ( baking soda ) : 1muỗng café
Phần II/
Dầu ăn : 1,5 Cup ( Nhớ dùng dầu Arachid nha chị , nó thơm ngon hơn)
Khay nướng bánh lót giấy sẵn.
Nướng lò nhiệt độ 360 °F ~180°C
Phần II/
Dầu ăn : 1,5 Cup ( Nhớ dùng dầu Arachid nha chị , nó thơm ngon hơn)
Khay nướng bánh lót giấy sẵn.
Nướng lò nhiệt độ 360 °F ~180°C
Cách Làm:
Tất cả của phần I/ trộn đều.
Cho II/ vào từ từ trộn đều ...rồi vắt viên bằng viên nem nướng...dùng nắp chai coca hay gì khác ấn xuống viên bánh cho nó hơi dẹp dẹp xuống rồi ấn một viên đậu phộng nguyên vào giữa cho nó đẹp nhất là khi có tiệc...
Bánh nguội...rồi cất vào hộp đậy kín cho vào tủ lạnh ăn dần...
Source: AMTHUCVIETNAM, Phuong Nguyen

Server: Apache/2.2.15 (Red Hat)


markdown:
Bác sỹ giúp em với, em đi siêu âm xem con iu đã vào tử cung chưa thì bác sỹ cho đi siêu âm đầu dò, như vậy có ảnh hưởng gì đến thai nhi không ah, vì có chị ở chỗ làm em bảo cấm không đc siêu âm đầu dò, rất không tốt cho thai nhi, huhu, nhưng bác sỹ bảo phải siêu âm đầu dò nên em vẫn phải làm theo lời bác sỹ. Em không bít có sao không nữa, em ghi chỉ số siêu âm của em lên bác sỹ xem giúp em với :
+ Tử cung tư thế trung gian dd, cơ tử cung đồng âm
+ Kích thước: To hơn bình thường
+ Trong buồng tử cung có hình ảnh giống túi ối
+ Kích thước GS: 4.5 x 3.7 x 4.5mm
+ Túi noãn hoàng: (-)
+ Âm vang thai: (-)
+ Tim thai: (-)
+ Màng nuôi rõ, không có hình ảnh tụ dịch dưới màng nuôi
+ Tương ứng với thai: 5 tuần 1 ngày ( +/- 1 tuần)
Trong khi em tính theo KKC là được 4 tuần 4 ngày.
Em đang rất lo lắng, bác sỹ giải đáp giúp em có nên siêu âm đầu dò không và chỉ số siêu âm như vậy có ổn không ah, em cảm ơn bác sỹ
# Mang thai có nên siêu âm đầu dò, các chỉ số như vậy có ổn không?
14/10/2011
[Mang thai - Bầu bí](http://net.meyeucon.org/hoidap/category/mang-thai-bau-bi/) **8385** lượt xem
Bác sỹ giúp em với, em đi siêu âm xem con iu đã vào tử cung chưa thì bác sỹ cho đi siêu âm đầu dò, như vậy có ảnh hưởng gì đến thai nhi không ah, vì có chị ở chỗ làm em bảo cấm không đc siêu âm đầu dò, rất không tốt cho thai nhi, huhu, nhưng bác sỹ bảo phải siêu âm đầu dò nên em vẫn phải làm theo lời bác sỹ. Em không bít có sao không nữa, em ghi chỉ số siêu âm của em lên bác sỹ xem giúp em với :
[Mang thai 3 tháng đầu](http://net.meyeucon.org/hoidap/tag/mang-thai-3-thang-dau/)• [Sự phát triển của thai nhi](http://net.meyeucon.org/hoidap/tag/su-phat-trien-cua-thai-nhi/)• [Sức khỏe khi mang thai](http://net.meyeucon.org/hoidap/tag/suc-khoe-khi-mang-thai/)
## 2 Trả lời
SÂ không có hại gì nhưng không cần thiết phải làm SÂ sớm thế tốn kém mà có nguy cơ lây bệnh qua đầu dò như viêm gan B, HIV, tạp khuẩn lây qua các dụng cụ khám nếu sơ ý bất cẩn trong thao tác và không tiệt khuẩn tốt. Ngay cả SÂ ngoài thành bụng cũng không cần thiết thì không làm, trong 3 tháng đầu nếu không đau bụng ra huyết thì chỉ nên làm 2 lần vào tuần thứ 8 để thấy tim thai và tuần thứ 11-12 đo độ dầy da gáy phát hiện bệnh Down.

Server: cloudflare-nginx

Link: <http://wp.me/p28BnX-BD>; rel=shortlink


markdown:
#
[
Quán cà phê gỗ độc đáo ít người biết ở Hà Nội
](/Quan-ca-phe-go-doc-dao-it-nguoi-biet-o-Ha-Noi-post408872.html)
Ẩm thực
Mặt tiền nhỏ hẹp lại, dễ bị lướt ngang qua nên không phải ai cũng biết bên trong Ozone Café mở ra một không gian gỗ rất độc đáo, chắc chắn khiến các bạn trẻ hứng thú.

Cache-Control: private

Via: 1.1 VNG-News-Cache-116:80 (squid)


markdown:
Giấy Dán Tường
Giới thiệu
Siêu Thị Nội Thất
Siêu Thị Giấy Dán Tường
Sofa
Rèm cửa
Thảm trải sàn
Sàn gỗ tự nhiên
Sàn vinly Hàn Quốc
Sàn gỗ công nghiệp
Dịch vụ nhà đẹp
Sân vườn
Tiểu cảnh
Bọc ghế sofa
Thiết kế nội thất
Trang trí nhà đẹp
Khung ảnh
Tin Tức Hot
Liên hệ
Siêu Thị Nội Thất
Siêu Thị Giấy Dán Tường
Tranh dán tường
Giấy dán tường G.stone
Giấy dán tường art deco
Giấy dán tường hàn quốc Zinnia
Giấy dán tường phòng ngủ
Giấy dán tường phòng khách
Giấy dán tường phòng trẻ em
Giấy dán tường germanium
Giấy dán tường hàn quốc retro
Giấy dán tường hàn quốc BOS
Giấy dán tường hàn quốc Danvii
Giấy dán tường hàn quốc soho
Giấy dán tường hàn quốc charmant
Giấy dán tường hàn quốc raum
Giấy dán tường hàn quốc diallo
Mẫu giấy dán tường verena 2013
Giấy dán tường hàn quốc verena
Giấy dán tường hàn quốc lohas
Giấy dán tường hàn quốc Nreal 2013
Sofa
Rèm cửa
Thảm trải sàn
Sàn gỗ tự nhiên
Sàn vinly Hàn Quốc
Sàn gỗ công nghiệp
Dịch vụ nhà đẹp
Sân vườn
Tiểu cảnh
Bọc ghế sofa
Thiết kế nội thất
Tin tức liên quan
Trang chủ
>
Siêu Thị Nội Thất
>
Siêu Thị Giấy Dán Tường
>
Tranh dán tường
Tranh dán tường mã 17
Giá cũ:
650,000 VNĐ
Giá bán:
510,000 VNĐ
Nhà sản xuất:
hàn quốc
Bảo hành:
6 tháng
Tình trạng:
Còn hàng
Mua tranh dán tường phong cảnh sao cho thích hợp nhất với không gian làm tăng vẻ đẹp của căn phòng. Liên hệ 0904 962 888 để được tư vấn miễn phí.
Thông tin sản phẩm
Một nỗi băn khoăn lớn với các gia đình đang có ý định sử dụng tranh dán tường là làm sao chọn được mẫu nào vừa chất lượng mà lại có giá thành hợp lý.
Mua tranh dán tường phong cản
h tại tầng 3- 226 bạch mai
Địa chỉ mua tranh dán tường phong cảnh tại hà nội
Sự lựa chọn
tranh dán tường
phù hợp sẽ đem lại vẻ đẹp hài hòa cho căn phòng. Tranh dán tường phong cảnh đang là những sản phẩm được ưa chuộng hiện nay.
Tranh dán tường bông hoa tạo điểm nhấn đầu giường
Tranh dán tường hàn quốc có khả năng chịu kiềm, axit, thân thiện với môi trường, đặc biệt là thi công nhanh gọn, dễ dàng và sạch.
Tranh dán tường hàn quốc như tạo một điểm nhấn tinh tế và sắc nét mang lại khoảng không gian mới lạ cho căn nhà vô cùng quen thuộc của bạn.
Hiện nay,
siêu thị giấy dán tường
của chúng tôi còn cung cấp tranh dán tường với nhiều mẫu mã đa dạng phù hợp với mọi không gian cho gia đình bạn
Tư vấn chọn tranh dán tường phong cảnh thích hợp phòng ngủ
Văn phòng : Tầng 3, Tòa Nhà 226, Bạch Mai, Hai Bà Trưng, Hà Nội
( Ngay đầu ngã tư Bạch Mai rẽ vào Lê Thanh Nghị )
Điện thoại bán hàng :
O916.59.8668
( Mr Đức )
Trang:
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
Sản phẩm cùng loại
Trang:
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
Chuyên đề Nội thất
Phong cách màu sắc trong nội thất phòng khách
Chúng ta sẽ bắt đầu với việc lựa chọn các màu sắc đơn giản nhưng được ưa chuộng nhất cho bức tường - bức tường sáng chói. Bức tường sáng chói là phổ biến cho một lý do, chúng tạo cho không gian của bạn một cảm giác tươi mới và sạch sẽ.
Nguyên tắc 'chuẩn' bố trí nội thất phòng khách
Một trong những cách dễ dàng để tạo ra không gian trò chuyện phù hợp là hãy thiết kế khu vực đó đối xứng nhau. Nó sẽ hình thành sự cân bằng, có tổ chức và bạn sẽ không cần dành nhiều thời gian để cố gắng sắp xếp hay thay đổi chúng.
Nội thất kệ ti vi xoay cho ngôi nhà hiện đại
Kệ tivi xoay là món nội thất đa năng phù hợp với nhiều kiểu không gian. Chiếc kệ này sẽ giúp chức năng giải trí của tivi được phát huy tối ưu nhất trong ngôi nhà.
Xu hướng phòng ngủ 'hot' nhất 2014
Bạn hoàn toàn có thể thiết kế, trang trí phòng ngủ theo gu thẩm mỹ cũng như sở thích của mình và không cần quá quan tâm người khác nghĩ gì vì họ sẽ chẳng bao giờ vào đó.
Để căn phòng không còn những bức tường đơn điệu
Một bức tường rộng, không có cửa sổ có thể trở thành một nơi hoàn hảo để bạn thỏa sức sáng tạo của mình.
Chuyên đề nhà đẹp
Ý tưởng trang trí tường đẹp không đụng hàng
Đừng ngại thể hiện óc sáng tạo và gu thẩm mỹ riêng của mình để trang trí tường theo những xu hướng thiết kế hàng đầu hiện nay.
Thêm sắc mầu cho phòng khách
Thêm sắc mầu cho phòng khách bằng cách trang trí cho phòng khách bằng những mầu sắc của đồ nội thất sao cho phù hợp với phong thủy cũng như hài hòa với không gian
Mẫu bàn trang điểm đẹp và tiện dụng
Một chiếc bàn trang điểm đẹp, có phong cách và tiện dụng sẽ giúp chị em có hứng thú hơn trong việc làm đẹp mỗi ngày.
Nội thất hay cho phòng khách nhỏ
Phòng khách thường là bộ mặt của cả ngôi nhà, nhưng nếu "bộ mặt" đó có diện tích khá chật hẹp, bạn hãy tham khảo những ý tưởng này để "trang điểm" cho nó. Dù mới hay cũ, chúng cũng đều là những ý tưởng tốt nhất giúp cho căn phòng trở nên gọn gàng, đẹp mắt
Chọn giấy dán tường cho từng phòng
Hiện có rất nhiều mẫu giấy dán tường với màu sắc và chất liệu khác nhau, nhưng cũng cần phải tìm hiểu kỹ để có chọn lựa tốt nhất.
Chuyên đề phong thủy
Phong thủy cho phòng ngủ khi chọn nội thất
Việc lựa chọn nội thất hợp phong thủy cho phòng ngủ là rất quan trọng vì nó ảnh hưởng trực tiếp tới sự nghỉ ngơi của bạn.
Ánh sáng theo phong thủy
Phong thủy là tất cả những gì về năng lượng và ánh sáng là biểu hiện mạnh mẽ nhất của nó. Thực tế, ánh sáng trong nhà bạn, cả ánh sáng tự nhiên và nhân tạo, đều ảnh hưởng rất nhiều đến chất lượng của năng lượng trong ngôi nhà.
Phong thủy bếp theo hướng tây Bắc
Theo phong thủy, phòng bếp đóng vai trò rất quan trọng đối với ngôi nhà, nhất là vị trí đặt bếp nấu. Bởi vì, bếp là một thiết bị giúp chúng ta chế biến ra đồ ăn, nuôi dưỡng tất cả mọi người trong gia đình.
Phong thủy cho đời sống vợ chồng
Không quan trọng chúng ta đang sống trong năm con giáp nào, năm con rồng hay con ngựa, các nguyên tắc triết học của phong thủy có thể nâng cao sự hài hòa cho thiết kế nội thất của bạn và thậm chí là kích thích sự lãng mạn ở bất kỳ thời điểm nào.
Không gian với các mẫu hoa phù hợp
Những bình hoa tươi tắn sẽ mang lại vẻ đẹp, sự rạng rỡ và một diện mạo hoàn toàn mới cho không gian sống của bạn.
Bộ sưu tập nhà đẹp
Nhà đẹp Lương Mạnh Hải trong phim vùa đi vừa khóc
"Vừa đi vừa khóc" không chỉ gây sốt vì kịch bản thú vị, hài hước, giàu tính nhân văn và dàn diễn viên trẻ đẹp, diễn xuất tài năng mà còn nổi bật bởi hoạt cảnh phim được quay rất nên thơ.
Thăm nhà của Ngọc nữ triệu đô
Cao Thùy Dương không chỉ được biết đến với danh hiệu Hoa hậu được yêu thích nhất của Miss International 2008, cô còn là gương mặt thân quen trên sóng truyền hình qua bộ phim Chuyện tình đảo ngọc.
Nội thất đẹp mê ly của siêu mẫu Vũ Thu Phương
Vũ Thu Phương được biết đến là một người mẫu, diễn viên tài năng thành công khi tuổi còn trẻ . Cuộc sống gia đình hạnh phúc, sự nghiệp thành công. Tuy là người nổi tiếng nhưng Vũ Thu Phương khá kín tiếng rất ít chia sẻ về cuộc sống riêng tư.
Căn hộ cao cấp mới tậu của Mỹ Linh
Hình ảnh tổng thế căn hộ chung cư Mỹ Linh sẽ mua. Ngôi nhà thứ 2 của diva "Tóc Ngắn" gần trung tâm và có nhiều tiện ích bao quanh như cao ốc văn phòng, dịch vụ tài chính, trường học, nhà hàng, khách sạn, siêu thị, chợ, trung tâm y tế…
Thích mê phòng ngủ của mỹ nhân Việt
Mỹ nhân Việt khiến công chúng tò mò về không gian riêng tư của những giấc mơ.
Sản phẩm bạn đã xem
Tranh dán tường mã 17
Giá bán: 510,000 đ
Showroom : Sofa - sàn gỗ - rèm cửa - thảm trải sàn - giấy dán tường - sàn vinyl Hàn Quốc
Mua hàng tại
: Tầng 3, Nhà 226, Phố Bạch Mai - Hà Nội ( Ngay đầu ngã tư Bạch Mai
rẽ
vào Lê Thanh Nghị )
Điện thoại : ( 04 ) 66 595 999 - ( 04 ) 66 59 3333
E.mail :
ceo@sieuthigiaydantuong.vn
Hotline:
0976.35.1111 - 0975.23.6666 - 0916.59.8668 - 0912.36.39.79 - 0904.962.888
sieuthigiaydantuong.vn
bán giá rẻ nhất thị trường - Kĩ thuật thi công vượt trội
Design by:
Giay dan tuong
Giấy dán tường - Hotline : O9O4.962.888
Tweet

X-Powered-By-Plesk: PleskWin


markdown:
3 trang
Lượt xem: 918
Download: 161
# Hợp đồng xuất khẩu gỗ
Chia sẻ:
[falco](http://tailieu.vn/user/falco)
Sản phẩm gỗ mỹ nghệ được làm bằng gỗ loại 1 và loại 2: hương, trắc, mun. tên hàng - bàn hình chữ nhật và bàn vuông - bàn làm việc hình chữ nhật- ghế - ghế gỗ cần đá(bộ 6 cái) - bộ bàn ghế cẩn (bộ 9 cái) - bộ bàn ghế cẩn rồng
## Thể loại:
[Biểu mẫu - Văn bản](http://tailieu.vn/bieu-mau-van-ban/)» [Hợp đồng](http://tailieu.vn/bieu-mau-van-ban/hop-dong/)
## Chủ đề liên quan:
**Nội dung Text: Hợp đồng xuất khẩu gỗ**
No .....................
Date ..................
It has been agreed between:
the sELLER:
Address:
Tel:.....................Telex: ......................Fax: ..........................
Represented by Mr:
BUYER
Address:
Tel:...........................Telex:.....................Fax:....................
Represented by Mr:
on terms and conditions as follows:
ARTICLE 1: COMMODITY – QUANTITY – PRICE
fine art wooden products made of wood of grade 1, grade 2: huong, trac,
mun
COmmodity quantity unit price amount
units fob hcmc usd
- rectangle and square 4 30 120
table
- rectangle bureau 2 40 80
- chair 25 10 250
- wooden carved stone 3 150 450
chair (6units/set)
- set of carved table-chair 1 400 400
(9units / set)
- set of carved deagon 1 900 900
table – chair
- carved chair 1 600 600
total 37 2.800
(US Dollars two thousand and eight hundred only)
ARTICLE 2: QUALITY: As agreed samples
ARTICLE 3: PACKING: As the Buyer’s demand.
ARTICLE 4: DELIVERY: By container in Oct. and Nov.1993
ARTICLE 5: PAYMENT: By TTR after having Bill of Lading
ARTICLE 6: GENERAL CONDITION
The two parties undertake to carry out completely and strictly this contract.
If there is any difficulty, both parties will discuss to solve the problem and any
change must be confirmed by written form.
This contract is made in 04 copies in English, half of which is for each party
wih the same value.
FOR THE BUYER FOR THE SELLER
Bản dịch
hợp đồng
Số: ........
Ngày:.....
Hợp đồng này đã được sự nhất trí của các bên:
Người bán:.............
Địa chỉ: ...................
Điện thoại: ................... Telex:.................... Fax.................
Người đại diện:.............................
Người mua:.............
Địa chỉ: ...................
Điện thoại: ................... Telex:.................... Fax.................
Người đại diện:.............................
với những điều kiện và điều khoản sau:
Điều 1: tên hàng – số lượng – giá cả
sản phẩm gỗ mỹ nghệ
được làm bằng gỗ loại 1 và loại 2: huong, trắc, mun.
tên hàng số lượng đơn giá thành tiền
đơn vị fob hcmc USD
- bàn hình chữ nhật và 4 30 120
bàn vuông
- bàn làm việc hình 2 40 80
chữ nhật
- ghế 25 10 250
- ghế gỗ cần đá(bộ 6 cái) 3 150 450
- bộ bàn ghế cẩn (bộ 9 cái) 1 400 400
- bộ bàn ghế cẩn rồng 1 900 900
- ghế cẩn 1 600 600
tổng cộng 37 2.800
(Hai trăm ngàn Đô la chẵn)
Điều 2: Chất lượng: như mẫu đã được thoả thuận
Điều 3: bao gói: như lời yêu cầu của bên mua
điều 4: giao hàng: bằng container vào tháng 10 và tháng 11 năm 1993
Điều 5: Thanh toán: chuyển tiền bằng điện su khi nhạn được vận đơn
Điều 6: điều khoản tổng quát
Hai bên cam kết thực hiện đầy đủ và chặt chẽ bản hợp đồng này. Khi có khó
khăn nào, hai bên cùng thảo luận và giải quyết vấn đề, và bất kỳ thay đổi nào
liên quan đến hợp đồng sẽ phải được xác nhận bằng văn bản.
Hợp đồng này được làm thành 4 bản bằng tiếng Anh, mỗi bên giữ 2 bản có
giá trị hiệu lực như nhau.
Người mua ký Người bán ký
![](images/graphics/blank.gif)
![](images/graphics/blank.gif)
## Top Download Hợp đồng
-
-
7p
5475
543
-
6p
1241
286
-
[Hợp đồng kinh tế - Cho thuê xe tự lái](http://tailieu.vn/doc/hop-dong-kinh-te-cho-thue-xe-tu-lai-222030.html)
2p
3151
590
-
[Mẫu hợp đồng chuyển nhượng quyền sử dụng đất](http://tailieu.vn/doc/mau-hop-dong-chuyen-nhuong-quyen-su-dung-dat-122261.html)
4p
1117
247
-
[Hợp đồng thuê máy móc thiết bị](http://tailieu.vn/doc/hop-dong-thue-may-moc-thiet-bi-222037.html)
4p
4148
791
-
-
[Mẫu hợp đồng ủy quyền quản lý, sử dụng nhà ở](http://tailieu.vn/doc/mau-hop-dong-uy-quyen-quan-ly-su-dung-nha-o-526919.html)
6p
769
227
-
[Hợp đồng thuê nhà dành cho người thuê lần đầu](http://tailieu.vn/doc/hop-dong-thue-nha-danh-cho-nguoi-thue-lan-dau-26060.html)
12p
999
267
-
[Hợp đồng kinh tế - thi công công trình](http://tailieu.vn/doc/hop-dong-kinh-te-thi-cong-cong-trinh-460914.html)
10p
2357
783
Tài Liệu Hợp đồng Mới
[Xem thêm »](http://tailieu.vn/bieu-mau-van-ban/hop-dong/)
Tài Liệu mới cập nhật
[Xem thêm »](http://tailieu.vn/tai-lieu/)


markdown:
Đây là phiên bản tài liệu đơn giản
Xem phiên bản đầy đủ của tài liệu Tập làm văn - NHÂN VẬT TRONG TRUYỆN
Tài liệu liên quan


markdown:
# Xem Phim Sex Xem Phim Sex Phim Sex Ca Si Thanh Thao Viet Nam
Result of keyword
### Xem Phim Sex Xem Phim Sex Phim Sex Ca Si Thanh Thao Viet Nam
50 Result of keyword
## Xem Phim Sex Xem Phim Sex Phim Sex Ca Si Thanh Thao Viet Nam
The Hot Video - Search Video system is a perfect video search video sharing sites from the famous word such as YouTube, Google Video, Metacafe, Dailymotion. The system is divided into several categories such as funny video, music video, video football .. etc. Hopefully you will find the video you like.
**Hot Keyword**: [[sexvnclip Nam Sinh Danh Nhau]([sexvnclip-nam-sinh-danh-nhau.html)- [[phim Sex 9xaidejishixem Phim Set 10]([phim-sex-9xaidejishixem-phim-set-10.html)- [Xem Phim Sex Xem Phim Sex Xem Phim Sex Anh Hung Xa Dieu 1984](xem-phim-sex-xem-phim-sex-xem-phim-sex-anh-hung-xa-dieu-1984.html)- [Xem Phim Sex Xem Phim Sex Xemsex Bao Thyphimsexbaothy](xem-phim-sex-xem-phim-sex-xemsex-bao-thyphimsexbaothy.html)- [Media.9xxem Phim Xes Lau Xanh](media.9xxem-phim-xes-lau-xanh.html)- [Ylfll Sex](ylfll--sex.html)- [Amami Tsubasa Sex](amami-tsubasa-sex.html)- [Phimxes](phimxes.html)- [Xem Phim Bao Ve Ong Chu Tap2](xem-phim-bao-ve-ong-chu-tap2.html)- [Turkey](turkey.html)- [Aidejishidoc Truyen Xex Viet Nam](aidejishidoc-truyen-xex-viet-nam.html)- [3gp Cuoi Vo Tren Xe Xuan Hinh](-3gp-cuoi-vo-tren-xe-xuan-hinh.html)- [[truyen Sec Hay]([truyen-sec-hay.html)- [[ngua Lam Tinh Voi Nguoi]([ngua-lam-tinh-voi-nguoi.html)- [Motminh.nettrang Giay Trang Rimex](motminh.nettrang-giay-trang-rimex.html)- [Video Dit Nhau Qua Dau](-video-dit-nhau-qua-dau.html)- [[truyen Tranh Sexuantrunghoa]([truyen-tranh-sexuantrunghoa.html)- [Cuong Li`aidejishiphim Sex](cuong-li`aidejishiphim-sex-.html)- [[sexvn Sex Gai 9x]([sexvn-sex-gai-9x.html)- [[phim Sex Hoat Hinh Songokuphim Sex Hoat Hinh Songokulamtinhvoicho]([phim-sex-hoat-hinh-songokuphim-sex-hoat-hinh-songokulamtinhvoicho.html)- [[sexvn Video La Han Quyen]([sexvn-video-la-han-quyen.html)- [Cuong Li`minh Hang Bimat Trinh Timxem Hai Hong Van Hoai](cuong-li`minh-hang-bimat-trinh--timxem--hai-hong-van-hoai.html)- [[phimmamoi]([phimmamoi.html)- [Video Ban Nang Goc 2](-video-ban-nang-goc-2.html)- [Phim Sex Tuoi Teen Viet Nam](phim-sex-tuoi-teen-viet-nam-.html)- [Aidejishisexvnsport Video](aidejishisexvnsport-video.html)- [[phim Hoat]([phim-hoat-.html)- [[sexvnhai Mua Noel]([sexvnhai-mua-noel.html)- [[co Giao Thaophim Xse Nhat]([co-giao-thaophim-xse-nhat.html)- [Motminh.netsexvnytkexytkexduong Hieu Nghia](motminh.netsexvnytkexytkexduong-hieu-nghia.html)- [[michael Fitt Tickle]([michael-fitt-tickle.html)- [Motminh.netsexvnsex Gay Vn](motminh.netsexvnsex-gay-vn.html)- [[sexvnfederica Zarri]([sexvnfederica-zarri.html)- [Oncwogirl Boy](oncwogirl-boy.html)- [[ylfllsexvncuu Am]([ylfllsexvncuu-am.html)- [[do Vat My]([do-vat-my.html)- [Cuong Li`likkuoncwolbvalclip Nong](cuong-li`likkuoncwolbvalclip-nong.html)- [Video Phim 68 Sexl Teensexvnaidejishingu��«ichi.com](-video-phim-68-sexl-teensexvnaidejishingu��«ichi.com.html)- [Video Sex Viet](video-sex-viet.html)- [[pim Sex Hoang Thuy Linhnhacphimthuyhu]([pim-sex-hoang-thuy-linhnhacphimthuyhu.html)- [[dragon Ball Gt]([dragon-ball-gt.html)- [Nxem Phim Tro Dua Cua So Phan Tap 66](nxem-phim-tro-dua-cua-so-phan-tap-66.html)- [Sex Hoc Sinh Cap 3 Lang Son](sex-hoc-sinh-cap-3-lang-son.html)- [Dogfuckgirl](dogfuckgirl.html)- [Phim Loan Luan Bo Chong Va Con Dau](phim-loan-luan-bo-chong-va-con-dau.html)- [Phim Tam Ly Viet Nam](phim-tam-ly-viet-nam.html)- [Phim47com Nguoi Vo Mao Danh](phim47com-nguoi-vo-mao-danh.html)- [Cac Va Lon](cac-va-lon.html)- [Phim Sex ấn độ](phim-sex-ấn-độ.html)- [Tim Tran Wep Sex Tube8.comphim Sex Trung Quoc Video Phim Kiem Hiep](tim-tran-wep-sex-tube8.comphim-sex-trung-quoc-video-phim-kiem-hiep.html)- [Phim Sex...hong Nhungclip Quanhetinhducxem Phim Truong Hong Cong](phim-sex...hong-nhungclip-quanhetinhducxem-phim-truong-hong-cong.html)- [Xem Phim Sex Xem Phim Sex Angelina Jolie Xxx Porn](xem-phim-sex-xem-phim-sex-angelina-jolie-xxx-porn.html)- [Motminh.netditnhau Maria Odawaditnhau](motminh.netditnhau-maria-odawaditnhau.html)- [Hong Kong Film Sex Edison](hong-kong-film-sex-edison.html)- [Sec Hong Kong](sec-hong-kong.html)- [Sex Nuoc Ngoai](sex-nuoc-ngoai.html)- [Em Chong Dit Chi Dau](em-chong-dit-chi-dau.html)- [Xem Phim Sex Xem Phim Sex Hien Lang Bac Giang](xem-phim-sex-xem-phim-sex-hien-lang-bac-giang.html)- [Xem Phim Sex Xem Phim Sex Phim Sex Ca Si Thanh Thao Viet Nam](xem-phim-sex-xem-phim-sex-phim-sex-ca-si-thanh-thao-viet-nam.html)

Server: nginx


markdown:
10:43 | Thứ bảy 09/06/2007 (GMT+7)
Từ ngày 5-6.6, TAND tỉnh Đắk Nông đã xét xử sơ thẩm vụ án 3 cán bộ thuế môi giới hối lộ và nhận hối lộ. Hội đồng xét xử đã tuyên phạt Trần Đức Linh, Phó Phòng thanh tra, Cục thuế tỉnh 4 năm tù giam, Nguyễn Đình Phương, cán bộ Phòng thanh tra, Cục thuế tỉnh 3 năm tù giam về tội nhận hối lộ; Nguyễn Hoàng Diệu, cán bộ Chi cục Thuế thị xã Gia Nghĩa 1 năm 6 tháng tù về tội môi giới hối lộ nhưng cho hưởng án treo.
09:45 | Thứ ba 09/01/2007 (GMT+7)
Tỉnh Đắk Nông ban hành bảng giá các loại đất trên địa bàn năm 2007. Theo đó, thị xã Gia Nghĩa có giá đất thổ cư ở các tuyến đường chính cao nhất là 2.700.000 đồng/m2, thấp nhất là đất thổ cư khu vực ven thị xã có giá 20.000đồng/m2.
17:28 | Thứ ba 29/11/2005 (GMT+7)
Thôn Tân Hòa (xã Đăk R’moanh thị xã Gia Nghĩa, Đăk Nông còn được gọi là làng bè vì gần 50 hộ dân ở đây sống bằng nghề nuôi cá bè.
22:58 | Thứ bảy 28/10/2006 (GMT+7)
Ngày 28/10/2006, Đội quản lý bảo vệ rừng lâm trường Trường Xuân vào tiểu khu 1678 để đưa tang vật là 3 chiếc xe máy càng chở gần 5 m3 gỗ hương do lâm tặc khai thác trái phép về đơn vị xử lý. Khi đi đến địa phận lâm trường Nghĩa Tín xã Quảng Thành, thị xã Gia Nghĩa, tỉnh Đắk Nông thì bị hơn 30 lâm tặc bao vây.
23:36 | Thứ năm 08/02/2007 (GMT+7)
* Đắk Lắk: Chặn dòng Sêrêpốk trên công trình thủy điện Buôn KuốpSáng qua 8.2, Tổng công ty xây dựng số 1 tổ chức lễ khởi công Nhà máy thủy điện Đắk R"tíh tại thị xã Gia Nghĩa. Ông Nguyễn Sinh Hùng, Ủy viên Bộ Chính trị, Phó thủ tướng thường trực Chính phủ về dự và ấn nút nổ mìn khởi công xây dựng nhà máy.
23:42 | Thứ năm 13/10/2005 (GMT+7)
Chiều 13/10/2005, trung tá Phạm Văn Nho, Trưởng công an thị xã Gia Nghĩa (tỉnh Đắk Nông) cho biết: hiện 1 trong tổng số 9 nạn nhân là cháu Trần Văn Chính, 16 tuổi, học sinh trường PTTH Gia Nghĩa đã tử vong.
14:12 | Thứ năm 13/10/2005 (GMT+7)
Trưa 12/10, tại km846 quốc lộ 14, đoạn qua thị xã Gia Nghĩa, một chiếc xe của Phòng cảnh sát bảo vệ và hỗ trợ tư pháp, thuộc Công an tỉnh Đăk Nông, đã gây tai nạn, làm 8 người trọng thương.
22:15 | Thứ năm 08/02/2007 (GMT+7)
8/2, Tổng Công ty xây dựng số 1-Bộ Xây dựng đã khởi công xây dựng thủy điện ĐắkR’Tih, có tổng vốn đầu tư hơn 3.400 tỷ đồng, tại thị xã Gia Nghĩa, tỉnh Đắk Nông.
09:08 | Thứ hai 29/05/2006 (GMT+7)
TP - Ngày 27/5/2006, Tổng Cty Xây dựng số I và Quỹ hỗ trợ Phát triển tỉnh Đăk Lăk đã ký kết hợp đồng tín dụng vay vốn thực hiện Dự án thủy điện Đăk R’Tik tại thị xã Gia Nghĩa (Đăk Nông), trị giá 243 tỉ đồng.
21:08 | Thứ năm 20/12/2007 (GMT+7)
Ngày 20/12 tại thị xã Gia Nghĩa, tỉnh Đắk Nông đã tổ chức gặp mặt thân mật và chúc mừng Giáng sinh 24 linh mục Công giáo và 15 mục sư Tin lành đại diện cho hơn 95.000 giáo dân Công giáo và gần 37.000 tín hữu Tin lành địa phương.
21:01 | Chủ nhật 05/08/2007 (GMT+7)
Từ ngày 1 - 5/8, do ảnh hưởng của gió mùa Tây Nam hoạt động mạnh kết hợp với hoàn lưu áp thấp nhiệt đới sau mạnh lên thành bão số 2 nên trên địa tỉnh Đắk Nông đã có mưa nhiều nơi.
08:23 | Thứ tư 30/05/2007 (GMT+7)
Những thầy giáo độc thân đêm đêm mất ngủ vì chuỗi tiếng động khó ngăn sau làn vách mỏng. Hàng trăm đứa bé dăm bảy tuổi tự xách can nhựa đi bộ cả cây số ra hồ Đắk S’nao lấy nước về nấu rau rừng ăn với nhau trong dãy chòi lá lụp xụp.
05:58 | Thứ sáu 23/09/2005 (GMT+7)
Chiều tối 20/9, khi đang thi công đường vào mỏ đá suối Đắc Nia (thị xã Gia Nghĩa, Đắc Nông), anh Tạ Quang Khoa đã bị nước lũ cuốn trôi, đến nay chưa tìm thấy thi thể.
08:48 | Thứ năm 13/10/2005 (GMT+7)
Trưa 12/10, tại km 846 quốc lộ 14, đoạn qua thị xã Gia Nghĩa, một chiếc xe của Phòng cảnh sát bảo vệ và hỗ trợ tư pháp, thuộc Công an tỉnh Đăk Nông, đã gây tai nạn, làm 8 người trọng thương. Nhiều nhân chứng khẳng định, chiếc xe này đã chạy với tốc độ khá cao.
04:06 | Thứ năm 31/05/2007 (GMT+7)
Hôm qua 30-5, 150 thí sinh đã tham dự ngày tuyển sinh đầu tiên tại thị xã Gia Nghĩa, Đắc Nông. Trong số đó, HLV Guillaume đã chọn được em Đỗ Thành Tâm (sinh 1996, học sinh lớp 5A Trường Phan Chu Trinh).
07:17 | Thứ bảy 14/04/2007 (GMT+7)
Tại hội nghị bàn kế hoạch cho vụ sản xuất hè thu 2007 trên địa bàn do Sở NN-PTNT TP.HCM tổ chức ngày 13-4, các địa phương cho biết diện tích dành cho sản xuất lúa đang có xu hướng giảm mạnh, trong khi diện tích rau quả và hoa kiểng tăng mạnh. Trong đó diện tích trồng lúa theo kế hoạch trên toàn địa bàn là 6.500ha, giảm 624ha (8,76%) so với vụ hè thu năm trước. Diện tích trồng rau tăng thêm 704ha (12,13%), với hơn 4.000ha rau được trồng tập trung tại các huyện..
23:12 | Thứ năm 04/11/2004 (GMT+7)
Giá nước sinh hoạt (không được sạch hung vì bơm dưới giếng lên chẳng lọc, chẳng khử chi cả) ở thị xã Gia Nghĩa tỉnh Đắc Nông bắt đầu từ đầu mùa khô giá nước cứ nhích dần theo cấp số nhân.
10:57 | Thứ năm 13/10/2005 (GMT+7)
Trưa 12/10, tại km846 quốc lộ 14, đoạn qua thị xã Gia Nghĩa, một chiếc xe của Phòng cảnh sát bảo vệ và hỗ trợ tư pháp, thuộc Công an tỉnh Đăk Nông, đã gây tai nạn, làm 8 người trọng thương. Nhiều nhân chứng khẳng định, chiếc xe này đã chạy với tốc độ khá cao.
12:44 | Thứ năm 13/10/2005 (GMT+7)
Lúc 12 giờ 15 phút ngày 12/10, tại km 846 quốc lộ 14 (đoạn qua thị xã Gia Nghĩa), xe U-oát của Phòng Cảnh sát bảo vệ và hỗ trợ tư pháp, thuộc Công an tỉnh Đắc Nông, đã gây ra tai nạn làm 8 người bị trọng thương.
Nạn nhân vụ Cát Tường bị rạch bụng sau khi chết?; Hoãn phiên xử bầu Kiên và đồng phạm; Ông Trần Xuân Giá khai gì về bầu Kiên?; Nổ súng xối xả trong nhà nghỉ chấn động Cần Thơ; Tai nạn thảm khốc trên cao tốc, 5 người chết...
Ông Võ Văn Thưởng nhậm chức Phó bí thư TP.HCM; Hợp long cầu dây văng lớn nhất Việt Nam; Hoang mang số liệu trẻ tử vong do dịch sởi; Hà Nội: Cháy lớn tại khu công nghiệp Vĩnh Tuy
Bộ Giáo dục xin 34 nghìn tỷ đổi mới chương trình; Dừng xử vụ Cát Tường, trả hồ sơ điều tra bổ sung; Chết tức tưởi sau khi bác sĩ rút 3 lọ tủy sống; Hai ca sỹ bị cướp giữa Sài Gòn...
Đường Trường Chinh bị nắn cong như thế nào; Nóng trước phiên xử vụ Cát Tường; Kỳ lạ hai xe ô tô chung biển số xanh “san bằng tất cả”; Nữ sinh mang thai ngất ở lớp rồi tử vong; Vì sao không công bố dịch sởi?...
Thanh tra lên tiếng vụ đường cong Trường Chinh; Hơn 100 chiến sỹ giải cứu 4 công an bị dân vây đánh; Hé lộ cát-sê khủng mời Khánh Ly về nước biểu diễn; Hy hữu: Bị hiếp dâm, bé gái quay clip tố cáo 'yêu râu xanh'
Theo kênh thông tin riêng của PV, Phòng PC45 (Công an tỉnh Ninh Bình) phát hiện tại CLB bóng đá Xi măng The Vissai Ninh Bình (thuộc Công ty TNHH Hoàng Phát Thể Thao) trong quá trình thi đấu bóng đá ở các giải V.league
Người dùng của một số website, dịch vụ trực tuyến lớn được khuyến khích đổi mật khẩu nhằm tự bảo vệ trước lỗ hổng Heartbleed.
Thời gian qua, thương lái Trung Quốc đến các vùng quê Việt Nam thu mua nhiều mặt hàng nông sản một cách không bình thường.
Chỉ vì mẫu thuẫn gia đình, nhát dao oan nghiệt đã cướp đi sinh mạng người con trai, đẩy cha già ở tuổi gần đất xa trời rơi vào vòng lao lý.
Gia đình Hà là một gia đình danh giá, chủ một hãng taxi lớn, một tiệm vàng trên đường Trường Chinh và một quán net tại số 270 Thiên Lôi.
Diễn biến dịch sởi: Lớn nhất mấy chục năm qua; Thiếu thuốc đặc trị ngộ độc nấm, nhiều bệnh nhân chết oan?; Vì sao không nên nấu nướng bằng nồi nhôm?; Giữ dáng người bằng ánh nắng mặt trời; Cận cảnh: Từ đuôi bò thối thành đặc sản!; 6 biểu hiện của "cậu nhỏ" không khỏe mạnh; 11 loại nước uống chống bức xạ máy tính... là những tin sức khỏe nổi bật tuần qua.
Đau lòng những vụ án cha mẹ giết con; Những thảm án cuồng yêu ở Sài Gòn; “Áp lực” tại phiên xử 5 công an đánh chết người đến từ đâu?; Ép cung, nhục hình: Căn nguyên của án oan!; 9X giết bạn, phi tang xác trong bể nước; Vụ TMV Cát Tường là án chưa từng có trong lịch sử tố tụng Việt Nam;...........là những tin đáng chú ý trong tuần.
Chỉ vì ham chơi và không làm bài tập về nhà, cậu bé 6 tuổi đã bị mẹ dùng móc treo quần áo đánh đập một cách dã man.
Cùng với việc kỳ công để theo đuổi, mời mọc ca sĩ Khánh Ly về nước biểu diễn, mức cát-sê của danh ca này cũng được hiểu là không hề nhỏ, nếu như không muốn nói là cao nhất từ trước đến nay dành cho các ca sĩ hải ngoại.
15 ngân hàng Việt Nam bị hacker tấn công, sau sự việc dưa hấu được mùa mất giá, đến lượt cà chua Đà Lạt đổ cho bò ăn, giá xăng giữ nguyên trong khi giá dầu giảm nhẹ, ngân hàng nóng chuyện mua bán - sáp nhập và tái cơ cấu... là những tin tức - sự kiện kinh tế nóng hổi trong tuần vừa qua.