markdown:
##
[Cung cấp 0982916906 giá 430000 tại Phường 8 Quận Tân Bình TPHCM](http://kk.simsomobi.com/2016/10/cung-cap-0982916906-gia-430000-tai.html)
Có nhiều cách nghĩ về sử dụng số đẹp giá gốc. Có rất nhiều người cho rằng chỉ cần có sim nghe gọi là được, số tiền trong tài khoản có nhiều thì càng tốt,.. Nhưng khi cuộc sống con người được nâng lên, rất nhiều nhu cầu của con người cần được thỏa mãn, trong các nhu cầu thì nhu cầu ‘’Đẹp’’ là đầu tiên. Nhu cầu làm đẹp bản thân, nhu cầu thời trang đẹp, nhu cầu nhà đẹp, xe đẹp, ,... và nhu cầu dùng số đẹp dễ nhớ cũng không ngoại lệ. Có nhiều lý do chính đáng để sử dụng số đẹp giá gốc. Dùng sim số đẹp giúp các bạn tự tin hơn trong giao tiếp, dễ thành công trong công việc. Mỗi người có một sở thích khác nhau, có nhiều người thích số đẹp dễ nhớ, lại có người chọn mua sim gắn với ngày sinh nhật, có người chọn sim theo biển số xe, ngày cưới, ngày thành lập công ty,... Trong kinh doanh, với nhiều người việc chọn mua và dùng sim số đẹp là rất quan trong, họ thường tìm mua những sim lộc phát, sim thần tài, xem phong thủy hợp tuổi, hợp mệnh,..Với họ sim điện thoại ngoài chức năng giao tiếp nghe gọi, còn mang nhiều ý nghĩa thần bí, với niềm tin mang lại nhiều vân may về tiền tài, công việc và công danh. Có nhiều người sẵn sàng bỏ tiền, bỏ thời gian để tìm cho mình những sim có nhiều ý nghĩa nhất, tao nên sự đẳng cấp và phong cách riêng của mình. Dưới đây chúng tôi đưa ra một ít sim số đẹp dễ nhớ để quý khách lựa chọn.
0969789415 ………………giá………………. 450000
0971609177 ………………giá………………. 430000
0986562967 ………………giá………………. 430000
0969789716 ………………giá………………. 550000
0967818964 ………………giá………………. 450000
0971333956 ………………giá………………. 450000
0967342770 ………………giá………………. 430000
0975972790 ………………giá………………. 430000
0969780122 ………………giá………………. 430000
0963652897 ………………giá………………. 430000
0977777292 ………………giá………………. 6550000
0961888086 ………………giá………………. 2450000
0979937228 ………………giá………………. 480000
0965616496 ………………giá………………. 430000
0986205876 ………………giá………………. 450000
0974009286 ………………giá………………. 480000
0975995524 ………………giá………………. 430000
0978357896 ………………giá………………. 550000
0986213629 ………………giá………………. 430000
0986563382 ………………giá………………. 430000
0972337761 ………………giá………………. 430000
0977682038 ………………giá………………. 430000
0948130790 ………………giá………………. 599000
0966836771 ………………giá………………. 430000
0904910359 ………………giá………………. 720000
0989618087 ………………giá………………. 430000
01233330001 ………………giá………………. 790000
0988874554 ………………giá………………. 1000000
0983991687 ………………giá………………. 550000
01238223456 ………………giá………………. 2550000
0965777304 ………………giá………………. 430000
0971699440 ………………giá………………. 450000
0979919018 ………………giá………………. 520000
0983629944 ………………giá………………. 550000
0942260281 ………………giá………………. 599000
0988698624 ………………giá………………. 450000
0968951987 ………………giá………………. 2100000
0989697290 ………………giá………………. 450000
01248216868 ………………giá………………. 3500000
0987090796 ………………giá………………. 1300000
Lúc này, bạn đã có thể mua. Cho dù quý vị ở tỉnh thành nào? và bất cứ lúc nào trên mọi miền tổ quốc cũng đừng ngần ngại, vì chỉ với 1 cú lick chuột bạn cũng đã đặt mua ngay được 1 chiếc sim số đẹp giá mềm nhất. Trường hợp quý vị đã chọn được số đẹp giá rẻ ở tại đây đừng ngần ngại hãy liên hệ với chúng tôi theo số điện thoại 01212357357 để được tư vấn thêm.
0914132211 ………………giá………………. 3000000
0918460550 ………………giá………………. 2600000
0943841010 ………………giá………………. 1500000
0916066608 ………………giá………………. 4200000
01999173222 ………………giá………………. 500000
0912399405 ………………giá………………. 1100000
01689409777 ………………giá………………. 890000
0973481122 ………………giá………………. 1800000
0913790642 ………………giá………………. 1200000
01275076789 ………………giá………………. 3000000
0904931906 ………………giá………………. 860000
0918521516 ………………giá………………. 1400000
0949901155 ………………giá………………. 1300000
0918424024 ………………giá………………. 1400000
0942885088 ………………giá………………. 1300000
0949421987 ………………giá………………. 3100000
0981334567 ………………giá………………. 36000000
0949414646 ………………giá………………. 1400000
0944615885 ………………giá………………. 1300000
0944866166 ………………giá………………. 1800000
0969789415 ………………giá………………. 450000
0971609177 ………………giá………………. 430000
0986562967 ………………giá………………. 430000
0969789716 ………………giá………………. 550000
0967818964 ………………giá………………. 450000
0971333956 ………………giá………………. 450000
0967342770 ………………giá………………. 430000
0975972790 ………………giá………………. 430000
0969780122 ………………giá………………. 430000
0963652897 ………………giá………………. 430000
0977777292 ………………giá………………. 6550000
0961888086 ………………giá………………. 2450000
0979937228 ………………giá………………. 480000
0965616496 ………………giá………………. 430000
0986205876 ………………giá………………. 450000
0974009286 ………………giá………………. 480000
0975995524 ………………giá………………. 430000
0978357896 ………………giá………………. 550000
0986213629 ………………giá………………. 430000
0986563382 ………………giá………………. 430000
0972337761 ………………giá………………. 430000
0977682038 ………………giá………………. 430000
0948130790 ………………giá………………. 599000
0966836771 ………………giá………………. 430000
0904910359 ………………giá………………. 720000
0989618087 ………………giá………………. 430000
01233330001 ………………giá………………. 790000
0988874554 ………………giá………………. 1000000
0983991687 ………………giá………………. 550000
01238223456 ………………giá………………. 2550000
0965777304 ………………giá………………. 430000
0971699440 ………………giá………………. 450000
0979919018 ………………giá………………. 520000
0983629944 ………………giá………………. 550000
0942260281 ………………giá………………. 599000
0988698624 ………………giá………………. 450000
0968951987 ………………giá………………. 2100000
0989697290 ………………giá………………. 450000
01248216868 ………………giá………………. 3500000
0987090796 ………………giá………………. 1300000
Lúc này, bạn đã có thể mua. Cho dù quý vị ở tỉnh thành nào? và bất cứ lúc nào trên mọi miền tổ quốc cũng đừng ngần ngại, vì chỉ với 1 cú lick chuột bạn cũng đã đặt mua ngay được 1 chiếc sim số đẹp giá mềm nhất. Trường hợp quý vị đã chọn được số đẹp giá rẻ ở tại đây đừng ngần ngại hãy liên hệ với chúng tôi theo số điện thoại 01212357357 để được tư vấn thêm.
0914132211 ………………giá………………. 3000000
0918460550 ………………giá………………. 2600000
0943841010 ………………giá………………. 1500000
0916066608 ………………giá………………. 4200000
01999173222 ………………giá………………. 500000
0912399405 ………………giá………………. 1100000
01689409777 ………………giá………………. 890000
0973481122 ………………giá………………. 1800000
0913790642 ………………giá………………. 1200000
01275076789 ………………giá………………. 3000000
0904931906 ………………giá………………. 860000
0918521516 ………………giá………………. 1400000
0949901155 ………………giá………………. 1300000
0918424024 ………………giá………………. 1400000
0942885088 ………………giá………………. 1300000
0949421987 ………………giá………………. 3100000
0981334567 ………………giá………………. 36000000
0949414646 ………………giá………………. 1400000
0944615885 ………………giá………………. 1300000
0944866166 ………………giá………………. 1800000
## 0 nhận xét:
## Đăng nhận xét


markdown:
Xuất Khẩu Lao Động
Đất Nước Con Người
Chi Nhánh Công Ty
Đơn Hàng Lao Động
Bạn Cần Biết
Đối Tác
HÃY LIKE PAGE HỮU ÍCH
Số lượt xem
Hỗ Trợ tư vấn 24/7 Hotline: 0982 686 028 - Mr Hải
Đối tác: Học kế toán thực hành - Học kế toán thực tế - học kế toán tại tphcm- dịch vụ kế toán - học kế toán tại hải phòng

WARC-Type: response

Content-Type: application/http; msgtype=response

WARC-Truncated: length

WARC-Identified-Payload-Type: application/xhtml+xml

Server: nginx

Connection: close

Pragma: no-cache

Cache-Control: no-store, no-cache, must-revalidate, post-check=0, pre-check=0

Vary: Accept-Encoding

Content-Type: text/html


markdown:
## Bán hàng đa cấp Oriflame Herbalife có lừa đảo không ?
Là sinh viên năm 2, mình cũng từng đến tham gia một số buổi hội thảo của các công ty kinh doanh
Thuyết trình viên thì cứ lải nhải, thao thao bất tuyệt về sản phẩm của mình. Có 1 từ mà phải lặp lại đến hơn năm chục lần trong vòng 20 phút, thế thì khác gì tra tấn người nghe.
**bán hàng đa cấp**. Ví dụ như **Oriflame, Herbalife**. Vậy các bạn đã từng tham gia những buổi hội thảo như thế bao giờ chưa ?
Thuyết trình viên thì cứ lải nhải, thao thao bất tuyệt về sản phẩm của mình. Có 1 từ mà phải lặp lại đến hơn năm chục lần trong vòng 20 phút, thế thì khác gì tra tấn người nghe.
[Oriflame Herbalife Ở buổi hội thảo của](http://banhangdacapmlm.files.wordpress.com/2012/10/images-16.jpg) ![Oriflame Herbalife Oriflame Herbalife](http://banhangdacapmlm.files.wordpress.com/2012/10/images-16.jpg)
![Oriflame Herbalife Oriflame Herbalife](http://banhangdacapmlm.files.wordpress.com/2012/10/images-16.jpg)
**, người ta hỏi có ai là người biết đến** [Giảm cân Herbalife](http://herbalifevina.com/vn/product-979-981-4883/bo-herbalife-gia-re-giam-can-herbalife.htm) **Giảm** **cân Herbalife**lần đầu tiên, thì chỉ có 2 người. 1 trong số đó là mình. Đang ngồi nghe thì có 1 chị, đang ngồi trên bàn đầu, bàn đại biểu ấy, chị ấy chạy thẳng xuống, giúi vào tay mình 1 tờ giấy ghi nguyệch ngoạc 4 câu hỏi. “Nhờ em tí lên đặt câu hỏi dùm ?”. Rồi nghe thêm 1 tí, “mời các bạn mua 1 bộ túi xách + tài liệu trị giá 400 nghìn.” Eo ơi, khiếp ! Sinh viên cả, gần 1 nửa tiền phòng 1 tháng đấy !
Trong kinh doanh, có khi mời khách hàng ăn tối 1 bữa, vài trăm đến hơn triệu, nhưng mà không tiếc, vì mình đang cố gắng nắm lấy cơ hội cao hơn, đằng này thì, bỏ 400 nghìn ra, mua bộ như thế, ”tiếc đứt ruột”.
Trên TV, đài báo có nói đến sự thành công của rất nhiều công ty kinh doanh theo dạng
Trên TV, đài báo có nói đến sự thành công của rất nhiều công ty kinh doanh theo dạng
**bán hàng đa cấp**. Thế nhưng tại sao khi về đến VN nó lại trở thành 1 đống bùi nhùi hỗn tạp như vậy ?
Mình không ghét các công ty
Cái mà mình thật sự ghét ở đây là cung cách hoạt động của những công ty như
Có lẽ, lợi nhuận từ việc kinh doanh
**bán hàng đa cấp**, chị gái mình từng bán hàng cho **AVON, DEPON, POND**và làm việc cũng rất tốt, lương hướng rõ ràng, thu nhập ổn định.
Cái mà mình thật sự ghét ở đây là cung cách hoạt động của những công ty như
**….. Cái cách họ nói, trình bày vấn đề gây phản cảm cho mình. Ghét vô cùng.** [Mỹ phẩm Oriflame](http://banhangdacapmlm.wordpress.com/my-pham-oriflame), Herbalife
Có lẽ, lợi nhuận từ việc kinh doanh
**kiểu này chỉ nằm ở cấp quản lý - người tuyển dụng các bạn.** [bán hàng đa cấp](http://banhangdacapmlm.wordpress.com/category/ban-hang-da-cap-mlm/) *……Hỏi trăng ai bán mua một nửa*
Ghép lại cho tròn thỏa ước mơ..
Ghép lại cho tròn thỏa ước mơ..
*VMT a.k.a MGK* *Ta thấy hoa cười mê mải ngắm* *Thế là từ đấy biết nàng thơ.* *Xem tiếp :*
Trả lờiXóa
……Hỏi trăng ai bán mua một nửa
Ghép lại cho tròn thỏa ước mơ..
VMT a.k.a MGK
Ta thấy hoa cười mê mải ngắm
Thế là từ đấy biết nàng thơ.
Tại sao không làm cho một tấn tiền và chỉ sử dụng một số của nó cho một nguyên nhân tốt, Ackman bình thường không? Bởi vì thu lợi nhuận từ Herbalife bị cáo buộc khai thác của các nhà phân phối của nó cảm thấy như “tiền máu”, Ackman nói. Mục tiêu của ông: để cho Ủy ban Thương mại Liên bang này nghiên cứu và đóng cửa công ty. Herbalife Johnson, trong khi đó, kêu gọi Chứng khoán và Hối đoái Mỹ Ủy ban để theo đuổi Ackman cho “thao túng thị trường chứng hiển nhiên.”Trả lờiXóa
Điều hấp dẫn nhất về cao-profile Ackman cuộc thập tự chinh chống lại Herbalife là một thực tế rằng Ackman đưa ra. Người sáng lập của Pershing Quản lý Capital Square được biết đến nhiều nhất những ngày này như một nhà đầu tư hoạt động mua cổ phần lớn trong công ty như Thái Bình Dương Canada ( CP ) , JC Penney ( JCP ) , và Target ( TGT ) để buộc thay đổi, ông hy vọng sẽ tăng giá cổ phiếu. Trong khi ông đã thực hiện nhiều hơn $ 1 tỷ USD bằng cách cá cược đối với công ty bảo hiểm trái phiếuMBIA ( MBI ) , Ackman thích để đặt tiền của mình vào các doanh nghiệp có thể cải thiện, so với những người sẵn sàng sụp đổ.
Tất cả lý do để tự hỏi tại sao ông đã dành hơn một năm nghiên cứu các trường hợp chống lại một công ty cho là một mục tiêu dễ dàng. Công ty tiếp thị đa cấp, từ Avon (AVP ) để Amway, từ lâu đã được xử lý với những lời chỉ trích rằng họ đang được xây dựng trên lưng của các nhà phân phối cả tin. Con người làm cho một đầu tư trả trước để bán sản phẩm thay mặt công ty thường cho gia đình và bạn bè với hy vọng rằng họ sẽ thực hiện một khoản hoa hồng khá từ việc bán hàng. Hơn nữa, họ đang thưởng cho việc tuyển dụng những người khác cũng làm như vậy. Đối với hầu hết người bán hàng, hệ thống hiếm khi dẫn đến một thu nhập hấp dẫn. Đối với nhà đầu tư, câu hỏi là những phần của doanh số bán hàng được thúc đẩy bằng cách đăng ký tuyển dụng mới so với bán cho người tiêu dùng muốn sản phẩm.

Server: GSE

X-Content-Type-Options: nosniff

Cache-Control: private, max-age=0

X-XSS-Protection: 1; mode=block

Content-Type: text/html; charset=UTF-8


markdown:
# Âm nhạc
[Cảm thụ âm nhạc ( Đồ Rê Mí )](http://musictalent.com.vn/cam-thu-am-nhac-do-re-mi.html) [](http://musictalent.com.vn/cam-thu-am-nhac-do-re-mi.html)
![ Cảm thụ âm nhạc ( Đồ Rê Mí )](http://musictalent.com.vn/wp-content/uploads/2016/06/khoa-hoc-do-re-mi-300x223.jpg)
Để đem đến cho bé một sân chơi và tạo điều kiện cho bé phát triển về cảm thụ âm nhạc , Music Talent mở ra một chương trình đào tạo mang tên “ Đồ Rê Mí “. Nhằm giúp trẻ tiếp cận sớm và bộc lộ năng khiếu của mình trong môi trường nghệ thuật.
Một sân chơi bổ ích để cho các bé được làm quen với nhau trong lớp học, với phương pháp học mà chơi, chơi mà học giúp cho các bé được những khoảng thời …
[Đọc Thêm](http://musictalent.com.vn/cam-thu-am-nhac-do-re-mi.html)
[Lợi ích của việc học đàn violin mà bạn cần biết](http://musictalent.com.vn/loi-ich-cua-viec-hoc-dan-violin-ma-ban-can-biet.html) [](http://musictalent.com.vn/loi-ich-cua-viec-hoc-dan-violin-ma-ban-can-biet.html)
![ Lợi ích của việc học đàn violin mà bạn cần biết](http://musictalent.com.vn/wp-content/uploads/2016/06/loi-ich-cua-viec-hoc-dan-violin-voi-tre-em-300x199.jpg)
Violin là một trong những nhạc cụ được phổ biến rộng rãi nhất ở trẻ em và người lớn ở mọi lứa tuổi. Đó là một nhạc cụ tuyệt đẹp, cả nhìn và lắng nghe. Nếu bạn đang suy nghĩ về việc học violin hay tìm một lớp học VIOLIN, thì đây là những lợi ích đáng ngạc nhiên! Hãy nhìn vào những gì violin có thể làm cho bạn:
1. Lợi ích vật chất
• Tăng sức mạnh cánh tay: Bạn có thể thấy mình mệt mỏi một …
[Đọc Thêm](http://musictalent.com.vn/loi-ich-cua-viec-hoc-dan-violin-ma-ban-can-biet.html)
[10 lợi ích của việc học đàn guitar bạn cần biết](http://musictalent.com.vn/10-loi-ich-cua-viec-hoc-dan-guitar-ban-can-biet.html) [](http://musictalent.com.vn/10-loi-ich-cua-viec-hoc-dan-guitar-ban-can-biet.html)
![ 10 lợi ích của việc học đàn guitar bạn cần biết](http://musictalent.com.vn/wp-content/uploads/2016/05/choi-guitar-tang-kha-nang-toan-hoc-300x200.jpg)
Khi bắt đầu quyết định chơi một loại nhạc cụ (đàn guitar chẳng hạn ), thì mục đích của bạn chắn không nằm ngoài giải trí phải không nào? Một số bạn khác thì có thể học đàn để gây ấn tượng với “người ấy” nhưng guitar còn có những lợi ích khác nữa mà ít ai biết đến. Không những giảm stress, học đàn guitar có thể cải thiện sức khỏe của bạn nữa đấy. Sâu đây chúng ta cùng tìm hiểu về những tác dụng kì …
[Đọc Thêm](http://musictalent.com.vn/10-loi-ich-cua-viec-hoc-dan-guitar-ban-can-biet.html)
[Học nhạc giúp tăng chỉ số IQ gấp 10 lần!](http://musictalent.com.vn/hoc-nhac-giup-tang-chi-so-iq-gap-10-lan.html) [](http://musictalent.com.vn/hoc-nhac-giup-tang-chi-so-iq-gap-10-lan.html)
![ Học nhạc giúp tăng chỉ số IQ gấp 10 lần!](http://musictalent.com.vn/wp-content/uploads/2016/03/10-cach-de-tang-tri-thong-minh-cho-tre1-300x200.jpg)
Những cách đơn giản dưới đây đã được khoa học chứng minh là giúp tăng chỉ số thông minh (IQ) của chúng ta.
Học nhạc
Âm nhạc rất hữu ích đối với tất cả mọi người. Đó là điều đã được khẳng định. Nhưng các nghiên cứu gần đây còn chỉ ra rằng, học nhạc giúp trẻ thông minh hơn bởi khi so sánh những đứa trẻ ở nhiều nhóm khác nhau thì những trẻ ở nhóm học nhạc có IQ cao hơn.
Các …
[Đọc Thêm](http://musictalent.com.vn/hoc-nhac-giup-tang-chi-so-iq-gap-10-lan.html)
[Vai trò của âm nhạc đối với trẻ em!](http://musictalent.com.vn/vai-tro-cua-am-nhac-doi-voi-tre-em.html) [](http://musictalent.com.vn/vai-tro-cua-am-nhac-doi-voi-tre-em.html)
![ Vai trò của âm nhạc đối với trẻ em!](http://musictalent.com.vn/wp-content/uploads/2016/03/lop-hoc-dan-piano-tre-em-300x236.jpg)
Âm nhạc đóng một vai trò rất kì diệu đối với trẻ em. Vậy tại sao bạn không cho con mình tiếp cận với âm nhạc sớm nhiều hơn nữa nhỉ?
Âm nhạc có nhiều tác dụng tốt cho cơ thể, trí não, tâm trạng và tinh thần. Với trẻ em, âm nhạc càng đặc biệt quan trọng bởi trẻ đang trong thời kỳ phát triển và cần được làm cho thấm nhuần dần những giá trị tốt đẹp.
Ngày càng có nhiều …
[Đọc Thêm](http://musictalent.com.vn/vai-tro-cua-am-nhac-doi-voi-tre-em.html)
[Trung Tâm Music Talent – Ươm Mầm Tài Năng](http://musictalent.com.vn/trung-tam-music-talent-uom-mam-tai-nang.html) [](http://musictalent.com.vn/trung-tam-music-talent-uom-mam-tai-nang.html)
![ Trung Tâm Music Talent – Ươm Mầm Tài Năng](http://musictalent.com.vn/wp-content/uploads/2015/06/dao-tao-300x236.jpg)
Trung Tâm Music Talent - Ươm Mầm Tài Năng
Trung tâm Music Talent là đơn vị trực thuộc Viện Phát triển Giáo dục và Văn hóa Việt Nam. Trung tâm có chức năng nghiên cứu và phát triển đào tạo các bộ môn năng khiếu nghệ thuật dành cho mọi lứa tuổi như Piano, Guitar, Violin, Thanh nhạc, Cảm thụ âm nhạc, Đồ Rê Mí, Hợp xướng, Giao hưởng, Múa, Vẽ, Dance Sport...
Với hệ thống trang thiết bị khang …
[Đọc Thêm](http://musictalent.com.vn/trung-tam-music-talent-uom-mam-tai-nang.html)
[10 bí mật dành cho những người mới tập đàn](http://musictalent.com.vn/10-bi-mat-danh-cho-nhung-nguoi-moi-tap-dan.html) [](http://musictalent.com.vn/10-bi-mat-danh-cho-nhung-nguoi-moi-tap-dan.html)
![ 10 bí mật dành cho những người mới tập đàn](http://musictalent.com.vn/wp-content/uploads/2015/07/hoc-dan-guitar-lvl1-300x199.jpg)
10 bí mật dành cho những người mới tập đàn:
1.Tư thế ngồi như thế nào:
Bạn đi học đàn, hay phát triển kỹ năng chơi đàn của bạn sau này, tư thế ngồi , phom tay cực kỳ quan trọng.Cách nhanh nhất là hãy tập "đứng" chơi đàn với một dây đeo ^^, khi bạn đứng mà chơi đàn tốt, tự khắc bạn ngồi sẽ chuẩn.Đây là một mí mật rất ít người biết.
2.Luyện chạy âm giai:
Bạn thường …
[Đọc Thêm](http://musictalent.com.vn/10-bi-mat-danh-cho-nhung-nguoi-moi-tap-dan.html)
[Lý do bạn nên học chơi một nhạc cụ](http://musictalent.com.vn/ly-do-ban-nen-hoc-choi-mot-nhac-cu.html) [](http://musictalent.com.vn/ly-do-ban-nen-hoc-choi-mot-nhac-cu.html)
![ Lý do bạn nên học chơi một nhạc cụ](http://musictalent.com.vn/wp-content/uploads/2015/06/0051-300x167.jpg)
Lý do bạn nên học chơi một nhạc cụ
Thật khó để tưởng tượng ra một cuộc sống mà không có âm nhạc. Trong khi tất cả mọi người đều thích nghe nhạc, không nhiều người trong chúng ta biết cách chơi các nhạc cụ như Gitar, saxophone, đàn piano... Tuy nhiên, không bao giờ quá muộn để học chơi một nhạc cụ.
Và dưới đây là 10 lý do bạn nên học chơi một nhạc cụ nào …
[Đọc Thêm](http://musictalent.com.vn/ly-do-ban-nen-hoc-choi-mot-nhac-cu.html)
[LỚP HỌC ĐÀN PIANO, ĐÀN GUITAR, VIOLIN, CẢM THỤ ÂN, MÚA, VẼ, DANCE…HÈ 2016](http://musictalent.com.vn/lop-hoc-dan-piano-dan-guitar-violin-2.html) [](http://musictalent.com.vn/lop-hoc-dan-piano-dan-guitar-violin-2.html)
![ LỚP HỌC ĐÀN PIANO, ĐÀN GUITAR, VIOLIN, CẢM THỤ ÂN, MÚA, VẼ, DANCE…HÈ 2016](http://musictalent.com.vn/wp-content/uploads/2015/06/IMG_0944-300x224.jpg)
Trung tâm Music Talent là đơn vị trực thuộc Viện Phát triển Giáo dục và Văn hóa Việt Nam. Trung tâm có chức năng nghiên cứu và phát triển đào tạo các bộ môn năng khiếu nghệ thuật dành cho mọi lứa tuổi như : Piano, Guitar, Violin, Thanh nhạc, Cảm thụ âm nhạc, Đồ Rê Mí, Hợp xướng, Giao hưởng, Múa, Vẽ, Dance Sport...
Với hệ thống trang thiết bị khang trang hiện đại đáp ứng 1 cách tốt nhất cho …
[Đọc Thêm](http://musictalent.com.vn/lop-hoc-dan-piano-dan-guitar-violin-2.html)
[KHAI GIẢNG LỚP HỌC GUITAR](http://musictalent.com.vn/khai-giang-lop-hoc-guitar.html) [](http://musictalent.com.vn/khai-giang-lop-hoc-guitar.html)
![ KHAI GIẢNG LỚP HỌC GUITAR](http://musictalent.com.vn/wp-content/uploads/2015/06/11260522_1842726435951956_1405272242068206716_n-300x225.jpg)
Trung tâm Music Talent liên tục khai giảng các lớp học Guitar: Guitar cổ điển, Guitar đệm hát. Để lựa chọn 1 môn nhạc cụ để học có lẽ rằng bộ môn đàn Guitar là phù hợp nhất với các bạn học sinh, sinh viên và những người yêu thích âm nhạc.
Đến với Music Talent các bạn sẽ được làm quen với bộ môn này 1 cách bài bản cả lý thuyết và thực hành từ cơ bản đến nâng cao.
Mỗi …
[Đọc Thêm](http://musictalent.com.vn/khai-giang-lop-hoc-guitar.html)

WARC-Identified-Payload-Type: text/html

Vary: Accept-Encoding,User-Agent


markdown:
![ ](http://nangmuihanquoc.vn/wp-content/themes/nangmuihanquoc.vn/images/hotline.png)
[Sữa mũi Hàn Quốc: Hiểu thế nào cho đúng](http://nangmuihanquoc.vn/sua-mui-han-quoc-hieu-nao-cho-dung.html)
Sửa mũi Hàn Quốc là phương pháp rất phổ biến trong xã hội hiện đại. Để mũi đẹp hơn thì người ta thường nâng cao sống mũi và xử lý đầu mũi cho thon gọn lại. Nếu chỉ nâng cao sống mũi mà đầu mũi và các chi tiết khác nhu cánh mũi, xương mũi,…không được xử lý thì chúng nhìn vẫn to và thô, điều này đồng nghĩa với việc mũi sau khi sửa sẽ không đạt được các tiêu chuẩn của Hàn Quốc.
*Sửa mũi đẹp như các ngôi sao Hàn* **Vậy Sửa mũi Hàn Quốc: Hiểu thế nào cho đúng?** *+ Công nghệ và chất liệu sử dụng trong nâng mũi Hàn Quốc:*
Mũi người châu Á thường thiếu các cấu trúc nâng đỡ (xương, sụn) nên không tạo đươc bộ khung vững chắc cho sống mũi, đặc biệt là đầu mũi. Vì vậy, hầu hết người Châu Á đều sở hữu chiếc mũi tẹt và khiến khuôn mặt thiếu đi sự thanh thoát. Để khắc phục, việc sử dụng sụn của chính cơ thể mình để để tạo hình mũi là rất phù hợp.
Khác với những công nghệ nâng mũi thông thường chỉ sử dụng sụn nhân tạo để nâng sông mũi và đầu mũi. Gây nên một loạt các biến chứng nguy hại như bóng đỏ, lộ sóng giả,…
Sửa mũi theo công nghệ hiện đại của Hàn Quốc sử dụng sụn tự thân ( sụn tai và sụn vách ngăn) giúp tạo hình đầu mũi, cho kết quả thẩm mỹ ổn định và lâu bền. Cụ thể là
+ Nâng mũi bọc sụn Hàn Quốc: Thường sử dụng một ít sụn tai để bao bọc đầu mũi và nâng cao sóng mũi bằng sụn nhân tạo được nhấp khẩu từ Hàn. Áp dụng cho những bạn đã có đầu mũi tốt và chỉ muốn nâng cao sóng mũi mà thôi. Giúp trụ mũi vững chắc, mềm mại hơn khi được bao bọc bởi sụn từ chính cơ thể mình
+ Nâng mũi s line: Giúp khắc phục được hầu hết các khuyết điểm vùng mũi và những khách hàng muốn sở hữu chiếc mũi đẹp hoàn thiện theo dáng cong nhẹ hình chữ S. Khi thực hiện, bác sĩ sẽ can thiệp trực tiếp vào sụn vách ngăn để kéo dài và nâng cao đầu mũi, tiếp đến nâng cao sóng mũi bằng sụn nhân tạo và bao bọc đầu mũi bằng sụn tự thân, gọt xương mũi bè, chỉnh hình cánh mũi,…
Tùy vào mong muốn và khuyết điểm của bạn mà bác sĩ chỉ định phương pháp nâng mũi Hàn Quốc cụ thể cho bạn.
*Một số hình ảnh thực tế sau sửa mũi Hàn Quốc tại Việt Nam* *+ Bác sĩ và quy trình phẫu thuật sửa mũi theo đúng tiêu chuẩn Hàn:*
Để thực hiện thành công ca phẫu thuật nâng mũi Hàn Quốc, bác sĩ đòi hỏi phải là người chuyên môn giỏi và đồng thời được đào tạo bài bản tại Hàn để sử dụng thành thục tất cả các công nghệ thẩm mỹ tiên tiến nhất của Hàn. Đặc biệt là khi thực hiện các kỹ thuật sửa mũi Hàn Quốc thì bác sĩ phải biết cân đối và tạo dáng mũi sao cho phù hợp nhất với khuôn mặt của từng người. Giúp cho bạn nhanh chóng sở hữu chiếc mũi Hàn Quốc đúng hiệu mà vẫn giữ được nét đẹp riêng của bạn.
Quy trình phẫu thuật sửa mũi Hàn Quốc cũng là bước rất quan trọng trong việc tạo hình mũi và đảm bảo an toàn cho các khách hàng. Bởi, tất cả các dịch vụ thẩm mỹ của Hàn từ đơn giản đến phức tạp đều phải trải qua quy trình phẫu thuật chuyên sâu: tư vấn, thăm khám, kiểm tra sức khỏe, tiến hành phẫu thuật khoa học, nghỉ dưỡng, chăm sóc và tái khám,…
*Quy trình sửa mũi Hàn Quốc ảnh hưởng rất lớn đển kết quả của bạn*
Theo chuyên gia thẩm mỹ hàng đầu Việt Nam – Nguyễn Phan Tú Dung: “Trên thị trường hiện nay xuất hiện nhiều trung tâm thẩm mỹ trôi nổi không rõ nguyên gốc. Do đó, khi quyết định đi nâng mũi Hàn Quốc bạn cần tìm hiểu rõ nguồn gốc xuất xứ của trung tâm đó. Hãy chú ý theo dõi các hoạt động trên truyền thông, trang web xem các thông tin, địa chỉ có minh bạch, rõ ràng và được nhiều người biết đến hay không? để quyết định”
*Xin vui lòng liên hệ:* **BỆNH VIỆN THẨM MỸ JW HÀN QUỐC**
141 – 143 Lê Thị Riêng, P.Bến Thành, Q.1, TP.HCM
ĐT: (08) 6683 2222 – (08) 2237 4567
Hotline: 09.6868.1111 – 09.6868.2222 – 09.6869.2222
Email: thammyvienhanquoc@gmail.com
*Lưu Ý: kết quả thẩm mỹ phụ thuộc vào đường nét có sẵn và cơ địa của từng người
![ ](http://nangmuihanquoc.vn/wp-content/themes/nangmuihanquoc.vn/images/hotline.png)

Server: Apache/2.2.31 (Unix) mod_ssl/2.2.31 OpenSSL/0.9.8e-fips-rhel5 mod_bwlimited/1.4

Link: <http://nangmuihanquoc.vn/wp-json/>; rel="https://api.w.org/", <http://nangmuihanquoc.vn/?p=16567>; rel=shortlink


markdown:
|
|
712 việc làm
22 ms
|
|![]()
Trong bán kính km của
Lọc theo ngày ▼
24 giờ trước
3 ngày trước
7 ngày trước
30 ngày trước
Lọc theo nguồn ▼
Các công ty
Trang việc làm
Công ty việc làm
|
|
Việc làm »
Việc làm 1 - 10 của 712
## Construction làm việc
Có 774 việc làm liên quan Construction trên neuvoo.com.vn. Nộp đơn ứng tuyển ngay bây giờ và giành công việc lý tưởng của bạn.
## Nội dung công việc và ngành nghề có bao gồm tìm kiếm nàyAssistant, Quality Control Manager, Quản Lý Chuỗi Thức Ăn Nhà Hàng, Media Analyst, Bác Sỹ Nghiên Cứu Y Khoa hoặc Senior Product Marketing. Những vị trí tuyển dụng này thường liên quan đến các ngành nghề như Tư vấn , Quản lý , Cơ khí, Giao tiếp, Ngân hàng hoặc Kinh doanh.
## Thống kê việc làm
Các khu vực với số lượng các vị trí tuyển dụng lớn nhất liên quan đến 'Construction' là Thừa Thiên Huế, Hà Nội, Bình Dương, Bà Rịa - Vũng Tàu, Quảng Nam hoặc Đồng Nai. Các thành phố với số lượng tìm kiếm lớn nhất là Hà Nội, Hồ Chí Minh, Hồ Chí Minh, Đà Lạt hoặc Biên Hòa.
## Các nhà tuyển dụng đang đề xuất Construction việc làm
Các nhà tuyển dụng đang đề xuất việc làm liên quan Construction nhất là Công ty Cổ Phần Chứng Khoán Rồng Việt, Công Ty TNHH ANAM ELECTRONICS Việt Nam, CTy TNHH Dịch Vụ Ăn Uống Ba Sao, Công Ty CP Truyền Thông Trực Tuyến NETLINK, Công ty CP Quảng Cáo Giải Pháp Việt Nam hoặc Công Ty TNHH Skyworth Việt Nam.
## neuvoo.com.vn: trang việc làm lớn nhất tại Việt Nam
neuvoo.com.vn là mạng việc làm lớn nhất trên toàn quốc với hơn 44345 vị trí tuyển dụng hiện có, 774 trong đó là liên quan đến Construction.
WRS Recruitment |
(Unspecified city)
- 2 ngày trước
![]()
My client, an renown power generation asset owner is looking to hire someone to take on the role of a VP Construction. The incumbent will effectively take on the role of PM for on their upcoming...
![]()
ASIAPOWER OVERSEAS EMPLOYMENT SERVICES. |
(Unspecified city)
- 1 ngày trước
![]()
0.00 AM TO 5.00 PM (MON TO SAT). Urgently required for a leading Korean Engineering & Construction... Role ProjectManager Production Manufacturing Maintenance. Industry Construction, Engineering, Cement...
![]()
ADS Enterprises |
(Unspecified city)
- 1 ngày trước
![]()
Job Description. Urgently required for a HYUNDAI ENGINEERING & CONSTRUCTION COMPANY for VIETAM. OTHERS... Profile Summary. Type Full Time. Eligibility B.Tech B.E. Civil. Role Other. Industry Construction...
![]()
EWI |
(Unspecified city)
- 1 ngày trước
![]()
Define the civil work pre requisite and follow up of civil work progress by site survey to check that construction is in line with design requirements. Requirements. For this role the client...
![]()
EWI |
(Unspecified city)
- 2 ngày trước
![]()
Closing Statement. ewi is an international consultancy focused on the search & selection of the Worlds leading engineering and construction professionals. We specialise in recruiting expats and...
![]()
BASF Asia Pacific |
Đà Nẵng, Đà Nẵng
- 14 ngày trước
OBJECTIVES OF THE POSITION. Market and sell range of Construction Systems products to achieve sales and... Develop sales aids, oral and written presentation. Create and conduct promotion of Construction Systems...
![]()
World University Service (WUS) |
(Unspecified city)
- 2 ngày trước
Planner. Architect. Construction Supervision. JOB OFFER The Vietnamese German University (VGU) is a... Planner. Architect. Construction Supervision. Reporting VGU internally to Presidential Board and...
![]()
Ky Nguyen Vang Consultants |
Hồ Chí Minh, Hồ Chí Minh
- 13 ngày trước
Mô tả công việc. Quản lý, lập kế hoạch và triển khai các công việc cho dự án (từ khâu chuẩn bị, khởi công và thi công công trình) theo đúng quy trình và quy định của Pháp luật. Điề...
![]()
Intel Corporation |
Hồ Chí Minh, Hồ Chí Minh
- 3 ngày trước
Responsible for managing and organizing a vast amount of electronic and hard copies of construction... Preferred Skills Nice to Have Skills i. Familiarity with engineering methods and Construction related...
![]()
HR2B |
Hồ Chí Minh, Hồ Chí Minh
- 7 ngày trước
Job Information. Be a Head of Construction Department. Oversee and manage construction site as well, and... Prepare system, procedure for construction work. Prepare internal and external reports pertaining to job...
![]()
HR2B |
Hồ Chí Minh, Hồ Chí Minh
- 12 ngày trước
Check that the resources of the Subcontractors are sufficient to meet the Construction Schedule and... Able to give direction and delegate tasks. Manage and oversee the day today construction management of...
![]()
RGF HR AGENT VIETNAM CO., LTD. |
Hồ Chí Minh, Hồ Chí Minh
- 11 ngày trước
District 1, HCMC. Business Type. 100. investment from Japan. Size. 50 100. Industry. Construction... Product Range. MRT construction. Established in Vietnam. 2013. GENERAL INFORMATION. Position. SITE NURSE...
![]()
HR2B |
Hồ Chí Minh, Hồ Chí Minh
- 12 ngày trước
Requirements. Fluent in reading, writing and speaking English. Good command in office software (Word, Excel, PowerPoint,. ). Understanding of services for construction project, real estate good...
![]()
EWI |
(Unspecified city)
- 2 ngày trước
![]()
SEO. Rail Planning, Rail TILOS, Rail Primavera. Closing Statement. ewi is an international consultancy focused on the search & selection of the Worlds leading engineering and construction...
![]()
WRS Recruitment |
(Unspecified city)
- 4 giờ trước
![]()
My client, an renown power generation asset owner is looking to hire someone to take on the role of a VP Construction. The incumbent will effectively take on the role of PM for on their upcoming...
![]()
Đừng bỏ lỡ công việc. Nhận thông báo các công việc mới được gửi đến email của bạn hàng ngày.
|
|

Server: Apache/2.4.7 (Ubuntu)

Set-Cookie: neuvoo-lang=vi; expires=Sun, 23-Jul-2017 13:48:45 GMT; Max-Age=2592000; path=/


markdown:
# Lee Hi bị nghi ngờ đụng "dao kéo" khi xuất hiện với gương mặt thon gọn
Vào ngày 9/3, Lee Hi chính thức trở lại với album mới mang tên "Seoulite". Ngay sau khi 2 MV "Breathe" và"Hold My Hand" được phát hành, cư dân mạng đã chỉ ra nhiều điểm khác lạ trên gương mặt của cô nàng khi đem so sánh với hình ảnh trước đây.
Chỉ ngay sau đó, chủ đề "
**Lee Hi phẫu thuật thẩm mỹ**" đã trở thành tiêu điểm của dư luận, dấy lên nhiều tranh cãi về chế độ giảm cân và tiêm botox.
*Hình ảnh Lee Hi khi mới debut* *Lee Hi có gương khá góc cạnh và bụ bẫm* *Hình ảnh trong album mới nhất với chiếc cằm vline* *Khuôn mặt khác lạ của Lee Hi*
**Ý kiến của cư dân mạng Hàn về gương mặt thon gọn của Lee Hi:**
- Ai quan tâm xem có phẫu thuật hay không, để người nổi tiếng yên đi.
- Hồi xưa con bé cũng xinh mà, xem ảnh tốt nghiệp của nó ý.
- Trông như tiêm botox ở hàm, cắt khóe mắt với làm mũi
- Mình thì thấy chắc con bé giảm cân thôi, hồi trước nó hơi mập mà, xong lại nghỉ quảng bá lâu ơi là lâu nên chắc trong lúc đó..
- Xinh ghê, hình như giảm nhiều cân phết nhỉ. Ăn kiêng là biện pháp PTTM tốt nhất đấy.
- Theo kinh nghiệm của em thì cô này đã tiêm filler vào mũi và botox ở hàm. Em cũng xài botox 3 năm nay rồi nên nhìn là biết hiệu quả đang chầm chậm phát huy. Sớm thôi, cô này sẽ còn thon nữa. Trước hàm của em còn vuông hơn nhiều nhưng giờ trái xoan luôn nên em biết.
- Nghe đồn con bé còn ăn kiêng ghê lắm
- Chắc cũng có làm nhưng cũng xinh sẵn rồi
- Không phải đâu, nét xinh sẵn rồi nên ăn kiêng xong mới lộ hết ra đấy
- Tui cho rằng không phải do PTTM đâu mà là giảm cân
*Nguồn tham khảo Koreaboo, Netizenbuzz Vtrans*
**Chủ đề:** [Lee Hi phau thuat tham my](http://nhacmoi.vn/su-kien/lee-hi-phau-thuat-tham-my) [ca si lee hi](http://nhacmoi.vn/su-kien/ca-si-lee-hi) [lee hi dao keo](http://nhacmoi.vn/su-kien/lee-hi-dao-keo) [lee hi](http://nhacmoi.vn/su-kien/lee-hi) [phẫu thuật thẩm mỹ](http://nhacmoi.vn/su-kien/phau-thuat-tham-my) [thẩm mỹ](http://nhacmoi.vn/su-kien/tham-my) [tiem botox](http://nhacmoi.vn/su-kien/tiem-botox) [giảm can](http://nhacmoi.vn/su-kien/giam-can) [hinh anh lee hi moi nhat](http://nhacmoi.vn/su-kien/hinh-anh-lee-hi-moi-nhat)
### Video đang được xem nhiều nhất
### Có thể bạn quan tâm
-
[Nếu đang thất tình, hãy tâm sự với Rihanna và bạn sẽ nhận được lời khuyên hay nhất!](http://nhacmoi.vn/sao-quoc-te/neu-dang-that-tinh-hay-tam-su-voi-rihanna-va-ban-se-nhan-duoc-loi-khuyen-hay-nhat-0127927.html)
-
[Bán công ty rượu, tài tử George Clooney bỏ túi 233 triệu USD](http://nhacmoi.vn/sao-quoc-te/ban-cong-ty-ruou-tai-tu-george-clooney-bo-tui-233-trieu-usd-0127923.html)
-
[Uyên Linh nhờ cộng đồng mạng nhắn gửi người lấy túi trăm triệu của mình tại sân bay](http://nhacmoi.vn/sao-viet/uyen-linh-nho-cong-dong-mang-nhan-gui-nguoi-lay-tui-tram-trieu-cua-minh-tai-san-bay-0127920.html)
-
[Shin Min Ah gây chú ý tại bệnh viện vì cần mẫn chăm sóc Kim Woo Bin điều trị ung thư](http://nhacmoi.vn/sao-han-quoc/shin-min-ah-gay-chu-y-tai-benh-vien-vi-can-man-cham-soc-kim-woo-bin-dieu-tri-ung-thu-0127932.html)
-
[Fan xôn xao trước nghi vấn Quỳnh Châu và Quang Hùng chia tay sau gần 3 năm hẹn hò](http://nhacmoi.vn/sao-viet/fan-xon-xao-truoc-nghi-van-quynh-chau-va-quang-hung-chia-tay-sau-gan-3-nam-hen-ho-0127838.html)
-
[Sau chiến thắng tại Produce 101, chưa biết bao giờ WANNA ONE mới lên sàn](http://nhacmoi.vn/sao-han-quoc/sau-chien-thang-tai-produce-101-chua-biet-bao-gio-wanna-one-moi-len-san-0127914.html)
## Bài liên quan
-
[Sự thật đằng sau nghi án "phim giả tình thật" của cặp đôi Song Joong Ki và Song Hye Kyo](http://nhacmoi.vn/sao-han-quoc/su-that-dang-sau-nghi-an-phim-gia-tinh-that-cua-cap-doi-song-joong-ki-va-song-hye-kyo-018163.html)
-
[Mỹ nhân "Hậu duệ mặt trời" - Kim Ji Won rạng ngời trong loạt ảnh váy cưới](http://nhacmoi.vn/sao-han-quoc/my-nhan-hau-due-mat-troi-kim-ji-won-rang-ngoi-trong-loat-anh-vay-cuoi-018969.html)
-
[Song Joong Ki: "Đối với tôi Song Hye Kyo là tiền bối và đừng hạ thấp chị ấy như vậy"](http://nhacmoi.vn/sao-han-quoc/song-joong-ki-doi-voi-toi-song-hye-kyo-la-tien-boi-va-dung-ha-thap-chi-ay-nhu-vay-019476.html)
-
[Ngôi sao hát nhạc phim "Hậu duệ mặt trời" từng phạm tội ấu dâm](http://nhacmoi.vn/sao-han-quoc/ngoi-sao-hat-nhac-phim-hau-due-mat-troi-tung-pham-toi-au-dam-019456.html)
-
[Đoàn phim "Hậu duệ mặt trời" bật mí về mối quan hệ giữa Song Joong Ki và Song Hye Kyo](http://nhacmoi.vn/sao-han-quoc/doan-phim-hau-due-mat-troi-bat-mi-ve-moi-quan-he-giua-song-joong-ki-va-song-hye-kyo-019295.html)
-
[Fan Việt Nam bị báo chí nước ngoài ví là “zombie” thèm khát Xiumin](http://nhacmoi.vn/sao-han-quoc/fan-viet-nam-bi-bao-chi-nuoc-ngoai-vi-la-zombie-them-khat-xiumin-019607.html)
-
[Cư dân mạng phát sốt vì những chia sẻ đáng yêu của Kim So Huyn](http://nhacmoi.vn/sao-han-quoc/cu-dan-mang-phat-sot-vi-nhung-chia-se-dang-yeu-cua-kim-so-huyn-019860.html)
-
[Song Joong Ki gặp rắc rối khi lộ ảnh tình tứ với bạn gái cũ trong quá khứ](http://nhacmoi.vn/sao-han-quoc/song-joong-ki-gap-rac-roi-khi-lo-anh-tinh-tu-voi-ban-gai-cu-trong-qua-khu-018324.html)
-
[Soong Joong Ki phải nhường vị trí số 1 cho Yoona trên bảng chỉ số truyền thông Đại Lục](http://nhacmoi.vn/sao-han-quoc/soong-joong-ki-phai-nhuong-vi-tri-so-1-cho-yoona-tren-bang-chi-so-truyen-thong-dai-luc-018579.html)
-
[Sân bay quốc tế Incheon náo loạn vì sự xuất hiện của Song Joong Ki](http://nhacmoi.vn/sao-han-quoc/san-bay-quoc-te-incheon-nao-loan-vi-su-xuat-hien-cua-song-joong-ki-018155.html)

Server: cloudflare-nginx

CF-Cache-Status: MISS

Cache-Control: public, max-age=1800

Set-Cookie: __cfduid=da76dc3af5d8ce22f5e9ef2cbe93cb74e1498225334; expires=Sat, 23-Jun-18 13:42:14 GMT; path=/; domain=.nhacmoi.vn; HttpOnly


markdown:
Tìm gì?
Nhà sản xuất & lắp đặt Thang Máy Bệnh Viện thương hiệu SEM.
- Hành trình lên đến 15 tầng
- Vận hành êm ái, dừng tầng chính xác
- Cửa thang máy & cabin rộng rãi, giúp đẩy giường bệnh & thiết bị y tế dễ dàng
- Đèn chiếu sáng được bố trí ẩn, không gây khó chịu cho bệnh nhân
Chuyên cung cấp & lắp đặt Thang Máy Bệnh Viện chính hiệu MITSUBISHI.
Nhận sửa chữa, bảo dưỡng thang máy các loại.
*Hãy liên hệ ngay theo số “0903 91 5977” để được phục vụ nhanh nhất!*
Hà Hồng - Chuyên nghiệp trong tư vấn thiết kế, lắp đặt Thang Máy Bệnh Viện các loại được nhập khẩu trực tiếp từ các hãng nổi tiếng:
*Mitsubishi, Toshiba, Hitachi, Schindler,\...* của Nhật Bản và Thái Lan
__CAM KẾT__: *Mang đến sản phẩm chất lượng, giá thành hợp lý, dịch vụ chu đáo cho khách hàng*
Hoàng Hà chuyên tư vấn, thiết kế và lắp đặt các loại thang máy bênh viện cung cấp cho khách hàng trong nước và quốc tế.
➤ Cam kết:
✦ Sản phẩm đa dạng, thẩm mỹ, tiện nghi, kinh tế, chất lượng.
✦ Phục vụ 24/24 giờ để đáp ứng an toàn & hiệu quả.
✦ Dịch vụ bảo hành & hậu mãi chu đáo.
► NĂNG LỰC:
▶Điều hành 5 chi nhánh trong lĩnh vực Lắp đặt Thang máy bệnh viện trên toàn quốc
▶Đạt 3 giải thưởng lớn:
*Thương hiệu Việt Nam vàng, Hàng Việt Nam chất lượng vàng, Doanh nghiệp - Doanh nhân tiêu biểu thời đại Hồ Chí Minh*
➤ Đại diện chính hãng thang máy mang thương hiệu FUJI HONGKONG tại Việt Nam.
➤ Nhập khẩu thang máy bệnh viện nguyên chiếc từ nhà máy
➤ Dịch vụ:
- Bảo hành - bảo trì - sửa chữa thang máy các loại
- Nhận nâng cấp các loại thang máy được nhập khẩu và sản xuất trong nước
*Chuyên tư vấn, thiết kế, thi công, lắp đặt, bảo trì các loại thang máy bệnh viện.*
⟐ Thương hiệu uy tín: Thang máy Mitsubishi, thang máy Fuji (Japan), Montanari (Italia), Schneider (Đức)…
⟐ 100% sản phẩm được thanh tra nhà nước về An toàn lao động xác nhận và cấp giấy phép hoạt động.
Chuyên cung cấp, lắp đặt, bảo dưỡng & sửa chữa các loại
* trên toàn quốc, với: Thang máy bệnh viện*
Tân Long - Nhà thầu Uy tín trên thị trường Thang Máy hiện nay, bao gồm:
- Thang máy bệnh viện
- Thang máy tải hàng.
- Thang máy tải khách, tải thực phẩm.
- Thang máy lồng kính.
- Thang cuốn.
Chuyên sản xuất, cung cấp & lắp đặt Thang Máy Bệnh Viện với các đặc tính nổi bật:
- Tải trọng: Từ 320kg - 2000kg
- Tốc độ: Từ 30m/ph - 150m/ph
- Hành trình tối đa: Lên đến 30 điểm dừng
Chuyên thiết kế, sản xuất & lắp đặt Thang Máy các loại như: Thang máy tải khách/tải hàng, Thang máy không phòng máy, Thang máy quan sát, Thang máy bệnh viện, Thang máy chung cư/gia đình, Thang cuốn,\... của các nhãn hiệu lớn đến từ Nhật Bản, Italy, Thụy Điển,\... Cung cấp phụ tùng thang máy & dịch vụ sửa chữa/tân trang thang máy.
Elemu - Từng bước khẳng định
*, với: thương hiệu thang máy bệnh viện an toàn và chất lượng*
Khánh Hưng - Chuyên cung cấp Thang Máy Bệnh Viện được lắp ráp trong nước và ngoại nhập
► Đảm bảo: Chất lượng tốt nhất - Giá cả cạnh tranh nhất.
► Đối tác:
*MITSUBISHI, YASKAWA, SANYO, MONTANARY, FUJI, HYUNDAI, NINGBO, KANEKO, KOYO, GEM.*
THANG MÁY BỆNH VIỆN HÀN LÂM
➤
*: Dịch vụ*
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50

Cache-Control: private


markdown:
Bạn thích các tin tức trong chủ đề này? Hãy bình luận, gửi, chia sẻ với bạn bè nhé!
(NLĐO) - Tay vợt 20 tuổi Lý Hoàng Nam đã có được thêm 15 điểm tích luỹ ATP khi tay vợt Jeremy Beale (Úc) bỏ cuộc ở ván 2, giúp Nam có mặt ở trận chung kết Giải Thailand F3 Futures.
23.06.2017
(NLĐO) - Modern Internasional, công ty mẹ sở hữu nhượng quyền 7-Eleven ở Indonesia, hôm 22-6 tuyên bố sẽ đóng cửa toàn bộ cửa hàng tiện lợi này trước...
Chủ đề liên quan: cửa hàng tiện lợi, USD, kinh doanh, thiết bị y tế, đóng cửa, Indonesia, cạnh tranh, công ty con, Thái Lan, cổ phiếu
22.06.2017
(NLĐO) - Vượt qua hạt giống số 5 Thomas Fancutt 6-3, 7-6 trong trận tứ kết đơn nam Giải Quần vợt F3 Thái Lan 2017 vào trưa 22-6, tay vợt Lý Hoàng Nam...
Chủ đề liên quan: Lý Hoàng Nam, bán kết đơn nam, người việt nam, Hoàng Thiên, đôi nam, Thái Lan, Futures
21.06.2017
(NLĐO) – Cảnh sát Thái Lan vừa đột kích vào một nhà chứa, phát hiện ra một người đàn ông phương Tây đang vui vẻ cùng 2 cô gái bán dâm trong bồn tắm...
Chủ đề liên quan: Thái Lan, gái mại dâm, mua bán dâm, Pattaya, cảnh sát Thái Lan, tắm nước nóng, binh sĩ Thái Lan, uống rượu bia, cảnh sát chìm, khu du lịch
17.06.2017
Giành 2 HCĐ cự ly 100 m tại Grand Prix châu Á và vừa giành "cú đúp" HCV 100 m lẫn 200 m tại Thái Lan, Lê Tú Chinh đang làm sáng lại giấc mơ chinh phục...
Chủ đề liên quan: đua tốc độ, điền kinh Việt Nam, Vũ Thị Hương, SEA Games, Lê Tú Chinh, HLV, Thái Lan, châu Á, Grand Prix
12.06.2017
Không còn hy vọng ở chiến dịch World Cup 2018, vai trò của Qatar dù vậy cũng còn khá quan trọng đối với nhóm đội đang chạy đua giành quyền đến nước Nga...
Chủ đề liên quan: World Cup 2018, World Cup 2022, Ả Rập Saudi, Đông Nam Á, Qatar, Hàn Quốc, Thái Lan
Liên tục phá sâu thành tích, từ 11 giây 63 vòng loại, 11 giây 54 ở bán kết và chạm mốc 11 giây 47 ở chung kết, "cô gái vàng" Lê Tú Chinh đã xuất sắc...
Chủ đề liên quan: cô gái vàng, Nguyễn Văn Lai, Dương Văn Thái, Lê Tú Chinh, điền kinh, 100 m, Thái Lan, SEA Games
(NLĐO) - Bộ Ngoại giao Thái Lan lên tiếng phản đối báo cáo của Diễn đàn Kinh tế Thế giới (WEF) khi đưa Thái Lan vào danh sách 20 điểm đến du lịch nguy...
Chủ đề liên quan: Bộ Ngoại giao, Diễn đàn Kinh tế thế giới, người phát ngôn bộ Ngoại Giao, khách du lịch nước ngoài, Liên Hiệp Quốc, Đông Nam Á, nguy hiểm, an ninh, bạo lực, an toàn, du lịch, Thái Lan
04.06.2017
(NLĐO)- Một du khách người Anh bị thương nặng sau khi rơi từ ban công khách sạn sau một cuộc đôi co với “gái bán hoa” tại Pattaya, Thái Lan hôm 3-6.
Chủ đề liên quan: du khách Anh, gái bán hoa, người chuyển giới, khỏa thân, Thái Lan, người nước ngoài, đe dọa tính mạng, bao cao su, cô gái mại dâm
02.06.2017
(NLĐO) - Nữ hoàng nhan sắc Thái Lan Rattana Ramchatu đã thiệt mạng sau tai nạn giao thông ngày 1-6, hưởng dương 19 tuổi.
Chủ đề liên quan: cuộc thi Hoa hậu, chương trình từ thiện, gặp sự cố, đường cao tốc, va chạm mạnh, hiện trường vụ tai nạn, hoa hậu, Thái Lan, Rattana Ramchatu
TIN MỚI CẬP NHẬT
23 Tháng 06,2017
Chủ đề hot trên NLĐ
Sự kiện nổi bật
Phụ trách: Trần Đoàn Trung - Phó Chủ tịch Liên đoàn Lao động TP.HCM
Phó Tổng Biên tập: Nguyễn Văn Tín
Phó Tổng Biên tập: Nguyễn Văn Trạch
Tổng Thư ký Tòa soạn: Dương Quang
Giấy phép số 1872/GP- BTTTT cấp ngày 9 tháng 10 năm 2012 của Bộ Thông tin và Truyền thông
Địa chỉ: 127 Võ Văn Tần, Phường 6, Quận 3 - TPHCM, Điện thoại:
028-3930.6262 / 028-3930.3275, Fax: 028-3930.4707
Bản quyền thuộc về Báo Người Lao Động ©2001-2014
Ghi rõ nguồn www.nld.com.vn khi sử dụng lại thông tin từ website này
Hotline: 0926 864 344
Email: doanhnghiep@admicro.vn

Content-Type: text/html; charset=utf-8


markdown: Chào cả nhà. Hiện nay mình mới mở một cửa hàng về văn phòng phẩm tại Vĩnh Phúc.. Mình đang cần tìm nhà phân phối văn phòng phẩm, giấy in, truyện dành cho lứa tuổi thiếu nhi, và các ấn phẩm tập tô chữ, tô màu......

X-Frame-Options: SAMEORIGIN

X-Cache: HIT from Backend


markdown:
(PL&XH) - Chỉ còn chưa đầy một tuần nữa, thí sinh cả nước sẽ bước vào kỳ thi THPT quốc gia. Kỳ thi năm nay được tổ chức sớm, nhưng công tác chuẩn bị từ các địa phương đã rất chủ động. Hiện tại, các địa phương đã sẵn sàng cho kỳ thi, với những phương án đảm bảo an ninh, an toàn triệt để đồng thời có biện pháp hỗ trợ thí sinh và người nhà trong những ngày thi.
Theo Sở GD&ĐT Hòa Bình, tỉnh sẽ tổ chức khai mạc kỳ thi THPT quốc gia 2017 vào 6g30 ngày 22-6. Tại lễ khai mạc sẽ công bố các quyết định thành lập Hội đồng thi và Ban coi thi của điểm thi; căn dặn, động viên thí sinh; không giới thiệu bộ bì đề thi trong lễ khai mạc.
Trong trường hợp xảy ra mưa bão, các điểm thi bố trí 1 phòng làm lễ khai mạc. Nếu không đủ chỗ cho tất cả thí sinh tham dự thì mời đại diện thí sinh của các phòng thi dự khai mạc.
Khi gọi thí sinh vào phòng thi, trước mỗi buổi thi, các cán bộ coi thi kiểm tra các vật dụng thí sinh mang vào phòng thi, tuyệt đối không để thí sinh mang vào phòng thi tài liệu và vật dụng cấm theo quy định tại quy chế thi.
Nếu thí sinh mang thiết bị ghi âm, ghi hình vào phòng thi thì cán bộ coi thi phải yêu cầu thí sinh làm cam kết các thiết bị đó đảm bảo theo quy định của quy chế thi.
Sở GD&ĐT cũng lưu ý, trước khi thí sinh làm bài thi trắc nghiệm, cán bộ coi thi hướng dẫn thí sinh đọc kỹ và làm theo hướng dẫn sử dụng phiếu trả lời trắc nghiệm (được in tại mặt sau của phiếu trả lời trắc nghiệm).
Giám đốc Sở GD&ĐT Điện Biên Nguyễn Sỹ Quân cho biết: Mọi công tác chuẩn bị cho kỳ thi THPT quốc gia 2017 ở địa phương đang được thực hiện nghiêm túc, đúng tiến độ; huy động gần 600 cán bộ coi thi của địa phương và từ trường đại học phối hợp. Học sinh dự thi là đối tượng được quan tâm đặc biệt.
Toàn tỉnh có 20 điểm thi THPT quốc gia, trong đó có 11 điểm thi liên trường đặt ở trung tâm các huyện, thị xã, thành phố và 9 điểm thi độc lập - là những trường ở xa, khoảng cách không gần nhau.
![ 1](http://media.phapluatxahoi.vn//uploads/medias/2017/06/16/550x500/1-bb-baaacdl9su.jpg)
Những trường bán trú, nội trú của Điện Biên luôn mở cửa chào đón thí sinh có nhu cầu ở lại ôn thi. Trường tổ chức nấu ăn tập trung hỗ trợ các em thuộc hộ nghèo, gia đình khó khăn. Người nấu có thể từ Ban đại diện cha mẹ học sinh hoặc do chính học sinh và giáo viên... Nguồn kinh phí được huy động từ UBND các huyện, Hội khuyến học, tổ chức xã hội, các nhà hảo tâm...
Tại buổi họp báo kỳ thi THPT quốc gia năm 2017 do GD&ĐT Thanh Hóa tổ chức, ông Lê Văn Hoa – Phó giám đốc Sở cho biết: Đến thời điểm hiện nay mọi điều kiện chuẩn bị cho kỳ thi đã hoàn tất. Các địa phương trên địa bàn tỉnh đã và đang tạo điều kiện tốt nhất cho kỳ thi diễn ra an toàn, nghiêm túc, đúng quy chế.
Ban chỉ đạo thi tỉnh Thanh Hóa cũng đã chỉ đạo đến Ban chỉ đạo thi các địa phương và các điểm thi để liên hệ chỗ ăn, nghỉ tạo điều kiện thuận lợi cho cán bộ, giáo viên ở xa về làm nhiệm vụ thi trên địa bàn. Đặc biệt, quan tâm bố trí cho học sinh có chỗ ăn, nghỉ không để học sinh nào vì hoàn cảnh khó khăn mà không tham dự kỳ thi.
Cụm thi Nghệ An có 30.966 thí sinh đăng ký dự thi. Nghệ An sẽ tổ chức thi ở 61 điểm thi với 1.313 phòng thi. Các trường được chọn làm điểm thi có cơ sở vật chất đầy đủ, thuận lợi cho đi lại, vận chuyển của thí sinh và phụ huynh.
Để kỳ thi được diễn ra nghiêm túc, an toàn và khách quan, Sở GD&ĐT Nghệ An dự kiến huy động hơn 2.600 giám thị làm công tác coi thi. Trong đó, giám thị đến từ các trường đại học, cao đẳng chiếm 50%. Bên cạnh đó, có khoảng 250 cán bộ làm công tác thanh tra, giám sát tại các điểm thi.
Thời điểm này, cũng như đối với các địa phương khác trên cả nước, Sở GD&ĐT Hà Nội đang tích cực chuẩn bị cho kỳ thi THPT quốc gia 2017, trong đó mục tiêu lớn nhất là tạo điều kiện thuận lợi để các thí sinh bước vào kỳ thi đạt kết quả tốt nhất.
Ông Ngô Văn Chất, Trưởng phòng Quản lý thi và Kiểm định chất lượng giáo dục - Sở GD&ĐT Hà Nội – cho biết: Đến thời điểm này, công tác chuẩn bị cho kỳ thi vẫn đang được tiến hành một cách khẩn trương, nghiêm túc.
Sở GD&ĐT Hà Nội yêu cầu các nhà trường phân loại các đối tượng học sinh, đặc biệt là lập danh sách những học sinh yếu kém, đồng thời phân công các giáo viên phụ trách những đối tượng này để giúp đỡ các em trong quá trình ôn tập. Với mục đích không học sinh nào bị lãng quên, Sở GD&ĐT cũng như yêu cầu các nhà trường tăng cường sự quan tâm, giám sát trong vấn đề hướng dẫn các học sinh ôn tập tốt, cũng trang bị cho các em cách thức làm bài thi, từng môn để đạt hiệu quả cao nhất.
Thứ trưởng Bộ GD&ĐT Nguyễn Thị Nghĩa từng lưu ý các địa phương: Vì tính quan trọng của kỳ thi THPT quốc gia, các đơn vị tổ chức thi không được chủ quan, lơ là; đặc biệt là công tác sao in, bảo mật, vận chuyển đề thi phải chặt chẽ, đúng quy trình; chú trọng tập huấn, phổ biến quy chế thi cho giám thị coi thi và thí sinh; xây dựng các phương án bảo vệ thi; làm tốt công tác truyền thông, tuyên truyền đến toàn xã hội… đảm bảo kỳ thi diễn ra nghiêm túc, an toàn, đúng quy chế.
Phan Thủy
/
*PL&XH*

Pragma: private


markdown: _________________vạn sự khởi đầu nan,gian nan bắt đầu nản,nản rồi vẫn ngồi than,than rồi lại ngồi nản..haizz

P3P: CP="IDC DSP COR ADM DEVi TAIi PSA PSD IVAi IVDi CONi HIS OUR IND CNT"

Cache-Control: no-cache

Vary: User-Agent


markdown:
MA CÀ RỒNG
Vampyr – phát sốt với trailer “đẫm máu” từ tân binh RPG nhà Sony
Vampyr, tân binh nhập vai có nét chấm phá mang âm hưởng gothic từ Sony vừa tung ra video giới thiệu về cơ chế game cực kỳ rùng rợn và ma quái của mình.
PC/Console
19/06/2017 15:30
Hé lộ trailer mới ấn định ngày ra mắt Castlevania từ đại gia Netflix
Mới đây, Netflix vừa tung đoạn trailer mới nhất đầy bạo lực, máu lửa và ấn định chính thức ngày ra mắt của siêu phẩm đầy bạo lực này vào ngày 07/06/2017.
Clip Game
25/05/2017 11:30
Điểm mặt 15 ma cà rồng đỉnh nhất thế giới anime (Phần cuối)
Cùng tìm hiểu xem những cái tên còn lại trong các ma cà rồng nổi tiếng nhất thế giới anime nhé.
Cộng đồng
14/04/2017 09:00
Điểm mặt 15 ma cà rồng đỉnh nhất thế giới anime (Phần 1)
Không chỉ đáng sợ trên phim ảnh, những ma cà rồng trong anime cũng rất ngầu đấy nhé!
Cộng đồng
13/04/2017 17:00
Gia Tộc Ma Cà Rồng: Game nhập vai phong cách anime đã cập bến Việt Nam
Với giao diện hoàn toàn bằng tiếng Việt kèm theo các sự kiện và máy chủ riêng biệt, người chơi Việt Nam cuối cùng đã có cơ hội trải nghiệm trọn vẹn tựa game đầy cạnh tranh với phong cách anime cực đáng yêu này.
Game mobile
19/01/2017 14:00
Cô nàng Ma Cà Rồng gợi cảm khiến các đấng mày râu điên đảo
Đây là bộ ảnh cosplay của Elsa Granhiert về một cô nàng Ma Cà Rồng trong series Anime đang làm mưa làm gió trên toàn thế giới hiện nay: Re:Zero (Re: Life in a Different World from Zero).
Ảnh Game
10/01/2017 09:00
«
1
»
ẢNH GAME
Chết cười khi phỏng vấn dàn nhân vật One Piece về kì thi THPT năm nay
Bỏng mắt với mỹ nhân Tokisaki Kurumi cực gợi cảm trong Date A Live
Chiêm ngưỡng cosplay Nữ thần Chiến Tranh trong Oragami cực quyến rũ
Chiêm ngưỡng “đường cong” cực nóng bỏng từ cosplay mỹ nhân Kiếm Võng 3
Bộ sưu tập cosplay toàn hotgirl cực quyến rũ tuần vừa qua
Khi couple Genji và Angela trong Overwatch “hoá thân” phong cách anime


markdown:
Severity: Notice
Message: Undefined offset: 1
Filename: controllers/popup.php
Line Number: 374
*Hua Hin Pool Villas ....Lowest Prices Guaranteed!
Khách sạn gần đó
Katathani Beach Resort
0.5 Km.
1.4 Km.
1.0 Km.
1.6 Km.
Thai Tour Info Co., Ltd. 46/26 Charoen Rat Rd, Bangklo, Bangkolaem, Bangkok 10120, Tel: +662-1641001 to 6 Fax: +662-1641010 Email: sales@choowap.com
Tất cả các quyền Thái Tour Info Co, Ltd, TAT giấy phép 11/04452
This website works best with the latest browsers: Google Chrome, Firefox, Safari

P3P: CP="NOI ADM DEV COM NAV OUR STP"


markdown:
*Hua Hin Pool Villas ....Lowest Prices Guaranteed!
Khách sạn gần đó
Siam Bay Resort
5.5 Km.
9.9 Km.
9.2 Km.
3.6 Km.
6.1 Km.
7.7 Km.
Thai Tour Info Co., Ltd. 46/26 Charoen Rat Rd, Bangklo, Bangkolaem, Bangkok 10120, Tel: +662-1641001 to 6 Fax: +662-1641010 Email: sales@choowap.com
Tất cả các quyền Thái Tour Info Co, Ltd, TAT giấy phép 11/04452
This website works best with the latest browsers: Google Chrome, Firefox, Safari


markdown:
# Những cảnh bảo quản tốt cho vách ngăn cần biết
Thảo luận trong '
[01.Khu dành riêng cho thành viên diễn đàn](forums/01-khu-danh-rieng-cho-thanh-vien-dien-dan.14/)' bắt đầu bởi [zyeuanhdiemzok](members/zyeuanhdiemzok.727/), [21/4/17](threads/nhung-canh-bao-quan-tot-cho-vach-ngan-can-biet.7970/).
Thảo luận trong '
[01.Khu dành riêng cho thành viên diễn đàn](forums/01-khu-danh-rieng-cho-thanh-vien-dien-dan.14/)' bắt đầu bởi [zyeuanhdiemzok](members/zyeuanhdiemzok.727/), [21/4/17](threads/nhung-canh-bao-quan-tot-cho-vach-ngan-can-biet.7970/).


markdown:
Sản phẩm
Sản xuất : Kaspersky Lab
Phiên bản : 2016
Giá soft247 580.000
**Kiểu bản quyền : ** Theo thời gian & theo máy **Thông tin bản quyền :** Bản quyền phần mềm 1 năm / 3 PC. Khi có phiên bản mới, Quý Khách được nâng cấp miễn phí.
Cài đặt & kích hoạt sản phẩm
Yêu cầu phần mềm
**Hệ điều hành : **Microsoft Windows XP Home Edition (Service Pack 2 hoặc cao hơn), Microsoft Windows XP Professional (Service Pack 2 hoặc cao hơn), Microsoft Windows XP Professional x64 Edition (Service Pack 2 hoặc cao hơn), Microsoft Windows Vista Home Basic (32/64 bit), Microsoft Windows Vista Home Premium (32/64 bit), Microsoft Windows Vista Business (32/64 bit), Microsoft Windows Vista Enterprise (32/64 bit), Microsoft Windows Vista Ultimate (32/64 bit), Microsoft Windows 7 Home Premium (32/64 Bit), Microsoft Windows 7 Professional (32/64 Bit), Microsoft Windows 7 Ultimate (32/64 Bit) **Phần mềm : **Microsoft Internet Explorer 6 trở lên, Microsoft Windows Installer 2.0
Yêu cầu phần cứng
• Intel Pentium 300 MHz hoặc cao hơn, 256 MB RAM với Microsoft Windows XP
• Intel Pentium 800 MHz 32 bit (x86) / 64 bit (x64) hoặc cao hơn, 512 MB RAM với Microsoft Windows Vista
• 1 GHz 32-bit (x86)/64-bit (x64) hoặc cao hơn, 1 GB RAM (32-bit) hoặc 2 GB RAM (64-bit) với Microsoft Windows 7
• Ổ cứng trống tổi thiểu 375MB
• CD-ROM.
• Kết nối Internet (Để kích hoạt sản phẩm)
Khách hàng đánh giá
Bước 1Khách đặt hàng
Bước 2Nhập thông tin cá nhân
Bước 3Thanh toán
Bước 4Xác thực và vận chuyển
Bước 5Khách nhận hàng

Server: Apache

Set-Cookie: cachthanhtoan=1; path=/


markdown:
|Class 8B - We are Family|
Chào mừng bạn đến với diễn đàn Chia sẻ kiến thức. Chỉ có thành viên của diễn đàn mới có thể được hưởng toàn bộ quyền lợi của diễn đàn. Chúc các bạn có những phút giây giải trí thật lành mạnh tại diễn đàn Chia sẻ kiến thức!!!
Vui lòng ĐĂNG NHẬP để xem tiếp. Hoặc ĐĂNG KÝ tài khoản mới để cùng tham gia thảo luận với các thành viên của diễn đàn
![]()
![]()
mimidangyeu_lc
♥[N]♥[I]♥[J]♥[I]♥
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
|» |![]()
Angel
|Đồng hồ|
|Keywords|
|Tìm kiếm|
|Đăng kí nhận tin|
|Lượt xem|
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
|Tác giả||Thông điệp|
Clarken ![]()
![]()
Posts : 938
Points : 11945
Thanked : 24
Ngày tham gia : 30/08/2011
Đến từ : Thiên Đình
Posts : 938
Points : 11945
Thanked : 24
Ngày tham gia : 30/08/2011
Đến từ : Thiên Đình
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
![]()
## Ảnh 15/11/2011
![]()
|» |


markdown:
(Suckhoe4u.com)- Ánh nắng mặt trời có tác dụng rất lớn trong việc ngăn ngừa ung thư, giảm rủi ro mắc chứng đa xơ cứng, chữa bệnh vảy nến, nâng cao chất lượng giấc ngủ… Hầu hết mọi người đều hiểu tác hại của việc ở ngoài trời quá lâu mà không sử dụng các biện pháp chống nắng sẽ dẫn …
[Xem chi tiết](http://suckhoe4u.com/loi-ich-cua-anh-nang-voi-suc-khoe/)

Server: Nginx-VPSSIM


markdown:
-
Mọi bài viết vi phạm chính sách, Spam/Không đúng chuyên mục BQT sẽ xóa bài và nick vĩnh viễn.
Để báo lỗi hoặc
**đặt quảng cáo**tại website vui lòng liên hệ:
Email: vipkhongtin@gmail.com - FB:
[Vipkhongtin](http://fb.com/vipkhongtin). Xin cảm ơn! [Dismiss Notice](account/dismiss-notice?notice_id=1)
# [Ở tại Huế] Cần mua máy ảnh 700k trở lui
Thảo luận trong '
[Điện tử - Kỹ thuật số](forums/dien-tu-ky-thuat-so.19/)' bắt đầu bởi [yeu hue], [8/12/15](threads/o-tai-hue-can-mua-may-anh-700k-tro-lui.20800/).

Server: Nginx

X-Powered-By: VPSSIM


markdown:
-
Mọi bài viết vi phạm chính sách, Spam/Không đúng chuyên mục BQT sẽ xóa bài và nick vĩnh viễn.
Để báo lỗi hoặc
**đặt quảng cáo**tại website vui lòng liên hệ:
Email: vipkhongtin@gmail.com - FB:
[Vipkhongtin](http://fb.com/vipkhongtin). Xin cảm ơn! [Dismiss Notice](account/dismiss-notice?notice_id=1)
# Chợ xe [ TN-Bán ] Ban xe may
Thảo luận trong '
[Xe Máy - Xe Đạp - Ô Tô](forums/xe-may-xe-dap-o-to.23/)' bắt đầu bởi [chautinhtri0609], [28/1/16](threads/tn-ban-ban-xe-may.29416/).


markdown:
# Bốn loại hình người tiêu dùng điển hình
Chia sẻ: Bun Bo | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:6
67
lượt xem 19
download
lượt xem 19
download
![](http://image.tlvnimg.com/document/thumbnail/2010/20100720/bunbo1/80x100/bon_loai_hinh_nguoi_tieu_dung_dien_hinh_9929.jpg)
##
Bốn loại hình người tiêu dùng điển hình
Mô tả tài liệu
[Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ](javascript:void(0);)
Download
![](http://static.tlvnimg.com/b2013az/templates/version1/default/images/down16x21.png)
Trong giai đoạn nền kinh tế Việt nam đang “tranh tối tranh sáng” giữa hai hình thức suy thoái và đang tăng trưởng trở lại, doanh nghiệp muốn “vùng đứng lên” phải tự đặt câu hỏi: Vậy khách hàng của ta là ai?
Chủ đề:
Bình luận(0)
[Đăng nhập để gửi bình luận!](javascript:void(0);)
CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

Server: Apache/2.2.31 (CentOS)

Set-Cookie: TLDEVNamespace=4quqp1iv6t9h882s7unit961i2; path=/; domain=.tailieu.vn; HttpOnly


markdown:
# Chương 5: Các phương pháp chiết rút tinh sạch và xác định protein
Chia sẻ: Duong Van Huy | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:20
lượt xem 227
download
![](http://image.tlvnimg.com/document/thumbnail/2010/20100324/quanghuy_89bg/80x100/chuong5_3512.jpg)
##
Chương 5: Các phương pháp chiết rút tinh sạch và xác định protein
[Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ](javascript:void(0);)
Download
![](http://static.tlvnimg.com/b2013az/templates/version1/default/images/down16x21.png)
Trong các tổ chức của cơ thể sống, protein có thể ở dưới dạng tự do trong các dịch sinh vật hoặc dưới dạng kết hợp, hoặc bị cầm trong các tế bào. Hơn nữa, trong tế bào có chứa hàng nghìn loại protein khác nhau, nếu ta cần nghiên cứu từng loại protein, trước hết phải chiết rút và tinh sạch chúng. Chính vì vậy, các kỹ thuật chiết rút, tinh sạch và nghiên cứu protein luôn ở vị trí trung tâm của các nghiên cứu hóa sinh và luôn được cập nhật và hiện đại hóa....
Bình luận(0)
[Đăng nhập để gửi bình luận!](javascript:void(0);)
##
Nội dung Text: Chương 5: Các phương pháp chiết rút tinh sạch và xác định protein
- 67 Chương 5 Các phương pháp chiết rút tinh sạch và xác định protein I. Khái niệm Trong các tổ chức của cơ thể sống, protein có thể ở dưới dạng tự do trong các dịch sinh vật hoặc dưới dạng kết hợp, hoặc bị cầm trong các tế bào. Hơn nữa, trong tế bào có chứa hàng nghìn loại protein khác nhau, nếu ta cần nghiên cứu từng loại protein, trước hết phải chiết rút và tinh sạch chúng. Chính vì vậy, các kỹ thuật chiết rút, tinh sạch và nghiên cứu protein luôn ở vị trí trung tâm của các nghiên cứu hóa sinh và luôn được cập nhật và hiện đại hóa. II. Các biện pháp cần thiết để nhận protein nguyên thể Các phương pháp chiết rút và tinh sạch protein đều dựa trên những tính chất hóa lý của protein như độ tích điện, kích thước phân tử, độ hòa tan... của protein cần chiết rút. Nhiều protein còn liên kết với các phân tử sinh học khác nên việc chiết rút các protein này còn phụ thuộc vào bản chất của các liên kết. Muốn thu nhận được các protein nguyên thể tức là protein có tất cả tính chất tự nhiên đặc trưng của nó, cần sử dụng các biện pháp khác nhau. 2.1. Nhiệt độ Để tách các protein khác nhau dựa trên kết tủa của chúng, người ta có thể sử dụng phương pháp biến tính chọn lọc nhờ tác dụng của nhiệt. Một điều cần lưu ý là chỉ nên dùng đối với trường hợp các protein enzyme bền với nhiệt. Dịch protein enzyme được giữ ở 50 - 70 0C trong thời gian xác định, sau đó protein tạp đã bị biến tính được loại bỏ bằng cách lọc hoặc ly tâm. Như vậy, dịch chiết protein thô bền với nhiệt có thể được thu nhận bằng cách cho kết tủa không thuận nghịch phần lớn các protein tạp. Để thu nhận chế phẩm protein theo phương pháp kết tủa thuận nghịch bằng các muối trung tính, cần tiến hành ở nhiệt độ thấp, đối với dung môi hữu cơ cần tiến hành ở nhiệt độ dưới 00C tránh biến tính đặc biệt là protein enzyme. 2.2. Nồng độ proton (pH) Protein là các chất lưỡng tính, vì vậy, trong các dung dịch acid và kiềm chúng sẽ bị phân ly như sau:
- 68 Kiềm Protein - COOH Protein - COO- + H+ acid acid Protein - NH2 Protein - NH3+ Kiềm Do các acid amin trong chuỗi polypeptide còn tồn tại nhiều nhóm chức tự do dưới dạng các ion hóa là nguyên nhân tạo ra tính đa điện của protein. Phân tử protein rất dài nên nhóm ion tự do tận cùng của chuỗi polypeptide không đáng kể, chủ yếu các nhóm chức tự do khác của chuỗi bên (R) quyết định tính chất tích điện của phân tử protein (nhóm cacboxyl của amino acid, OH của Tyrosine, ε - NH2 của lysine, guamidin của Arginine, inidazol của histidine) Mức độ ion hóa của các nhóm này phụ thuộc vào giá trị pH. Các nhóm acid ở dạng anion trong môi trường kiềm, các nhóm kiềm tồn tại ở dạng cation trong môi trường acid. Như vậy, ở một giá trị pH xác định, mỗi phân tử protein có một điện tích tổng số nào đấy mà độ lớn của nó phụ thuộc vào số lượng các nhóm tích điện dương và tích điện âm. Kết quả là ở giá trị nồng độ ion hydro cố định, các protein khác nhau trong hỗn hợp sẽ có tổng điện tích khác nhau. Nhiều phương pháp dùng để tách các hỗn hợp protein đều dựa vào đặc tính này. Các phân tử protein mang điện tích tổng số (dương hoặc âm) cùng dấu đẩy nhau ra xa nên dễ tan vào dung dịch. Mỗi một protein có một giá trị pH nhất định mà ở đó tổng số điện tích âm và điện tích dương trong phân tử bằng không. Giá trị đó gọi là điểm đẳng điện của protein. Điểm đẳng điện của các acid amin trung tính có giá trị pH từ 5,6 - 7,0; đối với các acid amin có tính acid (dicarboxylic) là từ 3,0 - 3,2; đối với các acid amin có tính kiềm (diamino) là từ 9,7 - 10,8. Ở điểm đẳng điện, độ hòa tan của protein là thấp nhất, protein dễ bị kết tủa. Dựa vào tính chất này, người ta có thể tách từng phần các protein enzyme trong hỗn hợp. Cũng giống như trường hợp tác dụng của nhiệt độ trong việc tách chiết protein, có thể dùng phương pháp biến tính chọn lọc nhờ tác dụng của pH của môi trường. Dịch protein enzyme được giữ ở pH ≤ 5 trong thời gian xác định. Protein tạp bị biến tính cũng được loại bỏ bằng cách lọc hoặc ly tâm. Ví dụ citochrom C cũng tan trong acid trichloracetic trong khi đó acid này làm kết tủa phần lớn protein. Như vậy các protein bền với acid có thể được tách chiết bằng cách này.
- 69 2.3. Tác nhân hóa học Có thể dùng muối trung tính hoặc các dung môi hữu cơ để tách chiết các protein enzyme. Phương pháp này được tiến hành dựa trện cơ sở: độ hòa tan của protein phụ thuộc vào sự tương tác của các nhóm tích điện trong phân tử protein với các phân tử nước. Sự tương tác đó (còn gọi là sự hydrate hóa) sẽ bị giảm xuống khi thêm vào dung dịch protein enzyme các dung môi hữu cơ hoặc các muối trung tính. Dung môi hữu cơ thường dùng là etanol, isopropanol, acetone hoặc hỗn hợp các loại rượu. Khi sử dụng các dung môi hữu cơ, cần chú ý tiến hành ở nhiệt độ thấp (từ 50C trở xuống). Dùng dung môi hữu cơ có thể tiến hành tách phân đoạn dưới 00C và có thể đến -200C, như vậy có tác dụng tốt đến độ ổn định của protein enzyme. Khi đã có kết tủa, chú ý lấy nhanh kết tủa ra khỏi dung môi bằng cách dùng máy ly tâm lạnh. Các muối trung tính có thể dùng là (NH4)2SO4, Na2SO4, MgSO4... Tuy nhiên, người ta đã nhận thấy muối (NH4)2SO4 là tốt nhất vì nó không làm hại mà làm ổn định (làm bền) hầu hết các loại protein enzyme. Loại muối này lại rẽ tiền và phổ biến. Độ hòa tan của nó lại rất lớn (bảo hòa 767g/l ở 250C) Ngoài ra nồng độ (NH4)2SO4 cần thiết để kết tủa protein enzyme khác nhau thì khác nhau nhiều. Ví dụ: Protease của nấm mốc dễ bị kết tủa ở 70% của (NH4)2SO4 bảo hòa hoàn toàn, còn amilase của mầm lúa bị kết tủa ở 50% độ bảo hòa của dung dịch muối này. Điều đó nói lên tính kết tủa lựa chọn của (NH 4)2SO4 cao hơn các muối khác. Có thể dùng (NH4)2SO4 ở cả 2 dạng: dạng bột và dạng dung dịch bảo hòa. Khi dùng bột, người ta cho từng ít một vào dịch chiết protein enzyme. Cách cho cũng ảnh hưởng lớn đến lượng kết tủa ban đầu của protein enzyme. Khi cho muối vào dịch chiết cần phải có máy khuấy từ để đảm bảo sự hòa tan của muối. Khi dùng dung dịch bảo hòa, trong nhiều sách về phương pháp nghiên cứu, người ta đưa ra bảng tính số lượng muối cần thiết để pha các dung dịch có độ bão hòa khác nhau ở những nhiệt độ nhất định. Khái niệm về số phần trăm của độ bảo hòa hoàn toàn đã được đề cập đến. Như ví dụ trên thì protein enzyme có thể bị kết tủa ở 50% (0,5) hoặc 70% (0,7) của độ bão hòa hoàn toàn của (NH4)2SO4. Khi cho dung dịch
- 70 (NH4)2SO4 bão hòa vào dịch chiết protein enzyme thì nồng độ (NH 4)2SO4 không tăng đột ngột. Sau khi kết tủa xong người ta thường để lắng khoảng 2 giờ hoặc qua đêm, mục đích là tạo kết tủa hoàn toàn (ở phương pháp dùng dung môi hữu cơ thì không cần để lâu). Kết tủa được lấy ra bằng cách ly tâm hoặc lọc qua phễu Buchner. Khi hòa tan kết tủa lại người ta thường thêm ion Ca++ để làm bền protein enzyme (dùng CaCl2 hoặc Ca(CH3 COO)2 Để tiện lợi, người ta đưa ra công thức cách tính lượng (NH4)2SO4 cho vào dịch có độ bão hòa cho trước (S1) để đạt đến một độ bão hòa cần thiết (S2) Tùy theo trạng thái (NH4)2SO4 cho thêm vào dịch chiết protein enzyme mà có công thức tính toán khác nhau. - Đối với (NH4)2SO4 ở dạng bột 0,515.V ( S 2 − S1 ) x(g) = 1 − 0,272 S 2 Trong đó V là thể tích dung dịch, S1, S2 là độ bão hòa cho trước và độ bão hòa cần đạt (ví dụ: S1 = 0,5; S2 = 0,7 chẳng hạn). Người ta cũng có thể dùng bản đồ toán (nomogram) để chiếu và xác định được lượng (NH4)2SO4 thêm vào để dịch chiết protein enzyme đạt được một độ bão hòa nhất định. Hoặc có thể đối chiếu ở bảng có sẵn. Lượng (NH4)2SO4 đưa vào để dung dịch có độ bão hòa nhất định có khác nhau tùy theo nhiệt độ thí nghiệm. - Đối với (NH4)2SO4 ở dạng dung dịch bão hòa. Thể tích (tính theo ml) của dung dịch bão hòa cần cho vào 100ml dung dịch có độ bão hòa ban đầu S1 để đạt đến một độ bão hòa S2 cần thiết được tính theo công thức sau: 100.( S 2 − S1 ) V(ml) = 1 − S2 Như vậy, nếu thêm từng phần các dung môi hữu cơ hoặc từng phần muối (NH4)2SO4 (có nồng độ bão hòa khác nhau) thì ta có thể tách từng phần hỗn hợp protein enzyme. Tuy nhiên, để phân chia hoàn toàn những hỗn hợp phức tạp, phương pháp này không cho kết quả tốt vì độ hòa tan của một số protein bị tăng lên. Mặc dầu vậy, cách kết tủa từng phần này cũng rất có lợi, đặc biệt là đối với giai đoạn đầu của việc tách chiết và làm
- 71 sạch protein emzyme, vì phương pháp khá đơn giản. Ngoài ra, các tác động khác như cơ học, sóng siêu âm... có ảnh hưởng đến quá trình tách chiết protein emzyme. III. Phá vỡ tế bào và chiết rút protein 3.1. Phá vỡ tế bào Protein enzyme có trong tất cả các cơ thể động vật, thực vật và vi sinh vật. Sau khi được tổng hợp nó có thể được tiết ra ngoài tế bào tồn tại trong các dịch cơ thể, dịch môi trường (gọi là protein enzyme ngoại bào) hoặc được giữ lại bên trong tế bào (protein enzyme nội bào). Các protein enzyme nội bào có thể tồn tại ở dạng hòa tan trong tế bào chất và các bào quan (nhân, microsome, mitochondria v.v...) của tế bào. Tế bào được bao bọc bằng một lớp màng.Lớp màng này ở vi khuẩn đôi khi rất bền và dày. Người ta còn thấy nhiều protein enzyme liên kết rất chặt chẽ với các bào quan của tế bào. Các phân tử protein enzyme không có khả năng đi qua màng của tế bào và màng của các bào quan của tế bào. Do đó để có thể chiết rút các protein enzyme nội bào, bước đầu tiên là phải phá vỡ cấu trúc của các tế bào có chứa protein enzyme và chuyển chúng vào dung dịch. Có thể phá vỡ cấu trúc của tế bào bằng các biện pháp cơ học như nghiền với bột thủy tinh hoặc cát thạch anh, làm đồng hóa bằng thiết bị nghiên đồng thể (homogenizator). Thiết bị này có chày thủy tinh gắn với một môtơ quay và có thể điều chỉnh được tốc độ quay theo yêu cầu. Các tế bào giữa chày thùy tinh và thành cối sẽ bị phá hủy. Để việc phá vỡ có hiệu quả, ở mô thực vật, trước khi nghiền, người ta thường thái nhỏ mẫu để vào ngăn đá hoặc cho trương nước. (ví dụ như đối với mẫu hạt khô). Còn ở các mô của động vật như gan hoặc thận, khi chiết protein enzyme người ta cần cắt bỏ các mô liên kết. Muốn tách được các protein trong các cấu tử của tế bào, người ta còn phải dùng các yếu tố vật lý và hóa học khác như sóng siêu âm, dùng các dung môi hữu cơ như butanol, acetone, glycerin, ethylacetat... và chất tẩy (detergent). Các hóa chất tốt cho việc phá vỡ các bào quan của tế bào vì trong các cơ quan này thường chứa mỡ. 3.2. Chiết rút protein Sau khi đã phá vỡ cấu trúc của các tế bào tiến hành chiết xuất các protein enzyme bằng các dụng dịch đệm thích hợp, dung dịch muối trung tính hoặc bằng nước đối với protein enzyme nội bào hoặc bằng ly tâm tách
- 72 tế bào đối với các protein enzyme ngoại bào: việc chọn phương pháp tách chiết protein enzyme tùy thuộc vào tính chất của protein enzyme cần nghiên cứu. IV. Tinh sạch protein 4.1. Loại các tạp chất Trong dịch chiết thô thu được ngoài protein enzyme còn có các protein tạp, các chất cao phân tử khác như polysaccharid, acid nucleic và các chất phân tử nhỏ như đường monose, các chất lipid, muối khoáng v.v... Để loại bỏ chúng phải sử dụng phối hợp nhiều biện pháp khác nhau. Để loại bỏ muối khoáng và các loại đường... là các tạp chất có phân tử lượng thấp người ta thường dùng phương pháp thẩm tích (dialysis) đối nước hay đối các dung dịch đệm loãng hoặc bằng cách lọc qua gel sephadex. Để loại bỏ các protein tạp và các tạp chất có phân tử lượng cao khác, người ta hay dùng kết hợp nhiều biện pháp khác nhau: phương pháp biến tính chọn lọc nhờ tác dụng của nhiệt độ hoặc pH của môi trường, phương pháp kết tủa phân đoạn bằng muối trung tính hoặc các dung môi hữu cơ (xem 5.2.1; 5.2.2. và 5.2.3), các phương pháp sắc ký trao đổi ion, điện di, phương pháp lọc gel. 4.2. Các kỹ thuật thông thường trong tinh sạch protein Như trên đã trình bày, sau khi nhận được dịch chiết protein thô, người ta thường sử dụng các phương pháp khác nhau để tách chiết và đồng thời làm tinh sạch protein. Ngoài các kỹ thuật đã được giới thiệu cụ thể ở các phần trên, có thể sử dụng các phương pháp dưới đây phục vụ cho việc tinh sạch các protein. 4.2.1. Ly tâm Một trong những kỹ thuật không thể thiếu được trong việc tách chiết và tinh chế protein là ly tâm. Máy ly tâm được sử dụng để tách các phần khác nhau khỏi dung dịch. Người ta gọi pha lỏng là chất lỏng bên trên kết tủa, pha rắn mà thường lắng kết xuống đáy ống ly tâm được gọi là kết tủa. Thực chất, sự ly tâm tăng tốc độ kết tủa của những tiểu phần rắn nhờ lực ly tâm. Sự sai khác về tỷ trọng của nguyên liệu lơ lững so với chất lỏng càng lớn thì tốc độ kết tủa sẽ càng cao. Mặc dầu người ta coi số vòng quay trong một phút là đơn vị thông thường của lực ly tâm, nhưng quy ước ấy không thỏa mãn.
- 73 Chính vì vậy, mức độ tăng lực ly tâm được đo một cách chính xác hơn bằng những bội số của trị số gia tốc của lực hút ở mặt biển, có nghĩa là được đo một lực ly tâm tương đối (relative centrifugal force, RCF) hoặc là được đo bằng các giá trị là bội số của lực hút trọng trường (xg). Công thức để tính lực ly tâm tương đối là: 4π 2 rn 2 32,2 Trong đó r là bán kính đến đáy của ống ly tâm tính ra "phút" (foot, 1foot = 30,48cm), n là số vòng quay trong 1 giây. Có thể tính giá trị của lực ly tâm tương đối một cách trực tiếp theo công thức: Lực ly tâm tương đối (g) = 1,1118 x 10-5 x R x N2. Trong đó R là bán kính (cm) nắp ly tâm tính từ tâm của trục đến đáy ống ly tâm, N là số vòng quay trong một phút. Cũng có thể dùng bản đồ toán (nomogram) để tính lực ly tâm tương đối Thông thường có thể làm kết tủa những tiểu phần lớn với lực ly tâm tương đối bé bằng các máy ly tâm để bàn. Để làm kết tủa những tiểu phần bé hơn kể cả những thành phần của tế bào cần có những máy ly tâm đặc hiệu bảo đảm được các giá trị lực ly tâm tương đối cao hơn 15000 x g đối với bất kỳ định lượng nào. Có những nguyên tắc để làm việc an toàn hơn với máy ly tâm đối với người thao tác cũng như đối với nguyên liệu được xử lý mà lúc thí nghiệm cần chú ý tuân thủ. Đó là nguyên tắc cân bằng đối xứng khi ly tâm và thăng bằng máy ly tâm khi đặt máy làm việc. Do tính chất không bền với nhiệt của phần lớn các protein enzyme, khi tách chiết tinh chế chúng, cần sử dụng máy ly tâm lạnh. Trong trường hợp điều kiện thí nghiệm có hạn chế, có thể sử dụng một số phương cách nhằm đảm bảo duy trì mẫu ở nhiệt độ thấp. Cần làm lạnh tốt mẫu và ống ly tâm trước khi ly tâm. Nếu trong máy có các ổ đệm thay thế có thể làm lạnh chúng trong tủ lạnh trước khi ly tâm. Cần phải tiến hành ly tâm với thời gian tối thiểu để tránh nóng máy. Có thể đặt trực tiếp máy ly tâm bé vào tủ lạnh, đưa dây dẫn ra ngoài qua lớp đệm của cánh cửa tủ lạnh. 4.2.2. Thẩm tích Thẩm tích là sự khuếch tán vi phân qua màng vốn không thấm đối với những chất keo hòa tan (protein, một số các polysaccharid) nhưng thấm đối với các dạng dịch các tinh thể.Các tinh thể (các muối, các hợp chất hữu cơ có trọng lượng phân tử thấp...) có thể khuếch tán qua màng
- 74 theo định luật Fick. Nước sẽ khuếch tán từ dung dịch có nồng độ thấp hơn (thường là dung dịch rửa) vào dung dịch keo, trong khi đó các ion (cation và anion) và các chất phân tử nhỏ sẽ chuyển vào dung dịch có nồng độ thấp hơn (thường chuyển vào dung dịch rửa). Trong quá trình tách chiết và tinh sạch protein, để loại muối ammonium sulphate ra khỏi dung dịch protein thì cho dung dịch protein vào cái túi đặc hiệu làm bằng nguyên liệu bán thấm. Thông thường người ta hay dùng túi colodion hoặc cellophane (loại sau hay được dùng hơn). Sau đó đặt cả túi vào bình chứa lượng lớn nước hoặc lượng lớn dung dịch đệm được pha loãng (ví dụ đệm phosphate có pH = 7, nồng độ 0,01M). Vì màng cellophane là màng bán thấm, có kích thước lỗ chỉ cho các chất có phân tử đi qua vào các dung dịch đệm loãng theo định luật khuếch tán. Như vậy, muối sẽ khuyến tán vào nước hoặc dung dịch đêm loãng (di chuyển theo hướng giảm nồng độ), còn nước hoặc đệm loãng sẽ di chuyển từ dung dịch rửa vào túi chứa protein. Protein là những đại phân tử không thể vượt qua túi thẩm tích và được giử lại trong túi. Bằng cách thay đổi thường xuyên dung dịch rửa có thể tẩy sạch muối ra khỏi protein , mặc dầu trong quá trình thẩm tích, nó là dung dịch được pha loãng hơn. Có thể làm giảm bớt hoặc loại trừ sự pha loãng như thế khi tiến hành thẩm tích dưới áp suất, có nghĩa là khi dung dịch được xử lý nằm dưới một áp suất thủy tĩnh đầy đủ, để dòng thủy động học của nước từ dung dịch sẽ cân bằng sự khuếch tán của các phân tử vào dung dịch. Phương pháp này thường đòi hỏi có thiết bị đặc biệt. Hình 5.1 Thẩm tích để loại muối (NH4)2SO4 trong kết tủa protein. Phương pháp thẩm tích thông thường là cho dung dịch có kết tủa protein vào túi thẩm tích (không quá 2/3 thể tích túi). Cho thuốc sát trùng hoặc toluen để bảo quản protein (vì thời gian thẩm tích lâu, protein có thể bị thối hỏng). Buộc túi vào một que thủy tinh, gác que thủy tinh lên miệng chậu nước để giữ túi ở giữa chậu. Cho vòi nước chảy nhẹ liên tục vào đáy chậu để thay đổi nước thường xuyên (hình 5.1). Muối (NH2)SO4 hòa tan trong nước và bị loại dần. Thời gian thẩm tích có thể từ 24 - 48 giờ, làm
- 75 thẩm tích lần cuối cùng bằng nước cất. Có thể tăng tốc độ thẩm tích khi khuấy dung dịch rửa bằng máy trộn cơ học hay máy trộn từ hoặc là quay chậm túi nhờ động cơ không lớn. Khi thẩm tích các protein thường người ta tiến hành tất cả các thao tác ở môi trường lạnh. 4.2.3. Sắc ký lọc gel Sắc ký lọc gel là một trong những kỹ thuật sắc ký cột được dùng phổ biến trong tách chiết và tinh sạch protein. Dịch chiết protein enzyme đã được loại bỏ phần lớn các protein tạp nhưng vẫn chưa đảm bảo độ đồng nhất cần thiết được tiếp tục làm sạch bằng phương pháp sắc ký cột. Phương pháp sắc ký (chromatography) là do hai chữ "chroma" là màu sắc và "grapho" là viết, nghĩa là viết bằng màu. Thuở ban đầu, người ta sử dụng phương pháp sắc ký để tách các chất màu và chỉ sau này người ta áp dụng cho việc tách các chất không màu. Sắc ký lọc gel còn được gọi là phương pháp dùng chất rây phân tử, lọc gel (gel filtration) Cơ sở của phương pháp lọc gel là dựa vào sự khác nhau nhau về kích thước, hình dạng và phân tử lượng của protein enzyme có trong hỗn hợp để tách chúng ra. Để đảm bảo cho việc tách protein enzyme được tốt, chất rây phân tử phải là chất trơ, không phản ứng với protein enzyme. Chất này cũng không hòa tan và tương đối bền với các yếu tố về cơ học cũng như sinh học. Ngoài ra chất được sử dụng cho mục đích lọc phân tử phải là chất không có tính đàn hồi (không co) và phải là chất ưa nước (hidrofil). Gel sephadex là chất thỏa mãn các yếu tố trên. Sephadex là chế phẩm dextran do các loài vi sinh vật khác nhau là Leuconostoc tạo ra khi chúng được nuôi cấy trên môi trường chứa saccharose. Trọng lượng phân tử của dextran có thể đạt tới hàng triệu và lớn hơn. Phân tử dextran bao gồm các chuỗi do các gốc glucose tạo thành các liên kết 1,6. Sephadex Nhận từ dextran bằng cách xử lý hóa học (do tác dụng của epichlohidrin) để tạo ra các lưới phân nhánh có liên kết ngang gọi là "sàng phân tử" và chất này trở thành không tan trong nước. Số liên kết ngang tạo ra càng nhiều, kích thước của lỗ sàng phân tử càng nhỏ. Phương pháp lọc phân tử trên Sephadex được tiến hành như sau: cho sephadex vào cột thủy tinh dài và cân bằng bằng dung dịch đệm có pH
- 76 nhất định. Sau đó cho dung dịch protein enzyme lên cột. Khi lọc và chiết bằng dung môi thích hợp, các phân tử có trọng lượng phân tử nhỏ (ở đây là các muối) sẽ khuếch tán chậm chạp qua các lỗ nhỏ của các hạt Sephadex bị trương phồng, còn chất có trọng lượng phân tử lớn hơn (ở trường hợp này là protein enzyme) không có khả năng đi vào mà lách nhanh qua các hạt sephadex và sẽ được chiết nhanh ra khỏi cột (hình 5.2 và hình 5.3). Vì vậy ta có thể tách được chất có trọng lượng phân tử cao hơn thoát ra khỏi cột gel trước so với chất có phân tử lượng nhỏ. Hãng Sephadex (Pharmacia) của Thụy Điển đã tung ra thị trường các loại sephadex có kích thước khác nhau có ký hiệu từ G10 đến G200. Số ký hiệu để chỉ ra mức độ nhận (hút) nước của chúng. Ví dụ G10 để chỉ khi trương phồng thì 1g gel khô nhận 1ml nước (1ml/g) muä úi prot ein Hình 5.2 Hoạt động của lọc phân tử sephadex. Các sephadex có ký hiệu khác nhau từ G10 đến G200 phục vụ trong việc lọc phân tử cho phép các chất có trọng lượng phân tử khác nhau lọt vào ở các ngưỡng khác nhau. Người ta còn sử dụng sephadex để loại muối thay cho quá trình thẩm tích. Cùng nhóm chất rây phân tử có nguồn gốc polisacharid, là chế phẩm dextran như sephadex (pharmacia) còn có molselect (Reanal) - là sản phẩm của Hungary được ứng dụng nhiều trong nghiên cứu. Có thể dùng để làm cô đặc các chất có trọng lượng phân tử lớn như protein, peptid, loại muối khỏi protein enzyme (dùng nhanh hơn so với thẩm tích), lọc gel tách theo trọng lượng phân tử (như protein huyết thanh)
- 77 Caïc phán tæí låïn khäng thãø âi vaìo caïc haût Sephadex Haût Caïc phá tæí nhoí âi Sephadex vaìo bãn trong caïc haût Sephadex Hình 5.3 Tách các phân tử theo kích thước bằng sắc ký lọc gel. hoặc tách các sản phẩm protein được hình thành dưới tác dụng của enzyme phân cắt (như γ - G - globulin bị cắt bởi papain). Ngoài nhóm chất rây phân tử là chế phẩm dextran còn có nhóm chất rây phân tử là chế phẩm gel acrilamid bao gồm Biogel (Bio - Rad) và Acrilex (Reanal). Acrilex gel là loại copolimer, sản phẩm của Hungary được tạo ra từ acrilamid và N, N' - metilen bisacrilamid. Các acrilex gel có ký hiệu từ P - 300 dùng để tách các chất có trọng lượng phân tử trong ngưỡng từ 100 - đến 300.000. Có thể sử dụng ở vùng pH từ 2 - 11. Chất thứ ba là agarose gel, đã loại sulphate. Hay phổ biến là loại sepharose (Pharmacia). Người ta thường dùng chất này để tách các phân tử có trọng lượng lớn hơn 106. Tóm lại bằng phương pháp lọc rây phân tử người ta thể tách các chất có trọng lượng phân tử khác nhau có trong hỗn hợp (như polimer, polisaccharid, acid nucleic, protein). Người ta có thể dùng kỹ thuật này để loại muối thay cho quá trình thẩm tích. Và hơn thế nữa, trong quá trình tinh chế protein enzyme, chúng còn được sử dụng để cô đặc dung dịch protein enzyme.
- 78 4.2.4. Phương pháp sắc ký trao đổi ion. Phương pháp sắc ký trao đổi ion dựa vào sự khác nhau về điện tích tổng số của các protein enzyme. Hay nói cách khác, phương pháp này được dựa trên cơ sở của phản ứng trao đổi ion giữa protein được tan trong nước hoặc dung dịch đệm loãng và các tác nhân trao đổi ion. Tác nhân (hay nguyên liệu) trao đổi ion có thể là chất nhựa có tích nhóm sinh ion hoặc là chất ionit. Đây là những chất giá trơ, không tan trong nước, có bản chất là cellulose hoặc chất gel dextran có lưới phân nhánh (Sephadex, Molselect) hoặc là chất nhựa polistirol. Chất giá thể này thường kết hợp với các nhóm ion hóa. Các chất trao đổi ion có chất giá là celluose, sephadex, molselect thông thường được dùng để tách protein enzyme, còn các chất trao đổi ion có chất giá là polistirol (ví dụ như Dowex, Amberlite) chỉ dùng để tách các peptid có trọng lượng phân tử nhỏ hơn. * Các chất trao đổi ion có chất giá cellulose - Cationit CM - cellulose (carboxylmetyl - cellulose)- là một dẫn xuất este của cellulose. Cellelose - O - CH2 - COOH Khi phân li cho ra COO-. Đây là chất trao đổi cation. Trên những cationit, thì các protein kiềm có thừa những nhóm amin và những nhóm kiềm khác được hấp phụ (liên kết ion). Sự hấp phụ trên các cationit được tiến hành với những dung dịch loãng ở pH 1,5 - 6,5. (Các protein kiềm có chứa các acid amin diamino - mono carboxylic như lys, Arg, His) - Anionit DEAE - cellulose (diethylamino - ethyl - cellulose) là dẫn xuất este của cellulose) C2H5 Cellulose - O - CH2 - CH2 - N C2H5 Trong H2O nó được phân ly: Cellulose - O - C2H4 - N - (C2H5)2 + H2O C2H5 Cellulose - O - C2H4 - N+ + OH- C2H5 H Đây là chất trao đổi anion, bản thân tích điện dương.
- 79 Các anionit được áp dụng để phân tích các protein acid có thừa những nhóm carboxyl tự do. Sự hấp phụ protein trên những ionit như vậy được tiến hành với những dung dịch đệm có lực ion thấp (0,005 - 0,1M) ở pH 7,5 - 8,5. (các protein acid có chữa các amino acid monoamin dicarboxylic như glu, Asp) Trong hỗn hợp chất ionit với dung dịch đệm có độ pH tương ứng, các chất ionit đã nói ở trên trở nên tích điện. Vì vậy trên bề mặt lớp chất giá sẽ hình thành một lớp điện tích có dấu phụ thuộc vào kiểu nhóm chức hóa học của nó. Nếu thêm protein enzyme vào dung dịch đệm thì các phân tử protein enzyme mang điện tích sẽ bị các nhóm tích điện trái dấu của chất trao đổi ion kéo lại. Khi dùng một dung dịch đệm để phản hấp phụ có pH khác hoặc khi thêm một loại ion khác có lực ion lớn hơn thì phân tử protein enzyme sẽ bị đẩy ra khỏi chất trao đổi ion. Khi tiến hành phản hấp phụ, thường người ta thêm vào các ion Na+ và Cl- trong NaCl có nồng độ tăng dần theo bậc thang hay theo gradient. Các phân tử protein enzyme nào có điện tích tổng số nhỏ thì sẽ bị đẩy ra trước do lực liên kết với chất trao đổi ion yếu. Còn những protein enzyme nào có liên kết với ionit lớn hơn thì sẽ bị đẩy ra bằng một lực ion của muối lớn hơn. Như vậy, bằng cách này, chúng ta có thể tách được từng phần các loại protein enzyme. Việc tách từng phần có lựa chọn tốt nhất là khi tăng dần nồng độ các ion thay thế. Nhờ nồng độ ion của muối tăng dần (gradient) người ta có thể rút ra từ cột các loại protein enzyme khác nhau. Có thể thu nhận dịch chiết enzyme protein sau khi qua cột bằng máy thu phân đoạn tự động. Theo thứ tự từng phần dịch thu được, người ta tiến hành định lượng protein theo các phương pháp Lowry hay phương pháp đo quang phổ và xác định đoạt hoạt độ của enzyme. * Nếu chất giá là sephadex thì chúng ta có chất trao đổi ion sephadex. Đó là các loại DEAE - sephadex và CM - sephadex. Ưu điểm của loại này là vừa tách được protein enzyme về kích thước và về điện tích tổng số của các protein enzyme. Trường hợp CM - sephadex trên chất giá sephadex có gắn nhóm COO- - O - CH2 - COOH ↓ phân ly COO : mang điện tích âm → là chất trao đổi cation -
- 80 4.2.5. Phương pháp dùng chất hấp phụ đặc hiệu sinh học hay là phương pháp sắc ký ái lực (affinity Chromatography). Cơ sở của phương pháp này là người ta gắn những phân tử gắn (ligand) vào chất mang (chất giá) rắn bằng liên kết cộng hóa trị mà protein enzyme cần tách sẽ tương tác đặc hiệu với nó. Những chất đó có thể là cơ chất (Substrate) hoặc chất ức chế (inhibitor) cạnh tranh. Trong trường hợp hai chất kháng nguyên và kháng thể có ái lực liên kết đặc hiệu với nhau, người ta thay thế vị trí chất gắn vào giá thể giữa kháng nguyên và kháng thể để nghiên cứu từng loại giống như cơ chất, chất ức chế và enzyme đặc hiệu của chúng. Hay nói cách khác dùng chất chỉ có khả năng liên kết đặc hiệu với một enzyme hoặc protein ta nghiên cứu. Chất mang thể rắn có thể là bất kỳ một loại nào phục vụ cho lọc gel như sephadex, nhưng người ta hay sử dụng nhất là gel Sepharose Ở trên cột giá thể hay chất mang chứa cơ chất cố định ở pH và lực ion phù hợp, chỉ có protein enzyme nào có khả năng chuyển hóa cơ chất mới gắn vào, các protein khác thì chảy xuống cột. Bằng cách thay đổi pH và lực ion phù hợp hoặc có thể bằng cách thêm chất ức chế cạnh tranh đã được hòa tan vào thì có thể tách được protein enzyme khỏi cột ở trạng thái sạch. 4.2.6. Kết tinh protein. Đây là phương pháp đặc hiệu tốt nhất để tách từng phần protein enzyme ở giai đoạn tinh chế cuối cùng. Khi protein enzyme đã được làm tinh khiết hoàn toàn, trong những trường hợp riêng biệt, người ta có thể tiến hành kết tinh chúng. Một điều cần chú ý là protein enzyme ở trạng thái tinh thể không thể được coi là bằng chứng về sự tinh khiết. Các tinh thể protein enzyme kết tinh lần đầu đôi khi có độ sạch không vượt quá 50% và có thể chứa các protein enzyme khác. Người ta thường tiến hành kết tinh protein enzyme trong dung dịch (NH4)2SO4. Quá trình kết tinh có thể tiến hành từ từ kéo dài vài ngày thậm chí hàng tuần nếu muốn nhận được các tinh thể tốt. Thông thường là thêm muối (NH4)2SO4 vào dung dịch protein enzyme khá đậm đặc cho đến khi làm vẫn đục nhẹ nhàng dung dịch. Sau đó đặt dung dịch vào một nơi, đồng thời tăng rất từ từ nồng độ muối trong dung dịch. Có thể tiến hành tăng nồng độ muối theo nhiều cách, thêm dung dịch muối đậm đặc hơn vào dung dịch protein enzyme theo từng giọt, thêm muối qua màng bán thấm hoặc có thể cho bay hơi chậm chạp dung dịch protein enzyme. Trong quá trình kết tinh có thể thay đổi chỉ số pH hoặc nhiệt độ. Để kết tinh protein
- 81 enzyme được dễ dàng, ở những giai đoạn trước đó, người ta thường tách từng phần các protein enzyme bằng các dung môi hữu cơ. Điều này có lẽ liên quan đến việc các chất cơ bản, chất lipid bị loại ra khỏi dung dịch protein enzyme tạo điều kiện tốt cho quá trình kết tinh. 4.2.7. Làm khô và bảo quản chế phẩm protein. Tính cố định cấu trúc của protein được bảo đảm nhờ khả năng liên kết nước của chúng. Nếu dung dịch protein enzyme bị khô ở độ nhiệt trong phòng thì đa số protein enzyme bị biến tính. Protein enzyme chỉ có thể được giữ ở dang khô trong trường hợp nếu việc sấy khô được tiến hành vô cùng nhanh hoặc ở nhiệt độ thấp. Nhiều protein như chúng ta đã biết, ở độ nhiệt thấp có thể được kết tủa bằng rượu hoặc acetone. Nếu kết tủa thu được bằng cách đó đem xử lý bằng rượu tuyệt đói, bằng acetone hoặc bằng ether và sau đó làm khô thật nhanh thì protein sẽ không bị biến tính. Ở dạng khô, bột protein có thể giữ một thời gian lâu, khi hòa tan nó trong nước nó thể hiện những tính chất ban đầu của mình. Tuy nhiên, nhiều protein không chịu được cách xử lý như vậy. Vì vậy, người ta sử dụng phương pháp làm đông khô là phương pháp làm khô protein thận trọng nhất, phương pháp này có thể sử dụng được cho hầu hết protein. Dung dịch protein đã được thẩm tích được làm đóng băng và làm thăng hoa băng ở áp suất 0,01-0,001 mm thuỷ ngân (được tạo ra nhờ máy hút chân không mạnh). Nơi nước được tạo ra đều được đóng băng trong bầu dự trữ ở độ nhiệt thấp hơn (-70, -80oC). Sau một vài giờ chỉ còn lại bột protein. Sau đó bột này (trong chân không) có thể được giữ ở độ nhiệt cao hơn. Protein đã được làm đông khô bằng cách như thế khi hoà tan trong nước cất sẽ cho dung dịch protein (nguyên thể) ngay sau một vài năm. Người ta đã bảo quản huyết thanh máu bằng phương pháp như thế, huyết thanh khô này có thể được sử dụng trong mục đích truyền máu. V. Định lượng và đánh giá độ tinh sạch của chế phẩm protein 5.1. Các phương pháp xác định hàm lượng protein Protein sau khi đã được tách chiết và làm sạch có thể định lượng được. Nếu protein nghiên cứu là enzyme thì việc định lượng thông qua xác định hoạt độ của enzyme (theo quy ước quốc tế: 1 đơn vị hoạt độ enzyme là lượng enzyme làm chuyển hoá 1µmol cơ chất trong 1 phút ở các điều kiện tiêu chuẩn). Như vậy cứ sau các bước tách chiết và làm sạch protein người ta thấy tổng lượng protein giảm nhưng hoạt độ enzyme tăng
- 82 nghĩa là hoạt độ riêng tăng rất cao. Protein được coi là sạch nếu những bước tách chiết và làm sạch sau không làm tăng hoạt độ riêng của chúng nữa, và chỉ khi đó ta mới hoàn thành việc tách chiết và làm sạch protein. Nếu protein không phải là enzyme thì ta có thể định lượng chúng bằng các phương pháp khác. Nếu protein ta nghiên cứu là hormon hoặc các độc tố thì chúng được xác định qua hiệu ứng sinh học mà chúng gây ra; ví dụ như hormon sinh trưởng (growth hormone) sẽ kích thích sự sinh trưởng của các tế bào đích nuôi cấy. Nếu là protein vận chuyển thì có thể xác định chúng thông qua nồng độ chất mà chúng vận chuyển. Sau đây là một số phương pháp thường được sử dụng để xác định hàm lượng protein. - Định lượng nitrogen theo phương pháp kjeldahl: Phần lớn các phương pháp gián tiếp xác định protein đều dựa trên cơ sở xác định lượng nitrogen. Lượng nitrogen có trong các protein là gần giống nhau không phụ thuộc vào chất lượng và nguồn protein. Đương nhiên trên cơ sở lượng nitrogen có thể xác định chỉ các protein đã được tinh sạch hoặc lượng protein của các mẫu nghiên cứu mà ngoài protein ra không chứa những chất chứa nitrogen khác. Trong nông nghiệp và công nghiệp thực phẩm, protein thô được định lượng bằng cách xác định lượng nitrogen toàn phần và kết quả nhân với 6,25, nghĩa là coi protein luôn luôn chứa 16% nitrgen. Thực tế, trong thực phẩm, bên cạnh protein còn có những chất hữu cơ khác có chứa nitrogen như amid, alcaloid, ammonia (ví dụ như trong thực phẩm lên men) acid nitric... do đó hàm lượng nitrogen toàn phần chính thức cao hơn 16% (16-17%) nhưng ở protein thực vật thì hàm lượng này lại thấp hơn 16%. Hệ số 6,25 là hệ số trung bình thô. Trong một vài trường hợp, muốn có kết quả chính xác, nên dùng những hệ số đặc biệt. Nguyên lý của phương pháp này là vô cơ hoá mẫu bằng H2SO4 đậm đặc và chất xúc tác. Dùng một kiềm mạnh (NaOH hoặc KOH) đẩy NH3 từ muối (NH4)2SO4. Sau đó hứng NH3 vào dung dịch acid có nồng độ xác định. Sau đó dùng kiềm có nồng độ xác định để chuẩn độ acid dư. Từ đó tính được lượng nitrogen có trong nguyên liệu. - Định lượng protein theo phương pháp Lowry: Phương pháp này dựa trên cơ sở dùng máy đo màu để xác định màu sản phẩm khử của phosphomolipden - phosphowolframate (thuốc thử Folin - Ciocalteau) với phức hợp đồng - protein. Phức màu xanh tạo thành có thể đo ở bước sóng 675nm. Cường độ màu của hỗn hợp phản ứng tỷ lệ thuận với nồng độ protein. Dựa vào đồ thị chuẩn protein (thông thường
- 83 dùng tinh thể albumin huyết thanh bò) ta có thể tính được hàm lượng protein trong mẫu nghiên cứu. Phương pháp Lowry được dùng rộng rãi để xác định nhiều loại protein khác nhau. Phương pháp này có độ nhạy cao, cho phép phát hiện được protein trong dung dịch ở nồng độ 1µg/ml. Tuy nhiên cường độ màu còn tuỳ thuộc nhiều vào loại protein. Ví dụ, ở cùng một nồng độ, dung dịch trypsin cho cường độ màu cao gấp 3 lần gelatin, hemoglobin cho cường độ màu thấp hơn trypsin nhưng cao hơn gelatin. Ngoài ra, nhiều chất khác có thể làm tăng hay giảm cường độ màu phản ứng, vì vậy phương pháp này cho kết quả chính xác khi xác định protein đã được tinh sạch. - Định lượng protein bằng phương pháp quang phổ: Phương pháp đơn giản nhất để đo nồng độ protein trong dung dịch là độ hấp thụ tia cực tím của nó. Nếu protein tinh sạch thì nồng độ tuyệt đối của nó được tính theo giá trị đo được. Nếu protein không tinh sạch (ví dụ, dịch chiết từ một sắc ký) thì nồng độ của protein tổng được tính tương đối từ độ hấp thụ. Nguyên tắc của phương pháp này là các protein hấp thụ tia cực tím cực đại ở bước sóng 280nm do các acid amin thơm như tryptophan, tyrosine và phenylalanine. Độ hấp thụ ở 280nm thay đổi tuỳ loại protein nhưng hệ số tắt đo được (nghĩa là độ hấp thụ của dung dịch protein 1% với đường sóng truyền qua 1cm) cho mỗi protein cho phép tính nồng độ của protein tinh sạch. Với một hỗn hợp các protein hoặc với bất cứ một loai protein nào mà không biết hệ số tắt thì nồng độ protein được tính như sau: Nồng độ protein (mg/ml)=1,55xA280-0,77xA260 Trong đó: A280: độ hấp thụ ở bước sóng 280nm A260: độ hấp thụ ở bước sóng 260nm Phương pháp này không dùng được cho các dung dịch có nồng độ protein thấp hơn 0,1mg/ml hoặc khi có mặt nhiều chất khác mà hấp thụ cùng một vùng cực tím (ví dụ, đệm, acid nucleic và một số chất béo), hoặc khi protein ở trong dịch truyền phù chứ không phải trong dung dịch. (Ví dụ, trong màng hoặc các phức hợp có trọng lượng phân tử lớn). Cũng cần chú ý là nếu tỷ lệ A280/A260 thấp hơn 0,6 nghĩa là dung dịch protein chưa sạch, bị lẫn các chất khác, đặc biệt với acid nucleic thì nên sử dụng phương pháp Lowry để đo nồng độ protein.
- 84 Vì vậy, phương pháp đo độ hấp thụ tia cực tím thường được dùng để định lượng protein đã tinh sạch hoặc để xác định protein trong các phân đoạn nhận được khi sắc ký tách các protein qua cột. 5.2. Đánh giá tính đồng thể của protein: Khi đã nhận được một protein enzyme ở trạng thái kết tinh, người ta phải thử lại mức độ tinh khiết hay tính đồng thể của nó. Độ đồng thể của chế phẩm protein enzyme phải được kiểm tra bằng một số phương pháp dựa trên những nguyên lý khác nhau. Trong một số trường hợp protein enzyme được coi là đồng thể khi ly tâm, nhưng lại có thể phân chia thành một số isoenzyme bằng phương pháp điện di trên gel. Chính vì vậy, nếu dùng nhiều loại phương pháp khác nhau để kiểm tra độ sạch của protein mà kết quả đều cho là đồng thể thì protein đó có thể được công nhận là tinh khiết. Những phương pháp để kiểm tra tính đồng thể hay dùng là xây dựng đồ thị về độ hoà tan, điện di và siêu ly tâm. - Phương pháp kiểm tra tính đồng thể (hoặc còn gọi là tính đồng nhất) của protein đơn giản và nhạy nhất là xây dựng đường biểu diễn về độ hoà tan. Cách làm như sau: Trong hàng loạt mẫu dùng một thể tích không đổi một loại dung môi (nước hoặc dung dịch muối) lắc với những số lượng enzyme khác nhau. Sau đó lọc và xác định số protein trong dịch lọc. Cuối cùng xây dựng đường đồ thị. Trong những loại mẫu đầu, tất cả các protein thêm vào bị hoà tan và số lượng protein thêm vào bằng số lượng protein có trong dịch lọc hay dịch ly tâm. Kết quả nhận được biểu diễn là một đường thẳng. Sau đó dung dịch đạt được bão hoà. Nếu protein đem hoà tan là tinh khiết nghĩa là đồng nhất thì khi thêm protein trong dịch lọc sẽ không tăng lên và đường biểu diễn có một điểm uốn. Nếu trong mẫu có một protein thứ hai thì sau khi đạt được độ bão hoà đối với protein ít hoà tan hơn, loại protein thứ hai còn có thể hoà tan được nữa. Kết quả là có một điểm bão hoà thứ hai và đường biểu diễn có hai điểm uốn. Nếu dịch chiết (hỗn hợp) có nhiều protein enzyme thì sẽ có nhiều điểm uốn. Phương pháp này được Northrop và Kunitz sử dụng rất có kết quả. Nay vẫn còn ứng dụng nhiều. - Phương pháp thứ hai để xác định độ đồng thể của protein enzyme là phương pháp điện di. Phương pháp điện di là ứng dụng tính chất lưỡng tính của protein, dựa trên cơ sở dịch chuyển của các tiểu phần chế phẩm
- 85 protein enzyme mang điện trong điện trường. Đem chế phẩm protein enzyme điện di ở pH và lực ion nhất định. Nếu trên điện di đồ có một băng protein thì chứng tỏ protein enzyme đó là đơn thể. Nếu có hai băng chứng tỏ có hai protein enzyme trong chế phẩm đó. Bản điện di đồ này được đua vào máy detector để phát hiện không chỉ nồng độ của băng điện di mà còn phát hiện được số lượng các băng vệt. Số lượng protein trong dịch lọc A Số lượng protein cho thêm B Hình 5.4: Đường biểu diễn độ hoà tan protein - Phương pháp siêu ly tâm: Đây cũng là phương pháp rất quan trọng để xác định tính đồng thể của protein enzyme. Phương pháp được thực hiện như sau:đơn thể A: Protein B: Hỗn hợp 2 protein Dùng lực ly tâm rất lớn bằng cách tăng số vòng quay ly tâm lên hàng nghìn, hàng vạn vòng trong một phút. Với tốc độ ly tâm rất lớn, người ta có thể tách ra được các phân tử enzyme có trọng lượng phân tử khác nhau. Tốc độ kết tủa của protein enzyme trong máy siêu ly tâm được xác định bằng trọng lượng phân tử của nó. Khi dừng quay thì các phân tử protein lại khuyếch tán vào dung dịch. Bởi vậy, cần phải quan sát tốc độ lắng trong quá trình siêu ly tâm. Chính vì vậy, trong cốc siêu ly tâm, người ta gắn một thiết bị quang học đặc biệt, vẽ các đường ánh sáng của kết quả
- 86 phân tích lên một màn. Nếu trong dung dịch có một loai protein enzyme (có một trọng lượng phân tử) thì trên màn sáng sẽ cho đường đồ thị có một đỉnh. Nếu làm việc với hai protein enzyme thì sẽ có hai đỉnh v.v... TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Nguyễn Hữu Chấn, Nguyễn Thị Hà, Nguyễn Nghiêm Luật, Hoàng Bích Ngọc, Vũ Thị Phương. 2001. Hoá sinh. Nxb Y học - Hà Nội. 2. Phạm Thị Trân Châu, Trần Thị Áng. 1999. Hoá sinh học.Nxb Giáo dục - Hà Nội. 3. Nguyễn Tiến Thắng, Nguyễn Đình Huyên. 1998. Giáo trình sinh hoá hiện đại. Nxb Giáo dục - Hà Nội. 4. Lê Ngọc Tú, Lê Văn Chứ, Đặng Thị Thu, Phạm Quốc Thăng, Nguyễn Thị Thịnh, Bùi Đức Hợi, Lưu Duẫn, Lê Doãn Diên. 2002. Hoá sinh công nghiệp. Nxb Khoa học & Kỹ thuật - Hà Nội. 5. Ajtai K., Szilagyi L..1985. Biokémiai gyakorlatok.Tankonyv. Jankonyv Kiado, Budapest. 6. Kerese I. 1984 Methods of Protein analysis. Akademiai Kiado, Budapest 7. Lehninger A.L. 2004. Principles of Biochemistry, 4th Edition. W.H Freeman, 2004 8. Stryer l., 1981. Biochmistry. W. H. Freeman and company, San francisco.
CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD
-
Ebook Các phương pháp phân tích ngành công nghệ lên men - PGS.TS. Lê Thanh Mai (chủ biên)
336 p |
813 |
391
-
Bài thuyết trình Các phương pháp sắc kí cột
47 p |
662 |
242
-
Thí nghiệm vi sinh vật học - BÀI 3 : CÁC PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY VÀ BẢO QUẢN VI SINH VẬT
8 p |
733 |
189
-
Thí nghiệm vi sinh vật học - BÀI 5 : CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH SỐ LƯỢNG TẾ BÀO VI SINH VẬT
9 p |
600 |
140
-
Ebook Các phương pháp nghiên cứu quần xã thực vật - PGS.TS. Hoàng Chung
117 p |
299 |
136
-
CÁC PHƯƠNG PHÁP SẢN XUẤT TINH DẦU
17 p |
274 |
135
-
Các phương pháp lai phân tử và mẫu dò
13 p |
311 |
124
-
NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN MỘT SỐ HỢP CHẤT HÓA HỌC TRONG LÁ GAI XANH
6 p |
210 |
76
-
THỦY PHÂN SACCHAROSE BẰNG INVERTASE CỐ ĐỊNH TRÊN HẠT CALCIUM ALGINATE
10 p |
191 |
51
-
Bài giảng Các phương pháp nuôi cấy tế bào: Chương 3 - ThS. Nguyễn Thành Luân
19 p |
160 |
42
-
Các phương pháp tạo ADN tái tổ hợp
6 p |
102 |
23
-
Bài giảng Các phương pháp nuôi cấy tế bào: Chương 2 - ThS. Nguyễn Thành Luân
13 p |
80 |
20
-
Bài giảng Chương 1: Các phương pháp xác định vi sinh vật trong thực phẩm
108 p |
74 |
19
-
Bài thuyết trình: Các phương pháp chuyển gen
32 p |
71 |
16
-
Bài giảng Chương 2: Các phương pháp định lượng vi sinh thực phẩm
68 p |
58 |
15
-
Bài giảng Các phương pháp điện di và chuyển lên màng lai trong phân tích - Trần Nhật Phương
62 p |
54 |
14
-
Chọn tạo giống hoa lan huệ (Hippeastrum Herb.) mới bằng phương pháp lai hữu tính giữa nguồn gen bản địa và nhập nội ở Việt Nam
10 p |
42 |
4

Set-Cookie: TLDEVNamespace=itab9kblst826lpq3r0u7cijn4; path=/; domain=.tailieu.vn; HttpOnly


markdown:
# Giải pháp điều khiển nâng hạ, truyền động hệ thống cân trục tháp dùng biến tần Hyundai N700 Series và PLC S7-300 (Phần cuối)
Chia sẻ: Nguyen Van Dau | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:7
lượt xem 187
download
![](http://image.tlvnimg.com/document/thumbnail/2010/20100710/trannguyen1111/80x100/giai_phap_dieu_khien_nang_ha_6093.jpg)
##
Giải pháp điều khiển nâng hạ, truyền động hệ thống cân trục tháp dùng biến tần Hyundai N700 Series và PLC S7-300 (Phần cuối)
[Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ](javascript:void(0);)
Download
![](http://static.tlvnimg.com/b2013az/templates/version1/default/images/down16x21.png)
Giải pháp điều khiển nâng hạ, truyền động hệ thống cân trục tháp dùng biến tần Hyundai N700 Series và PLC S7-300 (Phần I) Tính toán lựa chọn cho bộ điều khiển lập trình PLC Với bộ lập trình trung tâm đòi hỏi độ chính xác,tính ổn định và khả năng thay đổi linh hoạt cho người lập trình và kết hợp với bộ Màn hình OP3 tối ưu nhất thì bộ lập trình PLC CPU 224 của SIEMENS là giảI pháp tối ưu nhất. ...
Bình luận(0)
[Đăng nhập để gửi bình luận!](javascript:void(0);)
CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

Set-Cookie: TLDEVNamespace=tc0j2655fev1bavrmqd885c5f1; path=/; domain=.tailieu.vn; HttpOnly