markdown:
|Hôm nay, Thứ 7 23/05/15 20:06
|[Xem bài viết chưa trả lời](./search.php?search_id=unanswered&sid=8cb47e54f3533e53e63f054e8efd9e8c) | [Xem chủ đề đang hoạt động](./search.php?search_id=active_topics&sid=8cb47e54f3533e53e63f054e8efd9e8c)
|
|
Thời gian được tính theo giờ UTC + 8:45 Giờ
Các điều hành viên:
[minhtuan99bk](./memberlist.php?mode=viewprofile&u=2482&sid=8cb47e54f3533e53e63f054e8efd9e8c), [Baros3004](./memberlist.php?mode=viewprofile&u=205&sid=8cb47e54f3533e53e63f054e8efd9e8c)
|
|![]()
|
|
|Người gửi||Nội dung|
|
|cuixalui
|
|Tiêu đề bài viết:
|Kỹ sư|
|
|![]()
|
|![]()
|
|
LỜI MỞ ĐẦU
Ngày nay, cùng với sự phát triển mạnh mẽ của Công nghệ sinh học, các chế phẩm enzyme được sản xuất càng nhiều và được sử dụng trong hầu hết trong các lĩnh vực như: chế biến thực phẩm, nông nghiệp, chăn nuôi, y tế… Hàng năm lượng enzyme được sản xuất trên thế giới đạt khoảng trên 300.000 tấn với giá trị trên 500 triệu USD, được phân phối trong các lĩnh vực khác nhau [4].
Phần lớn enzyme được sản xuất ở quy mô công nghiệp đều thuộc loại enzyme đơn cấu tử, xúc tác cho phản ứng phân hủy. Khoảng 75% chế phẩm là enzyme thủy phân được sử dụng cho việc thủy phân cơ chất tự nhiên [4].
Protease là enzyme được sử dụng nhiều nhất hiện nay trong một số ngành sản xuất như: chế biến thực phẩm (đông tụ sữa làm pho mát, làm mềm thịt, bổ sung để làm tăng chất lượng sản phẩm trong sản xuất bia, xử lý phế phụ phẩm trong chế biến thực phẩm…), sản xuất chất tẩy rửa, thuộc da, y tế, nông nghiệp…
Qua nhiều năm, việc gia tăng sử dụng vi sinh vật như là một nguồn cung cấp protease đã cải thiện đáng kể hiệu quả sản xuất và sản phẩm được tạo ra nhiều hơn. Tuy nhiên giá thành chế phẩm protease còn khá cao, do đó cũng hạn chế việc sử dụng rộng rãi enzyme trong sản xuất. Các chế phẩm thu được sau quá trình nuôi cấy sản xuất enzyme chưa phải là chế phẩm có độ tinh khiết cao vì protein chỉ chiếm 20-30% [6]. Vì vậy, việc nghiên cứu cải tiến phương pháp tách và tinh chế enzyme nhằm thu được chế phẩm có độ tinh khiết cao rất cần thiết. Để tách và tinh chế enzyme nói riêng và protein nói chung thường có một loạt phương pháp hóa-lý và hóa học khác nhau. Có thể chia làm ba nhóm phương pháp sau:
- Phương pháp kết tủa
- Phương pháp sắc ký
- Phương pháp phân tách hệ hai pha nước
Protease phân bố ở thực vật, động vật, vi sinh vật. Tuy nhiên nguồn enzyme ở vi sinh vật phong phú nhất, có ở hầu hết các vi sinh vật như vi khuẩn, nấm mốc và xạ khuẩn… Có thể nói vi sinh vật là nguồn nguyên liệu thích hợp nhất để sản xuất enzyme ở quy mô lớn dùng trong công nghệ và đời sống.
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. Tình hình nghiên cứu enzyme.
1.1.1. Vấn đề nghiên cứu enzyme ở nước ta
Hầu như mọi phản ứng hoá học trong cơ thể sống đều cần phải có vai trò xúc tác của enzyme - chất xúc tác sinh học. Chính vì vậy, các nghiên cứu về enzyme đã thu hút sự quan tâm của các cán bộ hoá sinh học, sinh học thực nghiệm và nhiều nhà nghiên cứu ở các lĩnh vực liên quan khác. Các nghiên cứu nhằm theo hướng tách, tinh sạch enzyme, tạo các chế phẩm có độ sạch khác nhau, nghiên cứu cấu trúc, mối liên quan giữa cấu trúc và hoạt tính sinh học của enzyme, khả năng ứng dụng enzyme trong thực tế. Nghiên cứu về công nghệ enzyme đã được tiến hành bởi nhiều tác giả như sử dụng phủ tạng của lò mổ để sản xuất pancrease, pepsin, trypsin... sử dụng mầm mạ để sản xuất amylase. Đã có những thử nghiệm công nghệ như sản xuất amino acid từ nhộng tằm bằng protease, bột protein thịt bằng bromelain từ đọt dứa, lên men rượu bằng enzyme cố định trên cột. Cũng đã có những nghiên cứu sử dụng peroxydase, cyt-P450 trong chế tạo biosensor và thuốc phát hiện chất độc... Trong lĩnh vực y dược, việc nghiên cứu sâu về cơ chế tác dụng của một số enzyme nhằm mục đích kiến tạo nên một số thuốc dùng điều trị một số bệnh đặc biệt là tạo ra một số chế phẩm thuốc chống suy dinh dưỡng ở trẻ em, đồng thời đã tiến hành sản xuất đại trà. Đây là một đóng góp rất thiết thực và kịp thời trong việc phòng chống suy dinh dưỡng ở nước ta.
1.1.2. Công nghệ sản xuất enzyme Protease trên thế giới.
Trong những năm gần đây, giá trị thương mại của các enzyme công nghiệp trên toàn thế giới đạt khoảng 1 tỷ USD, trong đó chủ yếu là các enzyme thủy phân (75%), và protease là một trong ba nhóm enzyme lớn nhất sử dụng trong công nghiệp (60%) [4].
1.2. Tổng quan về enzyme Protease.
1.2.1. Giới thiệu chung.
Nhóm enzyme protease (peptit – hidrolase 3.4) xúc tác quá trình thuỷ phân liên kết liên kết peptit (-CO-NH-)n trong phân tử protein, polypeptit đến sản phẩm cuối cùng là các axit amin. Ngoài ra, nhiều protease cũng có khả năng thuỷ phân liên kết este và vận chuyển axit amin.
H2N- CH- CO- NH- CH- CO- …- NH- CH- COOH
R1 R2 RX
+H2O
H2N- CH- COOH + H2N- CH- CO … NH- CH- COOH
R1 R2 RX
Hình 1.1. Mô hình enzyme Protease thủy phân phân tử Protein.
Protease cần thiết cho các sinh vật sống, rất đa dạng về chức năng từ mức độ tế bào, cơ quan đến cơ thể nên được phân bố rất rộng rãi trên nhiều đối tượng từ vi sinh vật (vi khuẩn, nấm và virus) đến thực vật (đu đủ, dứa...) và động vật (gan, dạ dày bê...). So với protease động vật và thực vật, protease vi sinh vật có những đặc điểm khác biệt. Trước hết hệ protease vi sinh vật là một hệ thống rất phức tạp bao gồm nhiều enzyme rất giống nhau về cấu trúc, khối lượng và hình dạng phân tử nên rất khó tách ra dưới dạng tinh thể đồng nhất.
Cũng do là phức hệ gồm nhiều enzyme khác nhau nên protease vi sinh vật thường có tính đặc hiệu rộng rãi cho sản phẩm thuỷ phân triệt để và đa dạng.
Hình 1.2. Cấu trúc không gian enzyme Protease.
1.2.2. Phân loại Protease
Protease (peptidase) thuộc phân lớp 4 của lớp thứ 3 (E.C.3.4) .
Sơ đồ phân loại được tóm tắt trên hình 1.1:
Protease được phân chia thành hai loại: endopeptidase và exopeptidase.
* Dựa vào vị trí tác động trên mạch polypeptide, exopeptidase được phân chia thành hai loại:
+ Aminopeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide ở đầu N tự do của chuỗi polypeptide để giải phóng ra một amino acid, một dipeptide hoặc một tripeptide.
+ Carboxypeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide ở đầu C của chuỗi polypeptide và giải phóng ra một amino acid hoặc một dipeptide.
* Dựa vào động học của cơ chế xúc tác, endopeptidase được chia thành bốn nhóm:
+ Serin proteinase: là những proteinase chứa nhóm –OH của gốc serine trong trung tâm hoạt động và có vai trò đặc biệt quan trọng đối với hoạt động xúc tác của enzyme. Nhóm này bao gồm hai nhóm nhỏ: chymotrypsin và subtilisin. Nhóm chymotrypsin bao gồm các enzyme động vật như chymotrypsin, trypsin, elastase. Nhóm subtilisin bao gồm hai loại enzyme vi khuẩn như subtilisin Carlsberg, subtilisin BPN. Các serine proteinase thường hoạt động mạnh ở vùng kiềm tính và thể hiện tính đặc hiệu cơ chất tương đối rộng.
+ Cysteine proteinase: Các proteinase chứa nhóm –SH trong trung tâm hoạt động. Cystein proteinase bao gồm các proteinase thực vật như papayin, bromelin, một vài protein động vật và proteinase ký sinh trùng. Các cystein proteinase thường hoạt động ở vùng pH trung tính, có tính đặc hiệu cơ chất rộng.
+ Aspartic proteinase: Hầu hết các aspartic proteinase thuộc nhóm pepsin. Nhóm pepsin bao gồm các enzyme tiêu hóa như: pepsin, chymosin, cathepsin, renin. Các aspartic proteinase có chứa nhóm carboxyl trong trung tâm hoạt động và thường hoạt động mạnh ở pH trung tính.
+ Metallo proteinase: Metallo proteinase là nhóm proteinase được tìm thấy ở vi khuẩn, nấm mốc cũng như các vi sinh vật bậc cao hơn. Các metallo proteinase thường hoạt động vùng pH trung tính và hoạt độ giảm mạnh dưới tác dụng của EDTA.
Ngoài ra, protease được phân loại một cách đơn giản hơn thành ba nhóm:
- Protease acid : pH 2-4
- Protease trung tính : pH 7-8
- Protease kiềm : pH 9-11
CHƯƠNG II. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.
2.1.Đối tượng nghiên cứu.
Vi sinh vật: chủ yếu vi khuẩn, nấm mốc, xạ khuẩn.
Vi khuẩn
Lượng protease sản xuất từ vi khuẩn được ước tính vào khoảng 500 tấn, chiếm 59% lượng enzyme được sử dụng [6].
Protease của động vật hay thực vật chỉ chứa một trong hai loại endopeptidase hoặc exopeptidase, riêng vi khuẩn có khả năng sinh ra cả hai loại trên, do đó protease của vi khuẩn có tính đặc hiệu cơ chất cao. Chúng có khả năng phân hủy tới 80% các liên kết peptide trong phân tử protein [6].
Trong các chủng vi khuẩn có khả năng tổng hợp mạnh protease là Bacillus subtilis, B. mesentericus, B. thermorpoteoliticus và một số giống thuộc chi Clostridium. Trong đó, B. subtilis có khả năng tổng hợp protease mạnh nhất (Nguyễn Trọng Cẩn và cs, 1998). Các vi khuẩn thường tổng hợp các protease hoạt động thích hợp ở vùng pH trung tính và kiềm yếu.
Các protease trung tính của vi khuẩn hoạt động ở khoảng pH hẹp (pH 5-8) và có khả năng chịu nhiệt thấp. Các protease trung tính tạo ra dịch thủy phân protein thực phẩm ít đắng hơn so với protease động vật và tăng giá trị dinh dưỡng. Các protease trung tính có khả năng ái lực cao đối với các amino acid ưa béo và thơm. Chúng được sinh ra nhiều bởi B. subtilis, B. mesentericus, B. thermorpoteoliticus và một số giống thuộc chi Clostridium [2].
Protease của Bacillus ưa kiềm có điểm đẳng điện bằng 11, khối lượng phân tử từ 20.000-30.000. Ổn định trong khoảng pH 6-12 và hoạt động trong khoảng pH rộng 7-12 .
Nấm
Nhiều loại nấm mốc có khả năng tổng hợp một lượng lớn protease được ứng dụng trong công nghiệp thực phẩm là các chủng: Aspergillus oryzae, A. terricola, A. fumigatus, A. saitoi, Penicillium chysogenum)… Các loại nấm mốc này có khả năng tổng hợp cả ba loại protease: acid, kiềm và trung tính. Nấm mốc đen tổng hợp chủ yếu các protease acid, có khả năng thủy phân protein ở pH 2,5-3 [2].
Một số nấm mốc khác như: A. candidatus, P. cameberti, P. roqueforti… cũng có khả năng tổng hợp protease có khả năng đông tụ sữa sử dụng trong sản xuất pho mát.
Xạ khuẩn
Về phương diện tổng hợp protease, xạ khuẩn được nghiên cứu ít hơn vi khuẩn và nấm mốc. Tuy nhiên, người ta cũng đã tìm được một số chủng có khả năng tổng hợp protease cao như: Streptomyces grieus, S. fradiae, S. trerimosus… [2].
Các chế phẩm protease từ xạ khuẩn được biết nhiều là pronase (Nhật) được tách chiết từ S. grieus, enzyme này có đặc tính đặc hiệu rộng, có khả năng thủy phân tới 90% liên kết peptide của nhiều protein thành amino acid. Ở Liên Xô (cũ), người ta cũng tách được chế phẩm tương tự từ S. grieus có tên là protelin.
Từ S. fradiae cũng có thể tách chiết được keratinase thủy phân karetin. Ở Mỹ, chế phẩm được sản xuất có tên là M-Zim dùng trong sản xuất da [2]. Protease từ S. fradiae cũng có hoạt tính elastase cao, do đó chúng được dùng trong công nghiệp chế biến thịt.
Hầu hết các protease phân cắt protein ở các liên kết đặc hiệu, vì thế có thể sử dụng các enzyme này theo chiều phản ứng tổng hợp để tổng hợp các liên kết peptide định trước. Yếu tố tăng cường quá trình tổng hợp bao gồm pH, các nhóm carboxyl hoặc nhóm amine được lựa chọn để bảo vệ, khả năng kết tủa sản phẩm, phản ứng trong hệ hai pha lỏng.
2.2. Phương pháp nghiên cứu.
Quá trình sản xuất các chế phẩm enzyme vi sinh vật bao gồm các giai đoạn chủ yếu:
2.2.1. Tuyển chọn và cải tạo giống vi sinh vật cho enzyme có hoạt lực cao.
Để chọn giống vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp enzyme cao, người ta cóthể phân lập từ môi trường tự nhiên hoặc có thể dùng các tác nhân gây đột biến tác động lên bộ máy di truyền hoặc làm thay đổi đặc tính di truyền để tạo thành các biến chủng có khẳ năng tổng hợp đặc biệt hữu hiệu một loại enzyme nào đó, cao hơn hẳn chủng gốc ban đầu.
2.2.1.1. Phương pháp gây đột biến.
Đây là phương pháp hay được dùng nhất nhằm để:
-Tạo những đột biến bị giảm khả năng sinh tổng hợp repressor hoặc tổng hợp repressor có ái lực thấp với gene opertor.
-Tạo những đột biến tổng hợp enzyme có cấu trúc bậc 1 thay đổi do đó có thể giảm độ thay đổi với kiểu kìm hãm theo cơ chế liên hệ ngược.
Nếu sự thay đổi cấu trúc bậc 1 xảy ra ở vùng trung tâm hoạt động hoặc ở gần đó thì có thể làm thay đổi rõ rệt hoạt tính của enzyme.
-Gây đột biến ở đoạn gene hoạt hóa promotor để làm tăng áp lực của nó đối với ARN-polymerase do đó làm tăng tốc độ sao chép mã…Dùng biện pháp này có thể làm tăng lượng glucoza-6-phosphatdehydrogenaza lên 6 lần.
Hiện tượng đột biến thường liên hệ với sự thay đổi một gene, chẳng hạn bị “lồi” một bazo khi tái tạo phân tử ADN.[1]
Để tạo một đột biến gene có thể dùng tác nhân vật lý (tia tử ngoại, tia phóng xạ) hay hóa học (các hóa chất) tác dụng lên tế bào sinh vật.
2.2.1.2. Phương pháp biến nạp.[1]
Là sự biến đổi tính trạng di truyền của một nòi vi sinh vật dưới ảnh hưởng của ADN trong dịch chiết nhận nhận được từ tế bào của vi sinh vật khác. Ở đây yếu tố biến nạp là AND. Sự chuyển vật liệu di truyền (ADN) từ tế bào cho đến tế bào nhận có thể xảy ra trong ống nghiệm (invitro) khi cho tế bào nhận tiếp xúc với dịch chiết từ tế bào cho mà không có sự tiếp xúc giữa các tế bào.
Các tế bào có thể nhận bất kỳ loại ADN nào chớ không đòi hỏi phải là ADN từ các giống họ hàng. Tuy nhiên tế bào chỉ có thể nhận một số đoạn ADN nhất định, thường không quá 10 đoạn. Các đoạn ADN được di truyền trong biến nạp có M=106-107 và phải có cấu trúc xoắn kép. Hiện tượng biến nạp phổ biến ở nhiều loài vi khuẩn như: Diplococus, Staphylocus, Hemophilus, Agrobacterium, Rhizobium, Bacillus, Xantomonas.
2.2.1.3. Phương pháp tiếp hợp gene.[1]
Khác với biến nạp, ở đây vật liệu di truyền chỉ được truyền từ tế bào cho đến tế bào nhận khi hai tế bào tiếp xúc với nhau. Do vậy các vi sinh vật có khả năng biến nạp thì sẽ không có khả năng tham gia tiếp hợp gene nữa. Hiện nay quá trình tiếp hợp gene đã được nghiên cứu ở một số loài vi khuẩn như E.coli, salmonella, Pseudomonas aeruginosa.
2.2.1.4. Phương pháp tải nạp[1]
Vật liệu di truyền (ADN) được chuyển từ tế bào cho sang tế bào nhận nhờ vai trò trung gian của thực khuẩn thể (phage). Trong quá trình tải nạp, các đoạn AND được chuyển từ tế bào cho đến tế bào tiếp hợp với AND của tế bào nhận. Do đó làm biến đổi tính chất di truyền của tế bào nhận.
2.2.2. Phương pháp bảo quản giống vi sinh vật.
Khi sử dụng vi sinh vật để sản xuất enzyme cần chọn giống thuần chủng, đã được kiểm tra đầy đủ về các đặc tính hóa sinh, vi sinh, nuôi cấy và cần đặc biệt lưu ý đến điều kiện bảo quản giống. Thực tế khi bảo quản giống gốc trong một thời gian có thể tạo ra các biến dị ngẫu nhiên không mong muốn do đó định kỳ phải cấy chuyền và kiểm tra lại các đặc tính ban đầu.
• Phương pháp cấy chuyền.
Đây là phương pháp phổ biến nhất dễ thực hiện bằng cách giữ giống trên môi trường thạch (thạch nghiêng, hộp petri,…) với thành phần môi trường nuôi cấy và điều kiện nuôi cấy thích hợp cho giống vi sinh vật đó. Sau khi giống đã mọc tốt cần bảo quản ở nhiệt độ lạnh 3-40C và sau mỗi tuần phải cấy chuyền lại. Khi cấy chuyền chỉ lấy bào tử hoặc khuẩn lạc mà không nên lấy cả môi trường dinh dưỡng để đảm bảo không chuyền các sản phẩm trao đổi chất vào môi trường mới (có thể gây biến đổi bất lợi không thể lường hết được). Nếu là xạ khuẩn thì không nên bảo quản giống trên môi trường thạch mà nên giữ trong đất để khử trùng.
Để kéo dài thời gian bảo quản giống từ hàng tháng đến 1 năm, người ta phủ 1 lớp paraphin lỏng để tiệt trùng trên bề mặt giống để hạn chế sự phát triển của nó. Cần lưu ý chỉ phủ lớp dầu sau khi cấy vi sinh vật đạt đến độ chín sinh lý.
Phương pháp cấy chuyền rất có hiệu quả để bảo quản các giống nấm men, vi khuẩn và rất hữu hiệu, dễ dàng triễn khai giống ra sản xuất lớn, hạn chế các tai biến có thể dẫn đến hư hỏng giống gốc.
• Phương pháp làm khô
Bằng cách giữ giống trên cát, đất, silicagen trong điều kiện khô ráo (tất cả đều được khử trùng cẩn thận). Trong điều kiện như vậy sẽ hạn chế sự phát triển tiếp tục của giống khi bảo quản. Phươg pháp này rất hay được sử dụng để bảo quản nấm mốc, xạ khuẩn, một vài loại nấm men, vi khuẩn thời gian giữu giống có thể được 1 năm.
Phương pháp làm khô cũng thực hiện đơn giản, không cần dụng cụ đắt tiền. Tuy nhiên giống như phương pháp cấy chuyền thời gian bảo quản tương đối ngắn.
• Phương pháp đông khô
Đông khô là quá trình mà nước được lấy ra khỏi mẫu khi các mẫu đang ở trạng thái lạnh sâu. Ở đây vi sinh vật được huyền phù trong môi trường thích hợp và được làm lạnh trong môi trường chân không. Thiết bị đông khô sẽ hút nước và cuối cùng mẫu được làm khô đến mức nhất định. Mẫu được hàn kín để cho môi trường chứa mẫu là chân không. Đây là phương pháp phổ biến có hiệu quả cao cho bảo quản các đối tượng vi sinh vật khác nhau như nấm sợi, nấm men, vi khuẩn và một số virut. Tuy nhiên, phương pháp này ít được ứng dụng đối với tảo, động vật nguyên sinh và tế bào động vật.
• Phương pháp bảo quản lạnh sâu:
Đối với phương pháp bảo quản lạnh sâu thì vi sinh vật được bảo quản trong môi trường dịch thể và nước cần cho hoạt động sống của vi sinh vật bị bất hoạt ở nhiệt độ lạnh sâu (-196°C -> -80 °C).
Với phương pháp này, tế bào có thể bị vỡ trong quá trình làm lạnh và làm tan mẫu. Một nguyên nhân dẫn đến làm vỡ tế bào là việc tích luỹ các chất điện giải trong mẫu bảo quản và hình thành các tinh thể nước trong tế bào. Để khắc phục nhược điểm này người ta đã bổ sung các chất làm hạn chế tốc độ lạnh sâu và làm tan nhanh như glycerol, DMSO (dimethyl sulfoxide). Việc bảo quản theo phương pháp lạnh sâu này được thực hiện ở các thang nhiệt độ khác nhau như -20° C, -30° C, -40° C, -70° C, -140°C và -196° C. Nói chung mức nhiệt độ cao hơn -30° C cho hiệu quả thấp do tế bào chịu nồng độ muối cao sinh ra từ các chất điện giải. Phương pháp bảo quản này có hiệu quả với nhiều nhóm vi sinh vật khác nhau như nấm sợi, nấm men, vi khuẩn, xạ khuẩn và virut.
Đặc biệt với phương pháp bảo quản lạnh sâu trong nitơ lỏng là phương pháp vạn năng hơn cả. Phương pháp này thích hợp với nhiều đối tượng vi sinh vật khác nhau như vi khuẩn, nấm sợi, nấm men, virut, tảo và cả các dòng tế bào động vật. Tuy nhiên, phương pháp này cũng bộc lộ một số nhược điểm như đầu tư kinh phí cho thiết bị và điện, nitơ lỏng hoặc rủi ro như cháy nổ... Đặc biệt phương pháp này không thích hợp với các chủng vi sinh vật thường xuyên dùng đến. Nói chung phương pháp này thường được dùng với các chủng vi sinh vật có những đặc tính quí mà không thích hợp với phương pháp đông khô.
2.2.3. Môi trường nuôi cấy vi sinh vật tổng hợp enzyme Protease.
Cần phải chọn môi trường vì thành phần môi trường dinh dưỡng có ảnh hưởng trực tiếp đến sự sinh trưởng và tổng hợp enzyme của vi sinh vật. Trong thành phần môi trường phải có đủ các chất đảm bảo được sự sinh trưởng bình thường của vi sinh vật và tổng hợp enzyme.
Đặc biệt lưu ý là để tăng sự tổng hợp enzyme người ta thường dựa vào hiện tượng cảm ứng. Vì nếu như trong thành phần môi trường có các chất cảm ứng thì chất đó hay sản phẩm phân giải của nó sẽ kìm hãm hoặc làm yếu tác dụng kìm toả của chất kìm hãm nhằm bảo đảm khả năng sinh tổng hợp enzyme đã cho không bị cản trở. Chất cảm ứng tổng hợp enzyme cho thêm vào môi trường nuôi thường là cơ chất tương ứng của enzyme cần tổng hợp.
Thành phần chính của môi trường: C, N, H, O. Ngoài ra các chất vô cơ: Mn, Ca, P, S, Fe, K và các chất vi lượng khác.
2.2.3.1. Nguồn cacbon.
Thường là hợp chất hữu cơ trong đó chủ yếu là gluxit, tùy thuộc vào đặc tính của enzyme và nòi vi sinh vật mà người ta lựa chọn cho thích hợp.
Có nhiều chất hydratcacbon và các hợp chất khác là nguồn cacbon thích hợp đối với nấm mốc sinh ra enzyme protease có hoạt lực cao. Các nguồn cacbon có tác dụng đến sinh tổng hợp proteinase của nấm mốc có thể theo thứ tự:
Đối với Asp. flavus 74: fructoza→ glucoza→ sacaroza→ ramnoza→ manoza→ galactoza→ arabinora→ lactoza.
Đối với Asp. awamori 200: fructoza→ manit→ sacaroza→ arabinoza→ manoza→ galactoza→ lactoza.
Đối với Asp. oryzae 79: fructoza→ sacaroza→ maltoza→ glucoza→ manit→ arabinoza→ galactoza.
Tinh bột là nguồn cacbon của nhiều chủng vi khuẩn sinh tổng hợp enzyme Protease. Ví dụ: Vi khuẩn Bac. Subtilis có khả năng sinh tổng hợp Protease ở môi trường tinh bột >8%.
Nhiều xạ khuẩn ưa nhiệt, trong đó Micromonospora vulgaris 42, mọc tốt và sinh tổng hợp protease cao ở môi trường có tinh bột. Tăng nồng độ tinh bột từ 0,25- 1,5% sinh khối cũng tăng đồng thời với hiệu xuất tổng hợp enzyme.Nếu tăng nồng độ tinh bột hơn nữa sẽ không thu được kết quả dương tính. Tỷ số giữa cacbon và nitơ cần phải là 4: 1. Trên môi trường có maltoza (0,5- 2%) vi sinh vật phát triển bình thường, nhưng tổng hợp protease ngoại bào bị ức chế. Xạ khuẩn không phát triển được ở trên môi trường có các nguồn cacbon duy nhất là sacaroza, lactoza hoặc arabinoza. Glucoza, manoza, fructoza, xyloza có trong môi trường (0,2- 5%) làm ức chế sinh trưởng của xạ khuẩn và sinh tổng hợp enzyme.
Ngoài ra một số loại hydrocacbon cũng có nguồn cacbon có 125 chủng vi sinh vật. Chẳng hạn chủng Ps. Seruginosa có thể đồng hoá hydrocacbon và có khả năng sinh tổng hợp protease có hoạt lực cao trên môi trường n- parafin với 12, 14 và 16 nguyên tử cacbon, dầu nặng hoặc propylenglycol. Chúng không chỉ đồng hoá được cả hydrocacbon béo mà còn đồng hoá cả hydrocacbon thơm.[1]
2.2.3.2. Nguồn nito.
Nguồn nito sử dụng rất phong phú, bao gồm 2 nhóm: vô cơ và hữu cơ.
Đối với một số loài nấm mốc thuộc họ (A. oryzae, A. awamori, A. niger, A. flavus) trên môi trường có các nguồn nitơ hữu cơ sinh tổng hợp protease axit cao. Trên môi trường kzapek NaNO3 được thay bằng cả cazein hoạt lực protease của nấm mốc được tăng lên 3,5 lần, còn khi thay tinh bột bằng glucoza và bổ sung pepton hoạt lực enzyme tăng 6 lần. Nhiều kết quả nghiên cứu cho thấy sinh tổng hợp enzyme được nâng cao khi trong môi trường có đồng thời cả nguồn nitơ hữu cơ và nitơ vô cơ. Cho thêm vào môi trường có cám mì, bột đậu tương đã tách chất béo, các nguồn nitơ và hữu cơ hoạt lực enzyme protease tăng 22- 74%. Còn trường hợp dùng các nguồn nitơ vô cơ duy nhất trong môi trường sẽ dẫn đến ngừng sinh tổng hợp protease nói chung.
Trong quá trình nuôi cấy vi khuẩn, trong đó có B. subtilis và B. mesentericus, các hợp chất nitơ vô cơ và hữu cơ được dùng phối hợp trong môi trường sẽ tạo điều kiện thuận lợi cho sinh tổng hợp protease. Trong số các nguồn nitơ vô cơ thì NH4, H2PO4 là tốt hơn cả. Những muối khác NH4Cl, (NH4)2SO4, NH4NO3, NaNO3, KNO3, Ca(NO3)2 làm giảm hoạt lực protease tới 30- 50% , còn amylaza giảm 7- 10 lần. Còn trong môi trường chỉ có nguồn nitơ hữu cơ hoạt lực protease và amylaza cũng thấp hơn trong môi trường đối chứng (NH4)2HPO4 và nước chiết đậu tương.
Đối với xạ khuẩn ưa nhiệt Actynomyces Vulgaris U2 thì pepton là chất cảm ứng để sinh tổng hợp enzyme protease là tốt nhất.
Các axit amin có ảnh hưởng rõ rệt tới sinh tổng hợp enzyme bằng vi sinh vật. Glyxin, alanin, metionin và lơxin có tác dụng làm tăng hoạt lực protease của chủng đột biến A. oryzae 251- 90 đến 6- 9% và nguyên chủng A. oryzae 132- 63 tới 7- 24%. Nhiều axit amin có tác dụng ức chế đến sinh tổng hợp enzyme, Valin, axit glutamic, izolơxin và valin ức chế tổng hợp enzyme ở B. megaterium 60%. Còn đối với B. subtilis các axit amin ức chế trong quá trình này là glyxin, metionin, axit glutamic, alanin, lơxin,…
Ngoài ra, các bazơ purin như A (adenin), G (guanin) và các dẫn xuất của chúng, ARN và các sản phẩm thuỷ phân cũng làm tăng đáng kể sinh tổng hợp proteinza vi sinh vật.[1]
2.2.3.3. Nguồn các nguyên tố khoáng và các yếu tố (chất) kích thích sinh trưởng
Muối khoáng rất cần thiết cho hoạt động vi sinh vật.
Ion Mg2+ có tác dụng sinh tổng hợp và ổn định các enzyme có hoạt tính ở nhiệt độ cao.
Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đối với môi trường nuôi cấy. Nhiệt độ nuôi cấy thông thường từ 25 - 300C. Trị số pH ban đầu của môi trường (chủ yếu ở môi trường nước) cũng có thể gây ảnh hưởng nào đó đến sự tạo thành enzyme, nhưng khi đó cũng cần tính đến khả năng biến đổi nhanh chóng chỉ số đó bởi vi sinh vật.
Độ thông khí cũng rất cần thiết cho việc sinh tổng hợp enzyme. Vì vậy ở môi trường bề mặt người ta thường thêm chất xốp như trấu vào, còn ở môi trường bề sâu (môi trường dịch thể) , thì người ta thường lắc (nếu enzyme cần lắc thì việc này cực kỳ quan trọng). Độ ẩm cũng rất quan trọng (chỉ có tác dụng ở nuôi cấy bề mặt), phụ thuộc vào thành phần môi trường bề mặt.
Khi lựa chọn môi trường cần chú ý đến cả thành phần định tính và định lượng sao cho quá trình sinh tổng hợp enzyme mong muốn là cao nhất. Muốn vậy người ta có thể sử dụng một số phương pháp:
Phương pháp tối ưu hóa quy hoạch thực nghiệm toàn phần.
Phương pháp toán học mô hình hóa thực nghiêm.
2.2.4. Các loại môi trường nuôi cấy vi sinh vật tổng hợp enzyme.
Có thể chia làm 2 loại: môi trường tổng hợp và môi trường tự nhiên.
• Môi trường tổng hợp: là môi trường bao gồm các chất với liều lượng xác định (qua tìm hiểu, nghiên cứu), chẳng hạn nguồn cacbon có thể là tinh bột, xenluloza, đường, axit, rượu, nguồn nitơ vô cơ và hữu cơ. Loại môi trường này được sử dụng cho mục đích nghiên cứu.[1]
• Môi trường tự nhiên: thường dùng các loại phế liệu, nguyên liệu có chứa các nguồn cacbon, nitơ, khoáng, các yếu tố sinh tổng hợp trưởng. Mặt khác, các nguyên liệu này có sẵn, rẻ tiền nên được sử dụng rất nhiều trong công nghiệp sản xuất các chế phẩm enzyme từ vi sinh vật. Các nguyên liệu để chuẩn bị làm môi trường tự nhiên bao gồm: cám và bột hạt cốc, nước chiết ngô, dịch ép hoa quả, rau, khô dầu, bã rượu, rĩ đường, sản phẩm phân huỷ nấm, men bia, trấu, lõi ngô. Khi lựa chọn sử dụng môi trường cần chú ý đến các chất có tác dụng điều hoà sinh tổng hợp enzyme, đặc biệt các chất cảm ứng.[2]
Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đối với môi trường nuôi cấy. Nhiệt độ nuôi cấy thông thường từ 25 - 300C. Trị số pH ban đầu của môi trường (chủ yếu ở môi trường nước) cũng có thể gây ảnh hưởng nào đó đến sự tạo thành enzyme, nhưng khi đó cũng cần tính đến khả năng biến đổi nhanh chóng chỉ số đó bởi vi sinh vật.
2.2.5. Các phương pháp nuôi cấy vi sinh vật.
• Nuôi cấy bề mặt:
Phương pháp này rất thích hợp để nuôi cấy các loại nấm mốc do khả năng phát triển nhanh, mạnh, nên ít bị tạp nhiễm. Khi nuôi nấm mốc phát triển bao phủ bề mặt hạt chất dinh dưỡng rắn, các khuẩn ty cũng phát triển đâm sâu vào lòng môi trường đã được tiệt trùng, làm ẩm. Đối với một số mục đích đặc biệt, người ta nuôi vi sinh vật trực tiếp trên bề mặt hạt gạo (sản xuất tương), hạt đậu tương (đậu tương lên men- misô) đã được nấu chín trộn hạt cốc còn sống (làm men thuốc bắc, men dân tộc, làm tương).
Người ta thường dùng cám mì, cám gạo, ngô mảnh… có chất phụ gia là trấu. Cám, trấu, có bề mặt tiếp xúc lớn, mông, tạo được độ xốp nhiều, không có những chất gây ảnh hưởng xấu đến sự phát triển của nấm mốc. Tỉ lệ các chất phụ gia phải bảo đảm sao cho hàm lượng tinh bột trong khối nguyên liệu không được thấp hơn 20%, có thể bổ sung thêm nguồn nitơ vô cơ ((NH4)2SO4, (NH4)2CO), photpho, nitơ hữu cơ và các chất kích thích sinh trưởng như malt, nước chiết ngô, nước lọc bã rượu.
Quy trình công nghệ:
Nguyên liệu Trộn Làm ẩm Thanh trùng bằng nhiệt Lam nguội, tơi Gieo giống vsv Chuyển vào dụng cụ nuôi cấy Nuôi cấy, theo dõi, xử lý.
Ưu nhược điểm:
Nồng độ enzyme tạo thành cao hơn nhiều lần so với dịch nuôi cấy chìm sau khi đã tách tế bào vi sinh vật. Trong công nghiệp rượu muốn đường hoá 100kg tinh bột chỉ cần 5kg chế phẩm nấm mốc bề mặt nhưng phải cần đến 100lit nấm mốc chìm để lọc bã và tế bào vi sinh vật.
Chế phẩm dễ dàng sấy khô mà không làm giảm đáng kể hoạt tính enzyme, chế phẩm khô, dễ bảo quản, vận chuyển, nghiền nhỏ hoặc sử dụng trực tiếp nếu không cần khâu tách và làm sạch enzyme.
Tốn ít năng lượng, thiết bị, dụng cụ nuôi cấy đơn giản, có thể thực hiện qui mô gia đình, trang trại cũng như ở qui mô lớn đến 20T/ngày.
Nuôi cấy trong điều kiện vô trùng tuyệt đối và trong quá trình nuôi cấy nếu có nhiễm trùng phần nào, khu vực nào thì chỉ cần loại bỏ canh trường phần đó.
Tuy nhiên phương pháp bề mặt có năng suất thấp, khó cơ khí hoá, tự động hoá, cần diện tích nuôi lớn, chất lượng chế phẩm ở các mẻ không đồng đều.
• Nuôi cấy chìm
Vi sinh vật được nuôi cấy trong môi trường lỏng với cơ chất chủ yếu trong đa số trường hợp là tinh bột. Chỉ có một số ít giống vsv dùng nguồn cơ chất cacbon là đường glucoza, saccharoza. Thực tế, trong một số trường hợp đường hoá sơ bộ tinh bột trước khi thanh trùng. Khi đó đường maltoza được tạo thành là chất cảm ứng tốt, môi trường thường giảm độ nhớt nên dễ dàng cho quá trình khuấy trộn và sục khí.
Phương pháp nuôi cấy bề sâu đòi hỏi phải được vô trùng tuyệt đối ở các khâu vệ sinh tổng hợp, thanh trùng môi trường dinh dưỡng, thao tác nuôi cấy, không khí cung cấp cho quá trình nuôi cấy.
Các giai đoạn của quá trình nuôi cấy chìm 1 bước gồm: chuẩn bị môi trường nuôi cấy, nuôi cấy nấm men giống, nuôi cấy nấm mốc sản xuất.
Ưu nhược điểm
Phương pháp nuôi cấy hiện đại dễ cơ khí hoá, tự động hoá, năng suất cao, dễ tổ chức sản xuất.
Có thể nuôi cấy dễ dàng các chủng vi sinh vật đột biến có khả năng sinh tổng hợp enzyme cao và lựa chọn tối ưu thành phần môi trường, các điều kiện nuôi cấy, enzyme thu được tinh khiết hơn, đảm bao điều kiện vệ sinh, vô trùng.
Tuy nhiên do thu được canh trường và nồng độ enzyme thấp nên khi tách thu hồi enzyme sẽ có giá thành cao. Tốn điện năng cho khuấy trộn, nếu không bảo đảm vô trùng sẽ bị nhiễm hàng loạt, toàn bộ gây tổn thương lớn.
2.2.6. Tách và làm sạch chế phẩm enzyme.
Một điều cần nói thêm nữa là enzyme thường chứa ở các tế bào sinh vật gọi là các enzyme trong tế bào (intracellular), nhưng nó cũng có thể được các sinh vật tiết ra môi trường sống. Đó là các enzyme ngoài tế bào (extracellular). Enzyme vi sinh vật thường chiết là enzyme ngoại bào.[2]
. Các phân tử enzyme không có khả năng đi qua màng của tế bào và màng của các cấu tử của tế bào. Do đó để có thể chiết rút các enzyme nội bào, bước đầu tiên là phải phá vỡ cấu trúc của các tế bào có chứa enzyme và chuyển chúng vào dung dịch.
Có thể phá vỡ cấu trúc của các tế bào bằng các biện pháp cơ học như nghiền với bột thủy tinh hoặc cát thạch anh, làm đồng hóa bằng thiết bị đồng hóa (homogenizator).
Muốn tách được các enzyme trong các cấu tử của tế bào, người ta còn phải dùng các yếu tố vật lý và hóa học khác nhau như sóng siêu âm, dùng các dung môi hữu cơ như butanol, aceton, glycerin, ethyl acetate... và chất detergent. Các hóa chất có tác dụng tốt cho việc phá vỡ các cấu tử của tế bào vì trong các cơ quan này thường chứa mỡ.
Sau khi đã phá vỡ các cấu trúc của tế bào, enzyme được chiết bằng nước cất, bằng các dung dịch đệm thích hợp hoặc các dung dịch muối trung tính.
Có một số yếu tố ảnh hưởng đến quá trình chiết rút cần lưu ý. Trước hết đó là nhiệt độ. Để tránh mất hoạt tính hoặc thậm chí vô hoạt, cần chiết rút và tiến hành kết tủa enzyme ở nhiệt độ thấp (từ 3 đến 50C). Các thao tác phải nhanh. Một số chất điện ly làm tăng quá trình chiết rút enzyme như NaCl, ZnCl2, CaCl2. Tác dụng của chúng còn phụ thuộc vào phương pháp dùng khi chiết rút.
Để loại bỏ muối khoáng và các loại đường... là các tạp chất có phân tử lượng thấp, người ta thường dùng phương pháp thẩm tích (dialysis) đối nước hay đối các dung dịch đệm loãng hoặc bằng cách lọc qua gel sephadex.
Để loại bỏ các protein tạp (protein cấu trúc, protein trơ) và các chất có phân tử lượng cao khác người ta hay dùng kết hợp các phương pháp khác nhau: phương pháp biến tích chọn lọc nhờ tác dụng của nhiệt độ hoặc pH của môi trường, phương pháp kết tủa phân đoạn bằng muối trung tính hoặc các dung môi hữu cơ, các phương pháp sắc ký (sắc ký hấp phụ, sắc ký trao đổi ion), điện di, phương pháp lọc gel.
-Mục đích yêu cầu: Các chế phẩm enzyme được sử dụng ở các dạng khác nhau theo mức độ tinh khiết (hoạt độ riêng). Trong một số trường hợp, canh trường nuôi cấy vi sinh vật có chứa enzyme được sử dụng trực tiếp dưới dạng thô không cần tách tạp chất nếu chúng không gây ảnh hưởng đáng kể đến sản phẩm và quy trình công nghệ sau này (Ví dụ: sản xuất rượu, nước chấm thực vật, da). Cũng có khi người ta cần sử dụng chế phẩm enzyme tinh khiết trong công nghiệp dệt, công nghiệp mạch nha, y học, nghiên cứu khoa học.
Enzyme nói chung rất dễ bị giảm hoạt tính dưới tác dụng của các tác nhân bên ngoài do đó khi tách và tinh chế enzyme để tránh sự biến hình protein ảnh hưởng lớn đến hoạt tính enzyme cần tiến hành nhanh chóng ở nhiệt độ thấp, độ pH thích hợp không có mặt các chất gây biến hình enzyme.
2.2.6.1. Phương pháp kết tủa
Phương pháp kết tủa phân đoạn bằng (NH4)2 SO4 dựa trên cơ sở sự khác nhau về khả năng kết tủa của các protein enzyme ở một nồng độ muối (tính theo phần % nồng độ bão hòa) xác định được dùng phổ biến để loại bỏ bước đầu protein tạp của các dịch enzyme. Các loại muối có thể được dùng là (NH4)2 SO4, Na2 SO4, MgSO4 ... người ta đã nhận thấy muối (NH4)2 SO4 là tốt nhất vì nó không làm hại mà làm ổn định (làm bền) hầu hết các loại enzyme. Loại muối này lại rẻ và phổ biến. Độ hòa tan của nó lại rất lớn (bão hòa 767g/l ở 250C).
2.2.6.2. Phương pháp sắc ký
• Các kỹ thuật sắc ký cột
Dịch chiết enzyme đã được loại bỏ phần lớn các protein tạp nhưng vẫn chưa đảm bảo độ đồng nhất cần thiết. Do đó dịch chiết enzyme được tiếp tục làm sạch bằng phương pháp sắc ký cột.
-Phương pháp dùng chất rây phân tử (lọc gel - gel filtration)
Cơ sở của phương pháp lọc gel là dựa vào sự khác nhau về kích thước hình dạng và phân tử lượng của enzyme có trong hỗn hợp để tách chúng ra.
Để đảm bảo cho việc tách enzyme được tốt, chất rây phân tử phải là chất trơ, không phản ứng với protein enzyme. Chất này cũng không hòa tan và tương đối bền với các yếu tố về cơ học cũng như sinh học. Ngoài ra chất được sử dụng cho mục đích lọc phân tử phải là chất không có tính đàn hồi (không co) và phải là chất ưa nước (hydrophyl).
coarse), hạt trung bình (medium), hạt mịn (fine), hạt siêu mịn, rất mịn (superfine).
-Phương pháp sắc ký trao đổi ion
Phương pháp sắc ký trao đổi ion dựa vào sự khác nhau về điện tích tổng số của các protein enzyme. Hay nói cách khác, phương pháp này được dựa trên cơ sở của phản ứng trao đổi ion giữa protein được tan trong nước hoặc dung dịch đệm loãng và các tác nhân trao đổi ion. Tác nhân (hay nguyên liệu) trao đổi ion có thể là chất nhựa có tích nhóm sinh ion hoặc là chất ionit. Đây là những chất giá trơ, không tan trong nước, có bản chất là cellulose hoặc chất gel dextran có lưới phân nhánh (Sephadex, Molselect) hoặc là chất nhựa polystirol. Chất giá thể này thường kết hợp với các nhóm ion hóa. Các chất trao đổi ion có chất giá là cellulose, sephadex, molselect thông thường được dùng để tách protein enzyme, còn các chất trao đổi ion có chất giá là polystirol (ví dụ như Dowex, Amberlite) chỉ dùng để tách các peptid có trọng lượng phân tử nhỏ hơn.
Anionit DEAE - cellulose (diethylamino - ethyl - cellulose) là dẫn xuất este của cellulose.) C2H5
Đây là chất trao đổi anion
Nếu chất giá là sephadex thì chúng ta có chất trao đổi ion sephadex. Đó là các loại DEAE - sephadex và CM - sephadex. Ưu điểm của loại này là vừa tách được protein enzyme về kích thước và về điện tích tổng số của các protein enzyme. Trường hợp CM - sephadex trên chất giá sephadex có gắn nhóm COO-
Đây là chất trao đổi cation.
Ngoài ra có các phương pháp :
- Phương pháp dùng chất hấp phụ
- Phương pháp dùng chất hấp phụ đặc hiệu sinh học hay là phương pháp sắc ký ái lực (affinity chromatography)
2.2.6.3. Phương pháp tách hệ hai pha nước.[4]
Cơ sở kỹ thuật này dựa vào sự phân bố khác nhau của hỗn hợp trong dung dịch hai pha không hòa tan vào nhau. Các hệ hai pha đặc trưng bằng cách trộn các hệ dung môi vào nhau để tạo thành hai pha riêng biệt. Hệ dung môi được sử dụng trong phương pháp này có thể là polymer/polymer như: polyethylene glycol (PEG) và dextran hoặc polymer/muối như PEG và potassium phosphate, sodium sulphate, sodium phosphate,... Các protein và mảnh vỡ tế bào có khả năng hòa tan khác nhau giữa hai pha, vì vậy phương pháp này có thể được dùng cho cả hai trường hợp: phân tách protein khỏi mảnh vỡ tế bào và phân chia các enzyme trong suốt quá trình tinh sạch protein. Hệ hai pha nước được xem là phương pháp tốt cho việc phân tách và tinh sạch các hỗn hợp, vì phân tách chất lỏng có mật độ khác nhau dễ dàng hơn phân tách các chất rắn ra khỏi các chất lỏng. So với các phương pháp tinh sạch khác thì hệ hai pha nước có một số ưu điểm hơn như: có độ hòa tan trong nước của hai pha lớn (70-80%), đạt độ tinh sạch cao, hiệu suất cao, dễ dàng sử dụng ở quy mô lớn và đặc biệt polymer được tái sử dụng.
Sự phân tách đạt hiệu quả cao tùy thuộc vào các thông số như khối lượng phân tử và điện tích của đối tượng nghiên cứu, nồng độ và khối lượng phân tử của các polymer, nhiệt độ, pH, thời gian, lực ion của hỗn hợp và sự hiện diện của các loại muối đa hóa trị như phosphaste hoặc sulphate...
Hình 2.9. Phương pháp tách hệ hai pha nước
2.3. Enzyme cố định.
Enzyme cố định (hay enzyme không tan) là enzyme có sự tham gia hoạt động trong một không gian bị giới hạn. Sự giới hạn hoạt động vốn linh hoạt của enzyme bằng cách gắn nó vào một pha cách ly tách rời khỏi pha lỏng tự do và ở đó nó vẫn có khả năng tiếp xúc được với các phần tử cơ chất, effector hay inhibitor (chất ức chế). Pha gắn enzyme thường không tan trong nước nhưng cũng có thể là các polyme ưu nước
• Lợi ích của việc sử dụng enzyme cố định.
-Giảm giá thành do enzyme được sử dụng lặp lại nhiều lần với cùng một kiểu phản ứng xúc tác, chế phẩm bền hơn trong các điều kiện pH, nhiệt độ, áp suất thẩm thấu tối ưu, tốc độ phản ứng lớn, dễ tổ chức sản xuất ở mức độ tự động hóa cao.
-Chế tạo enzyme tương đối dễ, đầu tư xây dựng và sản xuất tương đối ít, sản phẩm phản ứng không hòa lẫn lộn với enzyme, có thể dễ dàng tổ chức sản xuất các sản phẩm lên men bằng enzyme ngoại bào như: rược etylic, axit hữu cơ, axitamin, vitamin.
• Một số phương pháp chủ yếu tạo enzyme cố định
-Microencapsulation (gói enzyme vào trong cực nhỏ)
Được nghiên cứu bởi Chang et al(1967-1968)
Cái màng polymer thẩm thấu dày 200A0 (xenluloza, polysacarit, phi tinh bột) tạo thành hạt đứng vững 10- 12M chứa cá phân tử enzyme bên trong. Lớp màng này cho phép cơ chất và sản phẩm phản ứng eyme được qua lại tự do nhưng các phân tử enzyme không thể qua lại được vì các phần tử quá lớn như : polysaccarit, protein cũng không thể qua lại màng được do đó không thể thực hiện phản ứng enzyme được.
Ngoài ra còn có các phương pháp:
-Liên kết enzyme vào chất mang không tan (silman và katchalski-1966)
-Định vị enzyme trong pha lỏng của hệ thống 2 pha (Reese and Mandels 1958)
-Giữ enzyme bằng màng siêu lọc.
• Các thiết bị sản xuất enzyme cố định
Figure 2.11. Sketch of the pilot-scale kinetic mixer
Figure 2.2 Photograph of kinetic mixer after installation at BNL
moisture contents but could not be remedied with the current mixer design.
collection vessel, and rectangular HEPA filter box are clearly discernable in the photograph.
Figure 2.12. Schematic of kinetic mixer off gas system.
Figure 2.13. Photograph of kinetic mixer off gas system.
Figure 2.14. Photograph of kinetic mixer with end flange removed for access to mixing blades.
Figure 2.15. Photograph of mixing blade sleeve.
Figure 2.16. Photograph of Plexiglass containment enclosure.
Figure 2.17. Photograph of enclosure during smoke bomb leak test.
CHƯƠNG III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Khả năng sinh tổng hợp enzyme Protease từ vi sinh vật
Kiểm tra sự tăng trưởng vi sinh vật: lấy ví dụ minh họa kiểm tra bằng hóa chất.
Bảng 3.1. Khả năng sinh tổng hợp protease của XKDNW10 theo thời gian ở 500C.[5]
Thời gian nuôi cấy Vòng phân giải
36 giờ
48 giờ
60 giờ
72 giờ
84 giờ
Từ đường kính vòng phân giải đồ thị về khả năng sinh enzyme protease của chủng XKDNW10 đã được xây dựng (hình 3.1.).
t(h) 24 36 48 60 72 84
D(mm) 0 9 15 22 29 29
Chú thích: t(h)- Thời gian nuôi cấy, d(mm)- Đường kính vòng thủy phân
3.2. Ứng dụng enzyme Protease vào trong công nghiệp.
Protease được sử dụng rộng rãi trong nhiều ngành công nghiệp như công nghiệp thực phẩm, công nghiệp nhẹ, công nghiệp dược phẩm và nông nghiệp…
Trong công nghiệp chế biến thịt, protease được dùng làm mềm thịt nhờ sự thủy phân một phần protein trong thịt, kết quả làm cho thịt có một độ mềm thích hợp và có vị tốt hơn. Protease được sử dụng để làm mềm thịt và tăng hương vị thịt. (ngâm thịt vào dinh dưỡng protease ở pH và nhiệt độ xác định- phương pháp này phổ biến và thuận lợi nhất; Tẩm hỗn hợp làm mềm thịt (enzyme, muối, bột ngọt). Tiêm dung dịch enzyme vào thịt; tiêm dung dịch enzyme vào con vật trước khi giết mổ). Sử dụng protease để sản xuất dịch đạm: từ Streptomyces fradiae tách được chế phẩm keratineza thuỷ phân được keratin rất có giá trị để sản xuất dịch đạm từ da, lông vũ. Nếu dùng axit để thuỷ phân sẽ mất đi hoàn toàn các axit amin chứa lưu huỳnh, nếu dùng kiềm để thuỷ phân sẽ bị raxemic hoá (chuyển dạng L sang D làm giảm giá trị sinh học của axit amin). Để thuỷ phân sâu sắc và triệt để protein (trong nghiên cứu, chế tạo dịch truyền đạm y tế) cần dùng các protease có tính đặc hiệu cao và tác dụng rộng, muốn vậy người ta thường dùng phối hợp cả 3 loại protease của 3 loài: vi khuẩn, nấm mốc, thực vật với tỷ lệ tổng cộng 1- 2% khối lượng protein cần thuỷ phân. Ưu điểm của việc thuỷ phân protease bởi enzyme là bảo toàn được vitamin của nguyên liệu, không tạo ra các sản phẩm phụ, không làm sẫm màu dịch thuỷ phân.
Trong chế biến thuỷ sản: Khi sản xuất nước mắm (và một số loài mắm) thường thời gian chế biến thường là dài nhất, hiệu suất thuỷ phân (độ đạm) lại phụ thuộc rất nhiều địa phương, phương pháp gài nén, nguyên liệu cá. Nên hiện nay quy trình sản xuất nước mắm ngắn ngày đã được hoàn thiện trong đó sử dụng chế phẩm enzyme thực vật (bromelain và papain) và vi sinh vật để rút ngắn thời gian làm và cải thiện hương vị của nước mắm. Tuy nhiên vẫn còn một số tồn tại cần phải hoàn thiện thêm về công nghệ.
Trong công nghiệp sữa, protease được dùng trong sản xuất phomat nhờ hoạt tính làm đông tụ sữa của chúng. Protease từ một số vi sinh vật như A. candidus, P. roquerti, B. mesentericus,… được dùng trong sản xuất pho mát [1]. Trong công nghiệp sản xuất bánh mì, bánh quy... protease làm giảm thời gian trộn, tăng độ dẻo và làm nhuyễn bột, tạo độ xốp và nở tốt hơn.
Trong sản xuất bia, chế phẩm protease có ý nghĩa quan trọng trong việc làm tăng độ bền của bia và rút ngắn thời gian lọc. Protease của A. oryzae được dùng để thủy phân protein trong hạt ngũ cốc, tạo điều kiện xử lý bia tốt hơn [6].
Trong công nghiệp da, protease được sử dụng làm mềm da nhờ sự thủy phân một phần protein của da, chủ yếu là collagen, thành phần chính làm cho da bị cứng. Kết quả đã loại bỏ khỏi da các chất nhớt và làm cho da có độ mềm dẻo nhất định, tính chất đó được hoàn thiện hơn sau khi thuộc da. Trước đây, để làm mềm da người ta dùng protease được phân lập từ cơ quan tiêu hóa của động vật. Hiện nay, việc đưa các protease tách từ vi khuẩn (B. mesentericus, B. subtilis), nấm mốc (A. oryzae, A. flavus) và xạ khuẩn (S. fradiae, S. griseus, S. rimosus...) vào công nghiệp thuộc da đã đem lại nhiều kết quả và dần dần chiếm một vị trí quan trọng [2] .
Trong công nghiêp dệt: Proteinase vi sinh vật được sử dụng để làm sạch tơ tằm, tẩy tơ nhân tạo (các sợi nhân tạo được bằng các dung dịch cazein, gelatin) để sợi được được bóng, dể nhuộm. Protease có tác dụng thủy phân lớp protein serisin đã làm dính bết các sợi tơ tự nhiên, làm bong và tách rời các loại tơ tằm, do đó làm giảm lượng hoá chất để tẩy trắng.
Ngoài ra, protease còn được ứng dụng rộng rãi trong rất nhiều ngành khác như:
- Điều chế dịch đạm thủy phân dùng làm chất dinh dưỡng, chất tăng vị trong thực phẩm và sản xuất một số thức ăn kiêng.
- Protease của nấm mốc và vi khuẩn phối hợp với amylase tạo thành hỗn hợp enzyme dùng làm thức ăn gia súc có độ tiêu hóa cao, có ý nghĩa lớn trong chăn nuôi gia súc và gia cầm.
- Điều chế môi trường dinh dưỡng của vi sinh vật để sản xuất vaccine, kháng sinh,…
- Sản xuất keo động vật, chất giặt tổng hợp để giặt tẩy các chất bẩn protein, sản xuất mỹ phẩm,…
KẾT LUẬN
Trong quá trình thực hiện bài semina: “Công nghệ sản xuất enzyme Protease từ vi sinh vật ứng dụng trong công nghiệp” chúng tôi đã đạt được các kết quả sau:
-Hiểu ý nghĩa,vai trò của VSV trong sản xuất và đời sống xã hội, đặc biệt trong tương lai khi công nghệ sinh học phát triển.
-Nắm được đặc tính sinh lý của vi sinh vật.
-Biết được một số nhóm vi sinh vật chính có thể sản xuất enzyme Protease ứng dụng trong công nghiệp.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
TIẾNG VIỆT
1. Trần Xuân Ngạch (2007), Công nghệ enzym, Trường Đại Học Bách Khoa Đà Nẵng.
2. Nguyễn Trọng Cẩn, Nguyễn Thị Hiền, Đỗ Thị Giang, Trần Thị Luyến (1998), Công nghệ enzyme, Nhà xuất bản nông nghiệp thành phố Hồ Chí Minh.
3. Lương Đức Phẩm (2004), Công nghệ vi sinh vật, Nhà xuất bản Nông nghiệp, Hà Nội.
4. Lưu Thị Nguyệt Minh(2007), “Phân tách Protease của Bacillus Subtilis bằng hệ hai pha Polyethylene glycol/ Potassium phosphate”, Đồ án tốt nghiệp.
5. Phạm Trần Vĩnh Phú (2007), “ Nghiên cứu một số chủng vi sinh vật ưa nhiệt từ quá trình phân hủy tự nhiên rác thải sinh hoạt của thành phố Đà Nẵng”,Đồ án tốt nghiệp.
6. Lê Xuân Phương (2001), Vi sinh vật công nghiệp, NXB Xây dựng, Hà Nội.
TÀI LIỆU MẠNG
1.
2.
4.
5.
_________________
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
Sửa lần cuối bởi
vào ngày Chủ nhật 29/11/09 22:45 với 1 lần sửa trong tổng số.
|
|Dragon_Fr
|
|Tiêu đề bài viết:
|Giáo sư|
|
|![]()
|
|![]()
|
|
Cop bài vào diễn đàn thì phải làm cho đoàn hoàn chứ, chả có cái hinh nào cả chỉ có chú thích thôi.
_________________
Sinh viên khoa lâm nghiệp
Lớp LN 41B
|
|cuixalui
|
|Tiêu đề bài viết:
|Kỹ sư|
|
|![]()
|
|![]()
|
|
đâu nó không hình mà vì tài liệu như thế mà
_________________
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
|
|![]()
|
|
Thời gian được tính theo giờ UTC + 8:45 Giờ
|
|
## Ai đang trực tuyến?
|
|
Đang xem chuyên mục này:
|Bạn
|không thể tạo chủ đề mới trong chuyên mục này.
Bạn
không thể trả lời bài viết trong chuyên mục này.
Bạn
không thể sửa những bài viết của mình trong chuyên mục này.
Bạn
không thể xoá những bài viết của mình trong chuyên mục này.
Bạn
không thể gửi tập tin đính kèm trong chuyên mục này.

Set-Cookie: phpbb3_myl7t_sid=8cb47e54f3533e53e63f054e8efd9e8c; expires=Sat, 30-May-2015 11:21:44 GMT; path=/; domain=.huaf.edu.vn; HttpOnly


markdown:
Do địa bàn nằm cách xa trung tâm thành phố Huế, đến nay khu vực thị trấn Phú Lộc và 05 xã phụ cận vẫn chưa được nối mạng nước sạch của Huewaco. Trong những năm gần đây, do tốc độ phát triển kinh tế - xã hội và quá trình đô thị hóa hướng tăng và sự mở rộng diện tích nuôi tôm, cá, vẹm, hàu trên đầm phá, ao hồ đã kéo theo sự ô nhiễm nguồn nước mặt; đồng thời quá trình khai thác nước ngầm bừa bãi cũng là một nguyên nhân gây ô nhiễm nguồn nước ngầm. Do vậy, nguồn nước hiện tại mà người dân trong vùng đang sử dụng đang bị ô nhiễm nghiêm trọng và có nguy cơ ngày càng tăng trong thời gian tới.
Bên cạnh đó, nhu cầu sử dụng nước sạch cho sản xuất và sinh hoạt của người dân tại khu vực này tăng cao. Một số hệ thống cấp nước tập trung hiện có vẫn còn mang tính nhỏ lẻ, chất lượng nước cấp cho sinh hoạt chưa theo đúng tiêu chuẩn qui định của Bộ Y tế. Vì vậy, vấn đề nước sạch luôn là một bài toán còn nhiều vướng mắc.
Đứng trước thực trạng đó, khởi đầu từ quý III-2008, Huewaco đã triển khai khảo sát, lập dự án và chính thức được UBND tỉnh phê duyệt cho thực hiện tại Quyết định số 2752/QĐ-UBND ngày 9-12-2008 với tổng mức đầu tư trên 43 tỉ đồng.
Mục tiêu của dự án là xây dựng hệ thống cấp nước sạch với công suất 5.000m3/ngày đêm, đáp ứng nhu cầu người dân thị trấn Phú Lộc và 5 xã phụ cận gồm: Lộc Trì, Lộc Điền, Lộc Hoà, Lộc An và Lộc Sơn; dự kiến cấp nước cho 42.127 nhân khẩu đến năm 2015 có tính đến phương án phát triển hệ thống cung cấp nước cho các xã ven đầm phá thuộc huyện Phú Lộc và Phú Vang. Đồng thời nâng cao tỉ lệ người dân dùng nước sạch, phòng tránh các nguyên nhân gây bệnh do sử dụng nguồn nước không hợp vệ sinh gây ra, tạo cơ sở ban đầu để phát triển nhà máy nước Hồ Truồi theo quy hoạch. Đây là một dự án trọng điểm, có tổng mức đầu tư lớn, phạm vi hưởng lợi rộng, qui mô công trình xây dựng trải rộng trên địa bàn 05 xã và 01 thị trấn thuộc huyện Phú Lộc.
Theo kế hoạch, dự án sẽ được khởi công vào quý III năm 2009 và hoàn thành sau 14 tháng. Dự án ra đời đáp ứng được sự mong mỏi của người dân, thể hiện sự quan tâm sâu sắc của Đảng, chính quyền đến đời sống người dân nông thôn, góp phần nâng cao tỉ lệ người dân dùng nước sạch trên toàn tỉnh, tiến tới thực hiện thắng lợi mục tiêu 95% hộ nông thôn được sử dụng nước sạch đến năm 2010 như Nghị quyết Đại hội Đảng bộ tỉnh lần thứ XIII đã đề ra.
-DVKH-

WARC-Type: response

Content-Type: application/http; msgtype=response

Connection: close

Cache-Control: private

Content-Type: text/html; charset=utf-8


markdown:
# Môn luật hôn nhân - Gia đình: Hậu quả pháp lý của việc chia tài sản chung trong thời kì hôn nhân
Nhằm đảm bảo lợi ích cho vợ, chồng, tôn trọng quyền sở hữu tài sản riêng của công dân, cũng như tạo điều kiện cho họ có những điều kiện tốt nhất để sản xuất kinh doanh thì Luật HNGĐ 2000 đã công nhận quyền có tài sản riêng của vợ chồng. Tài sản riêng của vợ chồng có thể được hình thành từ nhiều nguồn. Trong đó thì việc chia tài sản chung của vợ chồng trong thời kì hôn nhân là 1 căn cứ đặc biệt hình thành tài sản riêng của vợ chồng. Luật HNGĐ đã có những quy định khá cụ thể về vấn đề này, tuy nhiên thì vẫn còn 1 số những vướng mắc khi áp dụng trong thực tế cũng như khi xác định hậu quả pháp lý khi chia tài sản chung của vợ chồng trong thời kì hôn nhân. Nhằm làm rõ hơn về vấn đề này em xin được đi sâu vào phân tích vấn đề: Hậu quả pháp lý của việc chia tài sản chung trong thời kì hôn. 1. Cơ sở của việc chia tài sản chung của vợ chồng trong thời kì hôn nhân. 2. Hậu quả pháp lý của việc chia tài sản chung trong thời kỳ hôn nhân. 2.1. Về quan hệ nhân thân. 2.2 Về quan hệ tài sản. 3. Một số vướng mắc trong thực tế về thủ tục khi tiến hành chia tài sản chung trong thời kì hôn nhân của vợ, chồng. 4.Vấn đề khôi phục chế độ tài sản chung của vợ chồng.
![ doc](/images/icons/doc16x16.gif)
[lvcdongnoi](#)| Ngày: 25/02/2013 | Lượt xem: 814 | Lượt tải: 3 ![ download](/images/download.gif)
![ download](/images/download.gif)
**Môn luật hôn nhân - Gia đình: Hậu quả pháp lý của việc chia tài sản chung trong thời kì hôn nhân**, để xem tài liệu hoàn chỉnh bạn click vào nút DOWNLOAD ở trên
Các file đính kèm theo tài liệu này:
Môn luật hôn nhân - gia đình- Hậu quả pháp lý của việc chia tài sản chung trong thời kì hôn.doc


markdown:
Have you ever seen people who go out of their way to wear unflattering things because they are so good looking that they can pull off even the most terrible looks? This is very common amongst dancers. Their lithe bodies can take the most abuse from pleats and plaids. The straightness of their backs makes a fine counterpoint to the messy topknot, hair piled into a ball on the very top of their head like shiva. Shiva is the destroyer and the first thing on his list should be his hairdo, but who am I to argue with the divine? The river ganges is supposed to spout from his hairstyle, so there’s more going on in shiva’s topknot than just a chaotic updo achieved without a mirror during the first five minutes of yoga.
These hipster antihipster fashion forward folk are lucky in thrift stores and diving into a dumpster, and there is delicate art to their look, and most of it has to do with having narrow bones and a strict architecture that can show off a garment plain, without fitting. it just hangs, so that the thing can be seen for what it is, as opposed to having to negotiate the threaded turns and valleys of a shapelier figure. it’s not just about thinness, although this is an aspect to physical confidence which can help pull off a truly disgusting look. There is something of an attention to proportion and balance. ‘Ugly’ is just another form of pretty, and if you can actually master this, then you are a bit of a jedi, who also incidentally wear hideous and blousey and unfortunately belted garments and gross tiny braided tailed mullet hair that makes no sense of the head it is on.
Thick black eyeglass frames are essential, and I love these on everyone, no matter how insulting they are to the face underneath. I couldn’t ever wear these as I have no bridge on my nose. Yep, no bridge, but also no river flowing from my topknotted hair so frankly, I don’t need a bridge, but still, these glasses are a dream that will never come true for me. this is one part of ugly/pretty I really envy. The glasses I have a fetish for, truly.
A very short culotte with a cuff near the knee and big accordion pleats around the thighs and buttocks is another thing I would love to wear, but just cannot. I have only seen one person be able to do this. It’s so awful of a pant that only the most beautiful man I know could make it work for him, and the look is memorable and legendary. It’s a strange kind of shorts/pants hybrid that never got popular after the renaissance, like a poufy princely thing, that you could accessorize with a velvet pillow with a lone glass slipper resting on it, for your continuing search for Cinderella – when you really should be looking for new pants instead.
## 8 Comments. Add To The Mix…
You know Margaret, I do know some folks like to wear rather slinky or wild attire to show off themselves. That being said, I prefer simple and even uniforms back in the day, when I was in air force. Women in the 70s in air force, wearing fatigues O.D. (olive drab) greens and blues, looked cool. I also prefer the asian garb as I saw in Japan, Philippines and Korea, very nice.
Hmm… Now if I should be lucky enough to go to your Brunswick, what do I wear? Something loud but not over the top….
that is so hilarious in differing ways depending how i read that beyond the fact that i just blew chunks on the computer after eating some scrambled eggs — if my lover had busted a nut by loosening his eggs it would be a different selling point than scrimping on another after all of these years of homophobic ventures pretending to be homo-inclusive. i have NO patience at all!! i should have had udon rather than the eggs — even those goose eggs that someone kept mentioning to hide a sense of bounty in my pouch of over-pleated shorts that are so hilarious to wear because they are so hideous. i figure the next time i blow chunks after someone trying to present me with scrambled eggs, i’ll have those big poofy pockets to puke so i can use it to fry scrapple and eggs over medium or medium is just over it.
have a beautiful weekend!!
2 words for you Margaret….Chloë Sevigny!!
I think the ultimate master of ugly/pretty isn’t a thin supermodel. She is the fictional character, Enid, from Ghost World, as portrayed by Thora Birch in the movie. She really pulls it off, and her body is very much like yours, including the bridgeless nose. She wears great geek glasses of all sorts. I love everything Enid, especially her thrift store fashion sense.
This is without a doubt the most brilliant thing I have read in about a month. Thank you. I live in Austin, the “other” Portlandia, so this type of flinchwear is pretty much a daily part of what I will see when I leave my house every morning.
p.s. why do all of these homo-friendly men wind up being boring metrosexuals?? GOD, this project is absolute SHIT here in miami with crack heads, pedophiles, and the MOST boring faggots i’ve EVER had in my life. GOD, save the world — ‘cuz they are eating SHIT. i’ve had a front row seat and homo-friendly is about as interesting a dry-humping.
I also love the black frames, but I can’t wear them all the time, it’s like a part of the outfit… Sometimes I feel like they are essential & there are days when I get pretty sick of wearing them. But I still love them, you cant’t go wrong with Yves Saint Laurent vintage frames in black.
I am also a big fan of ray ban wayfarer eyeglasses.

Server: Apache

X-Powered-By: PleskLin

Vary: Accept-Encoding,Cookie

Cache-Control: max-age=1, private, must-revalidate

Content-Encoding: gzip

Content-Type: text/html; charset=UTF-8


markdown:
**Có thể tạo hóa ban cho bạn một thân hình cân đối, một vóc dáng gợi cảm, tuy nhiên, qua thời gian cùng với sự thờ ơ trong việc chăm sóc, vận động thì niềm kiêu hãng của bạn cũng sẽ có thể biến mất mà thay vào đó là một thân hình phì nhiêu và 3 vòng ngấn mỡ. Vậy nên, việc lên chế độ tập luyện thể dục hàng ngày với máy tập thể hình đa năng chính là phương pháp tốt nhất không chỉ giúp bạn duy trì vóc dáng đẹp mà còn đảm bảo một sức khỏe tốt.**
Sản phẩm máy tập đa năng được coi là giải pháp 3 nhất: An toàn nhất, hiệu quả nhất và tiết kiệm nhất.
*Máy tập thể hình đa năng hoàn hảo*
**An toàn nhất:**
Bạn lo lắng vì vòng 3 quá khổ, vùng 2 chảy sệ và và vùng cánh tay, tích tụ nhiều mỡ thừa? Đôi chân chẳng mấy thon gọn, khiến bạn mất hẳn đi sự tự tin vốn có? Bạn muốn có một kế hoạch giảm cân hoàn hảo? Nhưng bạn không thể thực hiện chế độ ăn kiêng vì tính chất công việc bạn đang đảm nhiệm thường xuyên giao thiệp, quan hệ khách hàng bằng những buổi chiêu đãi, tiệc tùng. Bạn cũng đã nghĩ đến phương án sử dụng thực phẩm giảm cân, nhưng đối với các loại thực phẩm chức năng giảm cân nếu sử dụng quá lâu, quá thường xuyên cũng có thể mang lại những tác dụng phụ không mong muốn.Vậy liệu pháp an toàn nhất là vận động, tập luyện thường xuyên cùng các loại máy hỗ trợ chuyên biệt.
[ ra đời dựa trên tiêu chí an toàn và chất lượng cho người sử dụng, mang đến tác dụng giảm cân đột phá mà hoàn toàn không gây bất cứ tác dụng phụ nào. Sản phẩm được nghiên cứu bởi các chuyên gia hàng đầu, sản phẩm sẽ mang đến cho bạn cảm giác nhẹ nhàng khi đạt được thân hình gợi cảm. Máy tập thể hình đa năng](http://maytapthehinhdanang.artseeddesign.com)
*Máy tập thể hình đa năng tốt nhất*
**Hiệu quả nhất:**
Chúng ta đều biết: Tập thể dục ngoài việc để có vóc dáng thon gọn, thân hình gợi cảm thì tập thể dục còn có ý nghĩa rất quan trọng trong việc điều trị và phòng ngừa các căn bệnh nguy hiểm như: Xương khớp, tim mạch và trí não. 30 phút mỗi ngày với máy tập thể dục đa năng hay
[, sẽ là cách tốt nhất để bạn duy trì một thân hình ký tưởng và giúp bạn minh mẫn, ngủ ngon, thăng hoa trong cuộc sống. may chay bo](http://dienmaytiendat.vn/may-tap-the-duc/may-chay-bo/)
**ArtSeed Design** (Vui lòng ghi rõ nguồn khi sao chép nội dung này)
CHIẾN LƯỢC SEO VÀ ONLINE MARKETING CHUYÊN NGHIỆP
ArtSeed Design cam kết mang đến cho bạn nguồn khách hàng tiềm năng, giúp tăng đột biến doanh số bán hàng, tăng khả năng nhận diện thương hiệu và nâng cao hiệu quả kinh doanh trong thời gian ngắn nhất.
Hotline: 0974.366.076 (Bình) - 0909.782.002 (Lan Trinh)

Cache-Control: no-store, no-cache, must-revalidate, post-check=0, pre-check=0

Pragma: no-cache

Vary: Accept-Encoding,User-Agent

Content-Type: text/html


markdown:
**Mang thai 3 tháng giữa thường là giai đoạn đẹp nhất của thai kỳ. Triệu chứng buồn nôn và mệt mỏi (thường gặp ở 3 tháng đầu) đã biến mất và bạn cảm thấy khỏe hơn và thoải mái hơn. Ðây là thời gian tuyệt vời vì bạn cảm thấy em bé di động bên trong bạn và cuối cùng bạn bắt đầu lộ ra dáng vẻ có thai rõ ràng.**
Trong 3 tháng giữa thai kỳ, các xét nghiệm máu, xét nghiệm tiền thai, và siêu âm có thể xác nhận em bé khỏe mạnh và phát triển bình thường. Nhiều phụ nữ nhận thấy rằng cuối cùng họ đã có thể nắm chắc việc sắp có em bé. Thời điểm này cũng là lúc bạn bắt đầu chia sẻ các tin tức tuyệt vời với gia đình, bạn bè và đồng nghiệp.
## Những thay đổi ở cơ thể mẹ
Hầu hết các bà bầu đều thấy giai đoạn này dễ chịu hơn giai đoạn 3 tháng đầu nhưng cũng cần phải được thông tin đầy đủ về thai kỳ trong những tháng này.
Bạn có thể thấy những triệu chứng như nôn ói và mệt mỏi biến mất. Nhưng những thay đổi khác, gây chú ý hơn của cơ thể có thể xuất hiện. Bụng của bạn sẽ lớn ra trong lúc bạn tiếp tục tăng cân và em bé tiếp tục lớn. Và trước khi giai đoạn này kết thúc, bạn sẽ cảm thấy em bé bắt đầu chuyển động và có thể cảm thấy nhiều cơn đau nhức.
### Một số triệu chứng cần lưu tâm trong giai đoạn này:
- Đau ở bụng, háng, và bắp đùi
- Đau lưng
- Chóng mặt – Khó thở
- Nổi vân da – Thay đổi ở da
- Ngứa ran ở bàn và ngón tay
- Ngứa ở bụng, lòng bàn tay, và lòng bàn chân.
- Táo bón
- Hệ miễn dịch kém
Hãy đến gọi cho bác sĩ nếu bạn bị nôn ói, ăn mất ngon, vàng da, hoặc mệt mỏi kèm với ngứa ngáy. Đây có thể là những dấu hiệu của một bệnh gan nặng được gọi là ứ mật thai kỳ.
### Tăng cân
Mọi thai phụ đều tăng cân ở những mức độ khác nhau. Trung bình, một thai phụ bình thường có thể tăng khoảng 0,5kg mỗi tuần, hoặc 1,5 đến 2 kg mỗi tháng trong ba tháng giữa thai kỳ.
### Tâm lý người mẹ
Em bé đã lớn lên từng ngày và bạn có thể cảm nhận được điều đó. Bạn sẽ cảm thấy yêu đời hơn, hào hứng hơn khi hướng đến giải pháp tương lai khi em bé chào đời. Bạn sẽ có những tưởng tượng về mối quan hệ với em bé trong bụng, những giao tiếp đầu tiên với bé…
### Em bé
Vào cuối giai đoạn này, thai nhi nặng khoảng 0,8 kg và dài khoảng 33 cm kèm theo sự phát triển của ngón tay, ngón chân, lông mi, và lông mày. Trong khoảng tháng thứ 5, bạn có thể cảm thấy thai nhi chuyển động. Vào cuối giai đoạn 3 tháng giữa thai kỳ, toàn bộ những cơ quan cơ bản của thai nhi như tim, phổi và thận đều được hình thành
## Những điều cần biết khi mang thai 3 tháng giữa
### Dinh dưỡng và ăn uống
- Nhu cầu năng lượng của mẹ lúc này là 2550 kcal/ngày, tăng 350 kcal so với mức bình thường.
- Tăng cường ăn uống trong đó ưu tiên các nhóm chất bột và giữ tỷ lệ cân đối với nhóm khác Đạm:Béo:Bột-đường = 14:31:55
- Cung cấp một lượng acid béo cần thiết để phát triển não bộ cho thai nhi
- Tiếp tục cung cấp thường xuyên lượng vitamin và chất xơ cho cơ thể thông qua rau quả.
- Tránh các chất kích thích: caffein, cồn, nicotin
- Duy trì chế độ ăn uống sạch sẽ, ăn chín uống sôi.
- Tránh những thực phẩm nhiều cholesterol và có thủy ngân
### Thuốc và vitamin
- Tiếp tục bổ sung các loại vi chất cần thiết cho cơ thể, đặc biệt là: sắt, canxi, Vitamin A,B,C,D, axit folic… Uống theo chỉ định của bác sĩ, tránh lạm dụng
- Luôn tránh các loại thuốc nhuộm tóc, thuốc bôi mặt trong suốt giai đoạn thai kỳ
- Sử dụng thuốc Đông y phải có chỉ định của bác sĩ
- Việc điều trị các bệnh trong giai đoạn này cũng cần theo chỉ định, không tự ý điều trị
### Siêu âm
- Siêu âm được thực hiện để giúp phát hiện các dị tật của thai nhi giúp các bác sĩ có phương án điều trị
- Siêu âm hỗ trợ cho các xét nghiệm cần thiết khác
- Siêu âm giúp cho bạn biết được cân nặng, các chỉ số, sự phát triển của thai nhi
### Các xét nghiệm cần thiết
Có nhiều xét nghiệm cần thiết được thực hiện trong giai đoạn này, khi đi khám thai tại cơ sở chuyên môn bạn sẽ được các bác sĩ tư vấn thực hiện các xét nghiệm. Các xét nghiệm có thể gồm:
- Xét nghiệm máu
- Xét nghiệm nước tiểu
- Xét nghiệm dung nạp glucô
- Xét nghiệm chọc dò nước ối
- Xét nghiệm chọc hút gai nhau
Các xét nghiệm sẽ giúp bạn biết được những vấn đề đang mắc phải trong giai đoạn thai kỳ và có phương án điều trị cần thiết. Các xét nghiệm chuyên sâu hơn sẽ được thực hiện nếu bác sĩ yêu cầu.
### Quan hệ tình dục khi mang thai 3 tháng giữa
Đây là giai đoạn bạn có thể yên tâm hơn khi quan hệ tình dục, tuy nhiên vẫn phải giữ sự cẩn trọng và lựa chọn các tư thế an toàn cho mẹ và con.
### Tập thể dục
Đi bộ, Yoga hay các bài aerobic nhẹ nhàng sẽ giúp cho các bà mẹ sảng khoái tinh thần, đẩy lùi bệnh tật và sẵn sàng cho sự chào đời của bé yêu.
## Bình luận
mai phuong
Chào bác sĩ.
Em đang mang bầu ở tuần 21. Mấy ngày nay am thường thấy ngứa ở vùng bụng và em cũng có gãi. Vậy cho em hỏi triệu chứng ngứa như thế có bị sao không và có ảnh hưởng gì tới em bé không ? Cảm ơn bác sĩ nhiều
Tran Quyen
Chào bsĩ, em mag thai dc 18 tuần, em đã đi xét nghiệm thì kết quả là HC Down, dị tật ống thần kinh, 3 nhiễm sắc thể 18 đều nguy cơ thấp. Kết quả như thế có bình thường k ah?
Nguyen thu thuy
E mang thai da duoc 17 tuan ma van buon non,met moi.bung ko thay to len may.e con hay bi dau bung va lung rat kho chju.xin hoi e be cua e co gj bat thuong ko a.e cung ko an dc e rat lo so e be thieu chat ko phat trien dc.
Hoang Huong
Chao bac si a. E nam nay 24t va mang thai lan dau. Vi chua chuan bi tinh than nen e co rat nhieu lo lang. E be cua e dc 14 t (ngay dau cu CKk Cuoi la 24.5.2012, chu ki KN la 28 ngay). Vay be con duoc bao nhieu tuan a? Moi day e di kham thj bsi chuan doan thai da duoc 14t, bsi cho e hoi luc do sieu am co biet duoc di tat khoang trang sau gay va benh down khong a? Vi e nghe cac chi bao la 12, 13t la sieu am tot nhat. E rat lo mac du ket qua sieu am la binh thuon. E cam on bac si. Rat mong bac si tu van giup.
Dương Nga
Hoàng Hương ak. Mình mang thai cũng được gần 14 tháng rùi, lúc mình đi khám thai ở tuan 12 – 13 là lúc đó bạn có thể kiểm tra sau gáy của em bé xem có bị dow hay ko rồi. quá 14 t là ko kiem tra dc dau.
Mình ktra em be nha minh là 1.7mm, thấy bác sĩ bảo trên 2.3 hay gì đó là phải kiểm tra nước ối đây. Nên bạn đi khám và hỏi bác sĩ kỹ vào.

WARC-Truncated: length

Set-Cookie: __cfduid=d75f091580157ce961937ed2e5b536be71432398369; expires=Sun, 22-May-16 16:26:09 GMT; path=/; domain=.meyeucon.org; HttpOnly

Link: <http://wp.me/pYbZW-2Vt>; rel=shortlink

Server: cloudflare-nginx


markdown:
Em có thai được 5 tuần nhưng bác sĩ siêu âm nói chưa có phôi thai. Vậy Bác sĩ cho em hỏi, thai mấy tuần tuổi thì có phôi thai và tim thai?
Khi có thai em hay bị ra huyết trắng có sao không bác sĩ?
Chuyên trang Hỏi Đáp cùng Mẹ Yêu Con giúp các bạn có thể đóng góp và cùng chia sẻ kiến thức vì một gia đình hạnh phúc, mạnh khỏe và trở thành các bậc cha mẹ thông thái...
17/01/2012
[Mang thai - Bầu bí](http://net.meyeucon.org/hoidap/category/mang-thai-bau-bi/) **2071** lượt xem
Em có thai được 5 tuần nhưng bác sĩ siêu âm nói chưa có phôi thai. Vậy Bác sĩ cho em hỏi, thai mấy tuần tuổi thì có phôi thai và tim thai?
Khi có thai em hay bị ra huyết trắng có sao không bác sĩ?
- Hãy tạo câu hỏi riêng của bạn. Khi có câu trả lời, email sẽ tự động gửi về hòm thư của bạn. Vui lòng kiểm tra cả hòm thư spam và đưa email về Inbox (chọn
*not spam* hoặc *không phải thư rác*) để không bị lỡ câu trả lời.
- Nếu bạn đặt câu hỏi vào câu của người khác sẽ không có email gửi về và chúng tôi cũng không trả lời câu hỏi đó.
## 1 Trả lời
Đối với thai 5 tuần tuổi, thì qua siêu âm chưa thể có phôi thai và tim thai. Phôi thai và tim thai có thể thấy được khi thai được 6 – 6,5 tuần.
Em cần mô tả rõ huyết trắng của em có màu sắc như thế nào, có hôi, có kèm theo ngứa rát không.
Huyết trắng sinh lý là huyết trắng có màu trắng trong, dai, thường xuất hiện vào ngày rụng trứng, không kèm theo ngứa rát vùng kín.
Huyết trắng bệnh lý là huyết trắng có màu vàng, xanh hoặc từng mảng trắng đục, kèm theo ngứa rát vùng kín.
BS đã trình bày huyết trắng sinh lý và bệnh lý, em xem lại huyết trắng của em thuộc dạng nào. Nếu là huyết trắng bệnh lý, em nên khám sản phụ khoa để được tư vấn.

Set-Cookie: kpg_stop_spammers_time=1432398037; expires=Sat, 23-May-2015 16:21:37 GMT; Max-Age=60

Link: <http://wp.me/p28BnX-M0>; rel=shortlink


markdown:
![]()
|4 giám khảo xuất hiện trên sân khấu The Voice.|
![]()
|Kiên Giang là thí sinh thi đầu tiên với ca khúc 'Cám ơn mẹ'. Ảnh: Kênh 14|
![]()
|Hương Tràm - ứng cử diễn nặng ký của chức vô địch.|
![]()
|4 giám khảo xuất hiện trên sân khấu The Voice.|
![]()
|Kiên Giang là thí sinh thi đầu tiên với ca khúc 'Cám ơn mẹ'. Ảnh: Kênh 14|
![]()
|Hương Tràm - ứng cử diễn nặng ký của chức vô địch.|**Tags:** [The Voice](http://news.go.vn/tag/%22The-Voice%22/trang/1/top.htm), [Kiên Giang](http://news.go.vn/tag/%22Ki%c3%aan-Giang%22/trang/1/top.htm), [Hương Tràm](http://news.go.vn/tag/%22H%c6%b0%c6%a1ng-Tr%c3%a0m%22/trang/1/top.htm), [Đinh Hương](http://news.go.vn/tag/%22%c4%90inh-H%c6%b0%c6%a1ng%22/trang/1/top.htm), [Xuân Nghi](http://news.go.vn/tag/%22Xu%c3%a2n-Nghi%22/trang/1/top.htm), [Đàm Vĩnh Hưng](http://news.go.vn/tag/%22%c4%90%c3%a0m-V%c4%a9nh-H%c6%b0ng%22/trang/1/top.htm), [Thu Minh](http://news.go.vn/tag/%22Thu-Minh%22/trang/1/top.htm), [Hồ Ngọc Hà](http://news.go.vn/tag/%22H%e1%bb%93-Ng%e1%bb%8dc-H%c3%a0%22/trang/1/top.htm), [Trần Lập](http://news.go.vn/tag/%22Tr%e1%ba%a7n-L%e1%ba%adp%22/trang/1/top.htm), [Phương Linh](http://news.go.vn/tag/%22Ph%c6%b0%c6%a1ng-Linh%22/trang/1/top.htm), [Quốc Huy](http://news.go.vn/tag/%22Qu%e1%bb%91c-Huy%22/trang/1/top.htm), [Thiều Bảo Trang](http://news.go.vn/tag/%22Thi%e1%bb%81u-B%e1%ba%a3o-Trang%22/trang/1/top.htm), [Gia Bảo](http://news.go.vn/tag/%22Gia-B%e1%ba%a3o%22/trang/1/top.htm), [Tiêu Châu Như Quỳnh](http://news.go.vn/tag/%22Ti%c3%aau-Ch%c3%a2u-Nh%c6%b0-Qu%e1%bb%b3nh%22/trang/1/top.htm), [Trúc Nhân](http://news.go.vn/tag/%22Tr%c3%bac-Nh%c3%a2n%22/trang/1/top.htm), [Christina Aguilera](http://news.go.vn/tag/%22Christina-Aguilera%22/trang/1/top.htm), [Xuân Sơn](http://news.go.vn/tag/%22Xu%c3%a2n-S%c6%a1n%22/trang/1/top.htm), [Hoài Sa](http://news.go.vn/tag/%22Ho%c3%a0i-Sa%22/trang/1/top.htm), [Giọng Hát Việt](http://news.go.vn/tag/%22Gi%e1%bb%8dng-H%c3%a1t-Vi%e1%bb%87t%22/trang/1/top.htm), [Ngân Bình](http://news.go.vn/tag/%22Ng%c3%a2n-B%c3%acnh%22/trang/1/top.htm), [Bee Gees](http://news.go.vn/tag/%22Bee-Gees%22/trang/1/top.htm), [Jesse Campbell](http://news.go.vn/tag/%22Jesse-Campbell%22/trang/1/top.htm), [chung kết](http://news.go.vn/tag/%22chung-k%e1%ba%bft%22/trang/1/top.htm), [thí sinh](http://news.go.vn/tag/%22th%c3%ad-sinh%22/trang/1/top.htm), [cuộc thi](http://news.go.vn/tag/%22cu%e1%bb%99c-thi%22/trang/1/top.htm), [đêm chung kết](http://news.go.vn/tag/%22%c4%91%c3%aam-chung-k%e1%ba%bft%22/trang/1/top.htm), [gay cấn](http://news.go.vn/tag/%22gay-c%e1%ba%a5n%22/trang/1/top.htm), [xuất sắc](http://news.go.vn/tag/%22xu%e1%ba%a5t-s%e1%ba%afc%22/trang/1/top.htm), [tiết mục](http://news.go.vn/tag/%22ti%e1%ba%bft-m%e1%bb%a5c%22/trang/1/top.htm), [ca khúc](http://news.go.vn/tag/%22ca-kh%c3%bac%22/trang/1/top.htm), [Vĩnh Hưng](http://news.go.vn/tag/%22V%c4%a9nh-H%c6%b0ng%22/trang/1/top.htm), [ban nhạc](http://news.go.vn/tag/%22ban-nh%e1%ba%a1c%22/trang/1/top.htm)
[
10 đầm xòe dựng phom kiều diễm của sao](http://news.go.vn/thoi-trang/tin-2100382/10-dam-xoe-dung-phom-kieu-diem-cua-sao.htm)
Xu hướng đầm 'ball gown' dựng phom của Zac Posen, Marchesa... được nhiều...
[
Mr. Đàm hẹn hò Thu Phương ở Mỹ](http://news.go.vn/sao/tin-2098899/mr-dam-hen-ho-thu-phuong-o-my.htm)
Hai huấn luyện viên The Voice rất thân mật khi cùng nhau đi uống cà phê.
[
'Thiên thần lai' dễ thương của DJ Myno - Van...](http://news.go.vn/hau-truong/tin-2099665/thien-than-lai-de-thuong-cua-dj-myno-van-bakel.htm)
Cậu nhóc David Van Bakel được bố mẹ lập trang cá nhân riêng để chia sẻ...
[
Khánh Thi mặc ton sur ton với Phan Hiển](http://news.go.vn/sao/tin-2099852/khanh-thi-mac-ton-sur-ton-voi-phan-hien.htm)
'Cặp đôi tin đồn' cùng mặc trang phục trắng đi chấm thi vòng loại của...
[
Táo tợn dàn cảnh cướp giữa Sài Gòn, giật gần 700...](http://news.go.vn/phap-luat/tin-2100916/tao-ton-dan-canh-cuop-giua-sai-gon-giat-gan-700-trieu-dong-khi-mo-cop-do-xang.htm)
Vừa mở cốp xe chờ đổ xăng, một người đàn ông đã bị tên cướp lao tới giật...
[
Công Trí, Trương Ngọc Ánh hội ngộ mỹ nhân 'Troy'](http://news.go.vn/sao/tin-2100866/cong-tri-truong-ngoc-anh-hoi-ngo-my-nhan-troy.htm)
Các nghệ sĩ Việt Nam có cơ hội gặp gỡ với nữ diễn viên nổi tiếng Diane...
Tin xem nhiều nhất
Tin xem nhiều nhất
Tin xem nhiều nhất
Tin xem nhiều nhất
Tin xem nhiều nhất
Tin xem nhiều nhất
Tin xem nhiều nhất
Tin xem nhiều nhất
Tin xem nhiều nhất
Tin xem nhiều nhất
Tin xem nhiều nhất
Tin xem nhiều nhất
Tin xem nhiều nhất

Connection: keep-alive

Keep-Alive: timeout=3, max=20

Set-Cookie: NSC_mc.ofxt.hp.wo=ffffffff78170e6045525d5f4f58455e445a4a423a1a;expires=Sat, 23-May-2015 16:28:05 GMT;path=/;httponly


markdown: [Xem tất cả](/index.php?option=com_realestate&part=buyer&task=searchResults&type=mua&Itemid=4) **bán khuôn đất 10.15 kdt tuệ tĩnh, thành phố hải dương.** **Hải Dương**- Giá: **13 triệu**VND/ **Bán nhà** **Hải Dương**- Giá: **2 tỷ 700 triệu**VND/ **Bán đất khu An Phú 3, ĐTM phía Tây, đường 13,5m, giá 730** **Hải Dương**- Giá: **730 triệu**VND/ **Cần bán lô đất Khu Biệt thự Đỉnh Long, Đô thị mới** **Hải Dương**- Giá: **9 triệu 500 ngàn**VND/ **Bán nhà 3.5 tầng tại kdt Đông Nam Cường** **Hải Dương**- Giá: **1 tỷ 900 triệu**VND **Bán nhà 4 tầng hướng Nam, Đinh Tiên Hoàng thuộc KĐT** **Hải Dương**- Giá: **3 tỷ 500 triệu**VND/ **Cần bán đất khu Viện Nhi Hải Dương** **Hải Dương**- Giá: **5 triệu**VND/ **Bán nhà 185 Phạm Xuân Huân khu đông Nam Cường** **Hải Dương**- Giá: **3 tỷ 200 triệu**VND/ **Cần bán nhà phố Phạm Xuân Huân** **Hải Dương**- Giá: **3 tỷ 200 triệu**VND/m2 **TP Hải Dương: Bán nhà sổ đỏ chính chủ diện tích 65m2** **Hải Dương**- Giá: VND/ **Bán khách sạn mini 5 tầng, 20 phòng, vị trí thuận lợi,** **Hải Dương**- Giá: **Thương lượng** **Cần bán nhà 2 tầng và 1 căn nhà cấp bốn 3 phòng Ngã** **Hải Dương**- Giá: **2 tỷ**VND **Bán nhà 3,5 tầng khu Vạn Lộc – Hải Dương** **Hải Dương**- Giá: **1 tỷ 400 triệu**VND/ **Bán đất mặt phố tại đường Tuệ Tĩnh kéo dài (vị** **Hải Dương**- Giá: **Thương lượng** **Cần bán 52,5m2 đất** **Hải Dương**- Giá: VND **Cần bán nhà số 29/312 đường Nguyễn Lương Bằng, TP** **Hải Dương**- Giá: **6 triệu**VND **Bán đất thổ cư 87m2 mặt đường Lê Cảnh Tuân,thành** **Hải Dương**- Giá: **9 triệu**VND/ **Cần bán nhà 2 tầng tại ngõ 293 Ngô Quyền. TP Hải Dương** **Hải Dương**- Giá: **1 tỷ 100 triệu**VND

P3P: CP="NOI ADM DEV PSAi COM NAV OUR OTRo STP IND DEM"

Cache-Control: post-check=0, pre-check=0


markdown:
Important
Safety Tips
Safety Tips
- Meet the seller and pet in person
- Don’t wire money or take advance payments.
- Only pay for shipping if you know the seller.
To learn more, visit the
[Safety Center](/info/safety/).
Report suspicious listings by clicking on
.
To learn more, visit the
[Safety Center](/info/safety/).
Report suspicious listings by clicking on
.

Server: Apache/2.2.23 (Unix) mod_ssl/2.2.23 OpenSSL/1.0.1g DAV/2

Set-Cookie: a=dT1EODQ1RTQ5QjU1NjBCOTI4; expires=Fri, 01-Jan-2038 20:00:00 GMT; path=/; domain=.oodle.com

P3P: CP="DSP IDC CUR ADM PSA PSDi OTPi DELi STP NAV COM UNI INT PHY DEM"

Vary: Accept-Encoding


markdown: Phim.org Xem phim nhanh nhất - Nguồn phim được cập nhật tự động từ các website chia sẽ video miễn phí như: Youtube.com, Clip.vn, Dailymotion.com, Zing.vn... Nếu muốn tranh chấp bản quyền video vui lòng Liên hệ BQT website, chúng tôi sẽ xem xét gỡ bỏ trong thời gian sớm nhất.

Cache-Control: max-age=0, no-cache, no-store, must-revalidate, post-check=0, pre-check=0


markdown:
Không tìm thấy kết quả phù hợp : Ngày Hôm Qua Tâp 30
Diễn viên
Ngày Hôm Qua Tâp 30, bộ phim Ngày Hôm Qua Tâp 30 hoặc đạo diễn Ngày Hôm Qua Tâp 30
mà bạn đang vừa tìm kiếm hiện chưa có trên PhimCK.com, hoặc đã bị xóa.
chúng tôi sẽ cập nhật thông tin về
Ngày Hôm Qua Tâp 30 trong thời gian ngắn nhất có thể

Pragma: private


markdown:
Vui lòng gõ tiếng Việt có dấu. Những bình luận trái với thuần phong mỹ tục sẽ bị xóa!
Ban quản trị có quyền xóa tài khoản có hành vi bình luận thiếu văn hóa mà không cần thông báo!

Server: Apache/2.2.23 (CentOS)


markdown:
Đăng Ký Nhận Phim Mới
Quản trị website: Huỳnh Mai Anh Kiệt (Quy Nhơn - Bình Định) - Email: HuynhMaiAnhKiet@Gmail.Com - Điện thoại: 0905567654.
Ghi rõ nguồn "wWw.PhimViet.Us" khi bạn phát hành lại thông tin từ website này.
Website tương thích tốt nhất với trình duyệt FireFox hoặc Google Chrome và độ phân giải màn hình 1024x768 pixels.

Accept-Ranges: bytes


markdown:
-
- Thứ 7, 23/05/2015, 23:24 PM
-
-
[Xã hội](http://phunutoday.vn/xa-hoi.html)
-
-
[Làm Mẹ](http://phunutoday.vn/lam-me.html)
-
-
[Sức khỏe](http://phunutoday.vn/suc-khoe.html)
-
-
[Làm đẹp](http://phunutoday.vn/dep.html)
-
-
[Thời trang](http://phunutoday.vn/thoi-trang.html)
-
-
[Xi nhan](http://phunutoday.vn/xi-nhan.html)
-
-
[Giải trí](http://phunutoday.vn/giai-tri.html)
-
-
[Chia sẻ](http://phunutoday.vn/chia-se.html)
-
-
[Khám phá](http://phunutoday.vn/kham-pha.html)
-
-
[Ảnh nóng](http://phunutoday.vn/anh-nong.html)
"Sau khi sự việc xảy ra, ca sĩ Đàm Vĩnh Hưng và tôi có nhắn tin cho nhau. Anh ấy xin lỗi và khuyên tôi đừng buồn, hãy coi đó như một cái nạn và động viên tôi cố gắng đứng lên bởi sau mình còn có rất nhiều người", tỳ kheo Thích Giác Ân, một trong hai nhà sư bị ca sĩ Đàm Vĩnh Hưng hôn trong đêm nhạc từ thiện, cho biết trong lúc thầy bị cấm túc tại chùa Quan Âm (thị xã Hồng Ngự, tỉnh Đồng Tháp) 3 tháng để sám hối.
[links()]
**"Đừng buồn**"
Không có thói quen lưu tin nhắn nhưng sư thầy Thích Giác Ân nhớ rất rõ những dòng
[chia sẻ](http://phunutoday.vn/tu-khoa-tim-kiem/chia-sẻ.html) mà ca sĩ Đàm Vĩnh Hưng nhắn cho thầy sau khi những hình ảnh màn hôn má, khóa môi phản cảm được đăng tải trên nhiều trang báo.
Thầy cho biết: "Anh Hưng có nhắn tin xin lỗi tôi rồi nói đó là cái nạn lớn của mình thì mình phải chịu. Chuyện này không có gì là sắp đặt cả, chỉ là chuyện xảy ra ngoài ý muốn mà thôi. Nụ hôn khi ấy chỉ là tình cờ nhằm đáp lại mối thâm tình với nhau và kêu gọi từ thiện".
|
|![]()
|Đàm Vĩnh Hưng viết thư xin lỗi Phật tử và người hâm mộ|
Hai ngày sau khi sư thầy Giác Ân bị tạm thời rút quyết định trụ trì chùa Quan Âm, ông hoàng nhạc Việt lại tiếp tục nhắn tin động viên thầy.
"Khi nhận quyết định tạm truất quyền trụ trì tôi hơi sốc bởi mình đi làm từ thiện mà vấp cái lỗi lớn quá. Anh Hưng nhắn tôi đừng có buồn. Anh ấy nói tội nghiệp cho quý thầy nhiều hơn vì sức ép của quý thầy còn nặng hơn bên giới showbiz. Anh Hưng động viên tôi cố gắng đứng lên bởi sau tôi còn có rất nhiều người", thầy Giác Ân chia sẻ.
Cũng theo thầy Giác Ân, Đàm Vĩnh Hưng là người tốt, chỉ vì tình cờ, lỡ hôn mà tạo nên một chuyện nhạy cảm với quần chúng, chứ không đem tâm ác ý hại nhau.
Trước đó, sau khi sự việc xảy ra, phải gánh chịu hình phạt biệt chúng, thầy Giác Ân cũng không hề oán trách Đàm Vĩnh Hưng.
Cùng nhắn tin chia sẻ với sư thầy Thích Giác Ân khi thầy bị tạm truất quyền trụ trì chùa Quan Âm, ca sĩ Lệ Quyên cũng khuyên thầy đừng buồn và chán nản.
|
|Đàm Vĩnh Hưng hôn sư và một năm tâm động **Hết biệt chúng sẽ đi từ thiện**
Theo quyết định của Thường trực Ban trị sự tỉnh hội Phật giáo Đồng Tháp, ngoài việc bị tạm truất quyền trụ trì, sư thầy Giác Ân còn bị cấm túc 3 tháng tại chùa Quan Âm để sám hối.
Thầy Giác Ân cho biết, điều thầy thấy đau xót nhất là rất nhiều phật tử đã từ bỏ thầy. "Họ gọi điện thắc mắc: Thầy là thầy chùa mà sao lại đi vào phòng trà, ca nhạc như thế? Họ không biết tôi đến đó để làm từ thiện".
|
|![]()
|Nụ hôn gây tranh cãi của ca sĩ Đàm Vĩnh Hưng với nhà sư trong đêm nhạc từ thiện 4/11|
Trong thời gian cấm túc, công việc hàng ngày của sư thầy Giác Ân là quét chùa, tụng kinh niệm Phật, đọc sách... và không ra khỏi chùa. Nếu có việc phải đi xa thì xin phép thầy lớn.
Thầy Giác Ân chia sẻ, sau khi xảy ra sự việc đáng tiếc trong đêm từ thiện, thầy và thầy Pháp Định bảo nhau chịu đựng, gắng tu vì đấy là cái nghiệp của mình, mình phải trả.
Hai nhà sư cầu mong mọi người sẽ tha thứ cho lỗi lầm của mình.
"Ai tha thứ được thì tha thứ, ai chửi bới thì đành chịu vì cá nhân mỗi người khác nhau. Chỉ mong mọi người biết thương yêu nhau, vì nhau và giúp nhau".
Dự định sau thời gian biệt chúng, hai nhà sư Giác Ân và Pháp Định sẽ đi làm từ thiện ở miền núi phía Bắc. "Chúng tôi muốn ủng hộ tiền để đồng bào miền núi có tiền mua gạo. Phật tử nào thương tình thì ủng hộ, không có chúng tôi sẽ kêu gọi gia đình mình", nhà sư Giác Ân cho biết.
Tuy nhiên, nhà sư cũng nhấn mạnh, tâm ý của hai thầy muốn làm từ thiện không phải vì vụ việc đáng tiếc vừa xảy ra, mà đó là cái tâm của các thầy muốn phụng sự cho đời.
Giấy phép số: 1450/GP do Sở TTTT Hà Nội cấp ngày 21/5/2014.
Bản quyền và phát triển bởi Công ty cổ phần Truyền thông Kết Nối Sáng Tạo.
Địa chỉ: P3005, Toà nhà 34T, Hoàng Đạo Thuý, Cầu Giấy, Hà Nội.
Đường dây nóng: 0976791616 - Email:
[tkts@phunutoday.vn](mailto:tkts@phunutoday.vn).
Liên hệ Quảng cáo: 0963 888 883

Server: Apache/2.2.15 (CentOS)

Cache-Control: max-age=600, private, must-revalidate


markdown:
|
|
|
|
8
thành viên
|5652
||207
||169
||4
|
Nhạc Ngoại - Lời: Nguyên Lộc
|1438
||52
||41
||5
|
Cao Tâm
|433
||3
||2
|
## Tên bài hát: xuan da ve
|2
|
Nhạc Việt NamHải Băng
|3
|
Nhạc ca sĩ mớiHoàng Yến Chibi
|4
|
Nhạc Việt NamCao Thái Sơn
|5
|
Nhạc Việt NamTam Hổ
|6
|
Nhạc Việt NamPhạm Trưởng
|7
|
Nhạc Việt NamPhạm Trưởng
|8
|
Nhạc Việt NamHồ Việt Trung; Hồ Quang Hiếu
|9
|
Nhạc ca sĩ mớiCao Tùng Anh; Hoàng Nhật Anh
|10
|
Nhạc Việt NamKhởi My
|11
|
Nhạc Việt NamPhạm Trưởng
|12
|
Nhạc Việt NamHồ Quang Hiếu
|13
|
Nhạc Việt NamKhắc Việt
|14
|
Nhạc Việt NamAnh Quân Idol
|15
|
Nhạc Việt NamHồ Quang Hiếu

Server: nginx admin

Cache-Control: no-cache, pre-check=0, post-check=0

Set-Cookie: ads_time=i%3A2%3B; expires=Sun, 22-May-2016 16:25:30 GMT; path=/; domain=.yeucahat.com


markdown:
# Gương thần
![Ca sĩ Baby J Trúc Diễm Ca sĩ Baby J Trúc Diễm](http://cainhaccho.net/anh-ca-si/baby-j-truc-diem.jpg)
![Ca sĩ Baby J Trúc Diễm Ca sĩ Baby J Trúc Diễm](http://cainhaccho.net/anh-ca-si/baby-j-truc-diem.jpg)
[Baby J Trúc Diễm](/ca-si/baby-j-truc-diem/)
Album:
Sáng tác:
Số lượt tải: 2
[Tiểu sử Baby J Trúc Diễm](/tieu-su/baby-j-truc-diem-profile/) *Cài làm nhạc chờ (trực tiếp)* **Chú ý:**Đây là bản nghe thử (đã bị cắt ngắn so với bản thật)
Soạn:
*HNC 4171*gửi *8577*
## Lời bài hát Gương thần
[Lời bài hát "Gương thần"](/loi-bai-hat/emx/guong-than.htm)
Trên cành tiếng chim lành, tỉnh được em dậy,
Và từng ngày được nhìn vào trong gương.
Gương thần ở giáng trần, ngự ở trên tường
Người phản chiếu những ước muốn của em.
Em chỉ muốn ngắm nhìn anh thôi,
Chỉ muốn biết lúc này anh đâu,
Giờ này chàng làm gì một mình,
Và cõi lòng chàng có nhớ em.
Ước muốn nắm lấy bàn tay anh,
Ước muốn khép nép nụ hôn anh,
Giữ lấy ấm áp nụ cười đó, để khỏa lấp nỗi nhớ bấy lâu,
Gương ơi gương xin hãy mang em đến bên anh,
Xin cho em bay xuyên qua thế giới gương thần,
Thật diệu kỳ tuyệt vời để thật sự được ngã vào dịu dàng vòng tay anh;
Những ước muốn nhỏ bé đang thao thức bao đêm,
Trong chiêm bao em mơ sao gương có hay rằng,
Là từng ngày được thực sự tỉnh dậy vì...tiếng nói anh đánh thức em thôi.
## Nhạc chuông liên quan
**Tên bài nhạc chuông**Ca sĩ **Nghe**
thử
thử
## HD tải nhạc chuông "Gương thần"
**Để nghe nhạc chuông Gương thần- Baby J Trúc Diễm**, trình duyệt/ browser của bạn cần cài flash và javascript.
Chú ý: Nếu bài nhạc chuông "Gương thần" là
**miễn phí**, bạn có thể nghe đầy đủ cả bài và tải về máy tính miễn phí, ngược lại bạn chỉ được nghe bản đã bị cắt ngắn.
Tainhacchuong.org hỗ trợ tải nhạc chuông bài hát Gương thần về điện thoại qua tin nhắn sms và về máy tính.
Để đánh giá bài nhạc chuông, bạn đưa chuột vào biểu tượng sao đánh giá 1 - 2 - 3 - 4 hay 5 sao cho bài hát đang nghe.
Lời bài hát Gương thần được cập nhật liên tục, chỉ mang tính tham khảo.
Nhập tên, nội dung và click vào "Gửi" nếu bạn muốn gửi lời bình cho nhạc chuông này
**Từ khóa tìm kiếm trang này**:
Tải nhạc chuông Gương thần- Baby J Trúc Diễm về điện thoại, Download/ nghe/ Tai nhac chuong Guong than cho dien thoai di dong; Download nhac chuong Guong than, ca si Baby J Truc Diem ve may tinh; Nhac chuong bai hat Guong than Baby J Truc Diem
Bình luậnXem toàn bộ Bình luận: Tên bạn: Nội dung:

Cache-Control: max-age=3600, public


markdown: Bản quyền thuộc về Ultizen, SGame phát hành độc quyền tại Việt Nam Số 35 đường số 3 Trần Thái Tông, Q Cầu Giấy, Hà Nội Email hỗ trợ: hotro@sgame.vn | Hotline: (+84 04) 37 678 252


markdown:
**MỚI NHẤT**tại đây: **http://thienkimsteel.com.vn/gia-thep/nha-may-sat-thep-thien-kim.html**
|
|THÉP XÂY DỰNG |
|GIÁ (CHƯA VAT) |
|GIÁ (VAT)
|
|POMINA HCM |
|D6 – D8 |
||
|
15.198
|
|D10 |
||
|
14.770
|
|D12 |
||
|
14.630
|
|D14 – D22 |
||
|
14.630
|
|D25 – D32 |
||
|
14.750
|
|POMINA ĐÀ NẴNG |
|D6 – D8 |
||
|
15.374
|
|D10 |
||
|
14.900
|
|D12 |
||
|
14.840
|
|D14 – D22 |
||
|
14.800
|
|D25 – D32 |
||
|
14.920
|
|TỔ HỢP |
|D6 – D8 |
|
13.000
|
|
14.630
|
|THÉP ĐẶC CHỦNG |
|GIÁ (CHƯA VAT) |
|GIÁ (VAT)
|
|Thép tròn trơn THIÊN KIM |
|D10 - D12 |
|
15.000
|
|
16.500
|
|D14 - D40 |
|
14.800
|
|
16.280
|
|Thép tròn chuốt THIÊN KIM |
|D10 - D12 |
|
16.000
|
|
17.600
|
|D14 - D40 |
|
15.800
|
|
17.380
|
|Thép vuông đặc THIÊN KIM |
|o 10 - o 12 |
|
15.200
|
|
16.720
|
|o 14 - o 22 |
|
15.000
|
|
16.500
|
|Thép tròn trơn TỔ HỢP |
|D10 |
|
13.700
|
|
14.796
|
|D12 |
|
13.700
|
|
14.796
|
|D14 - D25 |
|
13.500
|
|
14.580
|
|Thép vuông TỔ HỢP |
|o 10 - o 18 |
|
13.700
|
|
14.796
ĐIỀU KHOẢN
ĐIỀU KHOẢN
**Thanh Toán:**30% Cọc – 70% tiền ngay; hoặc chứng thư bảo lãnh 07 ngày. **Thời gian giao hàng:**
- Thép Thiên Kim: 10 – 15 ngày từ ngày nhận cọc. Bao cắt theo yêu cầu.
- Thép Pomina : 01 ngày từ ngày nhận cọc.
**LIÊN HỆ** **Trụ sở Đà Nẵng: 0944 222 888** **Đại Lý HCM: 0916 222 888 – 0912.343.139** **Đại Lý Đồng Nai:** **0916 222 888** ![ Báo giá thép xây dựng tháng 12 năm 2012](http://thienkimsteel.com.vn/uploads/thep-cay.jpg)


markdown:
23 ThaМҒng NДғm 2015
Trang chб»§
Tin tб»©c
ChГӯnh trб»Ӣ xГЈ hб»ҷi
QuбәЈn lГҪ khoa hб»Қc
Khoa hб»Қc - CГҙng nghб»Ү
DN Дҗб»•i mб»ӣi - SГЎng tбәЎo
GiГЎo dб»Ҙc
Kinh tбәҝ
VДғn hГіa
ДҗДғng Nhбәӯp
03:38-28/12/2012
NgГ y Tбәҝt, gГіi quГ
HOГҖNG Hб»“ng-Minh
QuГ cГЎp, hГіa ra trЖ°б»ӣc hбәҝt, vГ trГӘn hбәҝt, khГҙng phбәЈi lГ nб»Ј tiб»Ғn nhau, lГ cГәng tiб»Ғn nhau, lГ dбәЎy nhau nДғng lб»ұc hб»‘i lб»ҷ sau nГ y. MГ lГ sГЎng kiбәҝn, lГ tГ¬m tГІi, lГ sб»ұ quan tГўm chi tiбәҝt Д‘бәҝn nhб»Ҝng rung cбәЈm nhб»Ҹ bГ©, kГӯn Д‘ГЎo, riГӘng tЖ° cб»§a mб»—i con ngЖ°б»қi cб»Ҙ thб»ғ xung quanh mГ¬nh. LГ gГўy dб»ұng niб»Ғm vui cГ№ng nhau, cho nhau.
LГўu rб»“i, trong mб»ҷt dб»Ӣp sang mб»ҷt nЖ°б»ӣc bбәЎn, bГўy giб»қ nЖ°б»ӣc nГ o chбәЈ lГ nЖ°б»ӣc bбәЎn, tГҙi rЖЎi tГөm Д‘Гәng vГ o thб»қi khбәҜc cб»§a giГЎp Tбәҝt Noel.
Anh TбәҘt, ngЖ°б»қi bбәЎn quen, thбәҘy tГҙi bЖЎ vЖЎ, ngЖЎ ngГЎc, lбәЎi khГҙng phбәЈi lГ nai vГ ngвҖҰ Anh rб»§ tГҙi Д‘бәҝn dб»ұ Tбәҝt Noel б»ҹ mб»ҷt gia Д‘Г¬nh ngЖ°б»қi thГўn quen. NgбәЎi, vГ lo Д‘б»§ Д‘Ж°б»қng. MГ¬nh vб»«a ngЖЎ, vб»«a nghГЁo... NhЖ°ng Д‘Ж°б»Јc mб»қi nhiб»Үt tГ¬nh quГЎ. ChЖ°a kб»ғ cГЎi vДғn hГіa ngЖ°б»қi Viб»Үt trong tГҙi, nГіi "khГҙng", hay nГіi "cГі", lГ m gГ¬ cГі Д‘Ж°б»Јc cГЎi nghД©a 100% bao giб»қ Д‘Гўu. "KhГҙng", hay "cГі" cб»§a ngЖ°б»қi Viб»Үt trong tГҙi lГ Д‘б»ғ hoГЈn binh, Д‘б»ғ rб»“i loay hoay tiбәҝp...
Cuб»‘i cГ№ng tГҙi lбәЎi nhбәӯn Д‘Ж°б»Јc cбәЈ Д‘iб»Үn thoбәЎi trб»ұc tiбәҝp cб»§a chб»§ nhГ nб»Қ, qua mГЎy nГіi cб»§a anh TбәҘt. TГҙi hiб»ғu lГөm bГөm, Д‘бәЎi Д‘б»ғ "Д‘бәҝn Д‘i, vui lбәҜm, thбәӯt lГІng". Giб»Қng nГіi cб»§a anh chб»§ nhГ rГө rГ ng lГ nГіi ra Д‘Ж°б»Јc nhiб»Ғu hЖЎn bбәЈn thГўn lб»қi nГіi. ChГәng tГҙi chuбә©n bб»Ӣ Д‘Гҙi chГәt, rб»“i sб»ӣm hГҙm sau lГӘn Д‘Ж°б»қng.
Con tГ u chбәЎy mб»ҷt mбәЎch, ГӘm бәҜng, lб»« Д‘б»«, trong Д‘бәҘt trб»қi trбәҜng tuyбәҝt. Cб»‘c nЖ°б»ӣc trГӘn bГ n trЖ°б»ӣc mбә·t tГҙi thб»үnh thoбәЈng sб»§i lГӘn tГӯ chГәt bong bГіng, nhЖ°ng khГҙng sГіng sГЎnh. NhГ¬n xuб»‘ng Д‘Ж°б»қng cao tб»‘c phГӯa dЖ°б»ӣi kia, hб»ҷi xe phГЎo Д‘ang Д‘ua nhau, thбәҝ mГ kГ¬, tГ u cб»§a mГ¬nh vЖ°б»Јt hб»Қ cб»© nhЖ° khГҙng, nhЖ° mГ¬nh Д‘ang б»ҹ trong mб»ҷt thбәҝ giб»ӣi khГЎc. Anh TбәҘt Д‘oГЎn ra cГўu hб»Ҹi trong Д‘бә§u tГҙi, bбәЈo "nom thбәҝ thГҙi, tГ u mГ¬nh Д‘ang chбәЎy Гӯt ra cЕ©ng phбәЈi trГӘn hai trДғm rЖ°б»ҹi cГўy sб»‘ mб»ҷt giб»қ". KhГҙng gian tuyбәҝt xб»‘p xГЎp ngoГ i kia lГ cбәЈ mб»ҷt cГЎi phГІng cГЎch Гўm khб»•ng lб»“, tГҙi Д‘ГЈ cбәЈm nhбәӯn ra sб»ұ ГӘm Д‘б»Ғm cб»• tГӯch Д‘Гі hб»“i sГЎng sб»ӣm nay khi Д‘i bб»ҷ Д‘бәҝn nhГ ga, mб»ҷt thб»ұc tбәҝ khoa hб»Қc, chб»© khГҙng phбәЈi lГ tЖ°б»ҹng tЖ°б»Јng.
ДҗГәng giб»қ, chi li tб»ӣi phГәt, anh bбәЎn giб»Ҙc tГҙi ra cб»ӯa, phбәЈi sбәөn sГ ng ngay nhЖ° lГӯnh biб»Үt kГӯch nhбәЈy dГ№. Thбәҝ thбәӯt. Vб»«a Д‘бә·t chГўn xuб»‘ng Д‘Ж°б»Јc bб»қ ke nhГ ga xong, con tГ u Д‘ГЈ rб»қi bГЎnh. Sб»ұ chi li tб»‘c Д‘б»ҷ nГ y rГө rГ ng hбәЎn chбәҝ cГЎi cЖЎ hб»ҷi rГ¬nh mГІ Д‘Г№a cб»Јt mб»Қi lГәc cб»§a con ngЖ°б»қi Viб»Үt trong tГҙi. ChЖ°a kб»Ӣp Д‘б»Ӣnh thбә§n, thГ¬ mб»ҷt nб»Ҙ cЖ°б»қi nhбә№ nhГ ng, mб»ҷt vГІng tay бәҘm ГЎp Д‘ГЈ chГ o Д‘Гіn chГәng tГҙi. "Jean, hГўn hбәЎnh!" Vб»«a chГ o hб»Ҹi, chГәng tГҙi vб»«a ra lбәҘy xe cб»§a Jean. BДғng qua khu rб»«ng nhб»Ҹ, vб»Ғ Д‘бәҝn cб»ӯa nhГ , chб»Ӣ vб»Ј Christelle, cГҙ bГ© Sophie, cбәӯu bГ© Thomas diб»Үn ngбәҘt trб»қi nб»“ng nhiб»Үt chГ o Д‘Гіn chГәng tГҙi, sб»ұ nб»“ng nhiб»Үt lГ m tan giГЎ ngay mб»Қi e ngбәЎi "gГўy phГӯ thГ¬ giб»қ", Д‘б»ғ kГ©o xб»ҷc chГәng tГҙi vГ o ngay cuб»ҷc lб»… Tбәҝt bб»Ғ bб»ҷn cб»§a gia Д‘Г¬nh.
Giб»қ thГ¬ tГҙi mб»ӣi tб»үnh ra, ngГҙi nhГ cб»§a Christelle vГ Jean lГ mб»ҷt nhГ bбәЈo tГ ng vДғn hГіa thбәҝ giб»ӣi! CГЎc Д‘б»“ dГ№ng, tranh, tЖ°б»Јng, kб»ү vбәӯt phбә§n lб»ӣn Д‘Ж°б»Јc mua chб»ҹ vб»Ғ tб»« nhб»Ҝng chuyбәҝn б»ҹ, chuyбәҝn Д‘i tб»« bao nhiГӘu miб»Ғn Д‘бәҘt xб»© sб»ҹ khГЎc nhau. Ngay cбәЈ chiбәҝc bГ n nбә·ng chб»Ӣch б»ҹ phГІng khГЎch nГ y cЕ©ng Д‘ГЈ chu du tб»« miб»Ғn Д‘бәЈo viб»…n Д‘Гҙng vб»Ғ! Nhiб»Ғu kб»ү vбәӯt, cГ№ng nhб»Ҝng kб»ү niб»Үm cб»§a Д‘б»қi sб»‘ng xб»© Viб»Үt hГіa ra chбәіng xa lбәЎ vб»ӣi gia Д‘Г¬nh nГ y. NhЖ°ng Д‘бәҘy lГ cбәЈ nhiб»Ғu pho truyб»Үn dГ i, thбәӯt dГ i khГЎc...
----
Chiб»Ғu vб»Ғ, sau khi Д‘ГЈ dГЈ ngoбәЎi thЖ°б»ҹng thб»©c Д‘Гҙi chГәt khГӯ lбәЎnh nhЖ°ng ngб»Қt ngГ o tinh khiбәҝt, chГәng tГҙi vГ o bб»Ҝa Дғn tб»‘i Noel thiГӘng liГӘng, chuyб»Үn trГІ, Д‘Г№a bб»Јt. Bб»Қn trбә» thГ¬ cб»© chб»‘c chб»‘c lбәЎi liбәҝc mбәҜt hoГ i Д‘бәҝn gб»‘c cГ nh thГҙng lб»ӣn dб»ұng б»ҹ cбәЎnh lГІ sЖ°б»ҹi Д‘ang Д‘б»Ҹ cб»§i. Sб»‘ lЖ°б»Јng cГЎc gГіi quГ to nhб»Ҹ lГіng lГЎnh б»ҹ chб»— Д‘бәҘy vб»«a gГўy phбәҘn khГӯch, vб»«a thб»үnh thoбәЈng lГ m tГҙi thoГЎng chГәt lo Гўu.
Rб»“i cЕ©ng Д‘бәҝn lГәc bб»Қn trбә» chб»Јt reo бә§m lГӘn. Bб»‘ mбә№ chГәng Д‘ГЈ Д‘б»“ng ГҪ, rбәұng phГәt mб»ҹ quГ Д‘ГЈ Д‘бәҝn!
HГіa ra cГі hai loбәЎi quГ . LoбәЎi "riГӘng tЖ°", vГ loбәЎi "cГҙng cб»ҷng".
LoбәЎi "riГӘng tЖ°" Д‘Ж°б»Јc Д‘i trЖ°б»ӣc.
TГҙi thГ¬ mбәЈi lo nghД© vб»Ғ giГЎ trб»Ӣ cб»§a cГЎc mГіn quГ , nhбәҘt lГ trong mб»ҷt gia Д‘Г¬nh khГЎ giбәЈ nhЖ° thбәҝ nГ y, cГІn cГўu chuyб»Үn thГ¬ lбәЎi Д‘ang Д‘Ж°б»Јc triб»ғn khai theo mб»ҷt hЖ°б»ӣng khГЎc hбәіn.
QuГ cГЎp Д‘Ж°б»Јc chuбә©n bб»Ӣ nhiб»Ғu nhбәҘt, kД© nhбәҘt, cho nhiб»Ғu ngЖ°б»қi nhбәҘt, hГіa ra lГ quГ cГЎp cб»§a hai cГҙ cбәӯu bГ©! Cб»§a cГҙ Sophie, vГ cб»§a cбәӯu Thomas.
Jean loay hoay mб»ҹ gГіi quГ to tЖ°б»ӣng cб»§a Thomas. NДғm lбә§n mб»ҹ, mб»—i hб»ҷp carton lбәЎi chб»©a mб»ҷt hб»ҷp carton nhб»Ҹ hЖЎn nб»Ҝa б»ҹ bГӘn trong... Cuб»‘i cГ№ngвҖҰ chб»ү lГ mб»ҷt tб»қ giбәҘy con, ghi nhб»Ҝng chб»ү dбә«n nЖЎi giбәҘu quГ trong nhГ , nhЖ°ng bбәұng phГ©p Д‘б»‘ toГЎn hб»Қc. Jean gГЈi Д‘бә§u, Д‘бәҝm ngГіn tay, Д‘o bЖ°б»ӣc chГўnвҖҰ Д‘i lГ№ng khбәҜp nhГ , mГЈi khГҙng thбәҘy ra.
Christelle mб»ҹ bбәЈy hб»ҷp quГ lб»ӣn. Rб»‘t cб»Ҙc nДғm hб»ҷp nб»Қ, mб»—i hб»ҷp chб»©a mб»ҷt cГЎi chГ©n con. Hб»ҷp thб»© sГЎu lГ cГЎi бәҘm trГ . Hб»ҷp thб»© bбәЈy lГ cГЎi khay nhб»Ҹ cho bб»ҷ бәҘm chГ©n... Christelle nghiб»Үn trГ xanh! MГіn quГ trГ Viб»Үt cб»§a anh TбәҘt sau Д‘Гі vб»«a khГ©o gбә·p gб»Ў bб»ҷ бәҘm trГ cб»§a lЕ© nhб»Ҹ, Д‘Ж°б»Јc chб»Ӣ nhiб»Үt thГ nh tГЎn thЖ°б»ҹng!
TГҙi Д‘Ж°б»Јc tбә·ng mбәҘy mГіn quГ vui vбә» xinh xбәҜn... VГ mб»ҷt mГіn quГ Д‘бә·c biб»Үt trong mб»ҷt cГЎi hб»ҷp to Д‘Г№ng: trong Д‘бәҘy cГі mб»—i mб»ҷt mбә©u giбәҘy viбәҝt vб»Ғ "cГЎi lб»Јi cб»§a viб»Үc hГәt thuб»‘c lГЎ", vб»ӣi chб»Ҝ kГӯ cб»§a cбәЈ nhГ ! ChГ , mб»Қi ngЖ°б»қi Д‘ГЈ kб»Ӣp Д‘iб»Ғu tra ra cбәЈ cГЎi thГіi hГәt thuб»‘c lГЎ cб»§a tГҙi rб»“i! Sau nГ y tГҙi bб»Ҹ Д‘Ж°б»Јc thuб»‘c lГЎ, khГҙng biбәҝt cГі hiб»Үu б»©ng cб»§a mбә©u giбәҘy nГ y khГҙng?
NgГҙi nhГ rб»ҷn rГЈ tiбәҝng cЖ°б»қi, tiбәҝng xГ© giбәҘy quГ . ChГә chГі В«TГҙtВ» quГЎ hЖ°ng phбәҘn, lДғn lб»ҷn khбәҜp nЖЎi, cuб»‘i cГ№ng nбәұm im gбә·m mГіn quГ cГЎi xЖ°ЖЎng nhб»ұa. CГҙ mГЁo В«TardВ» cЕ©ng mon men lДғn vбә§n Д‘б»“ khбәҜp chб»‘n, cuб»‘i cГ№ng yГӘn tГўm nбәұm Ж°б»қn ra divan lim dim ngб»§ vб»ӣi mГіn quГ cГЎi nЖЎ Д‘б»Ҹ xГӯu Д‘Ж°б»Јc Д‘Гӯnh vГІng quanh cб»•.
Vб»Ғ phбә§n mГ¬nh, tГҙi Д‘ГЈ yб»ғm sбәөn mбәҘy cГЎi phong bГ¬ con con Д‘б»ұng Гӯt tiб»Ғn, Д‘б»ғ cб»ҷm б»ҹ trong tГәi, khГ©o tГӯnh toГЎn mГЈi, sao cho Д‘б»«ng Д‘бәҜt quГЎ, mГ cЕ©ng Д‘б»«ng keo kiб»Үt bб»§n xб»үn quГЎ, mб»ҷt bГ i toГЎn thбәӯt hiб»ғm hГіc. LГәc nГ y tГҙi bб»—ng chб»Јt thбәҘy mГ¬nh Д‘ГЈ nghГЁo, lбәЎi cГІn loay hoay xГҙi thб»Ӣt. TГҙi khГ©o lГ©o ra gГіc nhГ rГәt chГәng ra, cбәҘt tб»‘ng hбәҝt vГ o ba lГҙ.
TГҙi tбә·ng chung cбәЈ nhГ mб»ҷt cГЎi tranh thГӘu cбәЈnh Д‘бәҘt nЖ°б»ӣc mГ¬nh, mб»Қi ngЖ°б»қi vui vбә» thГӯch thГә ngбәҜm nghГӯa. NhЖ°ng tГҙi cЕ©ng chб»Јt hiб»ғu ra rбәұng mГіn quГ cб»§a tГҙi nГі chung chung quГЎ, nГі thiбәҝu sб»ұ tГ¬m tГІi quan tГўm Д‘бәҝn tб»«ng con ngЖ°б»қi cб»Ҙ thб»ғ tinh tбәҝ, rГө rГ ng lГ tГҙi khГҙng cГі ГҪ tб»© tГ¬m hiб»ғu gГ¬ vб»Ғ mб»—i ngЖ°б»қi trong nhГ trЖ°б»ӣc Д‘Гі. TГҙi tб»ұ thбәҘy tГҙi mГІn vбә№t, sГЎo rб»—ng, thay vГ¬ cб»© tЖ°б»ҹng mГ¬nh nhб»Ҝng lГ minh triбәҝt phЖ°ЖЎng ДҗГҙng cб»§a khб»ү. MГіn quГ cб»§a tГҙi kб»ғ ra chб»ү chбәҘp nhбәӯn Д‘Ж°б»Јc, thГҙng cбәЈm Д‘Ж°б»Јc, mб»ҷt khi tГҙi Д‘ГЈ б»ҹ tбә§m lГЈnh tб»Ҙ cб»§a mб»ҷt xб»© sб»ҹ nГ o Д‘Гі, cб»§a mб»ҷt siГӘu cЖ°б»қng chбәіng hбәЎn, Д‘ang dб»ҹ bбәӯn trДғm cГҙng nghГ¬n viб»Үc gГ¬ Д‘бәҘyвҖҰ
Nб»ӯa tiбәҝng Д‘б»“ng hб»“ tбә·ng quГ nhau, mГ vбә«n chЖ°a xong! Jean cuб»‘i cГ№ng cЕ©ng Д‘ГЈ tГЎi xuбәҘt, mбәЎng nhб»Үn dГӯnh Д‘бә§y Д‘бә§u. Jean tГ¬m ra cГЎi bб»©c tranh anh vбәҪ Thomas tб»« ngГ y cбәӯu cГІn bГ© tГӯ, bб»©c vбәҪ dб»ҹ dang, б»ҹ trong hбә§m nhГ , bб»©c tranh mГ anh Д‘ГЈ tб»«ng kб»ғ mГЈi vб»ӣi Thomas mГ khГҙng cГІn biбәҝt nГі nбәұm б»ҹ Д‘Гўu, cГІn Thomas thГ¬ mГЈi khГҙng biбәҝt Д‘Гі lГ cГўu chuyб»Үn thбәӯt, hay cГўu chuyб»Үn hЖ°. Jean Гҙm dб»« Thomas vГ o lГІng trong cГЎi nhГ¬n Ж°б»ӣt mбәҜt cб»§a cбәЈ nhГ .
CбәЈ nhГ mб»ҹ rЖ°б»Јu Champagne, vГ chuyб»ғn sang trГІ chЖЎi "quГ cГҙng cб»ҷng". QuГ cГҙng cб»ҷng lГ Д‘б»§ cГЎc thб»© linh tinh ngб»ҷ nghД©nh, phбә§n lб»ӣn lГ nhб»Ҝng thб»© Д‘б»“ бә©m Ж°ЖЎng trong nhГ chui lбә©n б»ҹ Д‘Гўu, nay Д‘Ж°б»Јc gГіi ghГ©m tinh tЖ°ЖЎm lбәЎi, buб»ҷc nЖЎ б»ҹ trГӘn. Mб»—i ngЖ°б»қi Д‘Ж°б»Јc phГЎt mб»ҷt cбә§n cГўu, vГ cГўu quГ theo lЖ°б»Јt, trГәng gГ¬ Д‘Ж°б»Јc nбәҘy, trong tiбәҝng cЖ°б»қi ngбәҘt ngГўy.
QuГ cГЎp, hГіa ra trЖ°б»ӣc hбәҝt, vГ trГӘn hбәҝt, khГҙng phбәЈi lГ nб»Ј tiб»Ғn nhau, lГ cГәng tiб»Ғn nhau, lГ dбәЎy nhau nДғng lб»ұc hб»‘i lб»ҷ sau nГ y. MГ lГ sГЎng kiбәҝn, lГ tГ¬m tГІi, lГ sб»ұ quan tГўm chi tiбәҝt Д‘бәҝn nhб»Ҝng rung cбәЈm nhб»Ҹ bГ©, kГӯn Д‘ГЎo, riГӘng tЖ° cб»§a mб»—i con ngЖ°б»қi cб»Ҙ thб»ғ xung quanh mГ¬nh. LГ gГўy dб»ұng niб»Ғm vui cГ№ng nhau, cho nhau.
VГ vб»ӣi cГўy Д‘Г n guitar, suб»‘t Д‘ГӘm chГәng tГҙi lб»Ҙc lб»Қi tб»« trГӯ nhб»ӣ ra Д‘б»§ cГЎc loбәЎi bГ i hГЎt Д‘Гҙng tГўy kim cб»•, hГЎt hГІ vб»ӣi nhau giб»Ҙc anh Mбә·t Trб»қi thб»©c dбәӯy.
----
Sau bб»Ҝa Дғn trЖ°a hГҙm sau, anh TбәҘt vГ tГҙi bб»Ӣn rб»Ӣn hГҙn chГ o Sophie, Thomas, chб»Ӣ Christelle, cбәЈ chГә chГі TГҙt, vГ cГҙ mГЁo Tard, Д‘б»ғ ra vб»Ғ. Chia sбә» vб»ӣi nhau mбәҘy chб»Ҙc tiбәҝng Д‘б»“ng hб»“, mГ lГІng cбәЈm thГҙng nay Д‘ГЈ Д‘б»Қng lбәЎi thГ nh vГҙ biГӘn.
Ra Д‘бәҝn bб»қ ke nhГ ga, Jean dбә·n chГәng tГҙi phбәЈi Д‘б»©ng Д‘Гәng vбәЎch sЖЎn Д‘ГЈ vбәҪ cб»ӯa lГӘn xuб»‘ng cho sб»‘ cб»§a toa tГ u Д‘ГЈ in trГӘn vГ© cб»§a chГәng tГҙi. "ДҗГўy lГ bбәҝn phб»Ҙ, tГ u chб»ү dб»«ng Д‘Гәng mб»ҷt phГәt thГҙi". Con tГ u cao tб»‘c vГ o ke, Д‘Гўy rб»“i, cб»ӯa tГ u soбәЎt nhбә№ mб»ҹ. ДҗГәng lГ chГӯnh xГЎc tб»ӣi phГәt giГўy vГ tб»ӣi centimГЁtre! ChГәng tГҙi Гҙm hГҙn Jean thбәӯt nhanh, trГЁo vб»Ҙt lГӘn tГ u, vГ hГ¬nh bГіng Jean thГўn thЖ°ЖЎng Д‘ГЈ tб»« tб»« ngЖ°б»Јc toa tГ u trГҙi vб»Ғ phГӯa xa...
ThЖ° bбәЎn Д‘б»Қc
Hб»Қ tГӘn
*
Дҗб»Ӣa chб»ү
Email
*
Nб»ҷi dung
*
Cбәӯp Nhбәӯt
Hб»§y
CГЎc tin Д‘ГЈ Д‘Ж°a
Cuб»ҷc trГІ chuyб»Үn trГӘn yГӘn xe mГЎy* - (27/12)
ДҗГӘm nhбәЎc cб»• Д‘iб»ғn вҖңNgЖ°б»қi chДғn cб»«u trГӘn nГәiвҖқ - (26/12)
Hiб»Үn tЖ°б»Јng Rafal Blechacz - (25/12)
Trong mб»ҷt dГІng ГҪ thб»©c - (21/12)
Nhб»Ҝng bГ i hб»Қc thuб»ҷc lГІng mб»ҷt thuб»ҹ - (19/12)
KTS VГө Trб»Қng NghД©a Д‘oбәЎt giбәЈi NhГ thiбәҝt kбәҝ tiГӘn phong - (17/12)
Hiб»Үn thб»ұc, Д‘ЖЎn thб»ғ, Д‘a thб»ғ, phб»©c thб»ғ - (14/12)
вҖңNgЖ°б»қi kб»ғ chuyб»ҮnвҖқ - (13/12)
Cбә§n thay Д‘б»•i cГЎi nhГ¬n vб»Ғ thб»қi kб»і thuб»ҷc Д‘б»Ӣa - (11/12)
SiГӘu gб»Қn - (07/12)
In бәҘn
Gб»ӯi Email
Quay lбәЎi
Дҗб»Қc nhiб»Ғu nhбәҘt
Mб»ҷt chб»— cho tiбәҝng cЖ°б»қi
HЖ°б»ӣng vб»Ғ vui sб»‘ng
BЖ°б»ӣc vГ o thбәҝ giб»ӣi cб»§a nhб»Ҝng ngЖ°б»қi tбәЎo ra nhб»Ӣp sб»‘ng HГ Nб»ҷi
вҖңMбәҘt Д‘oГ n kбәҝtвҖқ trЖ°б»ӣc nГ ng Lolita
Gieo hi vб»Қng tб»« phГӯm Д‘Г n
Birdman вҖ“ Дҗбәӯp cГЎnh bбәұng mб»ҷt cГә mГЎy
TГ¬m vб»Ғ cГЎ tГӯnh HвҖҷMГҙng
CГЎc khuyбәҝt tбәӯt lб»ӣn cб»§a cГЎc diб»…n giбәЈ
вҖңViбәҝt bб»ҹi Phu nhГўn BachвҖқ?
BГ n vб»Ғ вҖңlinh vбәӯtвҖқ trong vДғn hГіa Viб»Үt Nam
Mб»ӣi nhбәҘt
Cristofori, cha Д‘бә» cб»§a Д‘Г n piano
Ra mбәҜt вҖңLГІng NgЖ°б»қi MГӘnh Mang - 2вҖқ
вҖңMбәҘt Д‘oГ n kбәҝtвҖқ trЖ°б»ӣc nГ ng Lolita
NДғm cuб»ҷc luбәӯn chiбәҝn trong giб»ӣi nhбәЎc cб»• Д‘iб»ғn
CГЎc khuyбәҝt tбәӯt lб»ӣn cб»§a cГЎc diб»…n giбәЈ
TбәЎp chГӯ
Tia SГЎng - tiasang.com.vn
CЖЎ quan chб»§ quбәЈn: Bб»ҷ Khoa hб»Қc CГҙng nghб»Ү. GiбәҘy phГ©p: Sб»‘ 17/GP-TTДҗT ngГ y 24/01/2011.
TГІa soбәЎn: 70 Trбә§n HЖ°ng ДҗбәЎo - HГ Nб»ҷi, Tel: (043)-9426376, Fax: (043)-9426375, Email: tctiasang@gmail.com, tiasang@fpt.vn
YГӘu cбә§u ghi rГө nguб»“n tб»« http://tiasang.com.vn khi bбәЎn trГӯch dбә«n nГҙi dung tб»« website nГ y
Hб»Ү thб»‘ng Д‘Ж°б»Јc xГўy dб»ұng trГӘn cГҙng nghб»Ү Cб»•ng thГҙng tin Д‘iб»Үn tб»ӯ VietPortal

Set-Cookie: language=vi-VN; path=/; HttpOnly


markdown:
[Home](http://tinanninh.com) [Tin Tức Trong Ngày](http://tinanninh.com/tin-tuc-trong-ngay-3/)Cô gái nhảy thoát y trong phòng trọ bị lên án kịch...
# Cô gái nhảy thoát y trong phòng trọ bị lên án kịch liệt
## Trong Clip nhảy thoát y trong phòng trọ, cô gái nhanh chóng cởi phăng váy ngoài, chỉ mặc mỗi nội y và “lắc lư” điên cuồng.
Đoạn
**Clip nhay thoat y trong phong tro** kéo dài gần 3 phút quay lại cảnh, trong tiếng nhạc chát chúa, cô gái nhanh chóng cởi phăng chiếc váy bên ngoài, chỉ mặc bộ nội y màu đen bên trong và bắt đầu “lắc lư điên cuồng” ngay trong phòng trọ.
Có những đoạn màn uốn éo, lắc lư của cô gái chẳng khác gì vũ công chuyên nghiệp. Bên cạnh đó, cô còn được cổ vũ bởi người quay lại đoạn clip.
Rất nhiều các ý kiến khác nhau về đoạn clip này đã được chia sẻ. Nhiều ý kiến cho rằng, đây là hình ảnh hết sức lố bịch, kệch cỡm, làm hỏng hình ảnh thiếu nữ Việt Nam… thậm chí có ý kiến còn cho rằng cô gái này do “phê thuốc” nên mới có hành động vậy.
“Nếu
*Clip nhay thoat y trong phong tro* xem với nhau cá nhân thôi thì không sao nhưng quay lại rồi để đưa lên mạng thế này thì quá là lố bịch, quái dị hết cỡ.
Gì mà lại mặc mỗi nội y để mà nhảy nhót như thế. Tôi cảm thấy thật xấu hổ và dường như nó làm cho hình ảnh người phụ nữ bị biến dạng thô tục đi trước mặt mọi người”, nickname Ot Gio viết.
Theo thông tin ban đầu thì cô gái này được cho là đến từ Thái Nguyên.
Mời độc giả xem đoạn Clip nhay thoat y trong phong tro và để lại ý kiến bình luận :
[jwplayer mediaid=”19411″]
dien cung phai dien cho ra hon. dien kieu day chet chang ai thuong dau.
dien cung phai dien cho ra hon. dien kieu day chet chang ai thuong dau.
dien cung phai dien cho ra hon. dien kieu day chet chang ai thuong dau.
????may kon nay k co gi lam,zdo hoi wa
????may kon nay k co gi lam,zdo hoi wa
????may kon nay k co gi lam,zdo hoi wa
chẳng có gì hót cả. sao ko cởi hết ra nhỉ. đằng nào cũng mang tiếng rùi hik.
chẳng có gì hót cả. sao ko cởi hết ra nhỉ. đằng nào cũng mang tiếng rùi hik.
Em hồn nhiên như con điên… Đã ngu còn đánh đu muốn làm người nổi tiếng. Lố lăng như con khỉ khiêu dâm. Mà so sánh em này với khỉ, không khéo mình lại bị kiện vì tội xúc phạm động vật. Mất mặt chị em quá!
may` py dai ha? do ngua
đầu óc bã đậu.
đầu óc bã đậu.
nguoi xau ma nhay cung xau nua.chag jog ai ca.
Do ngua dien
con khung, con nay bị đú thong cam nhe các ban
con này học hành cái gì chứ? sao không đi làm gái nhỉ……. thật là đồ vô văn hóa
BÌNH THƯƠNG MÀ
con nay them khat di ba nhung ko co ai moi o nha cho nen lung chac ban tinh ban thiu kho ai them
con ya bị điên roi cho vao trại tâm thàn đi
hay thì có hay đấy…nhưng mà dở lắm.

CF-Cache-Status: EXPIRED

Cache-Control: public, max-age=1800


markdown:
TruyệnĐọc.Mobi
xem phim xec em dau loan luan voi anh chong
HOME
CHAT
TRUYỆN
Forumviet.Mobi - Chơi game avatar ngay trên wap, đang đẫn đầu trên xu thế di động, tham gia để chém gió nào!
WAPCHOI.MOBI - Trang wap game, wap tải nhạc hình nền khủng nhất việt nam
xem phim xec em dau loan luan voi anh chong
TAGS:
xem phim xec em dau loan luan voi anh chong
,
tai xem phim xec em dau loan luan voi anh chong
,
download xem phim xec em dau loan luan voi anh chong
,
xem phim xec em dau loan luan voi anh chong moi 2014
,
xem xem phim xec em dau loan luan voi anh chong miễn phí
Bình Luận Về xem phim xec em dau loan luan voi anh chong
Lên Trên
Chia sẻ bài viết
Chào Bạn Mình Muốn Chia Sẽ Bài Viết Này [url=http://truyendoc.mobi/tag/xem phim xec em dau loan luan voi anh chong]xem phim xec em dau loan luan voi anh chong[/url] Hi Vọng Là Sẽ Có Ít Cho Bạn Nguồn: Seo.Waptin.Net
Thống Kê
Trang chủ
©
Truyendoc.mobi

Set-Cookie: hosty=1; expires=Sun, 24-May-2015 00:00:00 GMT