text:
Thường trực Ban Bí thư Trương Tấn Sang hoan nghênh những đóng góp tích cực của Thị trưởng Hiramatsu vào việc thúc đẩy quan hệ hợp tác hữu nghị giữa hai nước trong thời gian qua; đánh giá cao sự phát triển hết sức năng động về kinh tế-xã hội và văn hóa của thành phố Osaka, trung tâm quan trọng về thương mại, công nghiệp, hải cảng của Nhật Bản và của vùng Kansai; khẳng định việc thúc đẩy quan hệ giữa các địa phương đóng vai trò cầu nối quan trọng trong việc làm sâu sắc hơn quan hệ giữa Việt Nam và Nhật Bản. Thường trực Ban Bí thư Trương Tấn Sang hoan nghênh việc mở rộng hợp tác giữa thành phố Osaka với Thành phố Hồ Chí Minh trên cơ sở khai thác tốt hơn tiềm năng phát triển giữa hai địa phương; đề nghị lãnh đạo thành phố Osaka khuyến khích và có chính sách hỗ trợ cần thiết để các doanh nghiệp Nhật Bản, kể cả doanh nghiệp vừa và nhỏ, mở rộng hoạt động và gia tăng đầu tư vào Việt Nam, gắn với việc chuyển giao công nghệ; mở rộng hợp tác về giáo dục, khoa học, đào tạo nhân lực, giao lưu nhân dân, trao đổi văn hóa, du lịch.Ông Kunio Hiramatsu chân thành cảm ơn nhân dân và Chính phủ Việt Nam đã ủng hộ, giúp đỡ nhân dân và Chính phủ Nhật Bản vượt qua giai đoạn khó khăn, khắc phục các hậu quả của thảm họa động đất, sóng thần; nhấn mạnh, trong thời gian qua, mối giao lưu, hợp tác giữa Việt Nam với thành phố Osaka và vùng Kansai, khu vực có nhiều điểm tương đồng về văn hóa và gần gũi với Việt Nam về địa lý và lịch sử không ngừng gia tăng.Thị trưởng thành phố Osaka khẳng định quan hệ kết nghĩa giữa thành phố Osaka và Thành phố Hồ Chí Minh đã phát triển hết sức tốt đẹp trên các lĩnh vực chính trị, kinh tế, văn hóa, giao lưu nhân dân, đóng góp tích cực vào sự phát triển quan hệ đối tác chiến lược giữa hai nước; cam kết thành phố Osaka sẽ tiếp tục mở rộng giao lưu, tăng cường hợp tác với Thành phố Hồ Chí Minh và các địa phương của Việt Nam, đặc biệt trên các lĩnh vực hai bên có thế mạnh bổ sung cho nhau./.
Copyright by VietNam Ministry of Foreign Affairs

markdown:
# Thường trực Ban Bí thư tiếp thị trưởng của Osaka
*Ông Trương Tấn Sang, Ủy viên Bộ Chính trị, Thường trực Ban Bí thư tiếp Thị trưởng thành phố Osaka, Nhật Bản Kunio Hiramatsu. (Ảnh: Doãn Tấn/TTXVN)*
Thường trực Ban Bí thư Trương Tấn Sang hoan nghênh những đóng góp tích cực của Thị trưởng Hiramatsu vào việc thúc đẩy quan hệ hợp tác hữu nghị giữa hai nước trong thời gian qua; đánh giá cao sự phát triển hết sức năng động về kinh tế-xã hội và văn hóa của thành phố Osaka, trung tâm quan trọng về thương mại, công nghiệp, hải cảng của Nhật Bản và của vùng Kansai; khẳng định việc thúc đẩy quan hệ giữa các địa phương đóng vai trò cầu nối quan trọng trong việc làm sâu sắc hơn quan hệ giữa Việt Nam và Nhật Bản.
Thường trực Ban Bí thư Trương Tấn Sang hoan nghênh việc mở rộng hợp tác giữa thành phố Osaka với Thành phố Hồ Chí Minh trên cơ sở khai thác tốt hơn tiềm năng phát triển giữa hai địa phương; đề nghị lãnh đạo thành phố Osaka khuyến khích và có chính sách hỗ trợ cần thiết để các doanh nghiệp Nhật Bản, kể cả doanh nghiệp vừa và nhỏ, mở rộng hoạt động và gia tăng đầu tư vào Việt Nam, gắn với việc chuyển giao công nghệ; mở rộng hợp tác về giáo dục, khoa học, đào tạo nhân lực, giao lưu nhân dân, trao đổi văn hóa, du lịch.
Ông Kunio Hiramatsu chân thành cảm ơn nhân dân và Chính phủ Việt Nam đã ủng hộ, giúp đỡ nhân dân và Chính phủ Nhật Bản vượt qua giai đoạn khó khăn, khắc phục các hậu quả của thảm họa động đất, sóng thần; nhấn mạnh, trong thời gian qua, mối giao lưu, hợp tác giữa Việt Nam với thành phố Osaka và vùng Kansai, khu vực có nhiều điểm tương đồng về văn hóa và gần gũi với Việt Nam về địa lý và lịch sử không ngừng gia tăng.
Thị trưởng thành phố Osaka khẳng định quan hệ kết nghĩa giữa thành phố Osaka và Thành phố Hồ Chí Minh đã phát triển hết sức tốt đẹp trên các lĩnh vực chính trị, kinh tế, văn hóa, giao lưu nhân dân, đóng góp tích cực vào sự phát triển quan hệ đối tác chiến lược giữa hai nước; cam kết thành phố Osaka sẽ tiếp tục mở rộng giao lưu, tăng cường hợp tác với Thành phố Hồ Chí Minh và các địa phương của Việt Nam, đặc biệt trên các lĩnh vực hai bên có thế mạnh bổ sung cho nhau./.
Cập nhật 11-07-2011

Via: 1.1 varnish


text:
Danh bạ web tốt nhất Việt Nam với hàng vạn liên kết chất lượng trong tất cả các lĩnh vực của cuộc sống.
Thống kê trên danh bạ :
16380
(website)
+
2694
(chờ duyệt)
Tìm kiếm với từ:
Danh bạ web Việt Nam
» Chi tiết về website
Danh mục chính
Giáo dục - Đào tạo
Giải trí - Âm nhạc
Khoa học - Công nghiệp
Kinh tế - Thương mại
Máy tính - Internet
Nhà nước - Tổ chức
Thể dục - Thể thao
Tin tức - Thời sự
Tư liệu - Tra cứu
Văn hoá - Nghệ thuật
Xã hội - Con người
Y tế - Sức khoẻ
Thông tin
Đối tác của chúng tôi
Website mới nhất
Kiến trúc Nhật Lam
Rao vặt miễn phí
Loglod trò chơi
Shop mobile
ShareDeal
Vật tư in ảnh giá sỉ
Cung cấp thiết bị cầm tay
Chợ thiết bị trực tuyến
Property - Real Estate Saudi Arabia
Tour Phu Quoc
Bài viết
Khuynh hướng quảng cáo mới
Thiết kế truyện tranh màu để quảng cáo cho sản phẩm Công ty của mình.
Kayako Livesupport- Chăm sóc và hỗ trợ khách hàng trực tuyến.
Kayako Livesupport- Chăm sóc và hỗ trợ khách hàng trực tuyến.
Giá bán mỗi tên miền khác nhau và duy nhất
Mỗi tên miền có cái giá riêng của nó bởi vì nhiều lý do: chỉ có thể tồn tại duy nhất một tên miền như thế trên thế giới.
Thám tử Hoàng Gia
Thám tử Hoàng Gia là công ty thám tử tư uy tín và chuyên nghiệp hàng đầu tại Việt Nam
Jobnavi.vn - Cầu nối giữa ứng viên và Nhà tuyển dụng
Jobnavi.vn là một trong những website việc làm trực tuyến hàng đầu tại Việt Nam.
Công cụ SEO
Kiểm tra PageRank
Kiểm tra PR cho nhiều site
Nút PageRank cho web
PR các liên kết trên site
Kiểm tra tính hợp lệ PR
Công cụ SEO
Trang của ngày
Công ty than Hà Tu
Đăng ký nhận web mới
Bạn có thể đăng ký nhận thư định kỳ những website mới được cập nhật trên Danh bạ web. Vui lòng nhập Email của bạn:
Liên kết tới chúng tôi
Danh bạ theo chữ cái :
#
A
Ă
Â
B
C
D
Đ
E
F
G
H
I
J
K
L
M
N
O
Ô
Ơ
P
Q
R
S
T
U
Ư
V
W
X
Y
Z
Đặt banner của bạn ở đây
Danh bai giai tri tren mang
Xem trước:
Tên website:
Danh bai giai tri tren mang
- http://vn. vinagames. com
Thông tin mô tả:
Choi bai va co ca ro tren mang voi nhung nguoi viet khac
Danh mục:
Máy tính - Internet
»
Trò chơi
Ngày đăng ký:
September 04, 2007 01:26:38 AM
Thống kê Alexa:
Thông tin bổ sung:
--- Links ---
Google
Bing
Yahoo
--- Pages ---
Google
Bing
Yahoo
--- Công cụ ---
Thông tin tên miền
Kiểm tra PageRank
Kiểm tra PR cho nhiều site
Nút PageRank cho web
PR các liên kết trên site
Kiểm tra tính hợp lệ PR
Thông tin Alexa
Page Strength
Bookmarks
Web liên quan:
Chơi Ca Rô, Tiến Lên trên mạng miễn phí
Choi co tuong tren mang
WEBSITE TRÒ CHƠI CHUNG SỨC
Công ty Xổ số kiến thiết An Giang
Babe Gamer - Funny Flash Game
Xem truyền hình trực tuyến trên internet
Thế giới Trò chơi
Trò chơi Việt
Thư viện Trò chơi
Game TS Online
Choigame.info Trò chơi trực tuyến
Audition nhịp điệu cuộc sống
Câu hỏi trắc nghiệm
Games online
Thế Giới Games Việt Nam
Cho thuê Truyện tranh & CD Games
Giải trí hàng ngày
Thế giới giải trí
Mô hình xe lửa
Những sắc màu thời thượng
Dịch vụ cho điện thoại qua tin nhắn
VietSon Game Club
Hỏi và Đáp
Công ty Cổ phần Công nghệ Giải trí
Petalia Network - Mạng giải trí và chia sẻ kiến thức
--- o 0 o ---
TRANG CHỦ
-
ĐĂNG KÝ MỚI
-
WEB MỚI
-
GỬI BÀI VIẾT
-
BÀI VIẾT MỚI
-
WEB HAY
-
LIÊN HỆ
-
SƠ ĐỒ
Bản quyền
© 2005-2010 thuộc
Vinatop
.
Quy định
-
Điều khoản sử dụng
-
Chính sách riêng tư
-
Thêm danh mục
-
Quảng cáo

WARC-Type: response

Content-Type: application/http; msgtype=response

WARC-Truncated: length

Server: cloudflare-nginx

Content-Type: text/html; charset=utf-8

Connection: close

Cache-Control: no-store, no-cache, must-revalidate, post-check=0, pre-check=0

Pragma: no-cache

Content-Encoding: gzip


text:
Xem Phim TV - Trang xem phim online hay, xem phim
miễn phí chất lượng tốt, Xem phim TV luôn cập nhật các bộ phim hành
động, phim chiếu rạp mới nhất với các thể loại phim tâm lý, phim hài ..v. Xem phim tại Xem phim
Tv sẽ luôn có phụ đề việt hoặc phim lồng tiếng đem đến sự thoải mái cho
các bạn khi xem phim. Xem phim tv sẽ hạn chế tối đa quảng cáo để luôn
là 1 sự lựa chọn phim online tốt nhất cho các bạn

Vary: Accept-Encoding

Accept-Ranges: bytes


text:
Xem Nhiều
Hành Động
Võ Thuật
Kiếm Hiệp
Tình Cảm
Hình sự
Thần Thoại
Viễn Tưởng
Hài Hước
Hoạt Hình
Kình Dị
Ph.Bộ Việt Nam
Ph.Bộ Trung Quốc
Ph.Bộ Hàn Quốc
Ph.Bộ Hồng Kông
Ph.Bộ Đài Loan
Phiêu lưu
Siêu nhân
Xã hội đen
Âm nhạc
Truyền Hình
Server Veoh
Server Google
Server Youtube
Server Sevenload
Server Megavideo
Server Dailymotio
Server CN-Youku
Server Tổng Hợp
Server Live Video
Tìm Phim :
Đôrêmon
,
Nụ hôn thần chết
,
Bao Thanh Thiên
,
Anh hùng xạ điêu
,
Châu Tinh Trì
,
Tình dục là chuyện nhỏ
,
phim cấp 3
Tìm Phim Theo Kí Tự:
A
|
B
|
C
|
D
|
E
|
F
|
G
|
H
|
I
|
J
|
K
|
L
|
M
|
N
|
O
|
P
|
Q
|
R
|
S
|
T
|
U
|
V
|
W
|
X
|
Y
|
Z
|
xem phim hanh trinh ket noi nhung trai tim
Bạn đang xem phim hanh trinh ket noi nhung trai tim :
"hanh trinh ket noi nhung trai tim"
Hãy thử tìm lại với từ khoá ngắn hơn như :
(Bấm từ khoá dưới xem kết quả)
Tìm phim với từ khoá :
hanh trinh
Tìm phim với từ khoá :
ket noi nhung
Chú ý:
Phải viết cách nhau, ví dụ muốn tìm phim
Tình cờ
bạn phải gõ là
tinh co
Nếu bạn
tinhco
sẽ không tìm thấy kết quả nào.
Mẹo : Nhập từ khóa, tên phim ngắn gọn chính xác, không cần gõ tiếng Việt có dấu.
Nhập ngắn gọn sẽ tìm được nhiều kết quả hơn ...
Thường nhập sai lỗi chính tả nên không tìm thấy. Ví dụ phim
" Tây Du Ký "
các bạn
thường nhập là
" Tây Du Kí "
nếu gõ đơn giản 2 từ
" tay du "
sẽ tìm thấy tất cả những
phim có 2 từ
" tay du "

Server: Apache

Vary: User-Agent,Accept-Encoding

Content-Type: text/html


text:
www
YKHOANET
NGHIÊN CỨU
Y KHOA
Bình luận y khoa
Bài giảng thống kê sinh học
- (Biostatistics)
Nghiên cứu khoa học
Thống kê R
Từ điển y khoa
Tạp chí y khoa
Hình ảnh y khoa
Nội soi: Atlas hình ảnh nội soi đường hô hấp
trên
Nội soi: Atlas hình ảnh nội soi cổ tử cung
MRI: Atlas hình ảnh MRI cột sống
GÓC SINH VIÊN
Y KHOA
Atlas ykhoa
Thông tin sinh viên
Triệu chứng học nội khoa
Thông số Cận Lâm Sàng
TRƯỜNG
Y KHOA
ĐH Y Khoa Hà Nội
ĐH Y Dược TPHCM
ĐH Y Khoa Thái Nguyên
ĐH Y Khoa Huế
ĐH Y Khoa Thái Bình
ĐH Y Tế Công Cộng
Vũ Thị Quế Hương1, Ðỗ Quang Hà1, Nguyễn Trọng
Lân2, Nguyễn Thanh Hùng2,
Võ Ðình Thâm3, Claudine Roche4, Eliane Chungue4
và Vincent Deubel5.
Hội Vệ sinh Dịch tễ
Virút Dengue (DEN) là tác nhân gây dịch quan trọng ở vùng
nhiệt đới và cận nhiệt đới, người ta đã ước tính có trên 250.000 ca dengue xuất
huyết (DXH) và ít nhất có 1 triệu ca sốt DEN đã xảy ra hàng năm(16).
Ở Việt Nam trong hơn ba chục năm qua, DXH đã là vấn đề quan trọng cho sức khỏe
cộng đồng. Các tỉnh phía Nam là vùng lưu hành dịch đã có số mắc và chết do DXH
rất cao(8). Có 4 týp virút DEN gây bệnh cho người qua vectơ trung
gian là muỗi Aedes aegypti, hiện đã trải rộng khắp Ðông Nam Á,
châu Phi, Trung Nam Mỹ và Thái Bình Dương. Có nhiều dạng lâm sàng khác nhau
trong nhiễm trùng DEN ở trẻ con đi từ nhẹ đến nặng như: sốt không rõ nguyên
nhân, sốt DEN cổ điển, DXH có hoặc không kèm choáng. Tỷ lệ tử vong do DXH tại
các vùng lưu hành DEN từ <1% đến 40%(5). Về điều trị, không có cách
nào khác hơn là bồi hoàn dịch một cách thận trọng(20) và để phòng
ngừa dịch không có biện pháp nào khác ngoài việc diệt muỗi. Do vậy, việc chẩn
đoán sớm và nhanh chóng có ý nghĩa rất lớn đối với kết quả điều trị bệnh cũng
như góp phần dự báo dịch sớm.
Nhiều tác giả đã ứng dụng phản ứng RT/PCR để phát hiện genome
của virút DEN(4,6,12,13,17,19) từ chủng virút DEN hoặc từ các loại
bệnh phẩm khác nhau (huyết thanh, dịch não tủy, muỗi). Có tác giả đã chứng minh
được độ nhạy cảm và độ đặc hiệu rất cao của phản ứng nhưng kỹ thuật quá phức tạp
khó áp dụng được trong điều kiện nước ta(6,12). Có tác giả trình bày
phương pháp rất đơn giản, nhanh chóng nhưng lại chưa đánh giá được độ nhạy cảm
của phản ứng trên huyết thanh BN mắc DXH(4,13,17). Do đó, sau khi xây
dựng thành công kỹ thuật RT/PCR ở Labo Arbovirút - Viện Pasteur Tp.HCM năm 1995,
chúng tôi tiến hành việc lượng giá kỹ thuật RT/PCR trên silica và semi-nested
PCR với các primer đặc hiệu cho virút DEN của Lanciotti trong chẩn đoán bệnh DXH
ở miền nam Việt nam cũng như trong tìm hiểu sinh bệnh học của DXH.
Mặt khác, trong sinh bệnh học DEN, phản ứng giữa kháng thể
(KT) DEN tồn lưu và tế bào T là nội dung của giả thuyết miễn dịch tăng cường, đã
giải thích tái nhiễm thường gây ra bệnh nặng hơn sơ nhiễm. Theo giả thuyết này,
các KT không trung hòa tồn lưu từ lần bị nhiễm DEN trước đó đã tạo thuận lợi cho
virút xâm nhập vào tế bào đơn nhân và đại thực bào mang receptor Fc. Ðiều này
làm tăng số lượng tế bào mang kháng nguyên (KN) hoạt hóa các tế bào T nhớ, dẫn
đến sự phóng thích các hóa chất trung gian gây thất thoát huyết tương và làm
tăng độ nặng của bệnh(11). Nghiên cứu này có mục đích tìm hiểu mối
liên quan giữa đáp ứng KT và virút trong sinh bệnh học của DEN: Có phải có týp
virút DEN nào đó thường gây ra bệnh nặng hơn so với những týp khác Có phải đáp
ứng KT kiểu tái nhiễm có liên quan đến độ nặng của bệnh
1. Ðối tượng nghiên cứu: là bệnh nhi (BN) được
chẩn đoán lâm sàng là DXH theo tiêu chuẩn của Tổ chức Y tế thế giới, điều trị
tại Khoa Sốt xuất huyết bệnh viện Nhi Ðồng 1 (tháng 5 - 8/1995) và Nhi Ðồng 2
(tháng 6 - 11/ 1996).
2. Cách lấy mẫu: Các mẫu máu cuả BN được lấy liên tiếp hàng ngày
từ lúc nhập viện đến khi xuất viện, trung bình 1 BN lấy được 5 mẫu máu. Máu toàn
phần được chuyển ngay trong lạnh đến labo Arbovirút viện Pasteur Tp.HCM. Tại
đây, máu được quay ly tâm 2500 vòng/phút - 20 phút ở 4oC, tách lấy
huyết thanh, chia vào nhiều ống nghiệm nhỏ và cất -70oC cho tới khi
làm xét nghiệm.
3. Phương pháp:
3.1. Chẩn đoán huyết thanh học:
Phản ứng ngăn ngưng kết hồng cầu (HI) và phản ứng miễn dịch
men thu bắt IgM (MAC-ELISA) được tiến hành theo Clarke và Casal(2)
và Kuno(15).
3.2. Phân lập virút trên nuôi tế bào muỗi dòng C6/36:
Huyết thanh BN mắc DXH được cấy vào nuôi tế bào Aedes
albopictus dòng C6/36. Sau 7 ngày, tiến hành định loại virút bằng phản ứng
miễn dịch huỳnh quang trực tiếp (DFA) dùng IgG kháng flavivirút gắn fluorescein
isothiocyanate và gián tiếp (IFA) dùng các kháng thể đơn giòng Dengue-1 Hawaii
15F3-1-15 và D2-1F1-3, Dengue-2 NGC 3H5-1-21, Dengue-3 H87 5D4-11-24 và Dengue-4
H241 1H10-6-7 do Trung tâm phòng chống dịch Colorado, Hoa Kỳ cung cấp.
3.3. RT/PCR trên silica: Tiến hành toàn bộ phản ứng
trong 1 tube duy nhất.
3.3.1 Chiết xuất ARN: Từ 10 ml huyết thanh BN, ARN của virút được chiết
xuất theo phương pháp Boom, HT được ly giải trong dung dịch L6 (chứa Guanidine
isothiocyanate và Triton X-100) với sự hiện diện của silica. Sau đó, rửa cặn
silica lần lượt với dung dịch L2 (chứa Guanidine isothiocyanate), ethanol 70% và
dung dịch đệm RT lạnh.
Trình tự gen của các primer
oligonucleotide tổng hợp
Primers
Trình tự gen
Chiều dài của sản phẩm PCR (bp)
D1(+)
TCAATATGCTGAAACGCGCGAGAAACCG
D1 - D2 = 511 bp
D2(-)
TTGCACCAACAGTCAATGTCTTCAGGTTC
TS1(-)
CGTCTCAGTGATCCGGGGG
D1 - TS1 = 482 bp
TS2(-)
CGCCACAAGGGCCATGAACAG
D1 - TS2 = 119 bp
TS3(-)
TAACATCATCATGAGACAGAGC
D1 - TS3 = 290 bp
TS4(-)
CTCTGTTGTCTTAAACAAGAGA
D1 - TS4 = 392 bp
D1, D2:
primers dùng chung cho cả 4 týp dengue.
TS1, TS2,
TS3, TS4: primer đặc hiệu riêng cho từng týp huyết thanh dengue.
3.3.2. Tổng hợp ADN bổ sung (cADN): Các đoạn mồi
(primer) oligonucleotide được tổng hợp tại Unité de Chimie Organique của Viện
Pasteur Paris. Primer D2 được bổ sung cho trình tự gen chung của cả 4 týp huyết
thanh dengue. Sợi cADN đầu tiên có được bằng cách sao chép ngược
(reverse transcriptase=RT) ARN virút với 250 nmole primer D2 trong dd đệm RTS
10X, chứa 10 đơn vị RNasin (Promega), 250 mM
dNTP và 6 đơn vị men sao chép ngược của virút gây u tủy ở chim (Promega) (AMV
Rtase = avian myeloblastosis virus reverse transcriptase). Phản ứng này được ủ 1
giờ ở 42C.
3.3.3 Khuếch đại cADN bằng phản ứng PCR.
Sản phẩm cADN được cho vào 50 ml là thể tích cuối cùng chứa các dung dịch đệm Taq 10X (Gibco
BRL), 25 mM MgCl2 (Gibco BRL), 5 mM dNTP, 50 pmoles primer D1, 50 pmoles primer
D2 và 2 đơn vị men Thermus aquaticus (Taq) polymerase (Gibco BRL). Việc
khuếch đại được thực hiện trong máy Crocodile III theo chương trình 21 (gồm 1
chu kỳ biến tính = denaturation ở 94C - 3 phút, tiếp theo là 35 chu kỳ (biến tính = denaturation ở 94C
- 30 giây, bắt cặp = annealing ở 53C -
90 giây và kéo dài = elongation ở 72C -
60 giây) và ở chu kỳ cuối cùng, mẫu được duy trì ở 72C - 10 phút.
3.4. Ðịnh týp virút DEN bằng phản ứng "semi-nested-PCR"
với các primers nucleotide đặc hiệu của Lanciotti.
4 ml sản phẩm
PCR pha loãng 1:100 được cho vào 50 ml
là thể tích cuối cùng của hỗn hợp khuếch đại (tương tự như trên) chỉ thay primer
D2 bằng 4 primers (TS1, TS2, TS3 và TS4) đặc hiệu riêng cho từng týp huyết thanh
dengue. Sự khuếch đại được tiến hành trong máy Crocodile III theo chương trình
22 (gồm 1 chu kỳ biến tính = denaturation ở 94C
- 5 phút, tiếp theo là 25 chu kỳ (biến tính = denaturation ở 94C
- 30 giây, bắt cặp = annealing ở 55C - 1
phút và kéo dài = elongation ở 72C - 2
phút) và ở chu kỳ cuối cùng, mẫu được duy trì ở 72C - 10 phút.
Ðiện di sản phẩm PCR lần 2 trên thạch 1,5 - 2 % trong
TBE có chứa ethidium bromide 20 - 30 phút ở 120 volt và định týp virút dengue
dựa trên kích thước các dải ADN theo từng đôi base.
Ngày nói trong nghiên cứu được tính từ ngày BN bắt đầu sốt.
Chỉ những BN đã được xác định bằng virút học hoặc huyết thanh học(8)
mới được xếp vào nhóm nghiên cứu và chỉ tính thời gian nhiễm virút huyết trong
những ca có RT-PCR dương tính.
- Phân tích so sánh các kết quả dựa trên các thử nghiệm thống
kê c2-test và F-test với
ngưỡng giá trị là 5%.
Từ tháng 5-8/1995 và tháng 6-11/1996, trong 110 BN được lựa
chọn đã có 99 BN (90%) được chẩn đoán xác định nhiễm DEN bằng virút học và/hoặc
huyết thanh học. Ðộ nặng nhẹ về lâm sàng cuả các BN này được ghi trong bảng 1,
phần lớn BN có độ tuổi nằm trong khoảng 5-9 tuổi (53%), kế đó là lứa tuổi 10-14
(27%) và 0-4 (15%). BN nam (66%) nhiều hơn nữ (34%).
Bảng 1: Chẩn đoán lâm sàng, tuổi và giới tính của các BN
là đối tượng nghiên cứu
Chẩn đoán ÐXH
Số BN
Tuổi trung bình, năm
Giới tính (% nam)
Nhiễm siêu vi
11
7,1 (1-10)
54
độ I
3
6,0 (5-7)
33
độ II
36
8,3 (2-15)
53
độ III
7,8 (0,66-15)
66
độ IV
7
7,3 (4-11)
57
Bảng 2: Tỷ lệ phân lập virút và
RT-PCR dương tính cuả các BN bị sơ, tái nhiễm
Huyết thanh học
Số phân lập virút dương tính (%)
Số RT-PCR dương tính (%)
Sơ nhiễm
4 (20)
14 (70)
Tái nhiễm
5 (6,3)
27 (34,2)
Cộng
9 (9,1)
41 (41,4)
Bảng 3: So sánh khả năng phát hiện bệnh DXH của RT-PCR và
Mac-ELISA.
Ngày sốt
Số HT thử nghiệm
Mac-ELISA (+)
RT-PCR (+)
2
1
0
2 (29%)
6 (86%)
4
24
10 (42%)
17 (71%)
5
51
22 (43%)
6
50
28 (56%)
6 (12%)
31 (62%)
2 (4%)
8
48
32 (67%)
1 (2%)
9
43
27 (63%)
010
32
24 (75%)
7 (100%)
Kết quả phân lập virút và RT-PCR được trình bày trong bảng 2.
Ở 9 BN tìm ra virút thì đồng thời cũng có RT-PCR dương tính.
Hơn nữa, RT-PCR còn phát hiện thêm 32 ca mà phân lập virút cho kết quả âm tính.
Khả năng phát hiện virút DEN bằng RT-PCR cao hơn phân lập virút khá nhiều, 41 ca
RT-PCR (+) so với 9 chủng virút DEN được tìm ra. Kết quả này một lần nữa xác
nhận RT-PCR có độ nhạy cảm cao trong chẩn đoán nhanh và sớm bệnh DXH (c2-test, p = 0,0000002)(19). Ngoài ra,
trong nghiên cứu này còn thấy RT-PCR phát hiện virút DEN ở những BN bị sơ nhiễm
cao hơn ca tái nhiễm (c2-test,
p = 0,003) trong khi đó với kỹ thuật phân lập virút đã không tìm thấy sự khác
biệt rõ rệt này (F-test, p = 0,07).
Kết quả cho thấy độ nhạy cảm rất cao của RT-PCR trong việc
phát hiện bệnh DXH trong vòng 4-5 ngày sau sốt. Ngược lại, với những mẫu huyết
thanh lấy sau ngày sốt thứ 5 thì Mac-ELISA cho tỷ lệ dương tính hơn hẳn. Ðiều
này càng nêu bật lên ưu điểm của RT-PCR trong chẩn đoán sớm bệnh DXH so với các
phương pháp chẩn đoán khác.
Các týp virút gây bệnh của 41 BN phát hiện bằng RT-PCR được
trình bày trong bảng 4. Trong 1995, mẫu lấy ở BV Nhi Ðồng I chủ yếu tập trung
vào các BN có bệnh cảnh lâm sàng nặng, thường kèm sốc; vì thế chúng tôi chỉ so
sánh số liệu cuả các mẫu lấy ở BV Nhi Ðồng 2, 1996. Về vai trò của các týp DEN
gây ra các bệnh cảnh lâm sàng của DXH, chúng tôi không tìm thấy mối tương quan
có ý nghĩa thống kê giữa týp virút và độ nặng nhẹ của bệnh (c2, P = 0,6) (Bảng 4), mặc dù tại bệnh viện
Nhi Ðồng 2, DEN-2 dường như gây ra sốc nhiều hơn DEN-1 và DEN-3.
Thời gian nhiễm virút huyết được phát hiện dài nhất là 9 ngày
chỉ quan sát được trong 1 BN duy nhất bị nhiễm DEN-3. Trong khi đó, 90% BN
(37/41) có thời gian nhiễm virút huyết kéo dài từ 4-6 ngày và thời gian nhiễm
virút huyết trung bình của các ca nghiên cứu là khoảng 5 ngày.
Các số liệu trong bảng 6 cho thấy không có mối liên hệ rõ rệt
giữa thời gian nhiễm virút huyết trung bình với độ nặng của bệnh đối với bất kỳ
týp virút DEN nào (F-test, p = 0,45).
Mối
liên quan giữa thời gian nhiễm virút huyết trung bình, tình trạng sơ tái nhiễm
cuả BN và týp virút được trình bày trong bảng 7.
Ở những BN bị tái nhiễm, thời gian nhiễm virút huyết trung
bình của cả 3 týp DEN hơi ngắn hơn so với các BN bị sơ nhiễm, tuy nhiên sự khác
biệt này không có ý nghĩa thống kê.
Hai phương pháp chẩn đoán bệnh DXH trong phòng thí nghiệm
đáng tin cậy là phản ứng huyết thanh học và phân lập virút. Tuy nhiên, việc phân
lập virút trên nuôi tế bào đòi hỏi thời gian ít nhất là 1 tuần và các phản ứng
huyết thanh học chỉ được tiến hành sau khi có sự gia tăng hiệu giá kháng thể. Vì
thế, các phương pháp này cho đến nay không giúp ích gì nhiều cho các nhà lâm
sàng. Nhiều nhóm nghiên cứu DEN đã nhất trí về khả năng chẩn đoán nhanh bệnh DXH
của phản ứng RT/PCR trên các mẫu HT BN mắc DXH với độ nhạy cảm là 75%(6)
và 54%(12) và độ đặc hiệu là 100%(4,6,12,13). Do đó kết
quả đạt được trong nghiên cứu này hoàn toàn phù hợp với các nghiên cứu trước
đây.
Kỹ
thuật chiết xuất ARN virút dựa trên Guanidine isothiocyanate và silica được tác
giả Boom triển khai năm 1990(1) đã giúp rút ngắn được thời gian thử
nghiệm. Ðồng thời, các cặp primer đặc hiệu cho nhóm virút DEN và cho từng týp
virút DEN của Lanciotti(13)
chứng tỏ có độ đặc hiệu rất cao (93% - 100% tùy theo týp virút DEN). Do đó,
trong điều kiện nước ta, việc ứng dụng hai kỹ thuật trên để chẩn đoán nhanh bệnh
DXH là rất cần thiết. Hơn nữa, RT/PCR có giá trị lớn trong chẩn đoán nhanh các
ca DXH nặng, khi lượng virút đã giảm nhiều trong máu nên phân lập virút phần lớn
sẽ âm tính. Sự nhanh chóng của thử nghiệm RT/PCR trên silica (cho phép định týp
virút sau 10 giờ và chỉ cần lượng huyết thanh rất ít khoảng 10 l) cho thấy tính
ưu việt của kỹ thuật này so với phương pháp phân lập virút dùng nuôi tế bào. Mặt
khác, kỹ thuật RT/PCR trên silica phát hiện virút DEN từ huyết thanh BN, trong
4-5 ngày đầu khởi bệnh, nhạy gấp 10 lần so với kỹ thuật nuôi tế bào, phù hợp với
kết quả của Deubel(6), trong những mẫu mà virút đã được chuẩn độ thì
PCR cũng nhạy gấp 20 lần hơn. Qua những kết quả sơ bộ như trên, chúng tôi có thể
kết luận rằng RT/PCR trên silica góp phần quan trọng trong việc chẩn đoán nhanh
bệnh DXH cũng như trong các nghiên cứu về sinh bệnh học bệnh sốt xuất huyết do
virút DEN gây ra.
Nhiễm virút huyết là một khía cạnh quan trọng trong dịch tễ
học của nhiễm trùng DEN nhưng chưa được khảo sát rộng rãi. Ðiều quan trọng là vì
lượng virút lưu hành trong máu BN song hành với mật độ và tiềm năng của quần thể
muỗi vectơ có ảnh hưởng đáng kể đến động lực lan truyền virút. Hơn nữa, mức độ
nhiễm virút huyết ở BN có thể liên quan đến độ nặng của bệnh(10).
Vaughn đã chứng minh rằng nhiễm virút huyết xuất hiện rất sớm trong giai đoạn
sốt, giảm nhanh khi sốt hạ và kháng thể tăng(18). Kuberski và CS đã
phân lập virút DEN-1 trong 73% BN vào ngày thứ 1 của bệnh và tỷ lệ giảm cho đến
không thể phân lập được virút sau ngày thứ 6(14). Gubler cũng ghi
nhận rằng phân lập virút dương tính ở ca sơ nhiễm thường gặp hơn ca tái nhiễm(9).
Kết quả phân lập virút của chúng tôi bị hạn chế do tùy thuộc
rất nhiều vào việc lấy mẫu ở bệnh viện. Chúng tôi có rất ít mẫu máu lấy vào ngày
thứ 3 của bệnh và đa số mẫu đầu tiên đều rơi vào ngày thứ 4 và thứ 5 của bệnh.
Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã sử dụng kỹ thuật RT-PCR để theo dõi thời gian
nhiễm virút huyết của DEN. Thời gian nhiễm virút huyết điển hình của các BN ở
đây là 4-5 ngày, đã phù hợp với các nghiên cứu trước đây(9,18). Tương
tự như Gubler, Kuberski và Vaughn, số liệu của chúng tôi cũng cho thấy không có
sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giưã thời gian nhiễm virút huyết ở BN sơ nhiễm
và tái nhiễm. Thời gian nhiễm virút huyết trung bình của cả 3 týp DEN cũng gần
giống nhau, hơi ngắn hơn ở BN nhiễm DEN-2 (4,6 ngày) và như nhau với DEN-1 và
DEN-3 (5,2 ngày). Thời gian nhiễm virút trung bình của 41 BN là 5 ngày.
Có tác giả cho rằng có vài týp virút như DEN-2 và DEN-3 dường
như đã gây ra bệnh nặng hơn. Tuy nhiên ở Indonesia, Gubler đã không thể chứng
minh mối liên quan giữa týp virút với độ nặng nhẹ của bệnh và chúng tôi cũng tìm
thấy kết quả tương tự trong nghiên cứu này. Khi các BN bị nhiễm với từng týp
virút riêng biệt, chúng tôi đã không thấy có sự khác nhau đáng kể nào trong thời
gian nhiễm virút huyết giữa các BN bị DXH nhẹ và nặng.
Tuy nhiên, các nhận xét trên đây mới chỉ là bước đầu dựa trên
99 ca nghiên cứu. Chúng tôi hy vọng trong tương lai không xa với điều kiện vật
chất kỹ thuật thuận lợi hơn sẽ cho phép chúng tôi tiếp tục nghiên cứu với số ca
nhiều hơn và định lượng virút gây nhiễm để có thể rút ra những kết luận mang
tính thuyết phục hơn.
1.
Boom, R., Sol, C.J.A., Salimans,
M.M.M., Jansen, C.L., Wertheim-van-Dillen, P.M.E., Van der Noordaa, J. (1990):
Rapid and simple method for purification of nucleic acids. J. Clin. Microbiol.,
28: 495-503.
2.
Clarke, D., Casals, J. (1958):
Techniques for hemagglutination and hemagglutination-inhibition with
arthropod-borne viruses. Am. J. Trop. Med. and Hyg., 7:561-573.
3.
Chomczynski, P. and Sacchi, N.
(1987): Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium
thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal. Biochem., 162: 156-159.
4.
Chungue, E., Roche, C., Lefervre,
M.F., Barbazan, P., Chanteau, S. (1993): Ultra-Rapid, Simple, Sensitive, and
Economical Silica Method for Extraction of Dengue Viral RNA From Clinical
Specimens and Mosquitoes by Reverse Transcriptase-PCR. J. Med. Virol., 40:
142-145.
5.
Cohen S., Halstead S.B. (1966):
Shock associated with dengue infection I. Clinical and physiologic
manifestations of dengue hemorrhagic fever in Thailand, 1964. J. Pediatr.,
68: 448-456.
6.
Deubel, V., Laille, M., Hugnot,
J.P., Chungue, E., Guesdon, J.L., Drouet, M.T., Bassot, S. and Chevrier (1990):
Identification of dengue sequences by genomic amplification: rapid diagnosis of
dengue virus serotypes in peripheral blood. J. Virol. Methods, 30: 41-54.
7.
Do Quang Ha, Nguyễn Kim Tiến,
Dinh Tuyết Hoa, Vu Thi Que Huong, Nguyen Trong Lan, Vo Dinh Tham, Nguyen Thi
Hong (1989): Epidemic DHF in South Vietnam, 1987. Dengue Bulletin, WHO,
14: 46-57.
8.
Do Quang Ha, Vu Thi Que Huong,
Huynh Thi Kim Loan, Pham Kim Sac (1996): Dengue Haemorrhagic Fever in South
Vietnam, 1991-1994. Dengue Bulletin, 20: 55-61.
9.
Gubler D.J., Suharyono W., Tan
R., Abidin, M., Sie, A. (1981): Viraemia in patients with naturally acquired
dengue infection. Bull WHO, 59: 623-630.
10.
Gubler D.J., et al. (1978):
Epidemiologic, clinical and virologic observations on dengue in the Kingdom of
Tonga. Am. J. Trop. Med. Hyg. 27: 581-589.
11.
Halstead S.B., ORourke E.J.
(1977): Dengue viruses and mononuclear phagocytes. I. Infection enhancement by
non-neutralising antibody. J. Exp. Med., 146:201-217.
12.
Henchal, E.A., Polo, S.L., Vorndam,
A.V., Yaemsiri, C., Innis, B.L., Hoke, C.H. (1991): Sensitivity and specificity
of a universal primer set for the rapid diagnosis of dengue virus infections by
polymerase chain reaction and nucleic acid hybridization. Am. J. Trop. Med.
Hyg., 45: 418-428.
13.
Lanciotti, R.S., Calisher, C.H.,
Gubler, D.J., Chang, G.J., Vorndam, A.V. (1992): Rapid detection and typing of
dengue viruses from clinical samples by using reverse transcriptase-polymerase
chain reaction. J. Clin. Microbiol., 30: 545-551.
14.
Kuberski T., Rosen L., Reed D.,
Nataika J. (1977): Clinical and laboratory observations on patients with primary
and secondary dengue type 1 infections with hemorrhagic manifestations in Fiji.
Am. J. Trop. Med. Hyg., 26: 775-783.
15.
Kuno, G., Gomez, I., Gubler, D.J.
(1987): Detecting artificial anti-dengue IgM immune complexes using an
enzyme-linked immuno sorbent assay. Am. J. Trop. Med. Hyg., 36: 153-159.
16.
Monath T.P. (1994): Dengue: the
risk to developed and developing countries. Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
91: 2395.
17.
Morita. K., Maemoto, T., Honda, S.
Onishi, K., Murata, M., Tanaka, M., Igarashi, A. (1994): Rapid Detection of
Virus Genome From Imported Dengue Fever and Dengue Hemorrhagic Fever Patients by
Direct Polymerase Chain Reaction. J. Med. Virol., 44: 54-58.
18.
Vaughn D.W., Green S.,
Kalayanarooj S., Innis B.L., Nimmannitya S., Suntayakorn S., Rothman A.L., Ennis
F.A., Nisalak A. (1997): Dengue in the Early Febrile Phase: Viremia and Antibody
Responses. The Journal of Infectious Diseases, 176: 322-330.
19.
Vu Thi Que Huong, Huynh Thi Kim
Loan, Do Quang Ha, Nguyen Trong Lan, Nguyen Thanh Hùng, Vincent Deubel (1997):
Detection of dengue virus by Reverse Transcription / Polymerase Chain Reaction.
Med J HCM city , 2: 2-4 (in vietnamese).
20.
World Health Organization
(1986): Dengue haemorrhagic fever: diagnostic, treatment and control. Geneva:
WHO, 1-58.
HỆ THỐNG PHẦN MỀM QUẢN LÝ BỆNH VIỆN
HT MEDSOFT
BS PHAN XUÂN TRUNG
"Lãng tử giữa thương trường"
WHO
definition of HEALTH:
Health is a state of complete physical, mental and social well-being and
not merely the absence of disease or infirmity.
ASP.NET - Unicode - Web based
HIS - RIS/PACS - LIS - DIS - HL7 - DICOM - IDC10
E-prescribing
E-Patient-Record
QUẢN LÝ CHUYÊN MÔN
Quản lý viện phí
Toa thuốc thông minh
Chẩn đoán hình ảnh
Quản lý xét nghiệm
Bệnh án điện tử
Quản lý dược bệnh viện
Quản lý quầy thuốc tây
QUẢN LÝ HÀNH CHÁNH
QL nhân sự - tiền lương
QL vật tư - trang thiết bị
QL tài chánh - kế toán
Báo cáo - giám sát
Website YKHOANET.COM
khai trương ngày 24/12/2000 - Năm thứ Tư.
Website YKHOANET - Y KHOA VIỆT NAM
www.ykhoanet.com và
www.ykhoa.net
In trang này
Phản
hồi
Web Master: Dr PHAN
XUAN TRUNG -
drxuantrung@ykhoa.net

markdown:
|
|
![]()
|
|![]()
|
|
|
|
|
|
Primers
|
|
Trình tự gen
|
|
Chiều dài của sản phẩm PCR (bp)
|
|
D1(+)
|
|
TCAATATGCTGAAACGCGCGAGAAACCG
|
|
D1 - D2 = 511 bp
|
|
D2(-)
|
|
TTGCACCAACAGTCAATGTCTTCAGGTTC
|
|
|
|
TS1(-)
|
|
CGTCTCAGTGATCCGGGGG
|
|
D1 - TS1 = 482 bp
|
|
TS2(-)
|
|
CGCCACAAGGGCCATGAACAG
|
|
D1 - TS2 = 119 bp
|
|
TS3(-)
|
|
TAACATCATCATGAGACAGAGC
|
|
D1 - TS3 = 290 bp
|
|
TS4(-)
|
|
CTCTGTTGTCTTAAACAAGAGA
|
|
D1 - TS4 = 392 bp
D1, D2: primers dùng chung cho cả 4 týp dengue.
TS1, TS2, TS3, TS4: primer đặc hiệu riêng cho từng týp huyết thanh dengue.
3.3.2. Tổng hợp ADN bổ sung (cADN): Các đoạn mồi
(primer) oligonucleotide được tổng hợp tại Unité de Chimie Organique của Viện
Pasteur Paris. Primer D2 được bổ sung cho trình tự gen chung của cả 4 týp huyết
thanh dengue. Sợi cADN đầu tiên có được bằng cách sao chép ngược
(reverse transcriptase=RT) ARN virút với 250 nmole primer D2 trong dd đệm RTS 10X, chứa 10 đơn vị RNasin (Promega), 250 mM dNTP và 6 đơn vị men sao chép ngược của virút gây u tủy ở chim (Promega) (AMV Rtase = avian myeloblastosis virus reverse transcriptase). Phản ứng này được ủ 1 giờ ở 42C.
3.3.3 Khuếch đại cADN bằng phản ứng PCR.
Sản phẩm cADN được cho vào 50 ml là thể tích cuối cùng chứa các dung dịch đệm Taq 10X (Gibco
BRL), 25 mM MgCl2 (Gibco BRL), 5 mM dNTP, 50 pmoles primer D1, 50 pmoles primer
D2 và 2 đơn vị men
*Thermus aquaticus (Taq)* polymerase (Gibco BRL). Việc
khuếch đại được thực hiện trong máy Crocodile III theo chương trình 21 (gồm 1
chu kỳ biến tính = denaturation ở 94C - 3 phút, tiếp theo là 35 chu kỳ (biến tính = denaturation ở 94C
- 30 giây, bắt cặp = annealing ở 53C -
90 giây và kéo dài = elongation ở 72C -
60 giây) và ở chu kỳ cuối cùng, mẫu được duy trì ở 72C - 10 phút. *3.4. Ðịnh týp virút DEN bằng phản ứng "semi-nested-PCR"
với các primers nucleotide đặc hiệu của Lanciotti. *
4 ml sản phẩm PCR pha loãng 1:100 được cho vào 50 ml là thể tích cuối cùng của hỗn hợp khuếch đại (tương tự như trên) chỉ thay primer D2 bằng 4 primers (TS1, TS2, TS3 và TS4) đặc hiệu riêng cho từng týp huyết thanh dengue. Sự khuếch đại được tiến hành trong máy Crocodile III theo chương trình 22 (gồm 1 chu kỳ biến tính = denaturation ở 94C - 5 phút, tiếp theo là 25 chu kỳ (biến tính = denaturation ở 94C - 30 giây, bắt cặp = annealing ở 55C - 1 phút và kéo dài = elongation ở 72C - 2 phút) và ở chu kỳ cuối cùng, mẫu được duy trì ở 72C - 10 phút.
Ðiện di sản phẩm PCR lần 2 trên thạch 1,5 - 2 % trong TBE có chứa ethidium bromide 20 - 30 phút ở 120 volt và định týp virút dengue dựa trên kích thước các dải ADN theo từng đôi base.
Ngày nói trong nghiên cứu được tính từ ngày BN bắt đầu sốt.
Chỉ những BN đã được xác định bằng virút học hoặc huyết thanh học
(8)
mới được xếp vào nhóm nghiên cứu và chỉ tính thời gian nhiễm virút huyết trong
những ca có RT-PCR dương tính.
- Phân tích so sánh các kết quả dựa trên các thử nghiệm thống
kê c
2-test và F-test với
ngưỡng giá trị là 5%.
Từ tháng 5-8/1995 và tháng 6-11/1996, trong 110 BN được lựa chọn đã có 99 BN (90%) được chẩn đoán xác định nhiễm DEN bằng virút học và/hoặc huyết thanh học. Ðộ nặng nhẹ về lâm sàng cuả các BN này được ghi trong bảng 1, phần lớn BN có độ tuổi nằm trong khoảng 5-9 tuổi (53%), kế đó là lứa tuổi 10-14 (27%) và 0-4 (15%). BN nam (66%) nhiều hơn nữ (34%).
Bảng 1: Chẩn đoán lâm sàng, tuổi và giới tính của các BN là đối tượng nghiên cứu
|
|
Chẩn đoán ÐXH
|
|
Số BN
|
|
Tuổi trung bình, năm
|
|
Giới tính (% nam)
|
|
Nhiễm siêu vi
|
|
11
|
|
7,1 (1-10)
|
|
54
|
|
độ I
|
|
3
|
|
6,0 (5-7)
|
|
33
|
|
độ II
|
|
36
|
|
8,3 (2-15)
|
|
53
|
|
độ III
|
|
53
|
|
7,8 (0,66-15)
|
|
66
|
|
độ IV
|
|
7
|
|
7,3 (4-11)
|
|
57
Bảng 2: Tỷ lệ phân lập virút và RT-PCR dương tính cuả các BN bị sơ, tái nhiễm
|
|
Huyết thanh học
|
|
Số phân lập virút dương tính (%)
|
|
Số RT-PCR dương tính (%)
|
|
Sơ nhiễm
|
|
4 (20)
|
|
14 (70)
|
|
Tái nhiễm
|
|
5 (6,3)
|
|
27 (34,2)
|
|
Cộng
|
|
9 (9,1)
|
|
41 (41,4)
Bảng 3: So sánh khả năng phát hiện bệnh DXH của RT-PCR và Mac-ELISA.
|
|
Ngày sốt
|
|
Số HT thử nghiệm
|
|
Mac-ELISA (+)
|
|
RT-PCR (+)
|
|
2
|
|
1
|
|
1
|
|
0
|
|
3
|
|
7
|
|
2 (29%)
|
|
|
|
4
|
|
24
|
|
10 (42%)
|
|
|
||
|
51
|
||
|
|
|
6
|
|
50
|
||
|
6 (12%)
|
|
7
|
|
50
|
||
|
2 (4%)
|
|
8
|
|
48
|
||
|
1 (2%)
|
|
9
|
|
43
|
||
|
1 (2%)
|
|
010
|
|
32
|
||
|
0
|
|
11
|
|
7
|
||
|
0
Kết quả phân lập virút và RT-PCR được trình bày trong bảng 2.
Ở 9 BN tìm ra virút thì đồng thời cũng có RT-PCR dương tính.
Hơn nữa, RT-PCR còn phát hiện thêm 32 ca mà phân lập virút cho kết quả âm tính.
Khả năng phát hiện virút DEN bằng RT-PCR cao hơn phân lập virút khá nhiều, 41 ca
RT-PCR (+) so với 9 chủng virút DEN được tìm ra. Kết quả này một lần nữa xác
nhận RT-PCR có độ nhạy cảm cao trong chẩn đoán nhanh và sớm bệnh DXH (c
2-test, p = 0,0000002) (19). Ngoài ra,
trong nghiên cứu này còn thấy RT-PCR phát hiện virút DEN ở những BN bị sơ nhiễm
cao hơn ca tái nhiễm (c 2-test,
p = 0,003) trong khi đó với kỹ thuật phân lập virút đã không tìm thấy sự khác
biệt rõ rệt này (F-test, p = 0,07).
Kết quả cho thấy độ nhạy cảm rất cao của RT-PCR trong việc phát hiện bệnh DXH trong vòng 4-5 ngày sau sốt. Ngược lại, với những mẫu huyết thanh lấy sau ngày sốt thứ 5 thì Mac-ELISA cho tỷ lệ dương tính hơn hẳn. Ðiều này càng nêu bật lên ưu điểm của RT-PCR trong chẩn đoán sớm bệnh DXH so với các phương pháp chẩn đoán khác.
Các týp virút gây bệnh của 41 BN phát hiện bằng RT-PCR được trình bày trong bảng 4. Trong 1995, mẫu lấy ở BV Nhi Ðồng I chủ yếu tập trung vào các BN có bệnh cảnh lâm sàng nặng, thường kèm sốc; vì thế chúng tôi chỉ so sánh số liệu cuả các mẫu lấy ở BV Nhi Ðồng 2, 1996. Về vai trò của các týp DEN gây ra các bệnh cảnh lâm sàng của DXH, chúng tôi không tìm thấy mối tương quan có ý nghĩa thống kê giữa týp virút và độ nặng nhẹ của bệnh (c2, P = 0,6) (Bảng 4), mặc dù tại bệnh viện Nhi Ðồng 2, DEN-2 dường như gây ra sốc nhiều hơn DEN-1 và DEN-3.
Thời gian nhiễm virút huyết được phát hiện dài nhất là 9 ngày chỉ quan sát được trong 1 BN duy nhất bị nhiễm DEN-3. Trong khi đó, 90% BN (37/41) có thời gian nhiễm virút huyết kéo dài từ 4-6 ngày và thời gian nhiễm virút huyết trung bình của các ca nghiên cứu là khoảng 5 ngày.
Các số liệu trong bảng 6 cho thấy không có mối liên hệ rõ rệt giữa thời gian nhiễm virút huyết trung bình với độ nặng của bệnh đối với bất kỳ týp virút DEN nào (F-test, p = 0,45).
Mối
liên quan giữa thời gian nhiễm virút huyết trung bình, tình trạng sơ tái nhiễm
cuả BN và týp virút được trình bày trong bảng 7.
Ở những BN bị tái nhiễm, thời gian nhiễm virút huyết trung bình của cả 3 týp DEN hơi ngắn hơn so với các BN bị sơ nhiễm, tuy nhiên sự khác biệt này không có ý nghĩa thống kê.
Hai phương pháp chẩn đoán bệnh DXH trong phòng thí nghiệm
đáng tin cậy là phản ứng huyết thanh học và phân lập virút. Tuy nhiên, việc phân
lập virút trên nuôi tế bào đòi hỏi thời gian ít nhất là 1 tuần và các phản ứng
huyết thanh học chỉ được tiến hành sau khi có sự gia tăng hiệu giá kháng thể. Vì
thế, các phương pháp này cho đến nay không giúp ích gì nhiều cho các nhà lâm
sàng. Nhiều nhóm nghiên cứu DEN đã nhất trí về khả năng chẩn đoán nhanh bệnh DXH
của phản ứng RT/PCR trên các mẫu HT BN mắc DXH với độ nhạy cảm là 75%
(6)
và 54% (12) và độ đặc hiệu là 100% (4,6,12,13). Do đó kết
quả đạt được trong nghiên cứu này hoàn toàn phù hợp với các nghiên cứu trước
đây.
Kỹ
thuật chiết xuất ARN virút dựa trên Guanidine isothiocyanate và silica được tác
giả Boom triển khai năm 1990
(1) đã giúp rút ngắn được thời gian thử
nghiệm. Ðồng thời, các cặp primer đặc hiệu cho nhóm virút DEN và cho từng týp
virút DEN của Lanciotti (13)
chứng tỏ có độ đặc hiệu rất cao (93% - 100% tùy theo týp virút DEN). Do đó,
trong điều kiện nước ta, việc ứng dụng hai kỹ thuật trên để chẩn đoán nhanh bệnh
DXH là rất cần thiết. Hơn nữa, RT/PCR có giá trị lớn trong chẩn đoán nhanh các
ca DXH nặng, khi lượng virút đã giảm nhiều trong máu nên phân lập virút phần lớn
sẽ âm tính. Sự nhanh chóng của thử nghiệm RT/PCR trên silica (cho phép định týp
virút sau 10 giờ và chỉ cần lượng huyết thanh rất ít khoảng 10 l) cho thấy tính
ưu việt của kỹ thuật này so với phương pháp phân lập virút dùng nuôi tế bào. Mặt
khác, kỹ thuật RT/PCR trên silica phát hiện virút DEN từ huyết thanh BN, trong
4-5 ngày đầu khởi bệnh, nhạy gấp 10 lần so với kỹ thuật nuôi tế bào, phù hợp với
kết quả của Deubel (6), trong những mẫu mà virút đã được chuẩn độ thì
PCR cũng nhạy gấp 20 lần hơn. Qua những kết quả sơ bộ như trên, chúng tôi có thể
kết luận rằng RT/PCR trên silica góp phần quan trọng trong việc chẩn đoán nhanh
bệnh DXH cũng như trong các nghiên cứu về sinh bệnh học bệnh sốt xuất huyết do
virút DEN gây ra.
Nhiễm virút huyết là một khía cạnh quan trọng trong dịch tễ
học của nhiễm trùng DEN nhưng chưa được khảo sát rộng rãi. Ðiều quan trọng là vì
lượng virút lưu hành trong máu BN song hành với mật độ và tiềm năng của quần thể
muỗi vectơ có ảnh hưởng đáng kể đến động lực lan truyền virút. Hơn nữa, mức độ
nhiễm virút huyết ở BN có thể liên quan đến độ nặng của bệnh
(10).
Vaughn đã chứng minh rằng nhiễm virút huyết xuất hiện rất sớm trong giai đoạn
sốt, giảm nhanh khi sốt hạ và kháng thể tăng (18). Kuberski và CS đã
phân lập virút DEN-1 trong 73% BN vào ngày thứ 1 của bệnh và tỷ lệ giảm cho đến
không thể phân lập được virút sau ngày thứ 6 (14). Gubler cũng ghi
nhận rằng phân lập virút dương tính ở ca sơ nhiễm thường gặp hơn ca tái nhiễm (9).
Kết quả phân lập virút của chúng tôi bị hạn chế do tùy thuộc
rất nhiều vào việc lấy mẫu ở bệnh viện. Chúng tôi có rất ít mẫu máu lấy vào ngày
thứ 3 của bệnh và đa số mẫu đầu tiên đều rơi vào ngày thứ 4 và thứ 5 của bệnh.
Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã sử dụng kỹ thuật RT-PCR để theo dõi thời gian
nhiễm virút huyết của DEN. Thời gian nhiễm virút huyết điển hình của các BN ở
đây là 4-5 ngày, đã phù hợp với các nghiên cứu trước đây
(9,18). Tương
tự như Gubler, Kuberski và Vaughn, số liệu của chúng tôi cũng cho thấy không có
sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giưã thời gian nhiễm virút huyết ở BN sơ nhiễm
và tái nhiễm. Thời gian nhiễm virút huyết trung bình của cả 3 týp DEN cũng gần
giống nhau, hơi ngắn hơn ở BN nhiễm DEN-2 (4,6 ngày) và như nhau với DEN-1 và
DEN-3 (5,2 ngày). Thời gian nhiễm virút trung bình của 41 BN là 5 ngày.
Có tác giả cho rằng có vài týp virút như DEN-2 và DEN-3 dường như đã gây ra bệnh nặng hơn. Tuy nhiên ở Indonesia, Gubler đã không thể chứng minh mối liên quan giữa týp virút với độ nặng nhẹ của bệnh và chúng tôi cũng tìm thấy kết quả tương tự trong nghiên cứu này. Khi các BN bị nhiễm với từng týp virút riêng biệt, chúng tôi đã không thấy có sự khác nhau đáng kể nào trong thời gian nhiễm virút huyết giữa các BN bị DXH nhẹ và nặng.
Tuy nhiên, các nhận xét trên đây mới chỉ là bước đầu dựa trên 99 ca nghiên cứu. Chúng tôi hy vọng trong tương lai không xa với điều kiện vật chất kỹ thuật thuận lợi hơn sẽ cho phép chúng tôi tiếp tục nghiên cứu với số ca nhiều hơn và định lượng virút gây nhiễm để có thể rút ra những kết luận mang tính thuyết phục hơn.
1. Boom, R., Sol, C.J.A., Salimans, M.M.M., Jansen, C.L., Wertheim-van-Dillen, P.M.E., Van der Noordaa, J. (1990): Rapid and simple method for purification of nucleic acids. J. Clin. Microbiol., 28: 495-503.
2. Clarke, D., Casals, J. (1958): Techniques for hemagglutination and hemagglutination-inhibition with arthropod-borne viruses. Am. J. Trop. Med. and Hyg., 7:561-573.
3. Chomczynski, P. and Sacchi, N. (1987): Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal. Biochem., 162: 156-159.
4. Chungue, E., Roche, C., Lefervre, M.F., Barbazan, P., Chanteau, S. (1993): Ultra-Rapid, Simple, Sensitive, and Economical Silica Method for Extraction of Dengue Viral RNA From Clinical Specimens and Mosquitoes by Reverse Transcriptase-PCR. J. Med. Virol., 40: 142-145.
*5.
*Cohen S., Halstead S.B. (1966):
Shock associated with dengue infection I. Clinical and physiologic
manifestations of dengue hemorrhagic fever in Thailand, 1964. *J. Pediatr., *
68: 448-456.
6. Deubel, V., Laille, M., Hugnot, J.P., Chungue, E., Guesdon, J.L., Drouet, M.T., Bassot, S. and Chevrier (1990): Identification of dengue sequences by genomic amplification: rapid diagnosis of dengue virus serotypes in peripheral blood. J. Virol. Methods, 30: 41-54.
*7.
*Do Quang Ha, Nguyễn Kim Tiến,
Dinh Tuyết Hoa, Vu Thi Que Huong, Nguyen Trong Lan, Vo Dinh Tham, Nguyen Thi
Hong (1989): Epidemic DHF in South Vietnam, 1987. *Dengue Bulletin, WHO, *
14: 46-57. *8.
*Do Quang Ha, Vu Thi Que Huong,
Huynh Thi Kim Loan, Pham Kim Sac (1996): Dengue Haemorrhagic Fever in South
Vietnam, 1991-1994. *Dengue Bulletin, *20: 55-61. *9.
*Gubler D.J., Suharyono W., Tan
R., Abidin, M., Sie, A. (1981): Viraemia in patients with naturally acquired
dengue infection. *Bull WHO*, 59: 623-630. *10.
*Gubler D.J., et al. (1978):
Epidemiologic, clinical and virologic observations on dengue in the Kingdom of
Tonga. *Am. J. Trop. Med. Hyg.* 27: 581-589. *11.
*Halstead S.B., ORourke E.J.
(1977): Dengue viruses and mononuclear phagocytes. I. Infection enhancement by
non-neutralising antibody. *J. Exp. Med., *146:201-217.
12. Henchal, E.A., Polo, S.L., Vorndam, A.V., Yaemsiri, C., Innis, B.L., Hoke, C.H. (1991): Sensitivity and specificity of a universal primer set for the rapid diagnosis of dengue virus infections by polymerase chain reaction and nucleic acid hybridization. Am. J. Trop. Med. Hyg., 45: 418-428.
13. Lanciotti, R.S., Calisher, C.H., Gubler, D.J., Chang, G.J., Vorndam, A.V. (1992): Rapid detection and typing of dengue viruses from clinical samples by using reverse transcriptase-polymerase chain reaction. J. Clin. Microbiol., 30: 545-551.
*14.
*Kuberski T., Rosen L., Reed D.,
Nataika J. (1977): Clinical and laboratory observations on patients with primary
and secondary dengue type 1 infections with hemorrhagic manifestations in Fiji. *
Am. J. Trop. Med. Hyg., *26: 775-783.
15. Kuno, G., Gomez, I., Gubler, D.J. (1987): Detecting artificial anti-dengue IgM immune complexes using an enzyme-linked immuno sorbent assay. Am. J. Trop. Med. Hyg., 36: 153-159.
*16.
*Monath T.P. (1994): Dengue: the
risk to developed and developing countries. *Proc. Natl. Acad. Sci. USA, *
91: 2395.
17. Morita. K., Maemoto, T., Honda, S. Onishi, K., Murata, M., Tanaka, M., Igarashi, A. (1994): Rapid Detection of Virus Genome From Imported Dengue Fever and Dengue Hemorrhagic Fever Patients by Direct Polymerase Chain Reaction. J. Med. Virol., 44: 54-58.
*18.
*Vaughn D.W., Green S.,
Kalayanarooj S., Innis B.L., Nimmannitya S., Suntayakorn S., Rothman A.L., Ennis
F.A., Nisalak A. (1997): Dengue in the Early Febrile Phase: Viremia and Antibody
Responses. *The Journal of Infectious Diseases, *176: 322-330. *19.
*Vu Thi Que Huong, Huynh Thi Kim
Loan, Do Quang Ha, Nguyen Trong Lan, Nguyen Thanh Hùng, Vincent Deubel (1997):
Detection of dengue virus by Reverse Transcription / Polymerase Chain Reaction.
*Med J HCM city *, 2: 2-4 (in vietnamese). *20.
*World Health Organization
(1986): Dengue haemorrhagic fever: diagnostic, treatment and control. *Geneva:
WHO*, 1-58.
[
HỆ THỐNG PHẦN MỀM QUẢN LÝ BỆNH VIỆN ](http://www.htmedsoft.com/)
|
|
Hệ thống phần mềm quản lý bệnh viện
YKHOA.NET 2005
Quản lý viện phí
Toa thuốc thông minh
Chẩn đoán hình ảnh
Quản lý xét nghiệm
Bệnh án điện tử
Quản lý dược bệnh viện
Quản lý quầy thuốc tây
QL nhân sự - tiền lương
QL vật tư - trang thiết bị
QL tài chánh - kế toán
Báo cáo - giám sát
|
|
Website YKHOANET.COM khai trương ngày 24/12/2000 - Năm thứ Tư.
Website YKHOANET - Y KHOA VIỆT NAM
|
|
Web Master: Dr PHAN
XUAN TRUNG -