text: **** Từ khóa hay tìm kiếm **** camera GNET GL 200 hcm| lắp camera hành trình cho xe oto camera blackvue giá rẻ| giá camera GNET hcm | lắp đặt camera BLACKVUE | thợ lắp đặt camera gnet | camera giám sát oto | lắp camera quan sát | ** nơi làm TPHCM: quận 1, quận 2, quận 3, quận 4, quận 5, quận 10, quận 11, quận 12, Gò Vấp, Bình Thạnh, Bình Tân, Tân Bình ...** | bán camera quan sát | dàn camera GNET | mua camera hành trình xe o tô | camera quan sát giá rẻ o tô | giá camera BLACKVUE DR650GW-1CH| giàn camera blackvue | giá sỉ camera blackvue | mua camera gnet ở tphcm | giá lắp đặt camera quan sát xe o tô | lắp đặt camera quan sát | ** nơi làm các tỉnh Nam Bộ: Bình Dương, Bình Phước, Vũng Tàu, Đồng Nai, Tây Ninh, Long An, Tiền Giang, Bến Tre, Đồng Tháp, Kiên Giang, An Giang, Long Xuyên, Cà Mau, Cần Thơ ... ** | camera hành trình xe o tô | camera gnet sài gòn | camera hành trình gia đình | camera hành trình hcm | camera BLACKVUE DR750LW-2CH bán ở đâu | thiết kế camera gnet gi 300 | thiết bị camera blackvue | giá thành camera blackvue 650gw-2ch | lắp đặt camera hành trình cho xe o tô | ** nơi làm các tỉnh Tây Nguyên: Đắk Lắk, Buôn Ma Thuột, Đắk Nông, Gia Nghĩa, Gia Lai, Pleiku, Kon Tum, Lâm Đồng, Đà Lạt ... ** CAMERA HÀNH TRÌNH CO Xin kính chào quý khách ! I. CHÚNG TÔI CHUYÊN CUNG CẤP & LẮP ĐẶT CAMERA HÀNH TRÌNH XE ÔTÔ VÀ XE TẢI - BLACKVUE, GNET là 2 thương hiệu camera hàng đầu Hàn Quốc với mẫu mã đẹp, công nghệ tiên tiến, giá tốt nhất. MADE IN KOREA + PHIÊN BẢN QUỐC TẾ Cung cấp sỉ & lẻ các loại camera hành trình ôtô, xe tải. Nhập khẩu camera hành trình trực tiếp từ Hàn Quốc: GNET, BLACKVUE Ship hàng toàn quốc, lắp đặt camera hành trình ôtô miễn phí tại tphcm II. BẢNG GIÁ THAM KHẢO TẠI CỬA HÀNG: (Hàng chính hãng - Giá đã bao gồm VAT ) *** Đối với khách hàng mua số lượng, vui lòng liên hệ trực tiếp để có GIÁ SỈ tốt nhất *** ==> Với mục tiêu là đem lại nhiều sản phẩm chất lượng, dịch vụ tốt nhất, CameraHanhTrinh.co luôn sàng phục vụ khách hàng. (HOTLINE 24/7: 0121.3526.825) + GNET: CAMERA HÀNH TRÌNH HÀN QUỐC GIÁ RẺ Ø GNET GN 100F ( Wi-Fi, Thẻ 8GB ) ----------------------------> 2.800.000đ KM CÒN: 1.800.000đ Ø GNET GI 300 ( Wi-Fi, Thẻ 32GB ) -----------------------------> 4.300.000đ KM CÒN: 2.900.000đ Ø GNET GL 200 ---------------------------------------------------> (đang cập nhật) + BLACKVUE: DÒNG CAMERA HÀNH TRÌNH ĐẲNG CẤP NHẤT THẾ GIỚI HIỆN NAY Ø BLACKVUE DR650GW-1CH -------------------------------------> 6.500.000đ KM CÒN: 6.390.000đ Ø LACKVUE DR650GW-2CH ---------------------------------------> 7.800.000đ KM CÒN: 7.490.000đ Ø BLACKVUE DR650GW-2CH TRUCK -----------------------------> 8.800.000đ KM CÒN: 8.790.000đ Ø BLACKVUE 750 LW 2CH -----------------------------------------> 8.800.000đ KM CÒN: 8.790.000đ + VISIONDRIVE: SẢN PHẨM CAO CẤP DÀNH CHO DOANH NGHIỆP Ø VISIONDRIVE 9600 BASIC -------------------------------------> 6.900.000đ Ø VISIONDRIVE 9600 WHG ---------------------------------------> 7.800.000đ => Đến với CameraHanhTrinh.co Quý khách hàng sẽ nhận được tất cả các cam kết tốt nhất: - Camera hành trình nhập khẩu chính hãng, giá tốt nhất thị trường. - Phiên bản quốc tế. - Bảo hành chu đáo 12 tháng/1 đổi 1. - Hỗ trợ kỹ thuật, tư vấn miễn phí. - Miễn phí giao hàng và lắp đặt nội thành HCM. - Liên hệ trực tiếp để nhận thông tin chương trình khuyến mãi. --------------------- MỌI CHI TIẾT XIN LIÊN HỆ: CAMERA HÀNH TRÌNH CO WEBSITE: CameraHanhTrinh.co EMAIL: baoanh020201@gmail.com SKYPE: sori3101 TEL: 0121.3526.825 – 0868.994.860 Đ/C: 168 Trần Nhân Tôn, p.2, q.10, TP.HCM FAN PAGE: facebook.com/camerahanhtrinhnhapkhau ***** RẤT HÂN HẠNH PHỤC VỤ QUÝ KHÁCH ! ***** --------- TAGS -------- camera quan sát hcm| lắp camera BLACKVUE DR650GW-2CH cho oto camera hành trình giá rẻ| giá camera blackvue dr650gw-1ch hcm | lắp đặt camera hành trình | thợ lắp đặt camera GNET | camera blackvue dr650gw-2ch xe tải | lắp camera quan sát|lắp đặt camera GNET | dàn camera gnet | camera blackvue 650gw-2ch o tô | camera giám sát giá rẻ xe tải | giá camera hành trình| giàn camera blackvue dr650gw-1ch | giá sỉ camera GNET | mua camera giám sát ở tphcm | giá lắp đặt camera hành trình xe tải | lắp đặt camera quan sát | camera BLACKVUE xe oto | camera gnet gl 200 sài gòn | camera giám sát gia đình | camera quan sát hcm | camera hành trình bán ở đâu | thiết kế camera BLACKVUE 650GW-2CH | thiết bị camera gnet gl 200 | giá thành camera GNET | lắp đặt camera quan sát cho xe o tô --------- KHU VỰC PHỤC VỤ NHANH Ở -------- TP.HỒ CHÍ MINH: Tại Quận 1. Tại Quận 2. Tại Quận 3. Tại Quận 4. Tại Quận 5. Tại Quận 6. Tại Quận 7. Tại Quận 8. Tại Quận 9. Tại Quận 10. Tại Quận 11. Tại Quận 12. Tại Quận Gò Vấp. Tại Quận Tân Bình. Tại Quận Tân Phú. Tại Quận Bình Thạnh. Tại Quận Phú Nhuận. Tại Quận Thủ Đức. Tại Quận Bình Tân. Tại Huyện Củ Chi. Tại Huyện Hóc Môn. Tại Huyện Bình Chánh --------- NƠI LÀM TOÀN QUỐC Ở -------- Hà Nội. TP.HCM. Đà Nẵng. An Giang. Bà Rịa – Vũng Tàu. Bạc Liêu. Bắc Giang. Bắc Kạn. Bắc Ninh. Bến Tre. Bình Dương. Bình Định. Bình Phước. Bình Thuận. Cao Bằng. Cà Mau. Cần Thơ. Đắk Lắk. Đắk Nông. Điện Biên. Đồng Nai. Đồng Tháp. Gia Lai. Hà Giang. Hà Nam. Hà Tĩnh. Hải Dương. Hải Phòng. Hậu Giang. Hòa Bình. Hưng Yên. Khánh Hòa. Kiên Giang. Kon Tum. Lai Châu. Lào Cai. Lạng Sơn. Lâm Đồng. Long An. Nam Định. Nghệ An. Ninh Bình. Ninh Thuận. Phú Thọ. Phú Yên. Quảng Bình. Quảng Nam. Quảng Ngãi. Quảng Ninh. Quảng Trị. Sóc Trăng. Sơn La. Tây Ninh. Thanh Hóa. Thái Bình. Thái Nguyên. Huế. Tiền Giang. Trà Vinh. Tuyên Quang. Vĩnh Long. Vĩnh Phúc. Yên Bái


text: Quả óc chó có thể chế biến thành nhiều món ăn đa dạng và vô cùng hấp dẫn. Các bạn hãy cùng chúng tôi tiếp tục tìm hiểu thêm một số món ăn ngon và bổ dưỡng được chế biến từ quả óc nhé! 1. Quả óc chó rán giòn Nguyên liệu - 400g hạt óc chó đã tách vỏ - 1/4 thìa cà phê muối, 2 thìa canh đường cát, 2 thìa canh vừng trắng - Nước cốt chanh, 2 thìa canh đường mạch nha Cách làm - Cho hạt óc chó vào luộc khoảng 3 phút rồi vớt ra để ráo nước - Rửa sạch vừng trắng rồi để ráo nước sau đó rang thơm. - Đun sôi khoảng 4 cốc nước, sau đó cho đường cát và muối vào, rồi luộc lại hạt óc chó khoảng 3 phút rồi vớt ra để ráo nước - Cho đường mạch nha và đường cát trộn lẫn với nhau rồi đun lên, sau đó cho nước cốt chanh vào, lại tiếp tục luộc hạt óc chó khoảng 5 phút rồi vớt ra để ráo nước - Cho hạt óc chó vào dầu đã nóng rồi rán vàng là được. Sau đó bày ra đĩa, rưới dầu vừng lên trên. 2. Tôm sốt mật ong với hạt óc chó Nguyên liệu - 400g tôm - 150g hạt óc chó đã bỏ vỏ - 150g đường,100g bột năng - Muối tiêu - 3 thìa canh sốt mayonnaise, 2 thìa canh mật ong, nước cốt chanh và sữa đặc có đường. Thực hiện - Cho 150g đường hòa tan với 240ml vào nồi nhỏ nước rồi đun sôi, vừa đun vừa khuấy. Khi nước đường sôi, cho hạt óc chó vào đảo đều tay khoảng vài phút cho đến khi thấy nước đường hơi sánh lại. - Dùng môi thủng vớt hạt óc chó ra đĩa - Bóc vỏ, bỏ đầu, rút chỉ đen ở lưng tôm rồi để ráo. - Đánh 3 lòng trắng trứng gà cho bông sủi bọt lên. Cho thêm 100g bột năng và tiêu muối vào rồi trộn đều. - Cho tôm vào hỗn hợp bột – lòng trắng trứng đó rồi đảo đều để tôm được bao đều bởi bột (Lưu ý là bạn chỉ cho tôm vào ngay trước khi chiên thôi nhé) - Cho từng con tôm vào chiên trong chảo dầu đã nóng, khi thấy tôm vàng đều thì vớt ra giấy thấm dầu. - Trộn đều 3 thìa canh mayonnaise, 2 thìa canh mật ong, 1 thìa canh nước cốt chanh và 1 thìa canh sữa đặc có đường trong một bát nhỏ rồi nếm thử xem đã vừa miệng chưa. Cuối cùng cho tôm ra đĩa, rưới phần sốt bạn vừa trộn rồi trộn đều và rắc hạt óc chó bạn đã chuẩn bị bước lên là có thể dùng ngay. 3. Gà sốt chua ngọt với hạt óc chó Nguyên liệu: - 250g thịt gà - 100g hạt óc chó - 150g bột chiên giòn - 50ml dầu ăn, 20ml dầu oliu - 15g hành tây băm nhuyễn, 15g tỏi băm nhuyễn - Tương cà, mật ong, gia vị Thực hiện: - Cho tỏi vào dầu oliu đã nóng để phi, rồi cho thêm 1 thìa canh mật ong và nước sốt cà chua vào đảo đều Cho thịt gà đã thái thành miếng lăn qua bột chiên giòn trước khi cho vào chảo dầu đang sôi để chiên. Khi thấy thịt gà vừa chin tới thì gắp ra -. Sau đó cho gà vào nước sốt cà chua và hành tỏi đã phi rồi xào qua cho vừa thấm và nêm gia vị vừa miệng rồi tắt bếp. - Lấy ra đĩa và rắc hạt óc chó lên 4. Cật heo xào mè đen cùng quả óc chó Nguyên liệu: - 50g hạt óc chó đã tách võ - 25g mè đen - Cật heo - Gừng, hành, rượu, dầu ăn, gia vị Thực hiện: - Cho hạt óc chó vào dầu chiên qua. Rang thơm mè đen bằng lửa nhỏ - Cho gừng, hành vào chảo dầu nóng rồi phi thơm, sau đó cho cật heo, rượu vào xào chín. Cuối cùng cho thêm hạt óc chó, mè đen và gia vị vào rồi trộn đều.

WARC-Type: response

Content-Type: application/http; msgtype=response

Cache-control: private, max-age=0

Connection: close

Server: Nginx-VPSSIM

X-Frame-Options: SAMEORIGIN

Vary: Accept-Encoding

Content-Type: text/html; charset=UTF-8


text:
Bộ đề trắc nghiệm Tiếng Anh lớp 8 (học kỳ I) UNIT 1 (phần 1)
Chia sẻ: Lang Du | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:7
1.596
lượt xem 583
download
lượt xem 583
download
Bộ đề trắc nghiệm Tiếng Anh lớp 8 (học kỳ I) UNIT 1 (phần 1)
Mô tả tài liệu
Download Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ
Bộ đề trắc nghiệm Tiếng Anh lớp 8 (học kỳ I) UNIT 1 (phần 1) Sau đây là bộ đề kiểm tra trắc nghiệm cơ bản môn anh văn khối THCS, Trắc nghiệm vốn là một phần không thể thiếu trong kỳ thi TN THCS nên việc tự ôn luyện kỹ năng này là 1 sự cần thiết tất yếu. hy vọng bộ đề này giúp các bạn học sinh có thể tự củng cố khả năng làm bai trắc nghiệm của mình
Chủ đề:
Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!
CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

markdown:
# Bộ đề trắc nghiệm Tiếng Anh lớp 8 (học kỳ I) UNIT 1 (phần 1)
Chia sẻ: Lang Du | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:7
1.596
lượt xem 583
download
lượt xem 583
download
![](http://image.tlvnimg.com/document/thumbnail/2010/20100812/smart_girl/80x100/bo_de_trac_nghiem_tieng_anh_lop_8_hk1__3733.jpg)
##
Bộ đề trắc nghiệm Tiếng Anh lớp 8 (học kỳ I) UNIT 1 (phần 1)
Mô tả tài liệu
[Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ](javascript:void(0);)
Download
![](images/down16x21.png)
Bộ đề trắc nghiệm Tiếng Anh lớp 8 (học kỳ I) UNIT 1 (phần 1) Sau đây là bộ đề kiểm tra trắc nghiệm cơ bản môn anh văn khối THCS, Trắc nghiệm vốn là một phần không thể thiếu trong kỳ thi TN THCS nên việc tự ôn luyện kỹ năng này là 1 sự cần thiết tất yếu. hy vọng bộ đề này giúp các bạn học sinh có thể tự củng cố khả năng làm bai trắc nghiệm của mình
Chủ đề:
Bình luận(0)
[Đăng nhập để gửi bình luận!](javascript:void(0);)
CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD

Set-Cookie: TLDEVNamespace=90pi9u0mj5p469nsih92cij3c3; path=/; domain=.tailieu.vn; HttpOnly

Server: Apache/2.2.31 (CentOS)

Cache-Control: no-store, no-cache, must-revalidate, post-check=0, pre-check=0

Pragma: no-cache


text:
Quyết định số 10/2002/QĐ-BTS
Chia sẻ: Son Nguyen | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:23
lượt xem 3
download
Quyết định số 10/2002/QĐ-BTS
Quyết định số 10/2002/QĐ-BTS của Bộ trưởng Bộ Thủy sản về việc ban hành tiêu chuẩn cấp ngành
Bình luận(0) Đăng nhập để gửi bình luận!
Nội dung Text: Quyết định số 10/2002/QĐ-BTS
- B THU S N C NG HOÀ XÃ H I CH NGHĨA VI T ------- NAM c l p - T do - H nh phúc --------- S : 10/2002/QÐ- BTS Hà N i, ngày 8 tháng 4 năm 2002 QUY T NNH V VI C BAN HÀNH TIÊU CHU N C P NGÀNH B TRƯ NG B THU S N - Căn c Ngh nh s 50/CP ngày 21 tháng 6 năm 1994 c a Chính ph v nhi m v quy n h n và t ch c b máy c a B Thu s n; - Theo ngh c a Ông V trư ng V Khoa h c Công ngh ; QUY T NNH : Ði u 1: Ban hành kèm theo Quy t nh này 04 Tiêu chuNn c p Ngành sau ây : 1. 28 TCN 177 : 2002 : hàm Lư ng kháng sinh nhóm tetracyclin trong s n phNm thu s n - Phương pháp nh lư ng b ng s c ký l ng hi u năng cao. 1. 28 TCN 178 : 2002 : Hàm lư ng axits axolinic trong s n phNm thu s n - Phương pháp nh lư ng b ng s c ký l ng hi u năng cao. 3. 28 TCN 179 : 2002 : Hàm lư ng aflatoxin trong s n phNm thu s n - Phương pháp nh lư ng b ng s c ký l ng hi u năng cao. 4. 28 TCN 180 : 2002 : Hàm lư ng thu c tr sâu g c clo h u vơ và poly clorua biphenyl trong s n phNm thu s n - Phương pháp nh lư ng b ng s c ký khí. Ði u 2: Các tiêu chuNn trên ây ư c khuy n khích áp d ng cho các phòng ki m nghi m khi ti n hành ki m tra ch t lư ng hàng thu s n và có hi u l c th c hi n sau 15 ngày k t ngày ký. Ði u 3: Chánh Văn phòng B ; Th trư ng các V , C c; Chánh Thanh tra B ; Giám c các S Thu s n, S Nông nghi p và Phát tri n nông thôn có qu n lý thu s n; Giám c Trung tâm Ki m tra Ch t lư ng và V sinh thu s n; Th trư ng các ơn v các phòng ki m nghi m nói t i Ði u 2 và các cơ s ch bi n thu s n ch u trách nhi m thi hành Quy t nh này. KT. B TRƯ NG B THU S N TH TRƯ NG
- Nguy n Vi t Th ng 28 TCN 177 : 2002 HÀM LƯ NG THU C KHÁNG SINH NHÓM TETRACYCLIN TRONG S N PH M THU S N - PHƯƠNG PHÁP NNH LƯ NG B NG S C KÝ L NG HI U NĂNG CAO Tetracyclines group in fishery products - Method for quantitative analysis by high performance liquid chromatography 1 Ph m vi áp d ng Tiêu chuN n này qui nh phương pháp xác nh hàm lư ng kháng sinh nhóm tetracyclin trong th y s n và s n phN m th y s n b ng s c ký l ng hi u năng cao (sau ây g i t t là HPLC). Gi i h n phát hi n c a phương pháp là 10 µg/kg. 2 Phương pháp tham chi u Tiêu chuN n này ư c xây d ng d a theo phương pháp s 995.09 Chlortetracyclin, Oxytetracycline, and Tetracycline trong ph n ăn ư c c a ng v t, quy n I, chương 23, trang 19 - 23 (23.1.17), phương pháp chuN n c a Hi p h i các nhà hoá h c phân tích (AOAC) ban hành năm 1997. 3 Nguyên t c 3.1 Kháng sinh nhóm tetracyclin bao g m 3 kháng sinh chính sau: tetracyclin (g i t t là TC), oxytetracyclin (g i t t là OTC) và clortetracyclin (g i t t là CTC). 3.2 Các kháng sinh này trong m u th y s n ư c chi t tách b ng dung d ch m (pH 4). D ch chi t ư c làm s ch b ng phương pháp chi t pha r n (SPE) trên c t tách chi t pha o Sep - Pak Cartrige C18. Hàm lư ng TC, OTC, CTC có trong d ch chi t ư c xác nh trên h th ng HPLC v i u dò UV t i bư c sóng 350 nm theo phương pháp ngo i chuN n. 4 Thi t b , d ng c , hoá ch t, dung d ch chu n và dung d ch th 4.1 Thi t b , d ng c 4.1.1 H th ng HPLC v i u dò UV. 4.1.2 C t s c ký pha o g m có: a. C t s c ký pha o C8, kích thư c c t L x ID : 250 x 4,6 mm, kích thư c h t 5 µm. b. C t s c ký pha o C18, kích thư c c t L x ID : 250 x 4,6 mm, kích thư c h t 5µm.
- 4.1.3 Máy nghi n ng th t c 10 000 vòng/phút. 4.1.4 Cân phân tích có chính xác 0,0001 g. 4.1.5 Máy ly tâm t c 5 000 vòng/phút (s d ng ng ly tâm dung tích 50 ml). 4.1.6 pH k 4.1.7 ng ly tâm th y tinh dung tích 50 ml. 4.1.8 Bình nh m c dung tích 10 ml, 100 ml và 1 000 ml. 4.1.9 C t Sep-Pak C18, dung tích 10 ml. 4.1.10 Ph u Buch-ner ư ng kính 5,5 cm. 4.1.11 Pipet t ng i u ch nh ư c t 2 n10 ml. 4.1.12 B siêu âm. 4.2 Hoá ch t 4.2.1 Ðinatri photphat khan (Na2HPO4) tinh khi t, lo i dùng cho phân tích. 4.2.2 Nư c c t lo i dùng cho HPLC. 4.2.3 Axit xitric ng m 1 phân t nư c, tinh khi t, lo i dùng cho phân tích. 4.2.4 Ethylen initrilotetraaxêtat inatri (sau ây vi t t t là EDTA) ng m 2 phân t nư c tinh khi t, lo i dùng cho phân tích. 4.2.5 Axít oxalic ng m 2 phân t nư c, tinh khi t, lo i dùng cho phân tích. 4.2.6 Metanol lo i dùng cho HPLC. 4.2.7 Axetonitril lo i dùng cho HPLC. 4.3 Dung d ch chuN n và dung d ch th 4.3.1 Dung d ch m McIlvaine (pH 4,0 +/- 0,05) g m: a. Dung d ch A: hoà tan 28,4 g Na2HPO4 khan (4.2.1) b ng nư c c t (4.2.2) trong bình nh m c dung tích 1 000 ml (4.1.8). Ð nh m c t i v ch. b. Dung d ch B: hoà tan 21,0 g axít xitric (4.2.3) b ng nư c c t (4.2.2) trong bình nh m c (4.1.8). Ð nh m c t i v ch. Cho t t 625 ml dung d ch A vào 1 000 ml dung d ch B. Ch nh pH t i 4,0 (+/- 0,05) b ng cách cho t ng gi t dung d ch HCl n ng 0,1M ho c dung d ch NaOH n ng 0,1M (s d ng pH k xác nh pH).
- Chú thích: Dung d ch b n trong vòng 1 tu n nhi t trong phòng. 4.3.2 Dung d ch m McIlvaine - EDTA Hoà tan 60,5 g EDTA (4.2.4) vào 1 625 ml dung d ch m McIlvaine (4.3.1). Chú thích: Dung d ch b n trong vòng 1 tu n nhi t trong phòng. 4.3.3 Dung d ch axit oxalic-metanol: hoà tan 1,26 g axít oxalic (4.2.5) b ng metanol (4.2.6) trong bình nh m c 1 000 ml (4.1.8). Ð nh m c t i v ch. Chú thích: Dung d ch chi t không b n, ch pha trư c khi s d ng. 4.3.4 Pha ng cho HPLC: hoà tan 1,26 g axít oxalíc (4.2.5) b ng nư c c t (4.2.2) trong bình nh m c 1 000 ml (4.1.8). Ð nh m c t i v ch. Thêm vào dung d ch 500 ml axetonitril (4.2.7) và 166 ml metanol (4.2.6). L c và u i khí. Chú thích: Dung d ch pha ng không b n, ch pha trư c khi s d ng. 4.3.5 Dung d ch chuN n g c 1 000 µg/ml: cân 108 mg (+/- 0,1) m i lo i kháng sinh chuN n (TC, OTC và CTC) lo i có gi y ch ng nh n hàm lư ng (lư ng cân ư c i u ch nh theo hàm lư ng kháng sinh ghi trong gi y ch ng nh n) vào 3 bình nh m c dung tích 100 ml (4.1.8) riêng bi t. Hòa tan và nh m c t i v ch 100 ml b ng metanol (4.2.6). Chú thích: B o qu n dung d ch t i nhi t -20 0C. Dung d ch b n trong vòng 3 tháng. 4.3.6 Dung d ch chuN n h n h p 100 µg/ml: hút chính xác 10 ml các dung d ch chuN n g c (4.3.5) vào bình nh m c 100 ml (4.1.8). Ð nh m c t i v ch b ng metanol (4.2.6). 4.3.7 Dung d ch chuN n h n h p 25 µg/ml: hút chính xác 2,5 ml dung d ch chuN n h n h p 100 µg/ml (4.3.6) vào bình nh m c 10 ml (4.1.8). Ð nh m c t i v ch b ng metanol (4.2.6). Chú thích: B o qu n dung d ch trong t l nh nhi t t 0 n 5oC. Dung d ch b n trong vòng 1 tu n. 4.3.8 Dung d ch chuN n h n h p 0,05; 0,10; 0,25; 0,50 và 1,00 µg/ml: hút chính xác 20, 40, 100, 200, 400 µl dung d ch chuN n h n h p 25 µg/ml (4.3.7) vào các bình nh m c 10 ml (4.1.8). Thêm 6 ml dung d ch axít oxalic-metanol (4.3.3) vào m i bình. Ð nh m c t i v ch b ng nư c c t (4.2.2). Chú thích: B o qu n dung d ch trong t l nh nhi t t 0 n 5oC. Dung d ch b n trong vòng 1 tu n. 5 Phương pháp ti n hành 5.1 ChuN n b m u th
- 5.1.1 Cân 5,00 g (+/- 0,05) m u (m) ã ư c băm nhuy n cho vào ng ly tâm th y tinh (4.1.7) th 1. Thêm 20 ml dung d ch m McIlvaine - EDTA (4.3.2) vào ng r i nghi n trong 30 giây b ng máy nghi n ng th (4.1.3). Sau ó, ly tâm ng b ng máy ly tâm (4.1.5) trong 10 phút t c 3 000 vòng/phút. 5.1.2 G n d ch trong c a ng th 1 vào ng ly tâm th y tinh (4.1.7) th 2. Cho thêm 20 ml dung d ch m McIlvaine - EDTA vào ng ly tâm thu tinh th 1. Tr n u, ly tâm ng trong 10 phút t c 3 000 vòng/phút r i l i g n d ch trong vào ng ly tâm th y tinh th 2. 5.1.3 Cho thêm 10 ml dung d ch m McIlvaine - EDTA vào ng ly tâm thu tinh th 1. Tr n u r i ly tâm ng trong 10 phút t c 3 000 vòng/phút. Ti p t c g n d ch trong vào ng ly tâm th y tinh th 2. 5.1.4 Ly tâm ng th y tinh th 2 trong 20 phút t c 3 000 vòng/phút. Sau ó, l c d ch trong qua gi y l c trên ph u Buch-ner. R a ng ly tâm 2 l n, m i l n r a s d ng 2 ml dung d ch m McIlvaine - EDTA. 5.2 ChuN n b m u tr ng M u tr ng ư c nh nghĩa là m u th y s n ã ư c xác nh không có các kháng sinh thu c nhóm TC. Ti n hành chuN n b m u tr ng gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.1. 5.3 ChuN n b m u xác nh thu h i Thêm 100 µl dung d ch chuN n h n h p 25 µg/ml (4.3.7) vào 5,00 g m u tr ng. Ð ng nh t m u b ng máy nghi n ng th (4.1.3). Ti n hành chuN n b m u gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.1. 5.4 Làm s ch d ch chi t 5.4.1 ChuN n b c t N i c t Sep - Pak C18 vào u ra c a m t xi lanh th y tinh dung tích 100 ml. Thêm l n lư t 20 ml metanol (4.2.6), 20 ml nư c c t (4.2.2) vào xi lanh th y tinh. Lo i b dung d ch ch y qua c t. 5.4.2 Làm s ch d ch chi t 5.4.2.1 Cho l n lư t các d ch chi t trong ng ly tâm thu ư c t i các Ði u 5.1.4, 5.2 và 5.3 vào các c t Sep - Pak ã ư c chuN n b Ði u 5.4.1. Tráng r a bình ch a b ng 2,0 ml dung d ch m McIlvaine - EDTA (4.3.2). Trong giai o n này, các kháng sinh nhóm tetracyclin s ư c h p ph lên b m t các h t r n ch a trong c t. Chú thích: Không ư c cho c t Sep - Pak khô gi a hai giai o n chuN n b c t và làm s ch d ch chi t. Ði u ch nh cho d ch ch y ra kh i c t t ng gi t. 5.4.2.2 Cho 20 ml nư c c t (4.2.2) vào xi lanh th y tinh và cho ch y qua c t. Lo i b d ch ch y ra kh i c t. Làm khô c t b ng dòng không khí s ch trong 2 phút.
- 5.4.2.3 Gi i h p các kháng sinh nhóm tetracyclin b ng cách cho 6,0 ml dung d ch axít oxalic-metanol (4.3.3) ch y qua c t v i t c 1,5 ml/phút. Thu d ch ra kh i c t vào bình nh m c 10 ml. Ð nh m c t i v ch (th tích V) b ng nư c c t (4.2.2). Ti n hành phân tích d ch thu ư c trên HPLC theo qui nh t i Ði u 5.5. 5.5 Ti n hành phân tích trên HPLC 5.5.1 Ði u ki n phân tích a. C t s c ký : C t pha o C8, L x ID : 250 x 4,6 mm, kích thư c h t 5 µm. b. Nhi t c t: Nhi t trong phòng. c. Pha ng: H n h p dung d ch axit oxalic-metanol-axetonitrile (4.3.4). d. T c dòng: 1,2 ml/phút. . Bư c sóng cài t cho u dò UV là 350 nm. e. Th tích tiêm: 60 µl. 5.5.2 n nh c t s c ký trong 30 phút b ng pha ng (4.3.4). 5.5.3 Tiêm các dung d ch chuN n (4.3.8) vào máy HPLC theo th t n ng t th p n cao. M i dung d ch tiêm 2 l n, tính chi u cao pic trung bình. D ng ư ng chuN n bi u th m i quan h gi a các chi u cao pic thu ư c và n ng (µg/ml) t ng lo i kháng sinh theo quan h tuy n tính b c 1 (phương trình y = ax + b). 5.5.4 Tiêm dung d ch m u th , dung d ch m u tr ng, dung d ch xác nh thu h i theo qui nh t i Ði u 5.4.2.3 vào h th ng HPLC. M i dung d ch m u tiêm 2 l n. Tính giá tr trung bình. Chú thích: Sau khi phân tích xong, làm s ch h th ng HPLC (bao g m c c t s c ký) b ng h n h p: nư c c t (4.2.2) - metanol (4.2.6) - axetonitrile (4.2.7) theo t l v th tích là 7-1-2 trong 30 phút. 5.6 Yêu c u v tin c y c a phép phân tích 5.6.1 Ð l p l i c a 2 l n tiêm Ð l ch chuN n (CVS) tính theo chi u cao pic s c ký c a 2 l n tiêm cùng m t dung d ch chuN n ph i nh hơn 0,5 %. 5.6.2 Ð thu h i (R) Ð thu h i ư c xác nh cho m i l n ch y m u ph i l n hơn 80 %. 5.6.3 Ðư ng chuN n i v i m i kháng sinh ph i có tuy n tính t t, h s tương quan quy h i tuy n tính (R2) ph i l n hơn ho c b ng 0,995.
- 5.6.4 Ð i v i các m u ch a ít hơn 0,5 µg/g kháng sinh nhóm TC, ph i ki m tra xác nh n k t qu b ng cách tiêm l i d ch chi t m u và dung d ch chuN n trên c t C18 (4.1.2.b) ch y cùng ch như c t C8 (4.1.2.a) và so sánh th i gian lưu c a píc m u và píc chuN n. 6 Tính k t qu Hàm lư ng các kháng sinh có trong m u ư c tính trên cơ s ư ng chuN n thu ư c (5.5.3). V i ư ng chuN n d ng y = ax + b, hàm lư ng các kháng sinh có trong m u ư c tính theo công th c sau: (Y - b) C (µg/kg) = x F x 1 000 a Trong ó: - C là n ng các kháng sinh có trong m u, tính theo µg/kg. - Y là hi u s gi a chi u cao pic c a d ch chi t và chi u cao pic có trong m u tr ng tiêm vào HPLC, tính theo ơn v dài. - a, b là các thông s c a ư ng chuN n y = ax + b, ư c xác nh theo Ði u 5.5.3. - F là h s pha loãng m u và có giá tr b ng t s gi a th tích d ch chi t thu ư c sau khi làm s ch V ( 5.4.2.3) và kh i lư ng m u m ( 5.1.1) s d ng. 28 TCN 178 : 2002 HÀM LƯ NG AXIT OXOLINIC TRONG S N PH M THU S N - PHƯƠNG PHÁP NNH LƯ NG B NG S C KÝ L NG HI U NĂNG CAO Oxolinic acid in fishery products - Method for quantitative analysis by High Performance Liquid Chromatography 1 Ph m vi áp d ng Tiêu chuN n này qui nh phương pháp xác nh hàm lư ng axit oxolinic trong th y s n và s n phN m th y s n b ng s c ký l ng hi u năng cao (sau ây g i t t là HPLC). Gi i h n phát hi n c a phương pháp là 0,5 mg/kg. 2 Phương pháp tham chi u Tiêu chuN n này ư c xây d ng d a theo phương pháp do Trung tâm Phát tri n Thu s n Ðông Nam á (SEAFDEC) biên so n. 3 Nguyên t c
- Axit oxolinic - kháng sinh thu c nhóm Quinolon - trong m u th y s n ư c chi t tách b ng axetonitril. D ch chi t ư c làm s ch b ng phương pháp chi t l ng-l ng v i n- hexan bão hoà axetonitril. Hàm lư ng axit oxolinic trong d ch chi t ư c xác nh trên h th ng HPLC v i u dò huỳnh quang theo phương pháp ngo i chuN n. 4 Thi t b , d ng c , hóa ch t, dung d ch chu n và dung d ch th 4.1 Thi t b , d ng c 4.1.1 H th ng HPLC v i u dò huỳnh quang. 4.1.2 C t s c ký TSK - GEL ODS - 80 TM, L x ID : 150 x 4,6mm, kích thư c h t 5µm. 4.1.3 Màng l c mao qu n kích thư c 0,4 µm. 4.1.4 Máy nghi n ng th t c 10 000 vòng/ phút. 4.1.5 Cân phân tích có chính xác 0,0001g. 4.1.6 Máy ly tâm t c 5 000 vòng/phút. 4.1.7 B siêu âm. 4.1.8 H th ng cô quay chân không. 4.1.9 ng ly tâm thu tinh, dung tích 150 ml, 15ml. 4.1.10 Bình chi t dung tích 125 ml. 4.1.11 Bình c u th y tinh dung tích 100 ml. 4.1.12 Bình nh m c dung tích 10 ml và 100 ml. 4.2 Hóa ch t 4.2.1 Nư c c t lo i dùng cho HPLC. 4.2.2 Axetonitril lo i dùng cho HPLC. 4.2.3 Metanol lo i dùng cho HPLC. 4.2.4 1 - propanol tinh khi t, lo i dùng cho phân tích. 4.2.5 n - hexan tinh khi t, lo i dùng cho phân tích. 4.2.6 Sulfat natri khan. 4.2.7 Clorua natri tinh khi t, lo i dùng cho phân tích.
- 4.2.8. Axit xitric lo i dùng cho HPLC. 4.2.9. Axit oxolinic lo i dùng cho HPLC. 4.3 Dung d ch chuN n và dung d ch th 4.3.1 Axit xitric 0,1 M: hòa tan 21,01 g axit xitric (4.2.8) trong 1 lít nư c c t (4.2.1). 4.3.2 Dung môi pha ng: pha ng cho ti n trình ch y HPLC là h n h p c a axetonitril, metanol và dung d ch axit xitric 0,1 M theo t l v th tích là 2 : 2 : 3. 4.3.3 Dung d ch chuN n g c 100 µg/ml: cân chính xác 10,0 mg axit oxolinic trên cân phân tích (4.1.5), hòa tan và nh m c t i 100 ml b ng h n h p axetonitril và nư c c t (4.2.1) theo t l v th tích là 1 :1. 4.3.4 Dung d ch chuN n trung gian 10 µg/ml: hút chính xác 10,0 ml dung d ch chuN n g c 100 µg/ml (4.3.3) vào bình nh m c 100 ml. Ð nh m c t i v ch b ng h n h p axetonitril và nư c c t (4.2.1) theo t l v th tích là 1 :1. 4.3.5 Dung d ch chuN n làm vi c: hút chính xác l n lư t 0,2 ml, 0,5 ml, 1,0 ml, 2,0 ml, 5,0 ml và 10,0 ml dung d ch chuN n trung gian (4.3.4) vào bình nh m c 10 ml. Ð nh m c t i v ch b ng h n h p axetonitril và nư c c t (4.2.1) theo t l v th tích là 1 :1 ư c các chuN n có hàm lư ng axit oxolinic l n lư t là: 0,2 µg/ml, 0,5 µg/ml, 1,0 µg/ml, 2,0 µg/ml, 5,0 µg/ml và 10,0 µg/ml. 5 Phương pháp ti n hành 5.1 ChuN n b m u th 5.1.1 Cân chính xác 5,0 g m u (m) ã ư c băm nhuy n cho vào ng ly tâm th y tinh dung tích 150 ml (4.1.9). Thêm 25,0 ml axetonitril (4.2.2) và 10,0 g sulfat natri khan (4.2.6) r i nghi n trong 30 giây b ng máy nghi n ng th (4.1.4). Ly tâm trong vòng 5 phút t c 2 500 vòng/phút. 5.1.2 L c l y ph n d ch cho vào bình chi t 125 ml (4.1.10) ch a s n 25,0 ml n-hexan bão hòa axetonitril. 5.1.3 Thêm 25,0 ml axetonitril vào ph n bã trong ng ly tâm r i nghi n trong 30 giây b ng máy nghi n ng th (4.1.4). Ly tâm trong vòng 5 phút t c 2 500 vòng/phút và l c l y ph n d ch cho vào bình chi t trên (5.1.2). 5.2 ChuN n b m u tr ng M u tr ng ư c nh nghĩa là m u th y s n ã ư c xác nh không có axit oxolinic. Ti n hành chuN n b m u tr ng gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.1. 5.3 ChuN n b m u xác nh thu h i
- Thêm 2ml dung d ch chuN n có hàm lư ng 5 µg/ml vào 10,0 g m u tr ng. Ð ng nh t m u b ng máy nghi n ng th (4.1.4). Ti n hành chuN n b m u gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.1. 5.4 Làm s ch d ch chi t 5.4.1 L c m nh bình chi t thu ư c các Ði u 5.1, 5.2 và 5.3 trong vòng 10 phút r i yên cho tách l p. M khoá chuy n l p axetonitril dư i vào bình c u th y tinh 100 ml (4.1.11). Thêm 5,0 ml 1-propanol (4.2.4) vào trong bình r i cô c n trên máy cô quay chân không (4.1.8) nhi t 40oC. 5.4.2 Thêm 2,0 ml (V) h n h p axetonitril và nư c c t (4.2.1) theo t l 3:7 v th tích. Ð bình vào trong b i u nhi t c a b siêu âm (4.1.7) cho n khi hoà tan c n hoàn toàn. 5.4.3 Chuy n dung d ch vào ng ly tâm dung tích 15 ml (4.1.9). Thêm 100,0 mg clorua natri tinh khi t và 1,0 ml dung d ch n-hexan bão hòa axetonitril. Tr n u trong b siêu âm (4.1.7) và ly tâm trong vòng 5 phút t c 2 500 vòng/phút. 5.4.4 Ð yên cho tách l p, sau ó dùng pipet cN n thN n hút l p axetonitril dư i cho vào xilanh nh a ã g n s n màng l c mao qu n (4.1.3). Ti n hành phân tích d ch l c thu ư c trên HPLC theo qui nh t i Ði u 5.5. 5.5 Ti n hành phân tích trên HPLC 5.5.1 Ði u ki n phân tích a. C t s c ký : TSK - GEL ODS 80 TM, L x ID:150 x 4,6 mm, kích thư c h t 5 µm. b. Nhi t c t : 35oC. c. Pha ng : H n h p axetonitril, metanol và axit xitric 0,1 M (4.3.2). d. T c dòng : 0,5 ml/phút. . Bư c sóng cài t cho u dò huỳnh quang: (kích ho t) E x 337nm, (phát x ) Em 365nm. e. Th tích tiêm : 20 µl. 5.5.2 Tiêm các dung d ch chuN n (4.3.5) vào máy HPLC theo th t n ng t th p n cao. M i dung d ch tiêm 2 l n, tính di n tích pic trung bình. D ng ư ng chuN n bi u th m i quan h gi a các di n tích pic thu ư c và n ng axit oxolinic theo quan h tuy n tính b c 1 (phương trình y = ax + b). 5.5.3 Tiêm dung d ch m u th , dung d ch m u tr ng, dung d ch xác nh thu h i theo qui nh t i Ði u 5.4.4 vào h th ng HPLC. M i dung d ch m u tiêm 2 l n. Tính giá tr trung bình. 5.6 Yêu c u v tin c y c a phép phân tích
- 5.6.1 Ð l p l i c a 2 l n tiêm Ð l ch chuN n (CVS) tính theo di n tích pic s c ký c a 2 l n tiêm cùng m t dung d ch chuN n ph i nh hơn 0,5 %. 5.6.2 Ð thu h i (R) Ð thu h i ư c xác nh b ng cách s d ng 5 m u ã cho vào m t lư ng dung d ch axit oxolinic chuN n ã bi t hàm lư ng chính xác. Ð thu h i tính ư c ph i trong kho ng t 85 % n 115 %, thu h i trung bình ph i l n hơn 90 %. 5.6.3 Ðư ng chuN n ph i có tuy n tính t t, h s tương quan quy h i tuy n tính (R2) ph i l n hơn ho c b ng 0,99. 6 Tính k t qu Hàm lư ng axit oxolinic có trong m u ư c tính trên cơ s ư ng chuN n thu ư c (5.5.2). V i ư ng chuN n d ng y = ax + b, hàm lư ng axit oxolinic có trong m u ư c tính theo công th c sau: (Y - b) C (µg/kg) = x F x 1 000 a Trong ó: - C là n ng axit oxolinic có trong m u, tính theo µgkg. - Y là hi u s gi a di n tích pic c a d ch chi t và di n tích pic có trong m u tr ng tiêm vào HPLC, tính theo ơn v di n tích - a, b là các thông s c a ư ng chuN n y = ax + b, ư c xác nh theo Ði u 5.5.2. - F là h s pha loãng m u và có giá tr b ng t s gi a th tích d ch chi t thu ư c sau khi làm s ch V (5.4.2) và kh i lư ng m u m (5.1.1) s d ng. 28 TCN 179 : 2002 HÀM LƯ NG AFLATOXIN - PHƯƠNG PHÁP NNH LƯ NG B NG S C KÝ L NG HI U NĂNG CAO Aflatoxin in fishery products - Method for quantitative analysis by High Performance Liquid Chromatography 1 Ph m vi áp d ng Tiêu chuN n này qui nh phương pháp xác nh hàm lư ng c t aflatoxin (B1, B2, G1, G2) trong th y s n và s n phN m th y s n b ng s c ký l ng hi u năng cao (sau ây g i t t là HPLC). Gi i h n phát hi n c a phương pháp là 1,5 µg/kg.
- 2 Phương pháp tham chi u Tiêu chuN n này ư c xây d ng d a theo phương pháp chuN n s 49.2.05 c a Hi p h i các nhà hoá h c phân tích (AOAC) công b năm 1997. 3 Nguyên t c Aflatoxin có trong m u th y s n bao g m các nhóm B1, B2, G1 và G2 ư c chi t tách ra b ng clorofom. D ch chi t ơc làm s ch b ng phương pháp chi t pha r n (SPE) trên silicagel. Hàm lư ng aflatoxin có trong d ch chi t ư c xác nh trên h th ng HPLC v i u dò huỳnh quang theo phương pháp ngo i chuN n. 4 Thi t b , d ng c , hóa ch t, ch t chu n và dung d ch th 4.1 Thi t b , d ng c 4.1.1 H th ng HPLC v i u dò huỳnh quang. 4.1.2 C t s c ký pha o LC18 kích thư c L x ID là 25 cm x 4,6 mm, ư ng kính h t t 5 n 10 [NAD1] µm. 4.1.3 Màng l c mao qu n kích thư c 0,4 µm. 4.1.4 Máy nghi n ng th t c 10 000 vòng/ phút. 4.1.5 Cân phân tích có chính xác 0,0001 g. 4.1.6 Máy ly tâm t c 5 000 vòng/phút. 4.1.7 B siêu âm. 4.1.8 H th ng cô quay chân không. 4.1.9 C t th y tinh có khóa teflon, kích thư c L x ID là 500 x 20 mm và 500 x 8 mm. 4.1.10 ng ly tâm th y tinh dung tích 250 ml. 4.1.11 Bình c u th y tinh dung tích 100 ml và 250 ml. 4.1.12 Bình nh m c dung tích 5 ml và 10 ml. 4.2 Hóa ch t 4.2.1 Nư c c t lo i dùng cho HPLC. 4.2.2 Metanol lo i dùng cho HPLC. 4.2.3 Clorofom lo i dùng cho HPLC. 4.2.4 Axetonitril lo i dùng cho HPLC.
- 4.2.5 n-hexan tinh khi t lo i dùng cho phân tích. 4.2.6 Ete etylic tinh khi t. 4.2.7 Sulfat natri khan. 4.2.8 Silicagel c h t t 60 n 200 mesh. 4.2.9 Silicagel ã ư c ho t hóa: cân 50,0 g silicagel tinh khi t (4.2.8) vào t s y trong 2 gi nhi t 110oC. Sau ó ngu i v nhi t c a phòng trong bình hút N m và ngâm trong clorofom 15 phút trư c khi nh i c t. 4.3 Dung d ch chuN n và dung d ch th 4.3.1 Dung d ch chuN n g c h n h p g m: B1 (n ng 100,0 µg/l), B2 (n ng 20,0 µg/l), G1 (n ng 100 µg/l) và G2 (n ng 20 µg/l). 4.3.2 ChuN n b dung d ch chuN n g c h n h p aflatoxin có n ng (như Ði u 4.3.1) trong metanol t các ng chuN n. Tùy theo n ng các aflatoxin có trong ng chuN n, dùng bình nh m c và lư ng metanol thích h p. 4.3.3 Dung d ch chuN n trung gian có n ng là B1 (10,0 µg/l), B2 (2,0 µg/l), G1 (10,0 µg/l) và G2 (2,0 µg/l): hút chính xác 1,0 ml dung d ch chuN n g c h n h p (4.3.1) vào bình nh m c 10 ml (4.1.12) r i nh m c t i v ch b ng metanol (4.2.2). 4.3.4 Dung d ch chuN n: hút chính xác l n lư t 0,0 ml, 1,0 ml, 2,0 ml, 4,0 ml, 8,0 ml và 10,0 ml dung d ch chuN n trung gian (4.3.3) vào các bình nh m c 10 ml (4.1.12) r i nh m c t i v ch b ng metanol. Các dung d ch chuN n thu ư c có n ng aflatoxin l n lư t như sau: a. ChuN n 1 : B1 (0,0 µg/l), B2 (0,0 µg/l), G1 (0,0 µg/l), G2 (0,0 µg/l). b. ChuN n 2 : B1 (1,0 µg/l), B2 (0,2 µg/l), G1 (1,0 µg/l), G2 (0,2 µg/l). c. ChuN n 3 : B1 (2,0 µg/l), B2 (0,4 µg/l), G1 (2,0 µg/l), G2 (0,4 µg/l). d. ChuN n 4 : B1 (4,0 µg/l), B2 (0,8 µg/l), G1 (4,0 µg/l), G2 (0,8 µg/l). . ChuN n 5 : B1 (8,0 µg/l), B2 (1,6 µg/l), G1 (8,0 µg/l), G2 (1,6 µg/l). e. ChuN n 6 : B1 (10,0 µg/l), B2 (2,0 µg/l), G1 (10,0 µg/l), G2 (2,0 µg/l). 4.3.5 Dung d ch pha ng: pha h n h p các dung môi axetonitril, metanol và nư c c t lo i dùng cho HPLC theo t l v th tích là 2 : 2 : 6. 5 Phương pháp ti n hành 5.1 ChuN n b m u th
- 5.1.1 Dùng cân phân tích (4.1.5) cân chính xác 50,0 g m u (m) ã ư c băm nhuy n cho vào ng ly tâm thu tinh dung tích 250 ml (4.1.10). 5.1.2 Thêm 100,0 ml clorofom (4.2.3) vào ng r i tr n u trong kho ng 2 phút b ng máy nghi n ng th (4.1.4). Sau ó, ly tâm ng b ng máy ly tâm (4.1.6) trong kho ng 5 phút t c 5 000 vòng/phút. Ti n hành l c d ch chi t và r a ph n bã b ng clorofom r i cho t t c d ch thu ư c vào bình c u thu tinh dung tích 250 ml (4.1.11). 5.2 ChuN n b m u tr ng M u tr ng ư c nh nghĩa là m u th y s n ã ư c xác nh không có aflatoxin. Ti n hành chuN n b m u tr ng gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.1. 5.3 ChuN n b m u xác nh thu h i Thêm 2,0 ml dung d ch chuN n 3 (4.3.4.c) vào 10,0 g m u tr ng. Ð ng nh t m u b ng máy nghi n ng th (4.1.4). Ti n hành chuN n b m u gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.1. Ph i chuN n b m u xác nh thu h i ng th i v i chuN n b m u th và m u tr ng. 5.4 Làm s ch d ch chi t 5.4.1 ChuN n b c t Ð t 1 l p bông th y tinh vào áy c t th y tinh có khóa teflon (4.1.9). Ðóng khóa và cho clorofom t i kho ng 2/3 c t r i thêm l n lư t 5,0 g sulfat natri khan (4.2.7), 20,0g silicagel ã ho t hóa (4.2.8), 15 g sulfat natri khan (4.2.7). Chú thích: tránh khô c t luôn gi m c clorofom cao hơn l p sulfat natri khan trên cùng kho ng 1,5 cm. 5.4.2 Làm s ch d ch chi t 5.4.2.1 Cô d ch chi t thu ư c (5.1.2) trên h th ng cô quay chân không (4.1.8) còn kho ng 5,0 ml nhi t 40 oC. Dùng pipet chuy n dung d ch t bình c u (5.1.2) vào c t làm s ch ã chuN n b (5.4.1) và tráng r a bình c u b ng clorofom. Ði u ch nh khoá t c ch y c a dung d ch ra kh i c t kho ng t 1,0 n 1,5 ml/phút. Trong giai o n này, aflatoxin s h p ph lên các h t silicagel. 5.4.2.2 Thêm vào c t l n lư t 50,0 ml n-hexan (4.2.5), 50,0 ml ete etylic (4.2.6). Ði u ch nh t c dung môi ch y qua c t 1,0 ml/phút. Sau ó lo i b d ch ch y ra kh i c t. 5.4.2.3 Gi i h p các aflatoxin kh i c t làm s ch b ng 50,0 ml h n h p clorofom và metanol theo t l v th tích là 97: 3 v i t c d 1,0 ml/phút. H ng dung d ch ch y ra kh i c t vào bình c u dung tích 100 ml (4.1.11). Cô d ch thu ư c trên h th ng cô quay chân không (4.1.8) nhi t 40o C cho n khô hoàn toàn. Hoà tan c n b ng
- 5,0 ml (V) dung d ch pha ng (4.3.5) trong bình nh m c 5 ml (4.1.12). Ti n hành phân tích hàm lư ng các aflatoxin trên HPLC theo qui nh t i Ði u 5.5. 5.4.2.4 Ti n hành làm s ch m u tr ng (5.2) và m u xác nh thu h i (5.3) gi ng như v i m u th (5.1) theo qui nh t i Ði u 5.4.2.1, Ði u 5.4.2.2 và Ði u 5.4.2.3. 5.5 Ti n hành phân tích trên HPLC 5.5.1 Ði u ki n phân tích a. C t s c ký : RP-LC 18, kích thư c L x ID là 25 cm x 4,6 mm, ư ng kính h t 5 -10 [NAD2] µm. b. Nhi t c t : 35oC. c. Pha ng : H n h p g m: axetonitril, metanol và nư c c t (4.3.5. d. T c dòng: 1,0 ml/phút. . Bư c sóng cài t cho u dò huỳnh quang là: (kích ho t) E x 365 nm, (phát x ) Em 455 nm. e. Th tích tiêm : 20 µl. 5.5.2 Tiêm các dung d ch chuN n (4.3.4) vào máy HPLC theo th t n ng t th p n cao. M i dung d ch tiêm 2 l n, tính di n tích pic trung bình. D ng ư ng chuN n bi u th m i quan h gi a các di n tích pic thu ư c và n ng t ng lo i aflatoxin theo quan h tuy n tính b c 1 (phương trình y = ax + b). 5.5.3 Tiêm dung d ch m u th , dung d ch m u tr ng và dung d ch xác nh thu h i vào h th ng HPLC. M i dung d ch m u tiêm 2 l n. Tính giá tr trung bình. 5.6 Yêu c u v tin c y c a phép phân tích 5.6.1 Ð l p l i c a 2 l n tiêm Ð l ch chuN n (CVs) tính theo di n tích pic s c ký c a 2 l n tiêm cùng m t dung d ch chuN n ph i nh hơn 0,5 %. 5.6.2 Ð thu h i (R) Ð thu h i ư c xác nh b ng cách s d ng 10 m u tr ng ã cho vào m t lư ng dung d ch aflatoxin chuN n ã bi t hàm lư ng chính xác (5.3). Ð thu h i tính ư c ph i n m trong kho ng t 85 % n 115 %, thu h i trung bình ph i l n hơn 90 %. 5.6.3 Ðư ng chuN n ph i có tuy n tính t t, h s tương quan quy h i tuy n tính (R2) ph i l n hơn ho c b ng 0,99. 6 Tính k t qu
- Hàm lư ng các aflatoxin có trong m u ư c tính trên cơ s ư ng chuN n thu ư c (5.5.2). V i ư ng chuN n d ng y = ax +b, hàm lư ng các aflatoxin có trong m u ư c tính theo công th c sau: (Y - b) C (µg/kg) = xF a Trong ó: - C là n ng aflatoxin có trong m u, tính theo µg/kg - Y là hi u s gi a di n tích pic c a d ch chi t và di n tích pic có trong m u tr ng tiêm vào HPLC, tính theo ơn v di n tích - a, b là các thông s c a ư ng chuN n y = ax + b, ư c xác nh theo Ði u 5.5.2. - F là h s pha loãng m u và có giá tr b ng t s gi a th tích d ch chi t thu ư c sau khi làm s ch V (5.4.2) và kh i lư ng m u m (5.1.1) s d ng. 28 TCN 180 : 2002 HÀM LƯ NG THU C TR SÂU G C CLO H U CƠ VÀ POLY CLORUA BIPHENYL TRONG TH Y S N VÀ S N PH M TH Y S N - PHƯƠNG PHÁP NNH LƯ NG B NG S C KÝ KHÍ Organochlorine pesticides and PCB-congeners in fish and fishery products - Method for quantitative analysis by Gas Chromatography 1 Ph m vi áp d ng 1.1 Tiêu chuN n này qui nh phương pháp xác nh hàm lư ng các thu c tr sâu g c Clo h u cơ và Poly Clorua Biphenyl (sau ây g i t t là PCBs) trong thu s n và s n phN m thu s n b ng h th ng s c ký khí (sau ây g i t t là GC). 1.2 Gi i h n phát hi n c a phương pháp i v i: α-BHC là 1,0 µg/kg; β-BHC là 4,5 µg/kg; γ-BHC là 0,7 µg/kg; heptaclo là 1,0 µg/kg; al rin là 1,5 µg/kg; iel rin là 2,5 µg/kg; en rin là 5,0 µg/kg; DDT là 1,5 µg/kg và clo an là 1,0µg/kg. 2 Phương pháp tham chi u Tiêu chuN n này ư c xây d ng d a theo phương pháp 'Rapid determination of chlorinated pesticides, polychlorinated biphenyls', Mitt.Lebendsmittelunters. Hyg. 65:131-150 (1974) và phương pháp s S9 nêu trong S tay hư ng d n phân tích dư lư ng thu c tr sâu c a C ng hoà liên bang Ð c (năm 1987). 3 Nguyên t c
- 3.1 Thu c tr sâu nhóm clo h u cơ bao g m các h p ch t chính hay ng phân c a chúng như sau: al rin; α-clo an; γ-clo an; oxi-clo an; p,p' DDD; p,p' DDE; o,p' DDT; p,p' DDT; iel rin; α-endosulfan; en rin; heptaclo, heptaclo epoxit; hexaclobenzen (HCB); α-hexacloxyclohexan (α-HCH); β-hexacloroxyclohexan (β- HCH); δ-hexacloxyclohexan (δ-HCH); iso rin, trans-nonaclo; γ- hexachlorocyclohexan (γ-HCH). 3.2 Các h p ch t nhóm PCBs bao g m: 4-PCB (CB3); 2,4,4'-PCB (CB28); 2,2',4,4'- PCB (CB47); 2,2',5,5'-PCB (CB52); 2,2',5,6'-PCB (CB53); 2,2',4,5,5'-PCB (CB101); 2,3,4,4',5'-PCB (CB114); 2,3',4,4',5'-PCB (CB118); 2,3,3',4,5'-PCB (CB122); 2,2',3,3',4,4'-PCB (CB128); 2,2',3,4,4',5'-PCB (CB138); 2,3,3,4',5',6'-PCB (CB149); 2,2',4,4',5,5'-PCB (CB153); 2,2',4,4',6,6'-PCB (CB155); 2,3,3',4,4',5'-PCB (CB156); 2,3,3',4,4',5'-PCB (CB157); 2,3',4,4',5'-PCB (CB167); 2,2',3,3',4,4',5'-PCB (CB170); 2,2',3,4,4',5,5'-PCB (CB180); 2,2',3,3',4,5,5',6-PCB (CB198). 3.3 Trong m u th y s n các h p ch t trên ư c chi t tách ra b ng dung môi pentan. D ch chi t ư c làm s ch b ng phương pháp chi t pha r n (SPE) trên florisil sau ó ư c tách làm 2 phân o n trên c t silicagel. Phân o n A ch a các PCB (tr CB3), HCB, al rin, iso rine, heptaclo và p,p' DDE. Phân o n B ch a CB3, p,p' DDE và các thu c tr sâu g c clo còn l i. Hàm lư ng các thu c tr sâu g c clo h u cơ và PCBs trong các phân o n chi t ư c xác nh trên máy s c ký khí v i u dò b t gi i n t (sau ây g i t t là ECD). 4 Thi t b , d ng c , hoá ch t, dung d ch chu n và dung d ch th 4.1 Thi t b và d ng c 4.1.1 C t s c ký th y tinh (có van khoá), kích thư c L x ID là 500 x 20 mm và 500 x 8mm. 4.1.2 H th ng cô quay chân không. 4.1.3 H th ng chi t m u soxhlet. 4.1.4 Máy nghi n ng th t c 10 000 vòng/phút. 4.1.5 Máy l c 4.1.6 T s y 4.1.7 Lò nung 4.1.8 Cân phân tích có chính xác 0,0001 g. 4.1.9 C t mao qu n (cho máy GC): lo i SPBTM - SUPELCO, kích thư c L x ID = 30 m x 0,32 mm ho c tương ương. 4.1.10 Máy s c ký khí v i u dò ECD.
- 4.1.11 H ng soxhlet: các ng soxhlet ư c làm s ch b ng cách chưng c t v i pentan hay diclormetan trên h th ng soxhlet trong 4 gi . 4.1.12 C i s . 4.1.13 B siêu âm 4.1.14 Bình thu tinh, bình tam giác dung tích 50 ml. 4.2 Hoá ch t 4.2.1 Ete ietyl lo i dùng cho HPLC. 4.2.2 Pentan lo i dùng cho HPLC. 4.2.3 Sulfat natri khan tinh khi t ư c làm s ch b ng iclometan trên h th ng soxhlet, sau ó nung nhi t 5000C trong 4 gi và gi trong chai thu tinh. 4.2.4 Isooctan lo i dùng cho HPLC. 4.2.5 Khí mang: Heli (lo i dùng cho GC). 4.2.6 Florisil c h t t 60 n100 mesh ư c làm s ch b ng h th ng soxhlet và nung nhi t 4500C trong 18 gi , sau ó cho vào chai thu tinh ư c ph b ng gi y nhôm và ư c gi nhi t 1200C trong t s y. 4.2.7 Florisil ư c ho t hoá: l y m t lư ng florisil (4.2.6) t t s y tr c ti p qua ph u vào m t bình áy tròn (erlenmeye) có nút nhám. Thêm vào bình 3 % nư c theo t l tr ng lư ng (w/w), sau ó l c h n h p kho ng 30 phút b ng máy l c và yên kho ng 1 gi trư c khi s d ng. 4.2.8 Bông thu tinh ư c làm s ch b ng pentan hay iclometan trên h th ng soxhlet và khô trên mi ng gi y nhôm t trong t hút. 4.2.9 Cát s ch ư c nung nhi t 5000C trong 3 gi , cho ngu i trên gi y nhôm sau ó gi trong chai có n p v n. 4.2.10 Silicagel c h t t 70 n 140 mesh. 4.2.11 Silicagel ã ư c ho t hoá: l y silicagel (4.2.10), r a s ch b ng iclometan r i cho vào trong chén s và trong t s y nhi t 1200C trong vòng 12 gi . Sau ó, dùng gi y thi c b c kín m ng chén s và l i vào t s y nhi t 1200C trư c khi s d ng. 4.3 Dung d ch chuN n và dung d ch th 4.3.1 Dung d ch r a gi i: h n h p dung d ch iclometan và pentan (4.2.2) theo t l v th tích là 2 : 8, ư c pha trư c khi s d ng.
- 4.3.2 ChuN n b các dung d ch chuN n thu c tr sâu g c clo và PCBs trong isooctan có n ng : 0,0 µg/l, 2,5µg/l , 5µg/l, 10,0 µg/l, 20,0 µg/l t các ng chuN n. Tuỳ theo n ng thu c tr sâu có trong ng chuN n, dùng bình nh m c và lư ng isooctan thích h p. 4.3.3 Dung d ch chuN n thu h i: pha -HCH trong dung môi isooctan có hàm lư ng là:các chuN n c a CB3, CB198 và -HCH/g isooctan.2,0 µg CB3/g isooctan; 0,2µg CB198/g isooctan và 0,2 µg 4.3.4 Dung d ch chuN n ki m tra: pha chính xác h n h p dung d ch chuN n ki m tra g m p,p DDE và ppDDT trong isooctan v i hàm lư ng c a m i ch t trong kho ng t 5 n 20 ng/ml isooctan. 5 Phương pháp ti n hành 5.1 Xác nh hàm lư ng ch t béo trong m u th 5.1.1 Nghi n u 250,0 g m u th y s n trên máy nghi n ng th (4.1.4). Dùng cân phân tích (4.1.8) cân chính xác 10,0 g m u (m) ã nghi n cho vào trong ng soxhlet s ch (4.1.11) ư c ph b ng bông thu tinh (4.2.8). Chi t m u v i 150,0 ml pentan trong 3 gi trên h th ng chi t m u soxhlet (4.1.3). 5.1.2 Cô c d ch chi t trên máy cô quay chân không (4.1.2) n kho ng 20 ml. Sau ó, cô ti p ch chân không cho n khi ch còn kho ng 1,0 ml. 5.1.3 Chuy n d ch ã cô vào m t chén cân ã bi t trư c kh i lư ng, dùng gi y nhôm ph lên chén cân r i qua êm trong t hút. Sau ó, chén cân ư c làm khô n kh i lư ng không i nhi t 700C trong t s y (s thay i c a chén cân không vư t quá 0,0005 g) r i ngu i t i nhi t phòng trong bình hút N m. Ph n thu ư c em cân là lư ng ch t béo có trong m u. 5.2 ChuN n b m u th 5.2.1 Cân chính xác 10,0 g m u (m) ã nghi n cho vào c i s (n u lư ng ch t béo trong 10,0 g m u l n hơn 0,8 g thì gi m lư ng m u m b o có t i a 0,8 g ch t béo trong lư ng m u em th nghi m). Thêm 10,0 g cát s ch (4.2.9) và 4,0 g sunfat natri khan (4.2.3) r i nghi n u b ng c i s (4.1.12). H n h p ư c ưa vào trong ng soxhlet s ch (4.1.11), ư c ph b ng bông thu tinh (4.2.8). Sau ó, h n h p ư c chi t v i 150,0 ml pentan trong 3 gi trên h th ng chi t m u soxhlet (4.1.3). 5.2.2 N u m u ch a nư c, s n phN m chi t ph i ư c l c qua sunfat natri khan r i ư c r a l i b ng 25,0 ml pentan. S n phN m chi t ư c cô c trên máy cô quay chân không (4.1.2) n kho ng 20 ml. Sau ó, cô ti p v i ch chân không nhi t 40oC cho n khi ch còn kho ng 1,0 ml. Thêm vào d ch thu ư c 2,0 ml isooctane r i làm s ch d ch chi t theo qui nh t i Ði u 5.5. 5.3 ChuN n b m u tr ng
- M u tr ng ư c nh nghĩa là m u th y s n ã ư c xác nh không có thu c tr sâu g c clo h u cơ và PCBs. Ti n hành chuN n b m u tr ng gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.2. 5.4 ChuN n b m u xác nh thu h i Thêm 2,0 ml dung d ch chuN n có hàm lư ng 5,0 µg/l (4.3.2) vào 10,0 g m u tr ng. Ð ng nh t m u b ng máy nghi n ng th (4.1.4). Ti n hành chuN n b m u gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.2. 5.5 Làm s ch d ch chi t 5.5.1 ChuN n b c t 5.5.1.1 Cân 25,0 g florisil ã ho t hoá r i cho vào c c thu tinh có m ch a 50,0 ml dung môi pentan (4.2.2). Sau ó rót t t dung d ch vào trong c t s c ký thu tinh (4.1.1) ã khoá van và nh i m t ít bông thu tinh (4.2.8) dư i áy c t. 5.5.1.2 Ð yên c t cho l ng, sau ó tháo van rút dung môi pentan ra kh i c t cho n khi m c dung môi trong c t cao hơn m c florisil kho ng 1,0 cm. Thêm m t ít bông th y tinh lên phía trên l p florisil tránh xáo tr n tinh th khi có dòng dung d ch vào. 5.5.2 Làm s ch d ch chi t 5.5.2.1 Chuy n các dung d ch thu ư c Ði u 5.2.2, Ði u 5.3 và Ði u 5.4 vào các c t s c ký ã chuN n b (5.5.1). 5.5.2.2 Cho ti p 3 l n, m i l n 3,0 ml dung d ch r a gi i (4.3.1). Ði u ch nh khoá t c r a gi i t t 4 n 5 ml/phút. Chú thích: không ư c khô c t trong t t c các bư c c a qui trình. 5.5.2.3 Thu toàn b d ch chi t i qua c t vào m t bình thu tinh áy tròn c a máy cô quay chân không (4.1.2). Ti n hành cô dung d ch thu ư c cho n khi ch còn kho ng 1,0 ml. B sung thêm 1,0 ml isooctan vào trong bình r i l c u hoà tan h t c n bám trên thành bình. Làm bay hơi t t b ng dòng khí nitơ cho t i khi d ch khô hoàn toàn. 5.5.2.4 Thêm chính xác 2,0 ml isooctan r i l c u hoà tan c n. 5.6 Phân tách thu c tr sâu g c clo và PCBs 5.6.1 ChuN n b c t 5.6.1.1 Cân chính xác 7,0 g silicagel ã ư c ho t hoá (4.2.11) vào trong bình nh m c tam giác dung tích 50 ml (4.1.14). Sau ó, cho thêm kho ng 25,0 ml pentan, l c u r i cho l ng. Ð h n h p này vào trong c t s c ký thu tinh kích thư c L x ID là 500 x 8 mm (4.1.1) ã nh i m t ít bông thu tinh (4.2.8) dư i áy c t.
CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD
-
Quyết định số 3733/2002/QĐ-BYT
59 p | 1852 | 221
-
Quyết định số 5129/2002/QĐ-BYT
24 p | 88 | 10
-
Quyết định số 10/2007/QĐ-BYT
2 p | 112 | 8
-
Quyết định số 4894/2002/QĐ-BYT
3 p | 77 | 8
-
Quyết định số 5047/2002/QĐ-BYT
13 p | 46 | 5
-
Quyết định số 4895/2002/QĐ-BYT
2 p | 71 | 5
-
Quyết định số 43/2002/QĐ-BGDĐT
10 p | 79 | 5
-
Quyết định số 10/2006/QĐ-BNN
8 p | 48 | 3
-
Quyết định số 139/2002/QĐ-UB
6 p | 45 | 3
-
Quyết định số 143/2002/QĐ-UB
5 p | 43 | 3
-
Quyết định số 10/2008/QĐ-BYT
2 p | 42 | 2
-
Quyết định số 10/2007/QĐ-UBND
8 p | 30 | 2
-
Quyết định số 10/2007/QĐ-UBND
4 p | 34 | 1
-
Quyết định số 10/2004/QĐ-BTS
2 p | 42 | 1
-
Quyết định số 10/2005/QĐ-BYT
7 p | 40 | 1
-
Quyết định số 10/2006/QĐ-BYT
2 p | 45 | 1
-
Quyết định số 136/2002/QĐ-TTg
1 p | 64 | 1

markdown:
# Quyết định số 10/2002/QĐ-BTS
Chia sẻ: Son Nguyen | Ngày: | Loại File: PDF | Số trang:23
lượt xem 3
download
![](http://image.tlvnimg.com/document/thumbnail/2009/20091130/lawttyt8/80x100/2282.jpg)
##
Quyết định số 10/2002/QĐ-BTS
[Vui lòng tải xuống để xem tài liệu đầy đủ](javascript:void(0);)
Download
![](images/down16x21.png)
Quyết định số 10/2002/QĐ-BTS của Bộ trưởng Bộ Thủy sản về việc ban hành tiêu chuẩn cấp ngành
Bình luận(0)
[Đăng nhập để gửi bình luận!](javascript:void(0);)
##
Nội dung Text: Quyết định số 10/2002/QĐ-BTS
- B THU S N C NG HOÀ XÃ H I CH NGHĨA VI T ------- NAM c l p - T do - H nh phúc --------- S : 10/2002/QÐ- BTS Hà N i, ngày 8 tháng 4 năm 2002 QUY T NNH V VI C BAN HÀNH TIÊU CHU N C P NGÀNH B TRƯ NG B THU S N - Căn c Ngh nh s 50/CP ngày 21 tháng 6 năm 1994 c a Chính ph v nhi m v quy n h n và t ch c b máy c a B Thu s n; - Theo ngh c a Ông V trư ng V Khoa h c Công ngh ; QUY T NNH : Ði u 1: Ban hành kèm theo Quy t nh này 04 Tiêu chuNn c p Ngành sau ây : 1. 28 TCN 177 : 2002 : hàm Lư ng kháng sinh nhóm tetracyclin trong s n phNm thu s n - Phương pháp nh lư ng b ng s c ký l ng hi u năng cao. 1. 28 TCN 178 : 2002 : Hàm lư ng axits axolinic trong s n phNm thu s n - Phương pháp nh lư ng b ng s c ký l ng hi u năng cao. 3. 28 TCN 179 : 2002 : Hàm lư ng aflatoxin trong s n phNm thu s n - Phương pháp nh lư ng b ng s c ký l ng hi u năng cao. 4. 28 TCN 180 : 2002 : Hàm lư ng thu c tr sâu g c clo h u vơ và poly clorua biphenyl trong s n phNm thu s n - Phương pháp nh lư ng b ng s c ký khí. Ði u 2: Các tiêu chuNn trên ây ư c khuy n khích áp d ng cho các phòng ki m nghi m khi ti n hành ki m tra ch t lư ng hàng thu s n và có hi u l c th c hi n sau 15 ngày k t ngày ký. Ði u 3: Chánh Văn phòng B ; Th trư ng các V , C c; Chánh Thanh tra B ; Giám c các S Thu s n, S Nông nghi p và Phát tri n nông thôn có qu n lý thu s n; Giám c Trung tâm Ki m tra Ch t lư ng và V sinh thu s n; Th trư ng các ơn v các phòng ki m nghi m nói t i Ði u 2 và các cơ s ch bi n thu s n ch u trách nhi m thi hành Quy t nh này. KT. B TRƯ NG B THU S N TH TRƯ NG
- Nguy n Vi t Th ng 28 TCN 177 : 2002 HÀM LƯ NG THU C KHÁNG SINH NHÓM TETRACYCLIN TRONG S N PH M THU S N - PHƯƠNG PHÁP NNH LƯ NG B NG S C KÝ L NG HI U NĂNG CAO Tetracyclines group in fishery products - Method for quantitative analysis by high performance liquid chromatography 1 Ph m vi áp d ng Tiêu chuN n này qui nh phương pháp xác nh hàm lư ng kháng sinh nhóm tetracyclin trong th y s n và s n phN m th y s n b ng s c ký l ng hi u năng cao (sau ây g i t t là HPLC). Gi i h n phát hi n c a phương pháp là 10 µg/kg. 2 Phương pháp tham chi u Tiêu chuN n này ư c xây d ng d a theo phương pháp s 995.09 Chlortetracyclin, Oxytetracycline, and Tetracycline trong ph n ăn ư c c a ng v t, quy n I, chương 23, trang 19 - 23 (23.1.17), phương pháp chuN n c a Hi p h i các nhà hoá h c phân tích (AOAC) ban hành năm 1997. 3 Nguyên t c 3.1 Kháng sinh nhóm tetracyclin bao g m 3 kháng sinh chính sau: tetracyclin (g i t t là TC), oxytetracyclin (g i t t là OTC) và clortetracyclin (g i t t là CTC). 3.2 Các kháng sinh này trong m u th y s n ư c chi t tách b ng dung d ch m (pH 4). D ch chi t ư c làm s ch b ng phương pháp chi t pha r n (SPE) trên c t tách chi t pha o Sep - Pak Cartrige C18. Hàm lư ng TC, OTC, CTC có trong d ch chi t ư c xác nh trên h th ng HPLC v i u dò UV t i bư c sóng 350 nm theo phương pháp ngo i chuN n. 4 Thi t b , d ng c , hoá ch t, dung d ch chu n và dung d ch th 4.1 Thi t b , d ng c 4.1.1 H th ng HPLC v i u dò UV. 4.1.2 C t s c ký pha o g m có: a. C t s c ký pha o C8, kích thư c c t L x ID : 250 x 4,6 mm, kích thư c h t 5 µm. b. C t s c ký pha o C18, kích thư c c t L x ID : 250 x 4,6 mm, kích thư c h t 5µm.
- 4.1.3 Máy nghi n ng th t c 10 000 vòng/phút. 4.1.4 Cân phân tích có chính xác 0,0001 g. 4.1.5 Máy ly tâm t c 5 000 vòng/phút (s d ng ng ly tâm dung tích 50 ml). 4.1.6 pH k 4.1.7 ng ly tâm th y tinh dung tích 50 ml. 4.1.8 Bình nh m c dung tích 10 ml, 100 ml và 1 000 ml. 4.1.9 C t Sep-Pak C18, dung tích 10 ml. 4.1.10 Ph u Buch-ner ư ng kính 5,5 cm. 4.1.11 Pipet t ng i u ch nh ư c t 2 n10 ml. 4.1.12 B siêu âm. 4.2 Hoá ch t 4.2.1 Ðinatri photphat khan (Na2HPO4) tinh khi t, lo i dùng cho phân tích. 4.2.2 Nư c c t lo i dùng cho HPLC. 4.2.3 Axit xitric ng m 1 phân t nư c, tinh khi t, lo i dùng cho phân tích. 4.2.4 Ethylen initrilotetraaxêtat inatri (sau ây vi t t t là EDTA) ng m 2 phân t nư c tinh khi t, lo i dùng cho phân tích. 4.2.5 Axít oxalic ng m 2 phân t nư c, tinh khi t, lo i dùng cho phân tích. 4.2.6 Metanol lo i dùng cho HPLC. 4.2.7 Axetonitril lo i dùng cho HPLC. 4.3 Dung d ch chuN n và dung d ch th 4.3.1 Dung d ch m McIlvaine (pH 4,0 +/- 0,05) g m: a. Dung d ch A: hoà tan 28,4 g Na2HPO4 khan (4.2.1) b ng nư c c t (4.2.2) trong bình nh m c dung tích 1 000 ml (4.1.8). Ð nh m c t i v ch. b. Dung d ch B: hoà tan 21,0 g axít xitric (4.2.3) b ng nư c c t (4.2.2) trong bình nh m c (4.1.8). Ð nh m c t i v ch. Cho t t 625 ml dung d ch A vào 1 000 ml dung d ch B. Ch nh pH t i 4,0 (+/- 0,05) b ng cách cho t ng gi t dung d ch HCl n ng 0,1M ho c dung d ch NaOH n ng 0,1M (s d ng pH k xác nh pH).
- Chú thích: Dung d ch b n trong vòng 1 tu n nhi t trong phòng. 4.3.2 Dung d ch m McIlvaine - EDTA Hoà tan 60,5 g EDTA (4.2.4) vào 1 625 ml dung d ch m McIlvaine (4.3.1). Chú thích: Dung d ch b n trong vòng 1 tu n nhi t trong phòng. 4.3.3 Dung d ch axit oxalic-metanol: hoà tan 1,26 g axít oxalic (4.2.5) b ng metanol (4.2.6) trong bình nh m c 1 000 ml (4.1.8). Ð nh m c t i v ch. Chú thích: Dung d ch chi t không b n, ch pha trư c khi s d ng. 4.3.4 Pha ng cho HPLC: hoà tan 1,26 g axít oxalíc (4.2.5) b ng nư c c t (4.2.2) trong bình nh m c 1 000 ml (4.1.8). Ð nh m c t i v ch. Thêm vào dung d ch 500 ml axetonitril (4.2.7) và 166 ml metanol (4.2.6). L c và u i khí. Chú thích: Dung d ch pha ng không b n, ch pha trư c khi s d ng. 4.3.5 Dung d ch chuN n g c 1 000 µg/ml: cân 108 mg (+/- 0,1) m i lo i kháng sinh chuN n (TC, OTC và CTC) lo i có gi y ch ng nh n hàm lư ng (lư ng cân ư c i u ch nh theo hàm lư ng kháng sinh ghi trong gi y ch ng nh n) vào 3 bình nh m c dung tích 100 ml (4.1.8) riêng bi t. Hòa tan và nh m c t i v ch 100 ml b ng metanol (4.2.6). Chú thích: B o qu n dung d ch t i nhi t -20 0C. Dung d ch b n trong vòng 3 tháng. 4.3.6 Dung d ch chuN n h n h p 100 µg/ml: hút chính xác 10 ml các dung d ch chuN n g c (4.3.5) vào bình nh m c 100 ml (4.1.8). Ð nh m c t i v ch b ng metanol (4.2.6). 4.3.7 Dung d ch chuN n h n h p 25 µg/ml: hút chính xác 2,5 ml dung d ch chuN n h n h p 100 µg/ml (4.3.6) vào bình nh m c 10 ml (4.1.8). Ð nh m c t i v ch b ng metanol (4.2.6). Chú thích: B o qu n dung d ch trong t l nh nhi t t 0 n 5oC. Dung d ch b n trong vòng 1 tu n. 4.3.8 Dung d ch chuN n h n h p 0,05; 0,10; 0,25; 0,50 và 1,00 µg/ml: hút chính xác 20, 40, 100, 200, 400 µl dung d ch chuN n h n h p 25 µg/ml (4.3.7) vào các bình nh m c 10 ml (4.1.8). Thêm 6 ml dung d ch axít oxalic-metanol (4.3.3) vào m i bình. Ð nh m c t i v ch b ng nư c c t (4.2.2). Chú thích: B o qu n dung d ch trong t l nh nhi t t 0 n 5oC. Dung d ch b n trong vòng 1 tu n. 5 Phương pháp ti n hành 5.1 ChuN n b m u th
- 5.1.1 Cân 5,00 g (+/- 0,05) m u (m) ã ư c băm nhuy n cho vào ng ly tâm th y tinh (4.1.7) th 1. Thêm 20 ml dung d ch m McIlvaine - EDTA (4.3.2) vào ng r i nghi n trong 30 giây b ng máy nghi n ng th (4.1.3). Sau ó, ly tâm ng b ng máy ly tâm (4.1.5) trong 10 phút t c 3 000 vòng/phút. 5.1.2 G n d ch trong c a ng th 1 vào ng ly tâm th y tinh (4.1.7) th 2. Cho thêm 20 ml dung d ch m McIlvaine - EDTA vào ng ly tâm thu tinh th 1. Tr n u, ly tâm ng trong 10 phút t c 3 000 vòng/phút r i l i g n d ch trong vào ng ly tâm th y tinh th 2. 5.1.3 Cho thêm 10 ml dung d ch m McIlvaine - EDTA vào ng ly tâm thu tinh th 1. Tr n u r i ly tâm ng trong 10 phút t c 3 000 vòng/phút. Ti p t c g n d ch trong vào ng ly tâm th y tinh th 2. 5.1.4 Ly tâm ng th y tinh th 2 trong 20 phút t c 3 000 vòng/phút. Sau ó, l c d ch trong qua gi y l c trên ph u Buch-ner. R a ng ly tâm 2 l n, m i l n r a s d ng 2 ml dung d ch m McIlvaine - EDTA. 5.2 ChuN n b m u tr ng M u tr ng ư c nh nghĩa là m u th y s n ã ư c xác nh không có các kháng sinh thu c nhóm TC. Ti n hành chuN n b m u tr ng gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.1. 5.3 ChuN n b m u xác nh thu h i Thêm 100 µl dung d ch chuN n h n h p 25 µg/ml (4.3.7) vào 5,00 g m u tr ng. Ð ng nh t m u b ng máy nghi n ng th (4.1.3). Ti n hành chuN n b m u gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.1. 5.4 Làm s ch d ch chi t 5.4.1 ChuN n b c t N i c t Sep - Pak C18 vào u ra c a m t xi lanh th y tinh dung tích 100 ml. Thêm l n lư t 20 ml metanol (4.2.6), 20 ml nư c c t (4.2.2) vào xi lanh th y tinh. Lo i b dung d ch ch y qua c t. 5.4.2 Làm s ch d ch chi t 5.4.2.1 Cho l n lư t các d ch chi t trong ng ly tâm thu ư c t i các Ði u 5.1.4, 5.2 và 5.3 vào các c t Sep - Pak ã ư c chuN n b Ði u 5.4.1. Tráng r a bình ch a b ng 2,0 ml dung d ch m McIlvaine - EDTA (4.3.2). Trong giai o n này, các kháng sinh nhóm tetracyclin s ư c h p ph lên b m t các h t r n ch a trong c t. Chú thích: Không ư c cho c t Sep - Pak khô gi a hai giai o n chuN n b c t và làm s ch d ch chi t. Ði u ch nh cho d ch ch y ra kh i c t t ng gi t. 5.4.2.2 Cho 20 ml nư c c t (4.2.2) vào xi lanh th y tinh và cho ch y qua c t. Lo i b d ch ch y ra kh i c t. Làm khô c t b ng dòng không khí s ch trong 2 phút.
- 5.4.2.3 Gi i h p các kháng sinh nhóm tetracyclin b ng cách cho 6,0 ml dung d ch axít oxalic-metanol (4.3.3) ch y qua c t v i t c 1,5 ml/phút. Thu d ch ra kh i c t vào bình nh m c 10 ml. Ð nh m c t i v ch (th tích V) b ng nư c c t (4.2.2). Ti n hành phân tích d ch thu ư c trên HPLC theo qui nh t i Ði u 5.5. 5.5 Ti n hành phân tích trên HPLC 5.5.1 Ði u ki n phân tích a. C t s c ký : C t pha o C8, L x ID : 250 x 4,6 mm, kích thư c h t 5 µm. b. Nhi t c t: Nhi t trong phòng. c. Pha ng: H n h p dung d ch axit oxalic-metanol-axetonitrile (4.3.4). d. T c dòng: 1,2 ml/phút. . Bư c sóng cài t cho u dò UV là 350 nm. e. Th tích tiêm: 60 µl. 5.5.2 n nh c t s c ký trong 30 phút b ng pha ng (4.3.4). 5.5.3 Tiêm các dung d ch chuN n (4.3.8) vào máy HPLC theo th t n ng t th p n cao. M i dung d ch tiêm 2 l n, tính chi u cao pic trung bình. D ng ư ng chuN n bi u th m i quan h gi a các chi u cao pic thu ư c và n ng (µg/ml) t ng lo i kháng sinh theo quan h tuy n tính b c 1 (phương trình y = ax + b). 5.5.4 Tiêm dung d ch m u th , dung d ch m u tr ng, dung d ch xác nh thu h i theo qui nh t i Ði u 5.4.2.3 vào h th ng HPLC. M i dung d ch m u tiêm 2 l n. Tính giá tr trung bình. Chú thích: Sau khi phân tích xong, làm s ch h th ng HPLC (bao g m c c t s c ký) b ng h n h p: nư c c t (4.2.2) - metanol (4.2.6) - axetonitrile (4.2.7) theo t l v th tích là 7-1-2 trong 30 phút. 5.6 Yêu c u v tin c y c a phép phân tích 5.6.1 Ð l p l i c a 2 l n tiêm Ð l ch chuN n (CVS) tính theo chi u cao pic s c ký c a 2 l n tiêm cùng m t dung d ch chuN n ph i nh hơn 0,5 %. 5.6.2 Ð thu h i (R) Ð thu h i ư c xác nh cho m i l n ch y m u ph i l n hơn 80 %. 5.6.3 Ðư ng chuN n i v i m i kháng sinh ph i có tuy n tính t t, h s tương quan quy h i tuy n tính (R2) ph i l n hơn ho c b ng 0,995.
- 5.6.4 Ð i v i các m u ch a ít hơn 0,5 µg/g kháng sinh nhóm TC, ph i ki m tra xác nh n k t qu b ng cách tiêm l i d ch chi t m u và dung d ch chuN n trên c t C18 (4.1.2.b) ch y cùng ch như c t C8 (4.1.2.a) và so sánh th i gian lưu c a píc m u và píc chuN n. 6 Tính k t qu Hàm lư ng các kháng sinh có trong m u ư c tính trên cơ s ư ng chuN n thu ư c (5.5.3). V i ư ng chuN n d ng y = ax + b, hàm lư ng các kháng sinh có trong m u ư c tính theo công th c sau: (Y - b) C (µg/kg) = x F x 1 000 a Trong ó: - C là n ng các kháng sinh có trong m u, tính theo µg/kg. - Y là hi u s gi a chi u cao pic c a d ch chi t và chi u cao pic có trong m u tr ng tiêm vào HPLC, tính theo ơn v dài. - a, b là các thông s c a ư ng chuN n y = ax + b, ư c xác nh theo Ði u 5.5.3. - F là h s pha loãng m u và có giá tr b ng t s gi a th tích d ch chi t thu ư c sau khi làm s ch V ( 5.4.2.3) và kh i lư ng m u m ( 5.1.1) s d ng. 28 TCN 178 : 2002 HÀM LƯ NG AXIT OXOLINIC TRONG S N PH M THU S N - PHƯƠNG PHÁP NNH LƯ NG B NG S C KÝ L NG HI U NĂNG CAO Oxolinic acid in fishery products - Method for quantitative analysis by High Performance Liquid Chromatography 1 Ph m vi áp d ng Tiêu chuN n này qui nh phương pháp xác nh hàm lư ng axit oxolinic trong th y s n và s n phN m th y s n b ng s c ký l ng hi u năng cao (sau ây g i t t là HPLC). Gi i h n phát hi n c a phương pháp là 0,5 mg/kg. 2 Phương pháp tham chi u Tiêu chuN n này ư c xây d ng d a theo phương pháp do Trung tâm Phát tri n Thu s n Ðông Nam á (SEAFDEC) biên so n. 3 Nguyên t c
- Axit oxolinic - kháng sinh thu c nhóm Quinolon - trong m u th y s n ư c chi t tách b ng axetonitril. D ch chi t ư c làm s ch b ng phương pháp chi t l ng-l ng v i n- hexan bão hoà axetonitril. Hàm lư ng axit oxolinic trong d ch chi t ư c xác nh trên h th ng HPLC v i u dò huỳnh quang theo phương pháp ngo i chuN n. 4 Thi t b , d ng c , hóa ch t, dung d ch chu n và dung d ch th 4.1 Thi t b , d ng c 4.1.1 H th ng HPLC v i u dò huỳnh quang. 4.1.2 C t s c ký TSK - GEL ODS - 80 TM, L x ID : 150 x 4,6mm, kích thư c h t 5µm. 4.1.3 Màng l c mao qu n kích thư c 0,4 µm. 4.1.4 Máy nghi n ng th t c 10 000 vòng/ phút. 4.1.5 Cân phân tích có chính xác 0,0001g. 4.1.6 Máy ly tâm t c 5 000 vòng/phút. 4.1.7 B siêu âm. 4.1.8 H th ng cô quay chân không. 4.1.9 ng ly tâm thu tinh, dung tích 150 ml, 15ml. 4.1.10 Bình chi t dung tích 125 ml. 4.1.11 Bình c u th y tinh dung tích 100 ml. 4.1.12 Bình nh m c dung tích 10 ml và 100 ml. 4.2 Hóa ch t 4.2.1 Nư c c t lo i dùng cho HPLC. 4.2.2 Axetonitril lo i dùng cho HPLC. 4.2.3 Metanol lo i dùng cho HPLC. 4.2.4 1 - propanol tinh khi t, lo i dùng cho phân tích. 4.2.5 n - hexan tinh khi t, lo i dùng cho phân tích. 4.2.6 Sulfat natri khan. 4.2.7 Clorua natri tinh khi t, lo i dùng cho phân tích.
- 4.2.8. Axit xitric lo i dùng cho HPLC. 4.2.9. Axit oxolinic lo i dùng cho HPLC. 4.3 Dung d ch chuN n và dung d ch th 4.3.1 Axit xitric 0,1 M: hòa tan 21,01 g axit xitric (4.2.8) trong 1 lít nư c c t (4.2.1). 4.3.2 Dung môi pha ng: pha ng cho ti n trình ch y HPLC là h n h p c a axetonitril, metanol và dung d ch axit xitric 0,1 M theo t l v th tích là 2 : 2 : 3. 4.3.3 Dung d ch chuN n g c 100 µg/ml: cân chính xác 10,0 mg axit oxolinic trên cân phân tích (4.1.5), hòa tan và nh m c t i 100 ml b ng h n h p axetonitril và nư c c t (4.2.1) theo t l v th tích là 1 :1. 4.3.4 Dung d ch chuN n trung gian 10 µg/ml: hút chính xác 10,0 ml dung d ch chuN n g c 100 µg/ml (4.3.3) vào bình nh m c 100 ml. Ð nh m c t i v ch b ng h n h p axetonitril và nư c c t (4.2.1) theo t l v th tích là 1 :1. 4.3.5 Dung d ch chuN n làm vi c: hút chính xác l n lư t 0,2 ml, 0,5 ml, 1,0 ml, 2,0 ml, 5,0 ml và 10,0 ml dung d ch chuN n trung gian (4.3.4) vào bình nh m c 10 ml. Ð nh m c t i v ch b ng h n h p axetonitril và nư c c t (4.2.1) theo t l v th tích là 1 :1 ư c các chuN n có hàm lư ng axit oxolinic l n lư t là: 0,2 µg/ml, 0,5 µg/ml, 1,0 µg/ml, 2,0 µg/ml, 5,0 µg/ml và 10,0 µg/ml. 5 Phương pháp ti n hành 5.1 ChuN n b m u th 5.1.1 Cân chính xác 5,0 g m u (m) ã ư c băm nhuy n cho vào ng ly tâm th y tinh dung tích 150 ml (4.1.9). Thêm 25,0 ml axetonitril (4.2.2) và 10,0 g sulfat natri khan (4.2.6) r i nghi n trong 30 giây b ng máy nghi n ng th (4.1.4). Ly tâm trong vòng 5 phút t c 2 500 vòng/phút. 5.1.2 L c l y ph n d ch cho vào bình chi t 125 ml (4.1.10) ch a s n 25,0 ml n-hexan bão hòa axetonitril. 5.1.3 Thêm 25,0 ml axetonitril vào ph n bã trong ng ly tâm r i nghi n trong 30 giây b ng máy nghi n ng th (4.1.4). Ly tâm trong vòng 5 phút t c 2 500 vòng/phút và l c l y ph n d ch cho vào bình chi t trên (5.1.2). 5.2 ChuN n b m u tr ng M u tr ng ư c nh nghĩa là m u th y s n ã ư c xác nh không có axit oxolinic. Ti n hành chuN n b m u tr ng gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.1. 5.3 ChuN n b m u xác nh thu h i
- Thêm 2ml dung d ch chuN n có hàm lư ng 5 µg/ml vào 10,0 g m u tr ng. Ð ng nh t m u b ng máy nghi n ng th (4.1.4). Ti n hành chuN n b m u gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.1. 5.4 Làm s ch d ch chi t 5.4.1 L c m nh bình chi t thu ư c các Ði u 5.1, 5.2 và 5.3 trong vòng 10 phút r i yên cho tách l p. M khoá chuy n l p axetonitril dư i vào bình c u th y tinh 100 ml (4.1.11). Thêm 5,0 ml 1-propanol (4.2.4) vào trong bình r i cô c n trên máy cô quay chân không (4.1.8) nhi t 40oC. 5.4.2 Thêm 2,0 ml (V) h n h p axetonitril và nư c c t (4.2.1) theo t l 3:7 v th tích. Ð bình vào trong b i u nhi t c a b siêu âm (4.1.7) cho n khi hoà tan c n hoàn toàn. 5.4.3 Chuy n dung d ch vào ng ly tâm dung tích 15 ml (4.1.9). Thêm 100,0 mg clorua natri tinh khi t và 1,0 ml dung d ch n-hexan bão hòa axetonitril. Tr n u trong b siêu âm (4.1.7) và ly tâm trong vòng 5 phút t c 2 500 vòng/phút. 5.4.4 Ð yên cho tách l p, sau ó dùng pipet cN n thN n hút l p axetonitril dư i cho vào xilanh nh a ã g n s n màng l c mao qu n (4.1.3). Ti n hành phân tích d ch l c thu ư c trên HPLC theo qui nh t i Ði u 5.5. 5.5 Ti n hành phân tích trên HPLC 5.5.1 Ði u ki n phân tích a. C t s c ký : TSK - GEL ODS 80 TM, L x ID:150 x 4,6 mm, kích thư c h t 5 µm. b. Nhi t c t : 35oC. c. Pha ng : H n h p axetonitril, metanol và axit xitric 0,1 M (4.3.2). d. T c dòng : 0,5 ml/phút. . Bư c sóng cài t cho u dò huỳnh quang: (kích ho t) E x 337nm, (phát x ) Em 365nm. e. Th tích tiêm : 20 µl. 5.5.2 Tiêm các dung d ch chuN n (4.3.5) vào máy HPLC theo th t n ng t th p n cao. M i dung d ch tiêm 2 l n, tính di n tích pic trung bình. D ng ư ng chuN n bi u th m i quan h gi a các di n tích pic thu ư c và n ng axit oxolinic theo quan h tuy n tính b c 1 (phương trình y = ax + b). 5.5.3 Tiêm dung d ch m u th , dung d ch m u tr ng, dung d ch xác nh thu h i theo qui nh t i Ði u 5.4.4 vào h th ng HPLC. M i dung d ch m u tiêm 2 l n. Tính giá tr trung bình. 5.6 Yêu c u v tin c y c a phép phân tích
- 5.6.1 Ð l p l i c a 2 l n tiêm Ð l ch chuN n (CVS) tính theo di n tích pic s c ký c a 2 l n tiêm cùng m t dung d ch chuN n ph i nh hơn 0,5 %. 5.6.2 Ð thu h i (R) Ð thu h i ư c xác nh b ng cách s d ng 5 m u ã cho vào m t lư ng dung d ch axit oxolinic chuN n ã bi t hàm lư ng chính xác. Ð thu h i tính ư c ph i trong kho ng t 85 % n 115 %, thu h i trung bình ph i l n hơn 90 %. 5.6.3 Ðư ng chuN n ph i có tuy n tính t t, h s tương quan quy h i tuy n tính (R2) ph i l n hơn ho c b ng 0,99. 6 Tính k t qu Hàm lư ng axit oxolinic có trong m u ư c tính trên cơ s ư ng chuN n thu ư c (5.5.2). V i ư ng chuN n d ng y = ax + b, hàm lư ng axit oxolinic có trong m u ư c tính theo công th c sau: (Y - b) C (µg/kg) = x F x 1 000 a Trong ó: - C là n ng axit oxolinic có trong m u, tính theo µgkg. - Y là hi u s gi a di n tích pic c a d ch chi t và di n tích pic có trong m u tr ng tiêm vào HPLC, tính theo ơn v di n tích - a, b là các thông s c a ư ng chuN n y = ax + b, ư c xác nh theo Ði u 5.5.2. - F là h s pha loãng m u và có giá tr b ng t s gi a th tích d ch chi t thu ư c sau khi làm s ch V (5.4.2) và kh i lư ng m u m (5.1.1) s d ng. 28 TCN 179 : 2002 HÀM LƯ NG AFLATOXIN - PHƯƠNG PHÁP NNH LƯ NG B NG S C KÝ L NG HI U NĂNG CAO Aflatoxin in fishery products - Method for quantitative analysis by High Performance Liquid Chromatography 1 Ph m vi áp d ng Tiêu chuN n này qui nh phương pháp xác nh hàm lư ng c t aflatoxin (B1, B2, G1, G2) trong th y s n và s n phN m th y s n b ng s c ký l ng hi u năng cao (sau ây g i t t là HPLC). Gi i h n phát hi n c a phương pháp là 1,5 µg/kg.
- 2 Phương pháp tham chi u Tiêu chuN n này ư c xây d ng d a theo phương pháp chuN n s 49.2.05 c a Hi p h i các nhà hoá h c phân tích (AOAC) công b năm 1997. 3 Nguyên t c Aflatoxin có trong m u th y s n bao g m các nhóm B1, B2, G1 và G2 ư c chi t tách ra b ng clorofom. D ch chi t ơc làm s ch b ng phương pháp chi t pha r n (SPE) trên silicagel. Hàm lư ng aflatoxin có trong d ch chi t ư c xác nh trên h th ng HPLC v i u dò huỳnh quang theo phương pháp ngo i chuN n. 4 Thi t b , d ng c , hóa ch t, ch t chu n và dung d ch th 4.1 Thi t b , d ng c 4.1.1 H th ng HPLC v i u dò huỳnh quang. 4.1.2 C t s c ký pha o LC18 kích thư c L x ID là 25 cm x 4,6 mm, ư ng kính h t t 5 n 10 [NAD1] µm. 4.1.3 Màng l c mao qu n kích thư c 0,4 µm. 4.1.4 Máy nghi n ng th t c 10 000 vòng/ phút. 4.1.5 Cân phân tích có chính xác 0,0001 g. 4.1.6 Máy ly tâm t c 5 000 vòng/phút. 4.1.7 B siêu âm. 4.1.8 H th ng cô quay chân không. 4.1.9 C t th y tinh có khóa teflon, kích thư c L x ID là 500 x 20 mm và 500 x 8 mm. 4.1.10 ng ly tâm th y tinh dung tích 250 ml. 4.1.11 Bình c u th y tinh dung tích 100 ml và 250 ml. 4.1.12 Bình nh m c dung tích 5 ml và 10 ml. 4.2 Hóa ch t 4.2.1 Nư c c t lo i dùng cho HPLC. 4.2.2 Metanol lo i dùng cho HPLC. 4.2.3 Clorofom lo i dùng cho HPLC. 4.2.4 Axetonitril lo i dùng cho HPLC.
- 4.2.5 n-hexan tinh khi t lo i dùng cho phân tích. 4.2.6 Ete etylic tinh khi t. 4.2.7 Sulfat natri khan. 4.2.8 Silicagel c h t t 60 n 200 mesh. 4.2.9 Silicagel ã ư c ho t hóa: cân 50,0 g silicagel tinh khi t (4.2.8) vào t s y trong 2 gi nhi t 110oC. Sau ó ngu i v nhi t c a phòng trong bình hút N m và ngâm trong clorofom 15 phút trư c khi nh i c t. 4.3 Dung d ch chuN n và dung d ch th 4.3.1 Dung d ch chuN n g c h n h p g m: B1 (n ng 100,0 µg/l), B2 (n ng 20,0 µg/l), G1 (n ng 100 µg/l) và G2 (n ng 20 µg/l). 4.3.2 ChuN n b dung d ch chuN n g c h n h p aflatoxin có n ng (như Ði u 4.3.1) trong metanol t các ng chuN n. Tùy theo n ng các aflatoxin có trong ng chuN n, dùng bình nh m c và lư ng metanol thích h p. 4.3.3 Dung d ch chuN n trung gian có n ng là B1 (10,0 µg/l), B2 (2,0 µg/l), G1 (10,0 µg/l) và G2 (2,0 µg/l): hút chính xác 1,0 ml dung d ch chuN n g c h n h p (4.3.1) vào bình nh m c 10 ml (4.1.12) r i nh m c t i v ch b ng metanol (4.2.2). 4.3.4 Dung d ch chuN n: hút chính xác l n lư t 0,0 ml, 1,0 ml, 2,0 ml, 4,0 ml, 8,0 ml và 10,0 ml dung d ch chuN n trung gian (4.3.3) vào các bình nh m c 10 ml (4.1.12) r i nh m c t i v ch b ng metanol. Các dung d ch chuN n thu ư c có n ng aflatoxin l n lư t như sau: a. ChuN n 1 : B1 (0,0 µg/l), B2 (0,0 µg/l), G1 (0,0 µg/l), G2 (0,0 µg/l). b. ChuN n 2 : B1 (1,0 µg/l), B2 (0,2 µg/l), G1 (1,0 µg/l), G2 (0,2 µg/l). c. ChuN n 3 : B1 (2,0 µg/l), B2 (0,4 µg/l), G1 (2,0 µg/l), G2 (0,4 µg/l). d. ChuN n 4 : B1 (4,0 µg/l), B2 (0,8 µg/l), G1 (4,0 µg/l), G2 (0,8 µg/l). . ChuN n 5 : B1 (8,0 µg/l), B2 (1,6 µg/l), G1 (8,0 µg/l), G2 (1,6 µg/l). e. ChuN n 6 : B1 (10,0 µg/l), B2 (2,0 µg/l), G1 (10,0 µg/l), G2 (2,0 µg/l). 4.3.5 Dung d ch pha ng: pha h n h p các dung môi axetonitril, metanol và nư c c t lo i dùng cho HPLC theo t l v th tích là 2 : 2 : 6. 5 Phương pháp ti n hành 5.1 ChuN n b m u th
- 5.1.1 Dùng cân phân tích (4.1.5) cân chính xác 50,0 g m u (m) ã ư c băm nhuy n cho vào ng ly tâm thu tinh dung tích 250 ml (4.1.10). 5.1.2 Thêm 100,0 ml clorofom (4.2.3) vào ng r i tr n u trong kho ng 2 phút b ng máy nghi n ng th (4.1.4). Sau ó, ly tâm ng b ng máy ly tâm (4.1.6) trong kho ng 5 phút t c 5 000 vòng/phút. Ti n hành l c d ch chi t và r a ph n bã b ng clorofom r i cho t t c d ch thu ư c vào bình c u thu tinh dung tích 250 ml (4.1.11). 5.2 ChuN n b m u tr ng M u tr ng ư c nh nghĩa là m u th y s n ã ư c xác nh không có aflatoxin. Ti n hành chuN n b m u tr ng gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.1. 5.3 ChuN n b m u xác nh thu h i Thêm 2,0 ml dung d ch chuN n 3 (4.3.4.c) vào 10,0 g m u tr ng. Ð ng nh t m u b ng máy nghi n ng th (4.1.4). Ti n hành chuN n b m u gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.1. Ph i chuN n b m u xác nh thu h i ng th i v i chuN n b m u th và m u tr ng. 5.4 Làm s ch d ch chi t 5.4.1 ChuN n b c t Ð t 1 l p bông th y tinh vào áy c t th y tinh có khóa teflon (4.1.9). Ðóng khóa và cho clorofom t i kho ng 2/3 c t r i thêm l n lư t 5,0 g sulfat natri khan (4.2.7), 20,0g silicagel ã ho t hóa (4.2.8), 15 g sulfat natri khan (4.2.7). Chú thích: tránh khô c t luôn gi m c clorofom cao hơn l p sulfat natri khan trên cùng kho ng 1,5 cm. 5.4.2 Làm s ch d ch chi t 5.4.2.1 Cô d ch chi t thu ư c (5.1.2) trên h th ng cô quay chân không (4.1.8) còn kho ng 5,0 ml nhi t 40 oC. Dùng pipet chuy n dung d ch t bình c u (5.1.2) vào c t làm s ch ã chuN n b (5.4.1) và tráng r a bình c u b ng clorofom. Ði u ch nh khoá t c ch y c a dung d ch ra kh i c t kho ng t 1,0 n 1,5 ml/phút. Trong giai o n này, aflatoxin s h p ph lên các h t silicagel. 5.4.2.2 Thêm vào c t l n lư t 50,0 ml n-hexan (4.2.5), 50,0 ml ete etylic (4.2.6). Ði u ch nh t c dung môi ch y qua c t 1,0 ml/phút. Sau ó lo i b d ch ch y ra kh i c t. 5.4.2.3 Gi i h p các aflatoxin kh i c t làm s ch b ng 50,0 ml h n h p clorofom và metanol theo t l v th tích là 97: 3 v i t c d 1,0 ml/phút. H ng dung d ch ch y ra kh i c t vào bình c u dung tích 100 ml (4.1.11). Cô d ch thu ư c trên h th ng cô quay chân không (4.1.8) nhi t 40o C cho n khô hoàn toàn. Hoà tan c n b ng
- 5,0 ml (V) dung d ch pha ng (4.3.5) trong bình nh m c 5 ml (4.1.12). Ti n hành phân tích hàm lư ng các aflatoxin trên HPLC theo qui nh t i Ði u 5.5. 5.4.2.4 Ti n hành làm s ch m u tr ng (5.2) và m u xác nh thu h i (5.3) gi ng như v i m u th (5.1) theo qui nh t i Ði u 5.4.2.1, Ði u 5.4.2.2 và Ði u 5.4.2.3. 5.5 Ti n hành phân tích trên HPLC 5.5.1 Ði u ki n phân tích a. C t s c ký : RP-LC 18, kích thư c L x ID là 25 cm x 4,6 mm, ư ng kính h t 5 -10 [NAD2] µm. b. Nhi t c t : 35oC. c. Pha ng : H n h p g m: axetonitril, metanol và nư c c t (4.3.5. d. T c dòng: 1,0 ml/phút. . Bư c sóng cài t cho u dò huỳnh quang là: (kích ho t) E x 365 nm, (phát x ) Em 455 nm. e. Th tích tiêm : 20 µl. 5.5.2 Tiêm các dung d ch chuN n (4.3.4) vào máy HPLC theo th t n ng t th p n cao. M i dung d ch tiêm 2 l n, tính di n tích pic trung bình. D ng ư ng chuN n bi u th m i quan h gi a các di n tích pic thu ư c và n ng t ng lo i aflatoxin theo quan h tuy n tính b c 1 (phương trình y = ax + b). 5.5.3 Tiêm dung d ch m u th , dung d ch m u tr ng và dung d ch xác nh thu h i vào h th ng HPLC. M i dung d ch m u tiêm 2 l n. Tính giá tr trung bình. 5.6 Yêu c u v tin c y c a phép phân tích 5.6.1 Ð l p l i c a 2 l n tiêm Ð l ch chuN n (CVs) tính theo di n tích pic s c ký c a 2 l n tiêm cùng m t dung d ch chuN n ph i nh hơn 0,5 %. 5.6.2 Ð thu h i (R) Ð thu h i ư c xác nh b ng cách s d ng 10 m u tr ng ã cho vào m t lư ng dung d ch aflatoxin chuN n ã bi t hàm lư ng chính xác (5.3). Ð thu h i tính ư c ph i n m trong kho ng t 85 % n 115 %, thu h i trung bình ph i l n hơn 90 %. 5.6.3 Ðư ng chuN n ph i có tuy n tính t t, h s tương quan quy h i tuy n tính (R2) ph i l n hơn ho c b ng 0,99. 6 Tính k t qu
- Hàm lư ng các aflatoxin có trong m u ư c tính trên cơ s ư ng chuN n thu ư c (5.5.2). V i ư ng chuN n d ng y = ax +b, hàm lư ng các aflatoxin có trong m u ư c tính theo công th c sau: (Y - b) C (µg/kg) = xF a Trong ó: - C là n ng aflatoxin có trong m u, tính theo µg/kg - Y là hi u s gi a di n tích pic c a d ch chi t và di n tích pic có trong m u tr ng tiêm vào HPLC, tính theo ơn v di n tích - a, b là các thông s c a ư ng chuN n y = ax + b, ư c xác nh theo Ði u 5.5.2. - F là h s pha loãng m u và có giá tr b ng t s gi a th tích d ch chi t thu ư c sau khi làm s ch V (5.4.2) và kh i lư ng m u m (5.1.1) s d ng. 28 TCN 180 : 2002 HÀM LƯ NG THU C TR SÂU G C CLO H U CƠ VÀ POLY CLORUA BIPHENYL TRONG TH Y S N VÀ S N PH M TH Y S N - PHƯƠNG PHÁP NNH LƯ NG B NG S C KÝ KHÍ Organochlorine pesticides and PCB-congeners in fish and fishery products - Method for quantitative analysis by Gas Chromatography 1 Ph m vi áp d ng 1.1 Tiêu chuN n này qui nh phương pháp xác nh hàm lư ng các thu c tr sâu g c Clo h u cơ và Poly Clorua Biphenyl (sau ây g i t t là PCBs) trong thu s n và s n phN m thu s n b ng h th ng s c ký khí (sau ây g i t t là GC). 1.2 Gi i h n phát hi n c a phương pháp i v i: α-BHC là 1,0 µg/kg; β-BHC là 4,5 µg/kg; γ-BHC là 0,7 µg/kg; heptaclo là 1,0 µg/kg; al rin là 1,5 µg/kg; iel rin là 2,5 µg/kg; en rin là 5,0 µg/kg; DDT là 1,5 µg/kg và clo an là 1,0µg/kg. 2 Phương pháp tham chi u Tiêu chuN n này ư c xây d ng d a theo phương pháp 'Rapid determination of chlorinated pesticides, polychlorinated biphenyls', Mitt.Lebendsmittelunters. Hyg. 65:131-150 (1974) và phương pháp s S9 nêu trong S tay hư ng d n phân tích dư lư ng thu c tr sâu c a C ng hoà liên bang Ð c (năm 1987). 3 Nguyên t c
- 3.1 Thu c tr sâu nhóm clo h u cơ bao g m các h p ch t chính hay ng phân c a chúng như sau: al rin; α-clo an; γ-clo an; oxi-clo an; p,p' DDD; p,p' DDE; o,p' DDT; p,p' DDT; iel rin; α-endosulfan; en rin; heptaclo, heptaclo epoxit; hexaclobenzen (HCB); α-hexacloxyclohexan (α-HCH); β-hexacloroxyclohexan (β- HCH); δ-hexacloxyclohexan (δ-HCH); iso rin, trans-nonaclo; γ- hexachlorocyclohexan (γ-HCH). 3.2 Các h p ch t nhóm PCBs bao g m: 4-PCB (CB3); 2,4,4'-PCB (CB28); 2,2',4,4'- PCB (CB47); 2,2',5,5'-PCB (CB52); 2,2',5,6'-PCB (CB53); 2,2',4,5,5'-PCB (CB101); 2,3,4,4',5'-PCB (CB114); 2,3',4,4',5'-PCB (CB118); 2,3,3',4,5'-PCB (CB122); 2,2',3,3',4,4'-PCB (CB128); 2,2',3,4,4',5'-PCB (CB138); 2,3,3,4',5',6'-PCB (CB149); 2,2',4,4',5,5'-PCB (CB153); 2,2',4,4',6,6'-PCB (CB155); 2,3,3',4,4',5'-PCB (CB156); 2,3,3',4,4',5'-PCB (CB157); 2,3',4,4',5'-PCB (CB167); 2,2',3,3',4,4',5'-PCB (CB170); 2,2',3,4,4',5,5'-PCB (CB180); 2,2',3,3',4,5,5',6-PCB (CB198). 3.3 Trong m u th y s n các h p ch t trên ư c chi t tách ra b ng dung môi pentan. D ch chi t ư c làm s ch b ng phương pháp chi t pha r n (SPE) trên florisil sau ó ư c tách làm 2 phân o n trên c t silicagel. Phân o n A ch a các PCB (tr CB3), HCB, al rin, iso rine, heptaclo và p,p' DDE. Phân o n B ch a CB3, p,p' DDE và các thu c tr sâu g c clo còn l i. Hàm lư ng các thu c tr sâu g c clo h u cơ và PCBs trong các phân o n chi t ư c xác nh trên máy s c ký khí v i u dò b t gi i n t (sau ây g i t t là ECD). 4 Thi t b , d ng c , hoá ch t, dung d ch chu n và dung d ch th 4.1 Thi t b và d ng c 4.1.1 C t s c ký th y tinh (có van khoá), kích thư c L x ID là 500 x 20 mm và 500 x 8mm. 4.1.2 H th ng cô quay chân không. 4.1.3 H th ng chi t m u soxhlet. 4.1.4 Máy nghi n ng th t c 10 000 vòng/phút. 4.1.5 Máy l c 4.1.6 T s y 4.1.7 Lò nung 4.1.8 Cân phân tích có chính xác 0,0001 g. 4.1.9 C t mao qu n (cho máy GC): lo i SPBTM - SUPELCO, kích thư c L x ID = 30 m x 0,32 mm ho c tương ương. 4.1.10 Máy s c ký khí v i u dò ECD.
- 4.1.11 H ng soxhlet: các ng soxhlet ư c làm s ch b ng cách chưng c t v i pentan hay diclormetan trên h th ng soxhlet trong 4 gi . 4.1.12 C i s . 4.1.13 B siêu âm 4.1.14 Bình thu tinh, bình tam giác dung tích 50 ml. 4.2 Hoá ch t 4.2.1 Ete ietyl lo i dùng cho HPLC. 4.2.2 Pentan lo i dùng cho HPLC. 4.2.3 Sulfat natri khan tinh khi t ư c làm s ch b ng iclometan trên h th ng soxhlet, sau ó nung nhi t 5000C trong 4 gi và gi trong chai thu tinh. 4.2.4 Isooctan lo i dùng cho HPLC. 4.2.5 Khí mang: Heli (lo i dùng cho GC). 4.2.6 Florisil c h t t 60 n100 mesh ư c làm s ch b ng h th ng soxhlet và nung nhi t 4500C trong 18 gi , sau ó cho vào chai thu tinh ư c ph b ng gi y nhôm và ư c gi nhi t 1200C trong t s y. 4.2.7 Florisil ư c ho t hoá: l y m t lư ng florisil (4.2.6) t t s y tr c ti p qua ph u vào m t bình áy tròn (erlenmeye) có nút nhám. Thêm vào bình 3 % nư c theo t l tr ng lư ng (w/w), sau ó l c h n h p kho ng 30 phút b ng máy l c và yên kho ng 1 gi trư c khi s d ng. 4.2.8 Bông thu tinh ư c làm s ch b ng pentan hay iclometan trên h th ng soxhlet và khô trên mi ng gi y nhôm t trong t hút. 4.2.9 Cát s ch ư c nung nhi t 5000C trong 3 gi , cho ngu i trên gi y nhôm sau ó gi trong chai có n p v n. 4.2.10 Silicagel c h t t 70 n 140 mesh. 4.2.11 Silicagel ã ư c ho t hoá: l y silicagel (4.2.10), r a s ch b ng iclometan r i cho vào trong chén s và trong t s y nhi t 1200C trong vòng 12 gi . Sau ó, dùng gi y thi c b c kín m ng chén s và l i vào t s y nhi t 1200C trư c khi s d ng. 4.3 Dung d ch chuN n và dung d ch th 4.3.1 Dung d ch r a gi i: h n h p dung d ch iclometan và pentan (4.2.2) theo t l v th tích là 2 : 8, ư c pha trư c khi s d ng.
- 4.3.2 ChuN n b các dung d ch chuN n thu c tr sâu g c clo và PCBs trong isooctan có n ng : 0,0 µg/l, 2,5µg/l , 5µg/l, 10,0 µg/l, 20,0 µg/l t các ng chuN n. Tuỳ theo n ng thu c tr sâu có trong ng chuN n, dùng bình nh m c và lư ng isooctan thích h p. 4.3.3 Dung d ch chuN n thu h i: pha -HCH trong dung môi isooctan có hàm lư ng là:các chuN n c a CB3, CB198 và -HCH/g isooctan.2,0 µg CB3/g isooctan; 0,2µg CB198/g isooctan và 0,2 µg 4.3.4 Dung d ch chuN n ki m tra: pha chính xác h n h p dung d ch chuN n ki m tra g m p,p DDE và ppDDT trong isooctan v i hàm lư ng c a m i ch t trong kho ng t 5 n 20 ng/ml isooctan. 5 Phương pháp ti n hành 5.1 Xác nh hàm lư ng ch t béo trong m u th 5.1.1 Nghi n u 250,0 g m u th y s n trên máy nghi n ng th (4.1.4). Dùng cân phân tích (4.1.8) cân chính xác 10,0 g m u (m) ã nghi n cho vào trong ng soxhlet s ch (4.1.11) ư c ph b ng bông thu tinh (4.2.8). Chi t m u v i 150,0 ml pentan trong 3 gi trên h th ng chi t m u soxhlet (4.1.3). 5.1.2 Cô c d ch chi t trên máy cô quay chân không (4.1.2) n kho ng 20 ml. Sau ó, cô ti p ch chân không cho n khi ch còn kho ng 1,0 ml. 5.1.3 Chuy n d ch ã cô vào m t chén cân ã bi t trư c kh i lư ng, dùng gi y nhôm ph lên chén cân r i qua êm trong t hút. Sau ó, chén cân ư c làm khô n kh i lư ng không i nhi t 700C trong t s y (s thay i c a chén cân không vư t quá 0,0005 g) r i ngu i t i nhi t phòng trong bình hút N m. Ph n thu ư c em cân là lư ng ch t béo có trong m u. 5.2 ChuN n b m u th 5.2.1 Cân chính xác 10,0 g m u (m) ã nghi n cho vào c i s (n u lư ng ch t béo trong 10,0 g m u l n hơn 0,8 g thì gi m lư ng m u m b o có t i a 0,8 g ch t béo trong lư ng m u em th nghi m). Thêm 10,0 g cát s ch (4.2.9) và 4,0 g sunfat natri khan (4.2.3) r i nghi n u b ng c i s (4.1.12). H n h p ư c ưa vào trong ng soxhlet s ch (4.1.11), ư c ph b ng bông thu tinh (4.2.8). Sau ó, h n h p ư c chi t v i 150,0 ml pentan trong 3 gi trên h th ng chi t m u soxhlet (4.1.3). 5.2.2 N u m u ch a nư c, s n phN m chi t ph i ư c l c qua sunfat natri khan r i ư c r a l i b ng 25,0 ml pentan. S n phN m chi t ư c cô c trên máy cô quay chân không (4.1.2) n kho ng 20 ml. Sau ó, cô ti p v i ch chân không nhi t 40oC cho n khi ch còn kho ng 1,0 ml. Thêm vào d ch thu ư c 2,0 ml isooctane r i làm s ch d ch chi t theo qui nh t i Ði u 5.5. 5.3 ChuN n b m u tr ng
- M u tr ng ư c nh nghĩa là m u th y s n ã ư c xác nh không có thu c tr sâu g c clo h u cơ và PCBs. Ti n hành chuN n b m u tr ng gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.2. 5.4 ChuN n b m u xác nh thu h i Thêm 2,0 ml dung d ch chuN n có hàm lư ng 5,0 µg/l (4.3.2) vào 10,0 g m u tr ng. Ð ng nh t m u b ng máy nghi n ng th (4.1.4). Ti n hành chuN n b m u gi ng như chuN n b v i m u th theo qui nh t i Ði u 5.2. 5.5 Làm s ch d ch chi t 5.5.1 ChuN n b c t 5.5.1.1 Cân 25,0 g florisil ã ho t hoá r i cho vào c c thu tinh có m ch a 50,0 ml dung môi pentan (4.2.2). Sau ó rót t t dung d ch vào trong c t s c ký thu tinh (4.1.1) ã khoá van và nh i m t ít bông thu tinh (4.2.8) dư i áy c t. 5.5.1.2 Ð yên c t cho l ng, sau ó tháo van rút dung môi pentan ra kh i c t cho n khi m c dung môi trong c t cao hơn m c florisil kho ng 1,0 cm. Thêm m t ít bông th y tinh lên phía trên l p florisil tránh xáo tr n tinh th khi có dòng dung d ch vào. 5.5.2 Làm s ch d ch chi t 5.5.2.1 Chuy n các dung d ch thu ư c Ði u 5.2.2, Ði u 5.3 và Ði u 5.4 vào các c t s c ký ã chuN n b (5.5.1). 5.5.2.2 Cho ti p 3 l n, m i l n 3,0 ml dung d ch r a gi i (4.3.1). Ði u ch nh khoá t c r a gi i t t 4 n 5 ml/phút. Chú thích: không ư c khô c t trong t t c các bư c c a qui trình. 5.5.2.3 Thu toàn b d ch chi t i qua c t vào m t bình thu tinh áy tròn c a máy cô quay chân không (4.1.2). Ti n hành cô dung d ch thu ư c cho n khi ch còn kho ng 1,0 ml. B sung thêm 1,0 ml isooctan vào trong bình r i l c u hoà tan h t c n bám trên thành bình. Làm bay hơi t t b ng dòng khí nitơ cho t i khi d ch khô hoàn toàn. 5.5.2.4 Thêm chính xác 2,0 ml isooctan r i l c u hoà tan c n. 5.6 Phân tách thu c tr sâu g c clo và PCBs 5.6.1 ChuN n b c t 5.6.1.1 Cân chính xác 7,0 g silicagel ã ư c ho t hoá (4.2.11) vào trong bình nh m c tam giác dung tích 50 ml (4.1.14). Sau ó, cho thêm kho ng 25,0 ml pentan, l c u r i cho l ng. Ð h n h p này vào trong c t s c ký thu tinh kích thư c L x ID là 500 x 8 mm (4.1.1) ã nh i m t ít bông thu tinh (4.2.8) dư i áy c t.
CÓ THỂ BẠN MUỐN DOWNLOAD
-
Quyết định số 3733/2002/QĐ-BYT
59 p |
1852 |
221
-
Quyết định số 5129/2002/QĐ-BYT
24 p |
88 |
10
-
Quyết định số 10/2007/QĐ-BYT
2 p |
112 |
8
-
Quyết định số 4894/2002/QĐ-BYT
3 p |
77 |
8
-
Quyết định số 5047/2002/QĐ-BYT
13 p |
46 |
5
-
Quyết định số 4895/2002/QĐ-BYT
2 p |
71 |
5
-
Quyết định số 43/2002/QĐ-BGDĐT
10 p |
79 |
5
-
Quyết định số 10/2006/QĐ-BNN
8 p |
48 |
3
-
Quyết định số 139/2002/QĐ-UB
6 p |
45 |
3
-
Quyết định số 143/2002/QĐ-UB
5 p |
43 |
3
-
Quyết định số 10/2008/QĐ-BYT
2 p |
42 |
2
-
Quyết định số 10/2007/QĐ-UBND
8 p |
30 |
2
-
Quyết định số 10/2007/QĐ-UBND
4 p |
34 |
1
-
Quyết định số 10/2004/QĐ-BTS
2 p |
42 |
1
-
Quyết định số 10/2005/QĐ-BYT
7 p |
40 |
1
-
Quyết định số 10/2006/QĐ-BYT
2 p |
45 |
1
-
Quyết định số 136/2002/QĐ-TTg
1 p |
64 |
1

Set-Cookie: TLDEVNamespace=38jtjdu3l9dk5iapohp3jvhci2; path=/; domain=.tailieu.vn; HttpOnly


text:
Dầu mỏ và khí
-
Ebook "Hóa học dầu mỏ và khí" nhằm cung cấp các kiến thức cơ bản về hóa học dầu mỏ và khí cho sinh viên học viên các ngành công nghệ hữu cơ hóa dầu. Ebook trình bày các nội dung sau: nguồn gốc dầu mỏ và khí, thành phần hóa học và phân loại dầu mỏ, ứng dụng của các phân đoạn dầu mỏ, các đặc trưng hóa lý và sự đánh giá chất lượng dầu mỏ, hóa học các quá trình chế biến dầu,...
252p ktct_1669 03-05-2012 668 317 Download
-
Nội dung gồm: Bài 1. Nguồn gốc dầu mỏ và khí; Bài 2. Thành phần hóa học và phân loại dầu mỏ; Bài 3. Các đặc tính của dầu thô và sản phẩm dầu mỏ; Bài 4. Ứng dụng của các phân đoạn dầu mỏ; Bài 5. Các đặc trưng vật lý và sự đánh giá chất lượng dầu mỏ.
77p nguyenvanquan037 24-03-2011 282 127 Download
-
Mô đun nhằm trang bị cho học viên có đủ kiến thức cơ bản một cách khái quát nhất về chuyên ngành hóa dầu, giúp cho học viên dễ dàng tiếp thu các kiến thức chuyên ngành. Nội dung chính của mô đun: Bài 1 Nguồn gốc của dầu mỏ và khí, Bài 2 Thành phần hóa học và phân loại dầu mỏ, Bài 3 Các đặc tính của dầu thô và sản phẩm dầu mỏ, Bài 4 Ứng dụng của các phân đoạn dầu mỏ, Bài 5 Các đặc trưng vật lý và sự đánh giá chất lượng dầu mỏ.
77p chipbia 18-07-2012 294 109 Download
-
Ebook Hóa học dầu mỏ và khí (tái bản lần 4 có sửa chữa, bổ sung) do PGS.TS. Đinh Thị Ngọ biên soạn nhằm cung cấp các kiến thức cơ bản về hóa học dầu mỏ và khí cho sinh viên học viên các ngành công nghệ hữu cơ hóa dầu. Phần 1 trình bày về hóa học dầu mỏ (4 chương): Nguồn gốc dầu mỏ và khí, thành phần hóa học và phân loại dầu mỏ, ứng dụng của các phân đoạn dầu mỏ, các đặc trưng hóa lý và sự đánh giá chất lượng dầu mỏ.
96p talata_4 19-12-2014 91 59 Download
-
Phần 2 Ebook Hóa học dầu mỏ và khí (tái bản lần 4 có sửa chữa, bổ sung) do PGS.TS. Đinh Thị Ngọ biên soạn trình bày nội dung phần "Hóa học và quá trình chế biến dầu" (6 chương). Cuốn sách nhằm cung cấp các kiến thức cơ bản về hóa học dầu mỏ và khí cho sinh viên ngành Công nghệ hữu cơ hóa dầu và các ngành có liên quan.
173p talata_4 19-12-2014 106 59 Download
-
Mời quý thầy cô giáo và các bạn học sinh cùng tham khảo Bài giảng Hóa học 9 bài 40: Dầu mỏ và khí thiên nhiên thiết kế bằng Powerpoint chuyên ghiệp giúp nâng cao kĩ năng và kiến thức trong việc soạn bài giảng điện tử giảng dạy và học tập. Bài giảng Hóa học 9 bài 40: Dầu mỏ và khí thiên nhiên trình bày bằng Slide rất sống động với các hình ảnh minh họa giúp các em học sinh dễ dàng hiểu được bài giảng và nhanh chóng năm bắt các nội dung chính bài học.
30p hoanglan_259 08-01-2014 166 53 Download
-
Mời quý thầy cô và các bạn tham khảo Giáo án Hóa học 9 bài 40: Dầu mỏ và khí thiên nhiên để nâng cao kĩ năng và kiến thức soạn giáo án theo chuẩn kiến thức, kỹ năng trong chương trình dạy học. Giáo án Hóa học 9 bài 40: Dầu mỏ và khí thiên nhiên được soạn với hình thức 3 cột phù hợp quy định bộ GD và nội dung súc tích giúp học sinh dễ dàng hiểu bài học hơn.
5p hoanglan_259 08-01-2014 154 33 Download
-
Dầu mỏ được con người biết đến từ thời cổ xưa, đến thế kỷ XVIII, dầu mỏ được sử dụng làm nhiên liệu để đốt cháy, thắp sáng. Sang thế kỷ XIX, dầu được coi như là nguồn nguyên liệu chính cho mọi phương tiện giao thông và cho nền kinh tế quốc dân. Hiện nay, dầu mỏ đã trở thành nguồn năng lượng quan trọng nhất của mọi quốc gia trên thế giới.
2p alibabava40tencuop 02-10-2009 996 326 Download
-
Tham khảo sách 'giáo trình dầu mỏ và khí', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
103p ktct_1669 23-04-2012 246 136 Download
-
Qua phân tích thành phần hoá học của các loại dầu mỏ khác nhau người ta nhận thấy không có loại dầu mỏ nào trên thế giới lại có thành phần giống nhau hoàn toàn cả, mà chúng rất khác nhau và thay đổi theo trong phạm vi rất rộng. Sự khác nhau rất nhiều về thành phần dầu mỏ đã là một vấn đề khoa học rất lớn.
122p 326159487 21-05-2012 259 110 Download
-
Thành phần của dầu mỏ và khí Chương I THÀNH PHẦN DẦU MỎ VÀ KHÍ Dầu mỏ và khí là những nguồn hydrocacbon phong phú nhất có trong thiên nhiên. Dầu mỏ cũng như khí, ngày càng phát hiện được nhiều và hầu như ở đâu cũng thấy dầu mỏ và khí không nhiều thì ít.
47p songsongcuoc 18-06-2011 189 98 Download
-
Tài liệu “Hóa học dầu mỏ và khí” cung cấp các kiến thức cơ bản về hóa học dầu mỏ và khí cho sinh viên, học viên cao học ngành công nghệ hữu cơ hóa dầu của trường đại học bách khoa Hà Nội và các trường khác có ngành đào tạo liên quan
26p dongta05 11-01-2012 201 83 Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 2', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p dongta05 11-01-2012 127 56 Download
-
Từ khi được phát hiện đến nay, dầu mỏ và khí đã và đang là nguồn nguyên liệu vô cùng quý giá của mỗi Quốc gia nói chung và toàn nhân loại nói riêng. Ngày nay sản phẩm của dầu mỏ và khí đang có mặt trong hầu hết các lĩnh vực đời sống sinh hoạt hàng ngày của con người cũng như công nghiệp.
47p nguyenthao1669 27-10-2011 230 55 Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 3', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p dongta05 11-01-2012 100 50 Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 4', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p dongta05 11-01-2012 83 48 Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 6', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p dongta05 11-01-2012 96 48 Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 5', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p dongta05 11-01-2012 79 43 Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 9', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p dongta05 11-01-2012 82 36 Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 7', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p dongta05 11-01-2012 78 35 Download

markdown:
# Dầu mỏ và khí
**Dầu mỏ và khí**
-
Ebook "Hóa học dầu mỏ và khí" nhằm cung cấp các kiến thức cơ bản về hóa học dầu mỏ và khí cho sinh viên học viên các ngành công nghệ hữu cơ hóa dầu. Ebook trình bày các nội dung sau: nguồn gốc dầu mỏ và khí, thành phần hóa học và phân loại dầu mỏ, ứng dụng của các phân đoạn dầu mỏ, các đặc trưng hóa lý và sự đánh giá chất lượng dầu mỏ, hóa học các quá trình chế biến dầu,...
252p
ktct_1669
03-05-2012
668
317
Download
-
Nội dung gồm: Bài 1. Nguồn gốc dầu mỏ và khí; Bài 2. Thành phần hóa học và phân loại dầu mỏ; Bài 3. Các đặc tính của dầu thô và sản phẩm dầu mỏ; Bài 4. Ứng dụng của các phân đoạn dầu mỏ; Bài 5. Các đặc trưng vật lý và sự đánh giá chất lượng dầu mỏ.
77p
nguyenvanquan037
24-03-2011
282
127
Download
-
Mô đun nhằm trang bị cho học viên có đủ kiến thức cơ bản một cách khái quát nhất về chuyên ngành hóa dầu, giúp cho học viên dễ dàng tiếp thu các kiến thức chuyên ngành. Nội dung chính của mô đun: Bài 1 Nguồn gốc của dầu mỏ và khí, Bài 2 Thành phần hóa học và phân loại dầu mỏ, Bài 3 Các đặc tính của dầu thô và sản phẩm dầu mỏ, Bài 4 Ứng dụng của các phân đoạn dầu mỏ, Bài 5 Các đặc trưng vật lý và sự đánh giá chất lượng dầu mỏ.
77p
chipbia
18-07-2012
294
109
Download
-
Ebook Hóa học dầu mỏ và khí (tái bản lần 4 có sửa chữa, bổ sung) do PGS.TS. Đinh Thị Ngọ biên soạn nhằm cung cấp các kiến thức cơ bản về hóa học dầu mỏ và khí cho sinh viên học viên các ngành công nghệ hữu cơ hóa dầu. Phần 1 trình bày về hóa học dầu mỏ (4 chương): Nguồn gốc dầu mỏ và khí, thành phần hóa học và phân loại dầu mỏ, ứng dụng của các phân đoạn dầu mỏ, các đặc trưng hóa lý và sự đánh giá chất lượng dầu mỏ.
96p
talata_4
19-12-2014
91
59
Download
-
Phần 2 Ebook Hóa học dầu mỏ và khí (tái bản lần 4 có sửa chữa, bổ sung) do PGS.TS. Đinh Thị Ngọ biên soạn trình bày nội dung phần "Hóa học và quá trình chế biến dầu" (6 chương). Cuốn sách nhằm cung cấp các kiến thức cơ bản về hóa học dầu mỏ và khí cho sinh viên ngành Công nghệ hữu cơ hóa dầu và các ngành có liên quan.
173p
talata_4
19-12-2014
106
59
Download
-
Mời quý thầy cô giáo và các bạn học sinh cùng tham khảo Bài giảng Hóa học 9 bài 40: Dầu mỏ và khí thiên nhiên thiết kế bằng Powerpoint chuyên ghiệp giúp nâng cao kĩ năng và kiến thức trong việc soạn bài giảng điện tử giảng dạy và học tập. Bài giảng Hóa học 9 bài 40: Dầu mỏ và khí thiên nhiên trình bày bằng Slide rất sống động với các hình ảnh minh họa giúp các em học sinh dễ dàng hiểu được bài giảng và nhanh chóng năm bắt các nội dung chính bài học.
30p
hoanglan_259
08-01-2014
166
53
Download
-
Mời quý thầy cô và các bạn tham khảo Giáo án Hóa học 9 bài 40: Dầu mỏ và khí thiên nhiên để nâng cao kĩ năng và kiến thức soạn giáo án theo chuẩn kiến thức, kỹ năng trong chương trình dạy học. Giáo án Hóa học 9 bài 40: Dầu mỏ và khí thiên nhiên được soạn với hình thức 3 cột phù hợp quy định bộ GD và nội dung súc tích giúp học sinh dễ dàng hiểu bài học hơn.
5p
hoanglan_259
08-01-2014
154
33
Download
-
Dầu mỏ được con người biết đến từ thời cổ xưa, đến thế kỷ XVIII, dầu mỏ được sử dụng làm nhiên liệu để đốt cháy, thắp sáng. Sang thế kỷ XIX, dầu được coi như là nguồn nguyên liệu chính cho mọi phương tiện giao thông và cho nền kinh tế quốc dân. Hiện nay, dầu mỏ đã trở thành nguồn năng lượng quan trọng nhất của mọi quốc gia trên thế giới.
2p
alibabava40tencuop
02-10-2009
996
326
Download
-
Tham khảo sách 'giáo trình dầu mỏ và khí', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
103p
ktct_1669
23-04-2012
246
136
Download
-
Qua phân tích thành phần hoá học của các loại dầu mỏ khác nhau người ta nhận thấy không có loại dầu mỏ nào trên thế giới lại có thành phần giống nhau hoàn toàn cả, mà chúng rất khác nhau và thay đổi theo trong phạm vi rất rộng. Sự khác nhau rất nhiều về thành phần dầu mỏ đã là một vấn đề khoa học rất lớn.
122p
326159487
21-05-2012
259
110
Download
-
Thành phần của dầu mỏ và khí Chương I THÀNH PHẦN DẦU MỎ VÀ KHÍ Dầu mỏ và khí là những nguồn hydrocacbon phong phú nhất có trong thiên nhiên. Dầu mỏ cũng như khí, ngày càng phát hiện được nhiều và hầu như ở đâu cũng thấy dầu mỏ và khí không nhiều thì ít.
47p
songsongcuoc
18-06-2011
189
98
Download
-
Tài liệu “Hóa học dầu mỏ và khí” cung cấp các kiến thức cơ bản về hóa học dầu mỏ và khí cho sinh viên, học viên cao học ngành công nghệ hữu cơ hóa dầu của trường đại học bách khoa Hà Nội và các trường khác có ngành đào tạo liên quan
26p
dongta05
11-01-2012
201
83
Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 2', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p
dongta05
11-01-2012
127
56
Download
-
Từ khi được phát hiện đến nay, dầu mỏ và khí đã và đang là nguồn nguyên liệu vô cùng quý giá của mỗi Quốc gia nói chung và toàn nhân loại nói riêng. Ngày nay sản phẩm của dầu mỏ và khí đang có mặt trong hầu hết các lĩnh vực đời sống sinh hoạt hàng ngày của con người cũng như công nghiệp.
47p
nguyenthao1669
27-10-2011
230
55
Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 3', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p
dongta05
11-01-2012
100
50
Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 4', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p
dongta05
11-01-2012
83
48
Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 6', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p
dongta05
11-01-2012
96
48
Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 5', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p
dongta05
11-01-2012
79
43
Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 9', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p
dongta05
11-01-2012
82
36
Download
-
Tham khảo tài liệu 'hóa học dầu mỏ và khí part 7', kỹ thuật - công nghệ, hoá học - dầu khí phục vụ nhu cầu học tập, nghiên cứu và làm việc hiệu quả
26p
dongta05
11-01-2012
78
35
Download

Set-Cookie: TLDEVNamespace=t0a88r1epthuslv72d1lu25945; path=/; domain=.tailieu.vn; HttpOnly


text:
Theo thống kê, riêng 6 tháng đầu năm 2016, cả nước xảy ra 1.506 vụ cháy (chỉ giảm 4 vụ, tương đương với 0,3%) làm 31 người chết, 181 người bị thương, thiệt hại về tài sản hơn 830 tỉ đồng và hơn 720 ha rừng.Theo Phòng cảnh sát phòng cháy chữa cháy Hà Nội, qua kiểm tra tổng số 1075 công trình nhà cao tầng trên địa bàn Thành phố (trong đó có 916 công trình đã đưa vào hoạt động, 151 công trình đang thi công, 08 công trình đang tạm dừng hoạt động) có 38 công trình không thực hiện, thực hiện không đầy đủ các quy định của pháp luật về phòng cháy chữa cháy.
Theo đó, nhiều công trình không tổ chức khắc phục các nội dung còn tồn tại, thiếu sót về phòng cháy chữa cháy đã được Cơ quan Cảnh sát phòng cháy chữa cháy kiến nghị. Một số công trình đưa vào sử dụng nhưng chưa được nghiệm thu về phòng cháy chữa cháy, không đảm bảo các điều kiện an toàn về phòng cháy chữa cháy.
Các công trình này tập trung chủ yếu tại quận Hà Đông với 14 tòa nhà và quận Hoàng Mai với 9 tòa nhà.
Bình luậnÝ kiến của bạn sẽ được biên tập trước khi đăng. Xin vui lòng gõ tiếng Việt có dấu

markdown:
![ Ảnh minh họa. Nguồn: internet](http://static.tapchitaichinh.vn/660x450/Uploaded/tranhuyentrang/2016_08_01/muanhachungcuhanoi2014_LYVL.jpg)
Theo thống kê, riêng 6 tháng đầu năm 2016, cả nước xảy ra 1.506 vụ cháy (chỉ giảm 4 vụ, tương đương với 0,3%) làm 31 người chết, 181 người bị thương, thiệt hại về tài sản hơn 830 tỉ đồng và hơn 720 ha rừng.Theo Phòng cảnh sát phòng cháy chữa cháy Hà Nội, qua kiểm tra tổng số 1075 công trình nhà cao tầng trên địa bàn Thành phố (trong đó có 916 công trình đã đưa vào hoạt động, 151 công trình đang thi công, 08 công trình đang tạm dừng hoạt động) có 38 công trình không thực hiện, thực hiện không đầy đủ các quy định của pháp luật về phòng cháy chữa cháy.
Theo đó, nhiều công trình không tổ chức khắc phục các nội dung còn tồn tại, thiếu sót về phòng cháy chữa cháy đã được Cơ quan Cảnh sát phòng cháy chữa cháy kiến nghị. Một số công trình đưa vào sử dụng nhưng chưa được nghiệm thu về phòng cháy chữa cháy, không đảm bảo các điều kiện an toàn về phòng cháy chữa cháy.
Các công trình này tập trung chủ yếu tại quận Hà Đông với 14 tòa nhà và quận Hoàng Mai với 9 tòa nhà.
## Bình luậnÝ kiến của bạn sẽ được biên tập trước khi đăng. Xin vui lòng gõ tiếng Việt có dấu

Cache-Control: public, max-age=300

Content-Type: text/html; charset=utf-8

Set-Cookie: .ASPXANONYMOUS=9EHp-pJk0gEkAAAAMDJhOTAzNzYtMTgyMS00NDdmLTkxMjMtZjcxMjQ3MDA3YTBk0; domain=tapchitaichinh.vn; expires=Mon, 02-Jan-2017 00:55:58 GMT; path=/; HttpOnly