text:
Giúp trẻ có giấc ngủ ngon
con em ít ngủ hay dậy đêm cứ 1 tiếng hay 45 phút là lại dậy khóc, phải bế đi dong và ru thì mới nín và ngủ tiếp.Em muốn hỏi có loại thuốc an thần thảo dược nào cho trẻ em uống không. Em muốn con em có giấc ngủ sâu và ngon hơn.Rất mong chờ hồi âm từ các bác sỹ và các bà mẹ gần xa.(thuy nga)
Trả lời: Nhịp thức ngủ là “nhịp điệu chìa khoá” tác động và chi phối mọi nhịp sống khác của cơ thể. Thời gian của giấc ngủ tuỳ thuộc vào tuổi tác và yêu cầu của từng cơ thể. Ở người lớn, cứ một giờ hoạt động phải bù bằng nửa giờ ngủ, ở trẻ em nhu cầu ngủ rất cao, cứ một giờ hoạt động phải bù lại bằng hai giờ ngủ, tức là gấp bốn lần người lớn. Tuổi càng nhỏ nhu cầu càng cao. Trẻ sơ sinh ngủ 20 – 22 tiếng mỗi ngày. Khi lớn lên nhu cầu ngủ giảm dần đến một tuổi chỉ còn 16 tiếng, hai tuổi còn 14 tiếng, ba tuổi còn 13 tiếng. Khi 16 tuổi chỉ còn tám tiếng giống như người lớn. Thời gian ngủ chủ yếu vào ban đêm, riêng trẻ em thời gian ngủ vào ban ngày cũng rất quan trọng.
Để giúp trẻ có một giấc ngủ tốt chúng ta cần phải lưu ý một số điểm sau đây:
1. Nên tập cho trẻ có một thói quen ngủ sớm và đi ngủ đúng vào một giờ giấc đã được quy định để tạo cho trẻ có một phản xạ nghỉ ngơi giúp trẻ ngủ dễ dàng trong bất kỳ điều kiện nào.
2. Giảm xuống tối thiểu các kích thích của ngoại cảnh cũng như nội tại lên hệ thần kinh của trẻ trong lúc ngủ, điều quan trọng nhất là phải tránh tiếng ồn và ánh sáng vì chúng sẽ làm cho giấc ngủ trẻ không sâu và dễ thức giấc. Ngoài ra cần lưu ý các kích thích khác như để trẻ đói hoặc ăn quá no, không vệ sinh thân thể, quần áo quá chật, nằm sai tư thế, nơi ngủ bẩn chật và không thông thoáng đều gây tác hại xấu trên giấc ngủ trẻ.
3. Cần hết sức tránh các chấn thương về tâm lý như làm cho trẻ bị ức chế tâm lý trước khi ngủ như doạ nạt, quát mắng, kể những chuyện gây sợ hãi như xem phim ảnh kinh dị. Trẻ có đái ỉa trong khi ngủ ta cũng nhẹ nhàng làm vệ sinh và cho trẻ ngủ lại, không la mắng trẻ.
4. Cho trẻ vui chơi, vận động cơ thể đầy đủ cũng góp phần giúp trẻ ngủ sâu hơn. Khi trẻ khó ngủ ta có thể dùng lời nói êm dịu để gây ám thị trẻ như: “Con nhắm mắt lại ngủ ngoan đi mẹ thương hoặc nhắm mắt lại ngủ giỏi đi con…” cũng sẽ giúp trẻ dễ đi vào giấc ngủ.
5. Mỗi trẻ có một nhu cầu về thời gian ngủ độ dài và độ sâu khác nhau, chúng ta cần nên tạo mọi điều kiện cho trẻ ngủ đầy đủ và thoả mãn theo nhu cầu riêng, không nên gọi trẻ thức sớm. Thông thường, khi ngủ đủ giấc trẻ sẽ tự động thức dậy không cần phải gọi.
6. Trong trường hợp trẻ có rối loạn giấc ngủ như mất ngủ liên tiếp vài đêm cần đưa trẻ đi khám bệnh, không nên dùng thuốc ngủ khi chưa có ý kiến của thầy thuốc. Có rất nhiều nguyên nhân gây ra rối loạn giấc ngủ, ở trẻ em cần lưu ý đến các rối loạn giấc ngủ có liên quan đến tình trạng thiếu dinh dưỡng thường đi kèm với tình trạng chán ăn, giảm ăn, giảm bú, nôn ói, chậm lớn, suy dinh dưỡng. Các biểu hiện rối loạn giấc ngủ thường gặp ở các trẻ này là ngủ ít, trằn trọc khó ngủ, thức giấc nhiều lần trong đêm, mơ, mớ, ác mộng, mộng du, khiếp sợ trong khi ngủ. Các rối loạn này có thể có liên quan đến tình trạng thiếu kẽm kèm theo thiếu đa chất do giảm ăn như ma giê, canxi, axít amin, vitamin nhóm B và có thể nhanh chóng được chữa khỏi khi được bổ sung kẽm và các chất dinh dưỡng thiếu hụt kể trên.
Theo chúng tôi bạn nên đưa bé đi khám để bác sĩ giúp bạn tìm được nguyên nhân khiến bé quấy khóc và ngủ không ngon giấc, từ đó sẽ có liệu pháp điều trị tận gốc căn nguyên gây mất ngủ của bé.
Chúc bạn và gia đình sức khỏe!
Bs.Thuocbietduoc

markdown:
# Giúp trẻ có giấc ngủ ngon
## con em ít ngủ hay dậy đêm cứ 1 tiếng hay 45 phút là lại dậy khóc, phải bế đi dong và ru thì mới nín và ngủ tiếp.Em muốn hỏi có loại thuốc an thần thảo dược nào cho trẻ em uống không. Em muốn con em có giấc ngủ sâu và ngon hơn.Rất mong chờ hồi âm từ các bác sỹ và các bà mẹ gần xa.(thuy nga)
** Trả lời: ** Nhịp thức ngủ là “nhịp điệu chìa khoá” tác động và chi phối mọi nhịp sống khác của cơ thể. Thời gian của giấc ngủ tuỳ thuộc vào tuổi tác và yêu cầu của từng cơ thể. Ở người lớn, cứ một giờ hoạt động phải bù bằng nửa giờ ngủ, ở trẻ em nhu cầu ngủ rất cao, cứ một giờ hoạt động phải bù lại bằng hai giờ ngủ, tức là gấp bốn lần người lớn. Tuổi càng nhỏ nhu cầu càng cao. Trẻ sơ sinh ngủ 20 – 22 tiếng mỗi ngày. Khi lớn lên nhu cầu ngủ giảm dần đến một tuổi chỉ còn 16 tiếng, hai tuổi còn 14 tiếng, ba tuổi còn 13 tiếng. Khi 16 tuổi chỉ còn tám tiếng giống như người lớn. Thời gian ngủ chủ yếu vào ban đêm, riêng trẻ em thời gian ngủ vào ban ngày cũng rất quan trọng.
**Để giúp trẻ có một giấc ngủ tốt chúng ta cần phải lưu ý một số điểm sau đây:**
1. Nên tập cho trẻ có một thói quen ngủ sớm và đi ngủ đúng vào một giờ giấc đã được quy định để tạo cho trẻ có một phản xạ nghỉ ngơi giúp trẻ ngủ dễ dàng trong bất kỳ điều kiện nào.
2. Giảm xuống tối thiểu các kích thích của ngoại cảnh cũng như nội tại lên hệ thần kinh của trẻ trong lúc ngủ, điều quan trọng nhất là phải tránh tiếng ồn và ánh sáng vì chúng sẽ làm cho giấc ngủ trẻ không sâu và dễ thức giấc. Ngoài ra cần lưu ý các kích thích khác như để trẻ đói hoặc ăn quá no, không vệ sinh thân thể, quần áo quá chật, nằm sai tư thế, nơi ngủ bẩn chật và không thông thoáng đều gây tác hại xấu trên giấc ngủ trẻ.
3. Cần hết sức tránh các chấn thương về tâm lý như làm cho trẻ bị ức chế tâm lý trước khi ngủ như doạ nạt, quát mắng, kể những chuyện gây sợ hãi như xem phim ảnh kinh dị. Trẻ có đái ỉa trong khi ngủ ta cũng nhẹ nhàng làm vệ sinh và cho trẻ ngủ lại, không la mắng trẻ.
4. Cho trẻ vui chơi, vận động cơ thể đầy đủ cũng góp phần giúp trẻ ngủ sâu hơn. Khi trẻ khó ngủ ta có thể dùng lời nói êm dịu để gây ám thị trẻ như: “Con nhắm mắt lại ngủ ngoan đi mẹ thương hoặc nhắm mắt lại ngủ giỏi đi con…” cũng sẽ giúp trẻ dễ đi vào giấc ngủ.
5. Mỗi trẻ có một nhu cầu về thời gian ngủ độ dài và độ sâu khác nhau, chúng ta cần nên tạo mọi điều kiện cho trẻ ngủ đầy đủ và thoả mãn theo nhu cầu riêng, không nên gọi trẻ thức sớm. Thông thường, khi ngủ đủ giấc trẻ sẽ tự động thức dậy không cần phải gọi.
6. Trong trường hợp trẻ có rối loạn giấc ngủ như mất ngủ liên tiếp vài đêm cần đưa trẻ đi khám bệnh, không nên dùng thuốc ngủ khi chưa có ý kiến của thầy thuốc. Có rất nhiều nguyên nhân gây ra rối loạn giấc ngủ, ở trẻ em cần lưu ý đến các rối loạn giấc ngủ có liên quan đến tình trạng thiếu dinh dưỡng thường đi kèm với tình trạng chán ăn, giảm ăn, giảm bú, nôn ói, chậm lớn, suy dinh dưỡng. Các biểu hiện rối loạn giấc ngủ thường gặp ở các trẻ này là ngủ ít, trằn trọc khó ngủ, thức giấc nhiều lần trong đêm, mơ, mớ, ác mộng, mộng du, khiếp sợ trong khi ngủ. Các rối loạn này có thể có liên quan đến tình trạng thiếu kẽm kèm theo thiếu đa chất do giảm ăn như ma giê, canxi, axít amin, vitamin nhóm B và có thể nhanh chóng được chữa khỏi khi được bổ sung kẽm và các chất dinh dưỡng thiếu hụt kể trên.
Theo chúng tôi bạn nên đưa bé đi khám để bác sĩ giúp bạn tìm được nguyên nhân khiến bé quấy khóc và ngủ không ngon giấc, từ đó sẽ có liệu pháp điều trị tận gốc căn nguyên gây mất ngủ của bé.
Chúc bạn và gia đình sức khỏe!
Bs.Thuocbietduoc


text:
1. Chuẩn bị dịch chiết tế bào để tinh sạch protein
Việc phân lập và tinh sạch được các loại protein riêng rẽ có ý nghĩa quyết định đến khả năng tìm hiểu được chức năng của chúng. Mặc dù trong một số trường hợp, chúng ta có thể nghiên cứu chức năng của protein ở dạng hỗn hợp phức tạp, nhưng phần lớn những nghiên cứu này thường dẫn đến những kết luận “mù mờ”.
Chẳng hạn như khi chúng ta nghiên cứu về hoạt tính của một enzym ADN polymerase trong một hỗn hợp protein thô (chẳng hạn từ dịch phân giải tế bào), các enzym ADN polymerase và protein thành phần khác cũng có thể ảnh hưởng đến hiệu suất tổng hợp ADN quan sát được trong thực nghiệm. Vì vậy, việc tinh sạch các protein là một bước quan trong trong quá trình tìm hiểu về chức năng của chúng.
Mỗi một protein thường có một số đặc tính riêng làm việc tinh sạch chúng thường có tính đặc thù. Điều này thì trái ngược với ADN, vốn cơ bản giống nhau về cấu trúc và thành phần, chỉ khác nhau về trình tự của các nucleotit. Các bước tinh sạch từng loại protein thường dựa trên các đặc tính đặc thù của nó về kích thước, hình dạng, điện tích và nhiều khi là chức năng của chúng.
Vật liệu khởi đầu cho hầu hết các quá trình tinh sạch protein từ sinh vật là các dịch chiết tế bào. Không giống ADN vốn có tính phục hồi cao trong các điều kiện nhiệt độ sống khác nhau, thì protein rất dễ bị biến tính và phá hủy sau khi bị giải phóng ra khỏi tế bào. Vì lý do này, hầu hết quá trình chuẩn bị các dịch chiết và tinh sạch protein được tiến hành ở nhiệt độ lạnh (4oC). Có một số cách chuẩn bị dịch chiết tế bào. Các tế bào có thể phân giải bằng sử dụng chất tẩy, các lực làm vỡ thành tế bào, xử lý với dung dịch nhược trương (làm tế bào trương lên do nước đi vào và vỡ ra), hoặc thay đổi đột ngột áp suất. Điểm chung của tất cả các phương pháp là làm thành tế bào vỡ ra và các protein được giải phóng. Trong một số trường hợp, các tế bào được chuyển về trạng thái đông lạnh trước khi được nghiền bằng những máy nghiền mẫu trong phòng thí nghiệm.
2. Sử dụng sắc ký cột trong tinh chế protein
Phương pháp chiết xuất và tinh sạch protein phổ biến nhất là sắc ký cột. Trong trường hợp này, các phân đoạn protein được cho chạy qua cột nhồi bằng các hạt agarose hoặc polyacrylamit nhỏ được cải biến cho phù hợp. Có một số phương án khác nhau trong việc sử dụng cột tách chiết và tinh sạch protein. Các quy trình khác nhau được thiết lập có thể khác nhau do đặc tính khác nhau của các loại protein. Ở đây mô tả ba phương pháp. Trong hai phương pháp đầu, protein được phân lập dựa vào kích thước và tính tích điện của chúng. Tóm tắt về các phương pháp này được nêu trên hình 14.
Sắc ký trao đổi ion: Trong phương pháp này, các phân tử protein được phân lập dựa trên điện tích ion hóa bề mặt của chúng bằng việc sử dụng các vật liệu làm cột là các hạt mang các nhóm chức tích điện âm hoặc dương (đây còn được gọi là pha tĩnh). Các phân tử protein tương tác yếu với các hạt (chẳng hạn như một phân tử protein tích điện dương được cho chạy qua cột mang các hạt tích điện âm) sẽ được hồi lưu khi sử dụng một dung dịch muỗi loãng chảy qua cột sau đó (dung dịch chạy mẫu được gọi là pha động). Các phân tử tương tác với pha động càng mạnh, càng cần dung dịch hàm lượng muối cao để hồi lưu mẫu (bởi muối làm "trung hòa" các vùng mang điện tích và vì vậy cho phép các phân tử protein được giải phóng khỏi cột. Bằng việc tăng dần nồng độ muối trong các dung dịch đệm thu hồi mẫu, các phân tử protein khác nhau, kể cả các phân tử có đặc tính tích điện gần giống nhau cũng được phân tách thành các phân đoạn khác nhau khi chúng được hồi lưu từ cột.
Sắc ký lọc gel: Kỹ thuật này cho phép phân tách các loại protein trên cở sở đặc điểm khác nhau của các loại protein về hình dạng và kích thước. Khác với trong kỹ thuật sắc ký trao đổi ion, các hạt được sử dụng để nhồi cột trong kỹ thuật này không mang các nhóm tích điện mà thay vào đó là mang các lỗ có kích thước khác nhau. Các phân tử protein càng nhỏ càng có nhiều khả năng thâm nhập vào tất cả các lỗ; vì vậy, thời gian chạy qua cột dài hơn và thời gian hồi lưu muộn hơn. Ngược lại, các phân tử protein kích thước càng lớn càng có thời gian hồi lưu (chạy qua toàn bộ cột) sớm hơn.
Đối với mỗi loại cột, các phân đoạn sắc ký được thu ở các nồng độ muối khác nhau hoặc ở các thời gian hồi lưu khác nhau để thu được từng loại protein được quan tâm nghiên cứu. Các phân đoạn có hoạt tính protein được quan tâm cao nhất sẽ được tích lũy và tiến hành tinh sạch bổ sung.
Độ tinh sạch của sản phẩm protein sẽ tăng lên khi các phân đoạn protein được chạy qua nhiều cột sắc ký khác nhau. Thông thường một cột sắc ký đơn lẻ không đủ để tinh sạch được một loại phân tử protein mong muốn nào đó dù quá trình sắc ký được lặp đi lặp lại nhiều lần, thay vào đó người ta thường phải áp dụng một chuỗi các bước kỹ thuật để có thể thu được một phân đoạn chứa một lượng lớn loại protein cần quan tâm nghiên cứu. Chẳng hạn như, dù có rất nhiều phân tử protein được hồi lưu trong dung dịch muối đậm đặc từ cột tích điện dương (đối với protein tích điện âm) hoặc được hồi lưu trong sắc ký lọc gel (đối với các protein kích thước tương đối nhỏ), các kỹ thuật này đơn lẻ thường không đủ để thu được một sản phẩm protein được tinh sạch hoàn toàn.
3. Sắc ký ái lực hỗ trợ quá trình tinh chế protein
Các đặc tính đặc trưng của từng loại protein có thể được tận dụng để giúp tinh sạch loại protein tương ứng được thuận tiện và hiệu quả hơn. Giả sử, nếu chúng ta biết một loại protein khi hoạt động liên kết đặc hiệu với ATP, thì có thể dùng cột sắc ký mang vật liệu gắn kết ATP để phân tách protein đó. Chỉ có protein liên kết với ATP mới được cột giữ lại, và cho phép hầu hết các loại protein không liên kết với ATP được chảy trôi qua cột. Kỹ thuật tinh sạch này được gọi là sắc ký ái lực. Có nhiều hợp chất khác nhau có thể được sử dụng để gắn kết với cột và giúp quá trình tinh sạch protein dễ dàng và hiệu quả hơn. Các hợp chất này bao gồm cả các trình tự ADN (để tinh sạch protein liên kết ADN) hoặc thậm trí là một loại protein để tinh sạch một loại protein khác được biết hoặc được mong đợi có tương tác phân tử với loại protein trên. Như vậy, để bắt đầu tinh sạch một loại protein nào đó, cần phải có những hiểu biết cơ bản về loại protein đó và tìm cách khai thác, ứng dụng các đặc tính có nó cho quá trình tách chiết và tinh sạch.
Một dạng rất phổ biến của sắc ký ái lực là sắc ký ái lực miễn dịch. Trong phương pháp này, người ta gắn kháng thể đặc hiệu với protein đích lên vật liệu làm cột sắc ký. Trong trường hợp lý tưởng, loại kháng thể này chỉ liên kết đúng với loại protein cần quan tâm còn cho phép tất cả các loại protein khác chảy trôi qua cột. Loại protein liên kết sau đó sẽ được thu hồi (hồi lưu) bằng cách sử dụng dung dịch muối hoặc đôi khi là các dung dịch chất tẩy nhẹ chảy qua cột. Khó khăn cơ bản gặp phải đối với phương pháp này là đôi khi liên kết giữa kháng thể và protein khá bền vững đến mức phải gây biến tính protein mới thu hồi được sản phẩm. Trong khi khác với ADN, protein sau khi biến tính thường không có khả năng hồi tính, vì vậy protein thu được theo cách này nhiều khi ở dạng không hoạt động chức năng và mất đi giá trị sử dụng trong nghiên cứu.
Để tăng hiệu quả tinh sạch, các protein cũng có thể được cải biến. Những cải biến này có thể là sự bổ sung các trình tự axit amin ngắn hoặc là vào đầu C hoặc vào đầu N của phân tử protein cần phân tích. Những bổ sung này, hay còn gọi là Ptrình tự đánh dấu có thể tạo ra được bằng công nghệ ADN tái tổ hợp. Các trình tự peptit đánh dấu giúp thay đổi thuộc tính của một phân tử protein mong muốn và giúp tinh chế protein này dễ dàng hơn. Ví dụ như, đối với một số protein người ta tiến hành bổ sung một chuỗi gồm 6 histidin giúp những protein này liên kết với Ni2+ gắn trên cột chặt hơn và dễ phân tách hơn, trong khi thuộc tính này thường không có ở phần lớn các loại protein khác. Ngoài ra việc sử dụng các epitop đặc hiệu (thường là một trình tự peptit có 5 - 7 axit amin đặc hiệu xác định kháng nguyên) cũng có thể được gắn vào phân tử protein cần tinh chế. Các cải biến này cho phép tinh sạch các loại protein trên cơ sở nguyên tắc sắc ký ái lực miễn dịch và sử dụng dị kháng nguyên mang các epitop được bổ sung. Điều đặc biệt là, các kháng thể và epitop này có thể thay đổi tính liên kết kháng thể tùy thuộc vào điều kiện khác nhau của môi trường (chẳng hạn, ái lực tăng khi không có Ca2+, và ái lực giảm khi có Ca2+). Điều này cũng giúp làm giảm ảnh hưởng của các yếu tố gây biến tính khác.
Nguyên tắc sắc ký ái lực miễn dịch cũng có thể được dùng để làm kết tủa nhanh một loại protein đặc hiệu nào đó (và mọi loại protein liên kết chặt với nó) từ một dịch chiết thô. Trong trường hợp này, phản ứng kết tủa thu được do kháng thể được gắn vào cùng loại hạt được sử dụng trong sắc ký cột. Do các hạt này có kích thước lớn, nên chúng lắng rất nhanh xuống đáy ống nghiệm mang theo các kháng thể và protein liên kết với chúng. Kỹthuật này được gọi là kỹ thuật kết tủa miễn dịch, cũng là một kỹ thuật ngày càng sử dụng phổ biến để tinh sạch nhanh protein hoặc phức hệ protein từ các dịch chiết thô. Mặc dù nếu chỉ sử dụng phương pháp này riêng rẽ, hiếm khi thu được sản phẩm protein được tinh sạch hoàn toàn, song phương pháp này thường rất hiệu quả để xác định các loại phân tử protein và các hợp chất khác (ví dụ như ADN) có tương tác với một loại protein đích nào đó.
4. Phân tích protein trên gel polyacrylamid
Các loại protein thường không mang điện tích âm đồng đều hay có cấu trúc bậc hai đồng nhất. Thay vào đó, chúng được tạo ra từ 20 loại axit amin khác nhau, một số chúng không mang điện tích, một số mang điện tích âm, còn một số mang điện tích dương. Ngoài cấu trúc bậc hai, protein hoạt động còn có các cấu trúc bậc ba, bậc bốn điển hình. Tuy vậy, nếu các protein được xử lý với các chất tẩy ion hóa mạnh như SDS (sodium dodecyl sulphat) và một hợp chất khử, ví dụ như mercapthoethanol, thì các cấu trúc bậc 2, và 4 của phân tử protein sẽ bị phá vỡ. Nghĩa là, sau khi xử lý với SDS, protein trở thành dạng phân tử polymer không có cấu trúc. Đồng thời, SDS tạo thành lớp vỏ ion và làm phân tử protein trở nên tích điện âm đồng đều hơn. Mecarptoethanol thì làm giảm các liên kết disulphit hình thành giữa các tiểu phần cystein. Kết quả là, nếu các phân tử ADN và ARN được gây biến tính bởi SDS và mercaptoethanol, thì sự phân tách của các loại phân tử protein trong điện di chủ yếu là do sự khác biệt về trọng lượng và kích thước phân tử. Sau khi điện di, các phân tử protein được nhuộm với các thuốc nhuộm liên kết protein như Coomassie brilliant blue và quan sát. Khi không có SDS, điện di vẫn có thể phân tách được các loại protein, nhưng lúc này còn có các yếu tố khác nhau của các loại protein là trọng lượng phân tử, tổng điện tích và điểm đẳng điện (xem dưới đây).
5. Định tính protein dựa trên phương pháp thẩm tách miễn dịch (immunoblotting)
Mặc dù có bản chất khác ADN và ARN, việc xác định sự có mặt của một loại protein trong số các protein có trong mẫu sinh học theo nguyên tắc gần giống với các phương pháp thẩm tách (còn gọi là lai) Southern và Northern (tương ứng với trường hợp của ADN và ARN). Tuy vậy, đối với protein, phương này định tính này dựa trên dựa trên nguyên tắc miễn dịch đặc thù của protein nên còn được gọi là phương pháp thẩm tách miễn dịch (immunoblotting) hay phương pháp thẩm tách (lai) Western. Trong phương pháp thẩm tách miễn dịch, các phân tử protein sau khi được phân tách trên điện di được chuyển và gắn lên màng. Màng này sau đó được ủ trong một dung dịch chứa kháng thể đặc hiệu với loại protein tinh sạch được quan tâm nghiên cứu. Kháng thể sẽ tìm thấy loại protein tương ứng ở trên màng lọc và gắn vào. Cuối cùng, bằng việc sử dụng phản ứng enzym hiện màu, người ta có thể quan sát được vị trí kháng thể liên kết trên màng. Như vậy, tất cả các phương pháp lai Southern, Northern và Western đều có điểm chung là sử dụng các hợp chất chọn lọc để quan sát sự có mặt của một hoặc một số loại phân tử đặc thù trong các hỗn hợp phức tạp.
6. Giải trình tự trực tiếp protein
Mặc dù có cấu tạo phức tạp hơn so với ADN và ARN, các phân tử protein cũng có thể giải trình tự trực tiếp, tức là việc xác định thành phần và thứ tự của các axit amin trên chuỗi polypeptit. Có hai phương pháp được sử dụng phổ biến hơn cả là: 1) phương pháp biến tính
dman và 2) phương pháp khối phổ kế tiếp. Khả năng xác định được trình tự protein có ý nghĩa quan trong trong trong nhiều nghiên cứu về hệ protein học (proteomics) và hệ gen học (genomics). Bởi vì với việc xác định được dù chỉ là một trình tự ngắn của các axit amin của một phân tử protein nào đó, chúng ta có thể xác định được gen mã hóa cho protein đó trên cơ sở đối chiếu với khung đọc mở có trong hệ gen của nhiều loài vốn đã được giải mã hoàn toàn hoặc gần như hoàn toàn nhưng nhưng chưa biết đầy đủ về chức năng của nhiều gen.
Phương pháp biến tính
dman là một phản ứng hóa học trong đó các tiểu phần axit amin được giải phóng lần lượt từ đầu N của chuỗi polypeptit. Điểm mấu chốt của phương pháp này là axit amin ở tận cùng đầu N của một chuỗi polypeptit có thể được cải biến khi xử lý với phenylisothyocyanate (P
TC) dẫn đến sự thay đổi ở gốc a-amino. Axit amin được cải biến này sau đó được cắt rời khỏi chuỗi polypeptit khi xử lý với axit trong điều kiện không làm phá hủy phần còn lại của chuỗi polypeptit. Việc xác định trình tự các axit amin được tiến hành dựa trên thứ tự hồi lưu của từng axit amin được cắt khỏi chuỗi bằng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC (high performance liquid chromatography), nhờ đặc điểm từng loại axit amin có thời gian hồi lưu đặc trưng. Mỗi một vòng gây biến đổi axit amin và cắt khỏi chuỗi polypeptit như vậy tạo ra một chuỗi polypeptit và một nhóm a-amino. Với việc lặp đi, lặp lại phản ứng cắt axit amin này sẽ cho phép xác định được trình tự ở đầu N của một chuỗi polypeptit. Trong thực tế, chu kỳ gây biến tính như vậy được lặp đi lặp lại từ 8 - 15 lần để xác định protein. Số chu kỳ như vậy thông thường là đủ để xác định được một loại protein đặc thù nào đó.
Phương pháp giải mã trình tự tự động dựa trên nguyên lý biến tính
dman là một phương pháp hiệu quả và cũng đã được sử dụng rộng rãi. Tuy vậy kỹ thuật này gặp trở ngại khi đầu N tận cùng của phân tử protein bị cải biến về mặt hóa học (ví dụ như bởi các nhóm acetyl hoặc formyl), mà hiện tượng này thì vốn có thể xảy ra tự nhiên trong điều kiện in vivo, hoặc trong quá trình tách chiết và tinh sạch protein. Để khắc phục hiện tượng này, người ta có thể sử dụng protease để cắt chuỗi polypeptit và phân tích trình tự bên trong chuỗi.
Phương pháp khối phổ kế tiếp (MS/MS) có thể được dùng để xác định các vùng trình tự protein khác nhau. Khối phổ là phương pháp xác định chính xác khối lượng của các các phân tử nhỏ. Một cách vắn tắt phương pháp này được mô tả như sau: phân tử cần phân tích được cho bay qua một thiết bị (trong điều kiện chân không) trong điều kiện tốc độ di chuyển của nó tương quan với tỉ số khối lượng / điện tích. Trên cơ sở này người ta có thể đo được thời gian bay của phân tử và xác định được khối lượng của nó. Đối với các phân tử sinh học có kích thước nhỏ như các chuỗi peptit và các phân tử protein nhỏ, thì trọng lượng phân tử của nó có thể xác định chính xác đến từng Dalton.
Để xác định khối lượng phân tử protein bằng phương pháp MS /MS, trước tiên phân tử protein thường được cắt thành các đoạn peptit có trình tự ngắn (thường dưới 20 axit amin) nhờ sử dụng enzym đặc hiệu, chẳng hạn như trypsin. Hỗn hợp các đoạn peptit này sau đó được đưa vào phân tích khối phổ và chúng phân tách nhau ra dựa trên tỉ số khối lượng / điện tích. Các đoạn peptit riêng rẽ sau đó sẽ bị bắt giữ và phân đoạn thành các chuỗi peptit thành phần. Khối lượng của mỗi peptit thành phần được xác định bằng phổ khối như minh họa trên hình 15. Sự kết hợp các dữ liệu về khối lượng của các đoạn peptit thành phần sẽ cho biết trình tự rõ ràng của phân tử protein ban đầu. Cũng giống như trong phương pháp biến tính
dman, việc xác định được trình tự của của khoảng 15 axit amin là đủ để so sánh với trình tự protein được luận ra từ các trình tự ADN đã được giải mã.
Kỹ thuật MS /MS thực sự là một kỹ thuật có tính cách mạng trong việc xác định và giải trình tự protein. Trong phương pháp này, thông thường chỉ cần một lượng mẫu nhỏ và hơn hết là có thể phân tích hỗn hợp nhiều loại protein đồng thời.
7. Hệ protein học (proteomics)
Việc phát triển của các kỹ thuật giải mã trình tự ADN, kết hợp với các phương pháp tách chiết, tinh sạch và phân tích trình tự protein đã mở đường cho sự hình thành một chuyên ngành mới gọi là hệ protein học. Hệ protein học (proteomics) là chuyên ngành nghiên cứu về toàn bộ tập hợp protein được một mô, tế bào hoặc cơ thể tạo ra trong các điều kiện đặc thù, phân tích mức độ phổ biến của từng protein và sự tương tác của chúng với nhau và với các phân tử khác (ví dụ như ADN) trong quá trình hoạt động của tế bào. Nếu như các kỹ thuật phân tích vi dãy phản ứng (microarray) có thể giúp nhận biết được sự biểu hiện của các gen trên cở sở phân tích hệ gen, thì các kỹ thuật proteomics cho phép xác định được hình ảnh tổng thể về toàn bộ vốn protein của một tế bào, mô hoặc cơ thể.
Hệ protein học được dựa trên ba phương pháp cơ bản: điện di hai chiều trên gel polyacrylamid để tiến hành phân tách các protein, khối phổ để xác định khối lượng phân tử và định tính protein (hoặc các đoạn peptit từ phân tử protein đó), và sinh tin học để đối chiếu các phân tử protein và các đoạn peptit với các trình tự mã hóa của chúng trong hệ gen. Một tế bào riêng lẻ thường ít nhất tạo ra hàng nghìn loại protein khác nhau, trong khi việc sử dụng đơn lẻ phương pháp điện di truyền thống trên gel polyacrylamid thường không đủ để phân lập và tách biệt các protein này. Vì vậy, như tên gọi của nó, phương pháp điện di hai chiều cho phép phân tách các phân tử protein trên gel điện di theo hai chiều được thực hiện kế tiếp nhau.
Trong bước thứ nhất, các phân tử protein được phân đoạn dựa trên điểm đẳng điện của chúng (theo nguyên tắc hội tụ đẳng điện). Theo nguyên tắc này, khi một gradient pH được tạo ra từ đầu này đến đầu kia của bản điện di, thì tại vị trí pH tương ứng làm trung hòa điện tích của một phân tử protein sẽ làm các phân tử protein tập trung (hội tụ) tại vị trí đó. Trong bước thứ hai, các phân tử protein tại điểm hội tụ được tiếp tục phân tách trên cơ sở khối lượng và kích thước của chúng khi di chuyển trên trường điện di polyacrylamid đã được gây biến tính bởi SDS như mô tả ở trên. Do các phân tử protein được đồng thời phân tách dựa trên hai thuộc tính (điểm đẳng điện và trọng lượng phân tử), nên hàng nghìn loại protein khác nhau có thể được phân tách khỏi nhau trong một thí nghiệm duy nhất. Sau khi được phân đoạn theo phương pháp điện di hai chiều, mỗi loại protein riêng biệt sẽ được đưa vào phân tích khối phổ để xác định chính xác khối lượng phân tử. Như đã nói ở trên, để tăng hiệu quả phân tích, thông thường protein được cắt thành các đoạn peptit nhỏ nhờ sử dụng protease thay cho việc phân tích phân tử protein ở dạng nguyên vẹn có phân tử lượng lớn và cấu trúc phức tạp. Kỹ thuật phân tích MS /MS cho phép giải trình tự chi tiết của các đoạn peptit và xác định phân tử protein.
Cuối cùng các dữ liệu về trình tự hệ gen hoàn chỉnh của một cơ thể và các trình tự peptit từ các loại protein được quan tâm nghiên cứu sẽ được đưa vào phân tích bằng các phần mềm sinh tin học để có thể xác định được một trình tự mã hóa đặc thù trong hệ gen tương ứng với loại protein có chức năng được quan tâm nghiên cứu. Như vậy, các nghiên cứu hệ gen học (genomics) và hệ protein học (proteomics) có mối quan hệ chặt chẽ trong các nghiên cứu di truyền học phân tử.
Hướng dẫn download:
Click vào link → Chờ 5 giây → Click vào SKIP AD >> (Pass nếu có: www.thuviensinhhoc.com)
Hãy click nút Like và G+1 để ủng hộ Thư Viện Sinh Học!
- Cơ chế phân tử của sao chép DNA
- Điện di phân tích ADN và ARN
- Các phương pháp lai phân tử và mẫu dò
- Tách dòng phân tử và xây dựng thư viện hệ gen
- Tổng hợp hóa học và sử dụng các đoạn oligonucleotit
- Phản ứng PCR
- Giải mã trình tự ADN
- Phân tích so sánh các hệ gen
- DNA là vật chất di truyền
- Thành phần và cấu tạo hóa học của acid nucleic
- Những cấu trúc chứa DNA trong tế bào
- Lập bản đồ gene của DNA ty thể
- Các yếu tố di truyền vận động (Transposable genetic elements) ở prokaryote
- Di truyền học phân tử các bào quan
- Sửa chữa và bảo vệ ADN
- Các yếu tố di truyền vận động ở eukaryote

markdown:
1. Chuẩn bị dịch chiết tế bào để tinh sạch protein
Việc phân lập và tinh sạch được các loại protein riêng rẽ có ý nghĩa quyết định đến khả năng tìm hiểu được chức năng của chúng. Mặc dù trong một số trường hợp, chúng ta có thể nghiên cứu chức năng của protein ở dạng hỗn hợp phức tạp, nhưng phần lớn những nghiên cứu này thường dẫn đến những kết luận “mù mờ”.
Chẳng hạn như khi chúng ta nghiên cứu về hoạt tính của một enzym ADN polymerase trong một hỗn hợp protein thô (chẳng hạn từ dịch phân giải tế bào), các enzym ADN polymerase và protein thành phần khác cũng có thể ảnh hưởng đến hiệu suất tổng hợp ADN quan sát được trong thực nghiệm. Vì vậy, việc tinh sạch các protein là một bước quan trong trong quá trình tìm hiểu về chức năng của chúng.
Mỗi một protein thường có một số đặc tính riêng làm việc tinh sạch chúng thường có tính đặc thù. Điều này thì trái ngược với ADN, vốn cơ bản giống nhau về cấu trúc và thành phần, chỉ khác nhau về trình tự của các nucleotit. Các bước tinh sạch từng loại protein thường dựa trên các đặc tính đặc thù của nó về kích thước, hình dạng, điện tích và nhiều khi là chức năng của chúng.
Vật liệu khởi đầu cho hầu hết các quá trình tinh sạch protein từ sinh vật là các dịch chiết tế bào. Không giống ADN vốn có tính phục hồi cao trong các điều kiện nhiệt độ sống khác nhau, thì protein rất dễ bị biến tính và phá hủy sau khi bị giải phóng ra khỏi tế bào. Vì lý do này, hầu hết quá trình chuẩn bị các dịch chiết và tinh sạch protein được tiến hành ở nhiệt độ lạnh (4oC). Có một số cách chuẩn bị dịch chiết tế bào. Các tế bào có thể phân giải bằng sử dụng chất tẩy, các lực làm vỡ thành tế bào, xử lý với dung dịch nhược trương (làm tế bào trương lên do nước đi vào và vỡ ra), hoặc thay đổi đột ngột áp suất. Điểm chung của tất cả các phương pháp là làm thành tế bào vỡ ra và các protein được giải phóng. Trong một số trường hợp, các tế bào được chuyển về trạng thái đông lạnh trước khi được nghiền bằng những máy nghiền mẫu trong phòng thí nghiệm.
2. Sử dụng sắc ký cột trong tinh chế protein
Phương pháp chiết xuất và tinh sạch protein phổ biến nhất là sắc ký cột. Trong trường hợp này, các phân đoạn protein được cho chạy qua cột nhồi bằng các hạt agarose hoặc polyacrylamit nhỏ được cải biến cho phù hợp. Có một số phương án khác nhau trong việc sử dụng cột tách chiết và tinh sạch protein. Các quy trình khác nhau được thiết lập có thể khác nhau do đặc tính khác nhau của các loại protein. Ở đây mô tả ba phương pháp. Trong hai phương pháp đầu, protein được phân lập dựa vào kích thước và tính tích điện của chúng. Tóm tắt về các phương pháp này được nêu trên hình 14.
Sắc ký trao đổi ion: Trong phương pháp này, các phân tử protein được phân lập dựa trên điện tích ion hóa bề mặt của chúng bằng việc sử dụng các vật liệu làm cột là các hạt mang các nhóm chức tích điện âm hoặc dương (đây còn được gọi là pha tĩnh). Các phân tử protein tương tác yếu với các hạt (chẳng hạn như một phân tử protein tích điện dương được cho chạy qua cột mang các hạt tích điện âm) sẽ được hồi lưu khi sử dụng một dung dịch muỗi loãng chảy qua cột sau đó (dung dịch chạy mẫu được gọi là pha động). Các phân tử tương tác với pha động càng mạnh, càng cần dung dịch hàm lượng muối cao để hồi lưu mẫu (bởi muối làm "trung hòa" các vùng mang điện tích và vì vậy cho phép các phân tử protein được giải phóng khỏi cột. Bằng việc tăng dần nồng độ muối trong các dung dịch đệm thu hồi mẫu, các phân tử protein khác nhau, kể cả các phân tử có đặc tính tích điện gần giống nhau cũng được phân tách thành các phân đoạn khác nhau khi chúng được hồi lưu từ cột.
Sắc ký lọc gel: Kỹ thuật này cho phép phân tách các loại protein trên cở sở đặc điểm
khác nhau của các loại protein về hình dạng và kích thước. Khác với trong kỹ thuật sắc ký trao đổi ion, các hạt được sử dụng để nhồi cột trong kỹ thuật này không mang các nhóm tích điện mà thay vào đó là mang các lỗ có kích thước khác nhau. Các phân tử protein càng nhỏ càng có nhiều khả năng thâm nhập vào tất cả các lỗ; vì vậy, thời gian chạy qua cột dài hơn và thời gian hồi lưu muộn hơn. Ngược lại, các phân tử protein kích thước càng lớn càng có thời gian hồi lưu (chạy qua toàn bộ cột) sớm hơn.
Đối với mỗi loại cột, các phân đoạn sắc ký được thu ở các nồng độ muối khác nhau hoặc ở các thời gian hồi lưu khác nhau để thu được từng loại protein được quan tâm nghiên cứu. Các phân đoạn có hoạt tính protein được quan tâm cao nhất sẽ được tích lũy và tiến hành tinh sạch bổ sung.
Độ tinh sạch của sản phẩm protein sẽ tăng lên khi các phân đoạn protein được chạy qua nhiều cột sắc ký khác nhau. Thông thường một cột sắc ký đơn lẻ không đủ để tinh sạch được một loại phân tử protein mong muốn nào đó dù quá trình sắc ký được lặp đi lặp lại nhiều lần, thay vào đó người ta thường phải áp dụng một chuỗi các bước kỹ thuật để có thể thu được một phân đoạn chứa một lượng lớn loại protein cần quan tâm nghiên cứu. Chẳng hạn như, dù có rất nhiều phân tử protein được hồi lưu trong dung dịch muối đậm đặc từ cột tích điện dương (đối với protein tích điện âm) hoặc được hồi lưu trong sắc ký lọc gel (đối với các protein kích thước tương đối nhỏ), các kỹ thuật này đơn lẻ thường không đủ để thu được một sản phẩm protein được tinh sạch hoàn toàn.
3. Sắc ký ái lực hỗ trợ quá trình tinh chế protein
Các đặc tính đặc trưng của từng loại protein có thể được tận dụng để giúp tinh sạch loại protein tương ứng được thuận tiện và hiệu quả hơn. Giả sử, nếu chúng ta biết một loại protein khi hoạt động liên kết đặc hiệu với ATP, thì có thể dùng cột sắc ký mang vật liệu gắn kết ATP để phân tách protein đó. Chỉ có protein liên kết với ATP mới được cột giữ lại, và cho phép hầu hết các loại protein không liên kết với ATP được chảy trôi qua cột. Kỹ thuật tinh sạch này được gọi là sắc ký ái lực. Có nhiều hợp chất khác nhau có thể được sử dụng để gắn kết với cột và giúp quá trình tinh sạch protein dễ dàng và hiệu quả hơn. Các hợp chất này bao gồm cả các trình tự ADN (để tinh sạch protein liên kết ADN) hoặc thậm trí là một loại protein để tinh sạch một loại protein khác được biết hoặc được mong đợi có tương tác phân tử với loại protein trên. Như vậy, để bắt đầu tinh sạch một loại protein nào đó, cần phải có những hiểu biết cơ bản về loại protein đó và tìm cách khai thác, ứng dụng các đặc tính có nó cho quá trình tách chiết và tinh sạch.
Một dạng rất phổ biến của sắc ký ái lực là sắc ký ái lực miễn dịch. Trong phương pháp này, người ta gắn kháng thể đặc hiệu với protein đích lên vật liệu làm cột sắc ký. Trong trường hợp lý tưởng, loại kháng thể này chỉ liên kết đúng với loại protein cần quan tâm còn cho phép tất cả các loại protein khác chảy trôi qua cột. Loại protein liên kết sau đó sẽ được thu hồi (hồi lưu) bằng cách sử dụng dung dịch muối hoặc đôi khi là các dung dịch chất tẩy nhẹ chảy qua cột. Khó khăn cơ bản gặp phải đối với phương pháp này là đôi khi liên kết giữa kháng thể và protein khá bền vững đến mức phải gây biến tính protein mới thu hồi được sản phẩm. Trong khi khác với ADN, protein sau khi biến tính thường không có khả năng hồi tính, vì vậy protein thu được theo cách này nhiều khi ở dạng không hoạt động chức năng và mất đi giá trị sử dụng trong nghiên cứu.
Để tăng hiệu quả tinh sạch, các protein cũng có thể được cải biến. Những cải biến này có thể là sự bổ sung các trình tự axit amin ngắn hoặc là vào đầu C hoặc vào đầu N của phân tử protein cần phân tích. Những bổ sung này, hay còn gọi là Ptrình tự đánh dấu có thể tạo ra được bằng công nghệ ADN tái tổ hợp. Các trình tự peptit đánh dấu giúp thay đổi thuộc tính của một phân tử protein mong muốn và giúp tinh chế protein này dễ dàng hơn. Ví dụ như, đối với một số protein người ta tiến hành bổ sung một chuỗi gồm 6 histidin giúp những protein này liên kết với Ni2+ gắn trên cột chặt hơn và dễ phân tách hơn, trong khi thuộc tính này thường không có ở phần lớn các loại protein khác. Ngoài ra việc sử dụng các epitop đặc hiệu (thường là một trình tự peptit có 5 - 7 axit amin đặc hiệu xác định kháng nguyên) cũng có thể được gắn vào phân tử protein cần tinh chế. Các cải biến này cho phép tinh sạch các loại protein trên cơ sở nguyên tắc sắc ký ái lực miễn dịch và sử dụng dị kháng nguyên mang các epitop được bổ sung. Điều đặc biệt là, các kháng thể và epitop này có thể thay đổi tính liên kết kháng thể tùy thuộc vào điều kiện khác nhau của môi trường (chẳng hạn, ái lực tăng khi không có Ca2+, và ái lực giảm khi có Ca2+). Điều này cũng giúp làm giảm ảnh hưởng của các yếu tố gây biến tính khác.
Nguyên tắc sắc ký ái lực miễn dịch cũng có thể được dùng để làm kết tủa nhanh một loại protein đặc hiệu nào đó (và mọi loại protein liên kết chặt với nó) từ một dịch chiết thô. Trong trường hợp này, phản ứng kết tủa thu được do kháng thể được gắn vào cùng loại hạt được sử dụng trong sắc ký cột. Do các hạt này có kích thước lớn, nên chúng lắng rất nhanh xuống đáy ống nghiệm mang theo các kháng thể và protein liên kết với chúng. Kỹthuật này được gọi là kỹ thuật kết tủa miễn dịch, cũng là một kỹ thuật ngày càng sử dụng phổ biến để tinh sạch nhanh protein hoặc phức hệ protein từ các dịch chiết thô. Mặc dù nếu chỉ sử dụng phương pháp này riêng rẽ, hiếm khi thu được sản phẩm protein được tinh sạch hoàn toàn, song phương pháp này thường rất hiệu quả để xác định các loại phân tử protein và các hợp chất khác (ví dụ như ADN) có tương tác với một loại protein đích nào đó.
4. Phân tích protein trên gel polyacrylamid
Các loại protein thường không mang điện tích âm đồng đều hay có cấu trúc bậc hai đồng nhất. Thay vào đó, chúng được tạo ra từ 20 loại axit amin khác nhau, một số chúng không mang điện tích, một số mang điện tích âm, còn một số mang điện tích dương. Ngoài cấu trúc bậc hai, protein hoạt động còn có các cấu trúc bậc ba, bậc bốn điển hình. Tuy vậy, nếu các protein được xử lý với các chất tẩy ion hóa mạnh như SDS (sodium dodecyl sulphat) và một hợp chất khử, ví dụ như mercapthoethanol, thì các cấu trúc bậc 2, và 4 của phân tử protein sẽ bị phá vỡ. Nghĩa là, sau khi xử lý với SDS, protein trở thành dạng phân tử polymer không có cấu trúc. Đồng thời, SDS tạo thành lớp vỏ ion và làm phân tử protein trở nên tích điện âm đồng đều hơn. Mecarptoethanol thì làm giảm các liên kết disulphit hình thành giữa các tiểu phần cystein. Kết quả là, nếu các phân tử ADN và ARN được gây biến tính bởi SDS và mercaptoethanol, thì sự phân tách của các loại phân tử protein trong điện di chủ yếu là do sự khác biệt về trọng lượng và kích thước phân tử. Sau khi điện di, các phân tử protein được nhuộm với các thuốc nhuộm liên kết protein như Coomassie brilliant blue và quan sát. Khi không có SDS, điện di vẫn có thể phân tách được các loại protein, nhưng lúc này còn có các yếu tố khác nhau của các loại protein là trọng lượng phân tử, tổng điện tích và điểm đẳng điện (xem dưới đây).
5. Định tính protein dựa trên phương pháp thẩm tách miễn dịch (immunoblotting)
Mặc dù có bản chất khác ADN và ARN, việc xác định sự có mặt của một loại protein trong số các protein có trong mẫu sinh học theo nguyên tắc gần giống với các phương pháp thẩm tách (còn gọi là lai) Southern và Northern (tương ứng với trường hợp của ADN và ARN). Tuy vậy, đối với protein, phương này định tính này dựa trên dựa trên nguyên tắc miễn dịch đặc thù của protein nên còn được gọi là phương pháp thẩm tách miễn dịch (immunoblotting) hay phương pháp thẩm tách (lai) Western. Trong phương pháp thẩm tách miễn dịch, các phân tử protein sau khi được phân tách trên điện di được chuyển và gắn lên màng. Màng này sau đó được ủ trong một dung dịch chứa kháng thể đặc hiệu với loại protein tinh sạch được quan tâm nghiên cứu. Kháng thể sẽ tìm thấy loại protein tương ứng ở trên màng lọc và gắn vào. Cuối cùng, bằng việc sử dụng phản ứng enzym hiện màu, người ta có thể quan sát được vị trí kháng thể liên kết trên màng. Như vậy, tất cả các phương pháp lai Southern, Northern và Western đều có điểm chung là sử dụng các hợp chất chọn lọc để quan sát sự có mặt của một hoặc một số loại phân tử đặc thù trong các hỗn hợp phức tạp.
6. Giải trình tự trực tiếp protein
Mặc dù có cấu tạo phức tạp hơn so với ADN và ARN, các phân tử protein cũng có thể giải trình tự trực tiếp, tức là việc xác định thành phần và thứ tự của các axit amin trên chuỗi polypeptit. Có hai phương pháp được sử dụng phổ biến hơn cả là: 1) phương pháp biến tính
dman và 2) phương pháp khối phổ kế tiếp. Khả năng xác định được trình tự protein có ý nghĩa quan trong trong trong nhiều nghiên cứu về hệ protein học (proteomics) và hệ gen học (genomics). Bởi vì với việc xác định được dù chỉ là một trình tự ngắn của các axit amin của một phân tử protein nào đó, chúng ta có thể xác định được gen mã hóa cho protein đó trên cơ sở đối chiếu với khung đọc mở có trong hệ gen của nhiều loài vốn đã được giải mã hoàn toàn hoặc gần như hoàn toàn nhưng nhưng chưa biết đầy đủ về chức năng của nhiều gen.
Phương pháp biến tính
dman là một phản ứng hóa học trong đó các tiểu phần axit amin được giải phóng lần lượt từ đầu N của chuỗi polypeptit. Điểm mấu chốt của phương pháp này là axit amin ở tận cùng đầu N của một chuỗi polypeptit có thể được cải biến khi xử lý với phenylisothyocyanate (P
TC) dẫn đến sự thay đổi ở gốc a-amino. Axit amin được cải biến này sau đó được cắt rời khỏi chuỗi polypeptit khi xử lý với axit trong điều kiện không làm phá hủy phần còn lại của chuỗi polypeptit. Việc xác định trình tự các axit amin được tiến hành dựa trên thứ tự hồi lưu của từng axit amin được cắt khỏi chuỗi bằng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC (high performance liquid chromatography), nhờ đặc điểm từng loại axit amin có thời gian hồi lưu đặc trưng. Mỗi một vòng gây biến đổi axit amin và cắt khỏi chuỗi polypeptit như vậy tạo ra một chuỗi polypeptit và một nhóm a-amino. Với việc lặp đi, lặp lại phản ứng cắt axit amin này sẽ cho phép xác định được trình tự ở đầu N của một chuỗi polypeptit. Trong thực tế, chu kỳ gây biến tính như vậy được lặp đi lặp lại từ 8 - 15 lần để xác định protein. Số chu kỳ như vậy thông thường là đủ để xác định được một loại protein đặc thù nào đó.
Phương pháp giải mã trình tự tự động dựa trên nguyên lý biến tính
dman là một phương pháp hiệu quả và cũng đã được sử dụng rộng rãi. Tuy vậy kỹ thuật này gặp trở ngại khi đầu N tận cùng của phân tử protein bị cải biến về mặt hóa học (ví dụ như bởi các nhóm acetyl hoặc formyl), mà hiện tượng này thì vốn có thể xảy ra tự nhiên trong điều kiện in vivo, hoặc trong quá trình tách chiết và tinh sạch protein. Để khắc phục hiện tượng này, người ta có thể sử dụng protease để cắt chuỗi polypeptit và phân tích trình tự bên trong chuỗi.
Phương pháp khối phổ kế tiếp (MS/MS) có thể được dùng để xác định các vùng trình tự protein khác nhau. Khối phổ là phương pháp xác định chính xác khối lượng của các các phân tử nhỏ. Một cách vắn tắt phương pháp này được mô tả như sau: phân tử cần phân tích được cho bay qua một thiết bị (trong điều kiện chân không) trong điều kiện tốc độ di chuyển của nó tương quan với tỉ số khối lượng / điện tích. Trên cơ sở này người ta có thể đo được thời gian bay của phân tử và xác định được khối lượng của nó. Đối với các phân tử sinh học có kích thước nhỏ như các chuỗi peptit và các phân tử protein nhỏ, thì trọng lượng phân tử của nó có thể xác định chính xác đến từng Dalton.
Để xác định khối lượng phân tử protein bằng phương pháp MS /MS, trước tiên phân tử protein thường được cắt thành các đoạn peptit có trình tự ngắn (thường dưới 20 axit amin) nhờ sử dụng enzym đặc hiệu, chẳng hạn như trypsin. Hỗn hợp các đoạn peptit này sau đó được đưa vào phân tích khối phổ và chúng phân tách nhau ra dựa trên tỉ số khối lượng / điện tích. Các đoạn peptit riêng rẽ sau đó sẽ bị bắt giữ và phân đoạn thành các chuỗi peptit thành phần. Khối lượng của mỗi peptit thành phần được xác định bằng phổ khối như minh họa trên hình 15. Sự kết hợp các dữ liệu về khối lượng của các đoạn peptit thành phần sẽ cho biết trình tự rõ ràng của phân tử protein ban đầu. Cũng giống như trong phương pháp biến tính
dman, việc xác định được trình tự của của khoảng 15 axit amin là đủ để so sánh với trình tự protein được luận ra từ các trình tự ADN đã được giải mã.
Kỹ thuật MS /MS thực sự là một kỹ thuật có tính cách mạng trong việc xác định và giải trình tự protein. Trong phương pháp này, thông thường chỉ cần một lượng mẫu nhỏ và hơn hết là có thể phân tích hỗn hợp nhiều loại protein đồng thời.
7. Hệ protein học (proteomics)
Việc phát triển của các kỹ thuật giải mã trình tự ADN, kết hợp với các phương pháp tách chiết, tinh sạch và phân tích trình tự protein đã mở đường cho sự hình thành một chuyên ngành mới gọi là hệ protein học. Hệ protein học (proteomics) là chuyên ngành nghiên cứu về toàn bộ tập hợp protein được một mô, tế bào hoặc cơ thể tạo ra trong các điều kiện đặc thù, phân tích mức độ phổ biến của từng protein và sự tương tác của chúng với nhau và với các phân tử khác (ví dụ như ADN) trong quá trình hoạt động của tế bào. Nếu như các kỹ thuật phân tích vi dãy phản ứng (microarray) có thể giúp nhận biết được sự biểu hiện của các gen trên cở sở phân tích hệ gen, thì các kỹ thuật proteomics cho phép xác định được hình ảnh tổng thể về toàn bộ vốn protein của một tế bào, mô hoặc cơ thể.
Hệ protein học được dựa trên ba phương pháp cơ bản: điện di hai chiều trên gel polyacrylamid để tiến hành phân tách các protein, khối phổ để xác định khối lượng phân tử và định tính protein (hoặc các đoạn peptit từ phân tử protein đó), và sinh tin học để đối chiếu các phân tử protein và các đoạn peptit với các trình tự mã hóa của chúng trong hệ gen. Một tế bào riêng lẻ thường ít nhất tạo ra hàng nghìn loại protein khác nhau, trong khi việc sử dụng đơn lẻ phương pháp điện di truyền thống trên gel polyacrylamid thường không đủ để phân lập và tách biệt các protein này. Vì vậy, như tên gọi của nó, phương pháp điện di hai chiều cho phép phân tách các phân tử protein trên gel điện di theo hai chiều được thực hiện kế tiếp nhau.
Trong bước thứ nhất, các phân tử protein được phân đoạn dựa trên điểm đẳng điện của chúng (theo nguyên tắc hội tụ đẳng điện). Theo nguyên tắc này, khi một gradient pH được tạo ra từ đầu này đến đầu kia của bản điện di, thì tại vị trí pH tương ứng làm trung hòa điện tích của một phân tử protein sẽ làm các phân tử protein tập trung (hội tụ) tại vị trí đó. Trong bước thứ hai, các phân tử protein tại điểm hội tụ được tiếp tục phân tách trên cơ sở khối lượng và kích thước của chúng khi di chuyển trên trường điện di polyacrylamid đã được gây biến tính bởi SDS như mô tả ở trên. Do các phân tử protein được đồng thời phân tách dựa trên hai thuộc tính (điểm đẳng điện và trọng lượng phân tử), nên hàng nghìn loại protein khác nhau có thể được phân tách khỏi nhau trong một thí nghiệm duy nhất. Sau khi được phân đoạn theo phương pháp điện di hai chiều, mỗi loại protein riêng biệt sẽ được đưa vào phân tích khối phổ để xác định chính xác khối lượng phân tử. Như đã nói ở trên, để tăng hiệu quả phân tích, thông thường protein được cắt thành các đoạn peptit nhỏ nhờ sử dụng protease thay cho việc phân tích phân tử protein ở dạng nguyên vẹn có phân tử lượng lớn và cấu trúc phức tạp. Kỹ thuật phân tích MS /MS cho phép giải trình tự chi tiết của các đoạn peptit và xác định phân tử protein.
Cuối cùng các dữ liệu về trình tự hệ gen hoàn chỉnh của một cơ thể và các trình tự peptit từ các loại protein được quan tâm nghiên cứu sẽ được đưa vào phân tích bằng các phần mềm sinh tin học để có thể xác định được một trình tự mã hóa đặc thù trong hệ gen tương ứng với loại protein có chức năng được quan tâm nghiên cứu. Như vậy, các nghiên cứu hệ gen học (genomics) và hệ protein học (proteomics) có mối quan hệ chặt chẽ trong các nghiên cứu di truyền học phân tử.
Hướng dẫn download:
Click vào link → Chờ 5 giây → Click vào
**SKIP AD >>** (Pass nếu có: www.thuviensinhhoc.com)
**Hãy click nút Like và G+1 để ủng hộ Thư Viện Sinh Học!**
| |[Tiếp >](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/450-nhung-cau-truc-chua-dna-trong-te-bao.html) [Cơ chế phân tử của sao chép DNA](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/481-co-che-phan-tu-cua-sao-chep-dna.html) [Điện di phân tích ADN và ARN](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/460-dien-di-phan-tich-adn-va-arn-.html) [Các phương pháp lai phân tử và mẫu dò](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/459-cac-phuong-phap-lai-phan-tu-va-mau-do-.html) [Tách dòng phân tử và xây dựng thư viện hệ gen](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/458-tach-dong-phan-tu-va-xay-dung-thu-vien-he-gen-.html) [Tổng hợp hóa học và sử dụng các đoạn oligonucleotit](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/457-tong-hop-hoa-hoc-va-su-dung-cac-doan-oligonucleotit-.html) [Phản ứng PCR](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/456-phan-ung-pcr.html) [Giải mã trình tự ADN](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/455-giai-ma-trinh-tu-adn-.html) [Phân tích so sánh các hệ gen](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/454-phan-tich-so-sanh-cac-he-gen.html) [DNA là vật chất di truyền](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/453-dna-la-vat-chat-di-truyen-.html) [Thành phần và cấu tạo hóa học của acid nucleic](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/452-thanh-phan-va-cau-tao-hoa-hoc-cua-acid-nucleic.html) [Những cấu trúc chứa DNA trong tế bào](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/450-nhung-cau-truc-chua-dna-trong-te-bao.html) [Lập bản đồ gene của DNA ty thể](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/426-lap-ban-do-gene-cua-dna-ty-the.html) [Các yếu tố di truyền vận động (Transposable genetic elements) ở prokaryote](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/425-cac-yeu-to-di-truyen-van-dong-transposable-genetic-elements-o-prokaryote.html) [Di truyền học phân tử các bào quan](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/424-di-truyen-hoc-phan-tu-cac-bao-quan.html) [Sửa chữa và bảo vệ ADN](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/423-sua-chua-va-bao-ve-adn.html) [Các yếu tố di truyền vận động ở eukaryote](/chuyen-de-sinh-hoc/di-truyen-phan-tu/422-cac-yeu-to-di-truyen-van-dong-o-eukaryote.html)

WARC-Type: response

Content-Type: application/http; msgtype=response

WARC-Truncated: length

Server: Apache

P3P: CP="NOI ADM DEV PSAi COM NAV OUR OTRo STP IND DEM"

Vary: User-Agent,Accept

Content-Encoding: x-gzip

X-Content-Encoded-By: Joomla! 1.5

Cache-Control: post-check=0, pre-check=0

Pragma: no-cache

Set-Cookie: ja_teline_iii_tpl=SqJzFrZcGjKVg7AJgGNVgTyHJR_c3likFjO4gJCzKFM.; expires=Wed, 08-Apr-2015 00:29:11 GMT; path=/

Connection: close

Content-Type: text/html; charset=utf-8


text:
Thơ ngụ ngôn La Fontaine
Loại sách: Thơ, danh ngôn - Thơ nước ngoài / Số trang: 137 / Kích cỡ: 13x19cm / Nhà xuất bản: Văn Học / Tìm theo vần: T / Hình thức bìa: Bìa mềm /
Những câu chuyện cổ tích hay nhất thế giới
Loại sách: Thiếu nhi - Truyện Thiếu Nhi / Số trang: 347 / Kích cỡ: 13x19cm / Nhà xuất bản: Hồng Bàng / Tìm theo vần: N / Hình thức bìa: Bìa mềm /
Mỗi Ngày Một Câu Chuyện Hay - Tập 1
Loại sách: Tâm lý - Sách học làm người / Số trang: 188 / Kích cỡ: 14.5x20.5cm / Nhà xuất bản: NXB Thanh Niên / Xuất xứ: - / Tìm theo vần: M /
Tại sao đuôi Chuột Túi lại rất có ích đối với chúng ?
Loại sách: Thiếu nhi - Trẻ Em Giải trí / Số trang: 10 / Kích cỡ: 13x15cm / Nhà xuất bản: Mỹ Thuật / Tìm theo vần: T / Hình thức bìa: Bìa mềm /

Set-Cookie: u_nologin_id=911623036; expires=Sun, 27-Jul-2014 00:23:13 GMT; path=/; httponly

Cache-Control: no-store, no-cache, must-revalidate, post-check=0, pre-check=0

Vary: Accept-Encoding

Content-Encoding: gzip

Content-Type: text/html; charset=UTF-8


markdown:
**1**lượt cảm ơn)
tai sao khi treo may de download thi sau mot luc ko dung vao chuot la man hinh den va ngung download.phai lam cach nao de co the download khi man hinh chuyen sang che do tiet kiem dien.truoc khi cai lai win xp em download co sao dau
FPT Elead NETTOP A100 Black ( Intel Atom 230 1.6GHz, 1GB RAM, 160GB HDD, VGA Intel GMA 950, PC DOS, Không kèm theo màn hình)
Dell Studio XPS 8000 (Intel Core i5-750 2.66GHz, 4GB RAM, 500GB HDD, VGA ATI Radeon HD 4670, Windows 7 Ultimate 64bit, Không kèm theo màn hình)
Compaq Presario CQ2111L (NC735AA) (Intel Atom 330 1.6GHz, RAM 1GB. HDD, 160GB, VGA Intel GMA 950, PC DOS, không kèm theo màn hình)
HP Compaq dx2390 - KM635AV (Intel Pentum Dual Core E5200 2.5GHz, 1GB RAM, 160GB HDD, VGA Intel GMA 3100, FreeDOS, không kèm theo màn hình)
|
|![]()
|
|

Set-Cookie: u_nologin_id=911697447; expires=Sun, 27-Jul-2014 00:59:49 GMT; path=/; httponly


text:
Sản phẩm
Rao vặt
Hỏi đáp
Gian hàng
Thêm
Tin tức, thông báo từ Vatgia.com
Để kinh doanh Online thành công
Danh sách gian hàng
Đánh giá sản phẩm công nghệ
BaoKim.vn
CucRe.vn
MyTour.vn
Nhanh.vn
123Doc.vn
WebBNC.net
IKI.vn
Sản phẩm
Sản phẩm
Rao vặt
Hỏi đáp
Cửa hàng
Hỗ trợ
Tuyển dụng
Nạp tiền
Đăng ký
Đăng ký thành viên
Đăng ký gian hàng
Đăng nhập
Tên truy cập:
Mật khẩu:
Nhớ mật khẩu
Quên mật khẩu
Sản phẩm
Sản phẩm
Rao vặt
Hỏi đáp
Cửa hàng
Toàn bộ danh mục
Thiết kế Website miễn phí
Đọc sách online miễn phí
Mua hàng giá cực rẻ
Phim HD Online
Có
525
sản phẩm
Tìm:
Giá từ:
Đến:
Lọc theo ngày cập nhật
15 ngày gần đây
Tất cả
Lọc theo Tỉnh/ Thành phố
Hà Nội
(276)
Hồ Chí Minh
(92)
Đồng Nai
(36)
Đà Nẵng
(2)
Hà Nội 2
(2)
Khánh Hòa
(1)
Quảng Trị
(35)
...Xem thêm
Các danh mục chính
Bố thắng (má phanh) xe máy
(1)
Xe bồn
(1)
Xe máy
(2)
Xe máy ba bánh chở hàng
(2)
Các phụ tùng xe máy khác
(12)
Dụng cụ, thiết bị sửa chữa Xe máy
(2)
Phụ kiện trang trí xe máy
(1)
Đèn xe máy
(32)
Đồ chơi xe Ôtô, xe máy
(4)
OFFROAD
(456)
Thiết bị rửa xe Ôtô
(1)
Bơm nước Ôtô
(1)
Sên nhông đĩa
(5)
Đèn ôtô
(1)
Đồ chơi ghép hình
(1)
Kết quả tìm kiếm trong các danh mục
Ô tô, xe máy, xe đạp
(517)
Xe máy, phụ tùng xe máy
(513)
OFFROAD
(456)
Đèn xe máy
(32)
Các phụ tùng xe máy khác
(12)
Sên nhông đĩa
(5)
Xe máy
(2)
Dụng cụ, thiết bị sửa chữa Xe máy
(2)
Xe máy ba bánh chở hàng
(2)
Bố thắng (má phanh) xe máy
(1)
Phụ kiện trang trí xe máy
(1)
Phụ tùng ô tô
(2)
Bơm nước Ôtô
(1)
Đèn ôtô
(1)
Ô tô ( Xe hơi)
(1)
Xe bồn
(1)
Cơ khí ô tô
(1)
Thiết bị rửa xe Ôtô
(1)
Hoa, quà tặng, đồ chơi
(5)
Đồ chơi
(5)
Đồ chơi xe Ôtô, xe máy
(4)
Đồ chơi ghép hình
(1)
Điện thoại, viễn thông
(2)
Thiết bị viễn thông
(2)
Máy bộ đàm trạm
(2)
Công nghiệp, Xây dựng
(1)
Vật tư, thiết bị công nghiệp
(1)
Thiết bị công nghiệp tổng hợp
(1)
Máy cắt cỏ
(1)
xe may xi bo
Bạn có muốn tìm thêm:
xe may yamaha
xe may honda
xe may xi bo
xe may xi bo 2009
xe may
xe may suzuki
xe su xi bo
xe xu xi bo
xe may suzuki bo 125
xe su xi bo cu
xe may suzuki bo
xe may si bo
xe may xin
xe may suzuki bo sa
xe may xu bo
xe may xi po
xe may xi lanh
xe may xilanh
xe may xiter
xe may xi
Có
525
sản phẩm cho từ khóa “
xe may xi bo
”
|
Rao vặt
(106)
|
Hỏi đáp
(40)
Sắp xếp:
Tên
|
Tên
|
Giá
|
Giá
Máy bộ đàm gắn
xe
tắc
xi
TM610
Giá bán:
3.260.000 VNĐ
Hàng mới từ
3.260.000 VNĐ
(6 GH bán)
Hãng sản xuất: HYT / Cự ly liên lạc(km): 0 / Độ ổn định tần số: ± 2 ppm / Số kênh: 8 / Khoảng kênh: 12.5/20/25/ kHz / Công suất VHF/UHF(W): 25 / Công suất GM(W): 0 / Điện thế nguồn sử dụng: 13.6V / Tính năng: Mật mã khóa, Độ bao phủ băng tần rộng, Báo động khẩn cấp, / Mở rộng: Cài đặt sẵn bộ xáo trộn âm thanh, Âm thanh được nén nghe rõ ràng, Chức năng quét, / Trọng lượng(g): 1000 /
Mới được đánh giá
Chưa có đánh giá nào
Bộ nhông xích Honda lắp cho
xe
Future neo
Giá bán:
170.000 VNĐ
Hàng mới từ
170.000 VNĐ
(3 GH bán)
Loại phụ tùng:
Nhông
Hãng sản xuất:
HONDA
Mới được đánh giá
“
Tương đối bền
”
tiyekogiha
| 27/05/2013 - 22:51
Xem tất cả
1
đánh giá
Bộ nhông xích Honda lắp cho
xe
Wave α 100
Giá bán:
170.000 VNĐ
Hàng mới từ
170.000 VNĐ
(3 GH bán)
Loại phụ tùng:
Nhông
Hãng sản xuất:
HONDA
Mới được đánh giá
Chưa có đánh giá nào
Bộ nhông xích Honda lắp cho
xe
Wave α 110
Giá bán:
170.000 VNĐ
Hàng mới từ
170.000 VNĐ
(4 GH bán)
Loại phụ tùng:
Nhông
Hãng sản xuất:
HONDA
Chưa có đánh giá nào
Bộ nhông xích Honda lắp cho
xe
Dream
Giá bán:
165.000 VNĐ
Hàng mới từ
165.000 VNĐ
(3 GH bán)
Loại phụ tùng:
Nhông
Hãng sản xuất:
HONDA
Chưa có đánh giá nào
Derbi
Bo
ulevard 50 2T 2009
Giá bán:
26.000.026 VNĐ
Hàng mới từ
26.000.026 VNĐ
(2 GH bán)
Hãng sản xuất:
DERBI
Dung tich xy lanh:
49.4cc
Loại Xe:
Xe ga
Chưa có đánh giá nào
Cùng Series:
Derbi
Bo
ulevard 125 4T 2009
Giá bán:
35.000.026 VNĐ
Hàng mới từ
35.000.026 VNĐ
(2 GH bán)
Hãng sản xuất:
DERBI
Dung tich xy lanh:
124cc
Loại Xe:
Xe ga
Chưa có đánh giá nào
1
câu hỏi về sản phẩm
Cùng Series:
Vam đột xích( Cảo mắt sên ) cao cấp H01
Giá bán:
116.000 VNĐ
Hàng mới từ
116.000 VNĐ
(1 GH bán)
Hãng sản xuất :
Bosi
Loại dụng cụ, thiết bị:
Đột xích
Xuất xứ:
Taiwan
Chưa có đánh giá nào
Vam đột xích cam( Cảo mắt sên cam ) cao cấp H01
Giá bán:
116.000 VNĐ
Hàng mới từ
116.000 VNĐ
(1 GH bán)
Hãng sản xuất :
Bosi
Loại dụng cụ, thiết bị:
Đột xích cam( Cảo mắt sên cam )
Xuất xứ:
Taiwan
Chưa có đánh giá nào
Bóng đèn Halogen Siêu Sáng (1 đôi)
Giá bán:
98.000 VNĐ
Hàng mới từ
98.000 VNĐ
(2 GH bán)
Loại: Đèn pha / Hãng sản xuất: YAMAHA / Công suất đèn (W): 35 / Xuất xứ: Germany /
5
/ 1 phiếu
1
câu hỏi về sản phẩm
Bóng đèn Halogen Philip cho Nouvo 3
Giá bán:
45.000 VNĐ
Hàng mới từ
45.000 VNĐ
(3 GH bán)
Loại: Đèn pha / Hãng sản xuất: PHILIPS / Công suất đèn (W): 35 / Xuất xứ: Germany /
Chưa có đánh giá nào
Bộ hơi Cos 0 cho
xe
Honda CG125
Không có GH bán...
Loại phụ tùng:
Xi
lanh / Hãng sản xuất: HONDA /
Chưa có đánh giá nào
Bộ xy lanh pittong xéc măng Cos 0
xe
Honda CB125T
Không có GH bán...
Loại phụ tùng:
Xi
lanh / Hãng sản xuất: HONDA /
Chưa có đánh giá nào
Xi
Téc HYUNDAI chở nhiên liệu máy bay chuyên dụng
Giá bán:
1.842.432.000 VNĐ
Hàng mới từ
1.842.432.000 VNĐ
(18 GH bán)
Hãng sản xuất: Hyundai / Nhiên liệu: Diesel / Tải trọng cho phép chở (kg): 0 / Thể tích (cm3): 24000 /
Chưa có đánh giá nào
Máy rửa
xe
bọt tuyết và xịt WAX bóng Pallas Pro
Giá bán:
9.700.000 VNĐ
Hàng mới từ
9.700.000 VNĐ
(8 GH bán)
Hãng sản xuất:
PALLAS
Loại thiết bị:
Máy tạo bọt
Xuất xứ:
Liên Doanh
Chưa có đánh giá nào
Trang:
1
2
3
4
..
Kết quả tìm kiếm rao vặt
Thu mua máy tập củ đã qua sử dụng giá cao
Bán buôn bộ đàm chính hãng Kenwood
MOTOTR
BO
Xi
R M8220/M8228
cần bán
xe
HONDA VISION chính chủ ,nguyên bản 24 triệu -
24.000.000 VNĐ/ 01
Máy chạy bộ điện, máy chạy bộ cơ, máy đạp
xe
,
xe
đạp tập, máy tập cơ bụng -
2.370.000 VNĐ
Cần Bán
Xe
Đông Lạnh Kia
Bo
ngo III - 1T4 - 1.4 Tấn - 1,4 Tấn - 1400Kg - 1,4T Cũ Nhập Khẩu Nguyên... -
400.000.000 VNĐ
BÁN
XE
TẢI THÙNG ĐÔNG LẠNH CŨ VÀ MỚI 1 TẤN - 1,4 TẤN - 1.4 TẤN CỦA HÃNG KIA
BO
NGO III VÀ HÃNG... -
350.000.000 VNĐ
Máy bộ đàm cầm tay dùng cho nhà hàng,khách sạn,chất lượng giá tốt tp hcm
Mua máy tính rinh
xe
máy” và “Tuần lễ vàng laptop Dell & Sony giảm 1.000.000
Áo
xi
nh mùa hè *siêu kut3* MiLanShop -
200.000 VNĐ/ bộ
BÁN MUA
XE
ĐÔNG LẠNH KIA
BO
NGO - THANH LÝ GẤP LÔ
XE
ĐÔNG LẠNH HYUNDAI 1 TẤN NHẬP KHẨU ĐỜI 2007
BÁN
XE
ĐÔNG LẠNH KIA
BO
NGO III NHẬP KHẨU - CẦN BÁN GẤP
XE
ĐÔNG LẠNH KIA
BO
NGO III NHẬP KHẨU MÀU...
Cần bán gấp
xe
FLY chính chủ giá rẻ vỏ
bo
c nguyên nilon -
12.800.000 VNĐ/ 01
Máy đạp tập thể dục X-bike i2 -
3.250.000 VNĐ/ cái
Xe
đạp tập thể dục BK 307 -
10.500.000 VNĐ/ CÁI
Bo
sch EXACT Vietnam
Máy cán bột, Máy cuộn bột, Máy chia bột, Máy trộn bột, Tu u
bo
t,
May
cat banh, Lo nuong
Cần bán ô tô TOYOTA LAND CRUISER
BỘ ĐÀM CHIẾT KHẤU 5%-MUA 5 CÁI TẶNG 1 CÁI-ĐẠI LÝ CUNG CẤP MÁY BỘ ĐÀM MOTOROLA SMP-418/MOTOROLA...
Máy khoan chứng từ
XI
UDUN HT- 70 -
18.900.000 VNĐ/ 1 chiếc
Xem tất cả
Tìm kiếm tại Hỏi đáp
Cấn giúp cách cài phim cho máy ipod china?
Tại sao đăng câu hỏi trên vật giá mà không thấy ai trả lời?
Xi
n ý kiến về Ram máy tính?
Cho mình hỏi cái tay thắng Racing
Bo
y của YAMAHA có thể gắn cho Air Blade ko vậy?
Tại sao Air Blade của em bằng tiền Nouvo mà sao em thấy nó cứ quê quê?
Các anh em cho mình hỏi về
xe
Bo
nus 125????
Hỏi về chức năng ghi âm của máy apple ipood nano 4g thế hệ 3?
Xi
n cho hỏi giá Nouvo LX ở HCM hiện tại là bao nhiêu tiền?
xe
chạy 1 lít xăng được bao nhiêu km
Cách chèn video và video clip vào ipod?
Cần tư vấn mua máy DSLR của Canon ?
Luvias có quá nhỏ ko?
Anh chị cho em biết ý nghĩa của con số 5029 trong bản số
xe
máy đi ạ?
Xi
n tư vấn lựa chọn giữa Liberty i.e và AirBlade Fi 2010?
Tivi kêu rất to khi tắt máy
Ban Gap en lun chau au
xe
zin,gia mem
300 tr, có mua được
xe
4 bánh- Bền, chất lượng?
Đánh gia
xe
kawasaki
Bo
ss 175?
Xe
hayate có bán tại HCM Không? Nếu có thì ở đâu? Giá bao nhiêu? Mức độ tiêu hao xăng thế nào?
Xi
n tư vấn dùm em nên mua Canon 400D hay Nikon D60?
Đánh giá tổng quan Yamaha Luvias?
Xem tất cả
Vatgia.com
|
Sản phẩm
|
Rao vặt
|
Hỏi đáp, tư vấn tiêu dùng
|
Đánh giá (Review)
|
Lưu trữ rao vặt
|
iPad 3
|
Xe may
|
Dien thoai
|
Netbook
|
Máy tính laptop
|
Galaxy S5
|
Máy ảnh số
|
iPhone
|
Máy nghe nhạc MP3
|
Galaxy Tab
|
Tivi LCD
|
Mainboard
|
RAM
|
Màn hình LCD
|
Điều hòa
|
BlackBerry
|
Máy chấm công
|
Máy chiếu
|
Máy photocopy
|
Bat dong san
|
Can thue nha
|
Galaxy S4
|
iPhone 5
|
Sách
|
San go cong nghiep
|
iPhone 5S
|
Ao cuoi
|
Sàn gỗ công nghiệp
|
Ô tô
|
O to
|
Oto
|
Xe hơi
|
Tủ rack
|
Thiết bị PDH Multiplexer
|
Phụ kiện kết nối máy tính
|
Đàn Piano
|
Tấm dán bảo vệ
|
Dụng cụ tháo ráp piston
|
Bì thư
|
Thiết bị trao đổi nhiệt
|
Dụng cụ xây dựng cầm tay
|
Ống nhòm
|
Nhãn dán
|
Quần áo bóng rổ
Công ty Cổ phần Vật Giá Việt Nam. Số GCNDT: 011032001615, cấp ngày 21/06/2012, nơi cấp: UBND thành phố Hà Nội.
Trụ sở chính: Lê Đại Hành, Hai Bà Trưng, Hà Nội - Chi nhánh Hồ Chí Minh: Đường Lữ Gia, Phường 15, Quận 11, Hồ Chí Minh

Set-Cookie: u_nologin_id=911824408; expires=Sun, 27-Jul-2014 02:02:35 GMT; path=/; httponly


text:
Tổng Đại lý Tuân Hà cung cấp các sản phẩm bảng, cũi, ghế tập ăn cho bé...với giá tốt nhất!
Giường cũi trẻ em , cũi cho bé, giá bán các loại cũi trên thị trường
Áo chống cận thị và hỗ trợ cột sống
Bé yêu của bạn đang ở vào độ tuổi từ 3-5, ba mẹ muốn bé tập làm quen với tiếng Anh để sớm phát triển khả năng ngoại ngữ? Làm thế nào để biến việc học nặng nề thành những trò chơi vui vẻ dành cho bé? Bộ sách Bé làm quen với tiếng Anh gồm 3 cuốn: First picture words object (Đồ vật quanh em), Fun with First words (Vui học những từ đầu tiên) và Bogie Bear learns words (Gấu Bogie học từ) sẽ giúp bé học tiếng Anh thật dễ dàng.
Bogie Bear learns words (Gấu Bogie học từ) là cuốn sách thích hợp cho các bé từ 5 tuổi. Đây là cuốn từ điển Anh – Việt bằng hình giúp phát triển các kỹ năng tiếng Anh cho trẻ. Các từ trong cuốn sách này được chia theo các tình huống và chủ đề trong cuộc sống hằng ngày của gia đình gấu Bogie. Ví dụ, chiếc gối, chiếc chăn hay chiếc đèn bàn là những vật dụng thường có trong phòng ngủ nên được xếp vào nhóm Phòng ngủ, và cứ thế, các em sẽ nhớ lâu hơn. Ngoài ra, mỗi từ tiếng Anh luôn có kèm phần nghĩa tiếng Việt và phần phiên âm giúp các em có thể tự đọc và viết một cách chính xác. Đồng thời, ở cuốn sách này, trẻ còn được học cách sử dụng các động từ thông dụng kết hợp với các danh từ và làm quen với những câu tiếng Anh đơn giản, thông qua đó các em sẽ có những khái niệm đầu tiên về ngữ pháp tiếng Anh cơ bản để từ đó học tiếp ở trình độ cao hơn. Chưa hết, với các minh họa nhiều màu sắc và các nhân vật đáng yêu cũng khiến việc học tiếng Anh trở nên thú vị và thật cuốn hút.
Bên cạnh Những từ thú vị, bé còn được Chơi dán hình với các hình dán ngộ nghĩnh được sắp xếp ở hai trang đầu cuốn sách. Ba mẹ có thể hướng dẫn bé chọn hình và dán với từ tương ứng để ôn lại và tăng cường kỹ năng ghi nhớ từ vựng.
Đặc biệt, để việc sử dụng bộ sách được thuận tiện, hiệu quả, ba mẹ sẽ tìm thấy những hướng dẫn vô cùng hữu dụng ở phần Lời khuyên dành cho phụ huynh với các chỉ dẫn về cách thức dạy bé học, bé đọc và phần Phát âm để bé hiểu cách đọc, cách nhấn mạnh từ ra sao trước các ký hiệu (‘) hay (ֽ).
Tác giả: Cẩm Tú
NXB: Dân Trí
Phát hành: Đông A
Năm XB: 2010
Giá: 145.000 VNĐ / Bộ ( 3 cuốn ).
Hãy gọi 04.3350.6002 hoặc chat với yahoo sach_thieu_nhi để đặt mua cuốn sách này.
Tôi tài giỏi, bạn cũng thế!
Bách khoa tri thức cho trẻ em - câu hỏi và trả lời
Bộ 365 chuyện kể hằng đêm
Bút chấm đọc thông minh Touch Talk 4GB - VTC E 9000
Ghế xe hơi Vantage - Safety 1st Xanh lá cây 22564TRI
Ghế xe hơi Summit màu xanh lá - Safety first 22566TRI
Ghế ăn ếch xanh GD 599
66430-Xe tập đi Safety1st Happy Play time (2 Trong 1)
Magic Nuudles
Bột ngô nặn Magic Nuudles - Đồ chơi sáng tạo và an toàn cho bé
Các bộ truyện tranh Doremon
Mua Robot Huna ở Nhà sách thiếu nhi
Big Book of pirates-Những tên cướp biển
Sách thiếu nhi tháng 12
Sách mới cho các bé tại www.sachthieunhi.net

markdown:
Tổng Đại lý Tuân Hà cung cấp các sản phẩm bảng, cũi, ghế tập ăn cho bé...với giá tốt nhất!
Giường cũi trẻ em , cũi cho bé, giá bán các loại cũi trên thị trường
Áo chống cận thị và hỗ trợ cột sống
|Siêu VIP còn trống
|
Liên hệ Q.Cáo
0976.822.270
|Siêu VIP còn trống
|
Liên hệ Q.Cáo
0976.822.270
|Siêu VIP còn trống
|
Liên hệ Q.Cáo
0976.822.270
|Siêu VIP còn trống
|
Liên hệ Q.Cáo
0976.822.270
|Siêu VIP còn trống
|
Liên hệ Q.Cáo
0976.822.270
|
|
Tin rao vặt này đã hết hạn! Tin lưu trữ..
Bạn hãy vào mục
|
|
|
|
|
|
|Đăng bởi :||
|![]()
|Thông tin chi tiết||
|
Bé yêu của bạn đang ở vào độ tuổi từ 3-5, ba mẹ muốn bé tập làm quen với tiếng Anh để sớm phát triển khả năng ngoại ngữ? Làm thế nào để biến việc học nặng nề thành những trò chơi vui vẻ dành cho bé? Bộ sách
**Bé làm quen với tiếng Anh** gồm 3 cuốn: **First picture words object **(Đồ vật quanh em), **Fun with First words** (Vui học những từ đầu tiên) và **Bogie Bear learns words** (Gấu Bogie học từ) sẽ giúp bé học tiếng Anh thật dễ dàng. **Bogie Bear learns words (Gấu Bogie học từ)** là cuốn sách thích hợp cho các bé từ 5 tuổi. Đây là cuốn từ điển Anh – Việt bằng hình giúp phát triển các kỹ năng tiếng Anh cho trẻ. Các từ trong cuốn sách này được chia theo các tình huống và chủ đề trong cuộc sống hằng ngày của gia đình gấu Bogie. Ví dụ, chiếc gối, chiếc chăn hay chiếc đèn bàn là những vật dụng thường có trong phòng ngủ nên được xếp vào nhóm Phòng ngủ, và cứ thế, các em sẽ nhớ lâu hơn. Ngoài ra, mỗi từ tiếng Anh luôn có kèm phần nghĩa tiếng Việt và phần phiên âm giúp các em có thể tự đọc và viết một cách chính xác. Đồng thời, ở cuốn sách này, trẻ còn được học cách sử dụng các động từ thông dụng kết hợp với các danh từ và làm quen với những câu tiếng Anh đơn giản, thông qua đó các em sẽ có những khái niệm đầu tiên về ngữ pháp tiếng Anh cơ bản để từ đó học tiếp ở trình độ cao hơn. Chưa hết, với các minh họa nhiều màu sắc và các nhân vật đáng yêu cũng khiến việc học tiếng Anh trở nên thú vị và thật cuốn hút.
Bên cạnh Những từ thú vị, bé còn được Chơi dán hình với các hình dán ngộ nghĩnh được sắp xếp ở hai trang đầu cuốn sách. Ba mẹ có thể hướng dẫn bé chọn hình và dán với từ tương ứng để ôn lại và tăng cường kỹ năng ghi nhớ từ vựng.
Đặc biệt, để việc sử dụng bộ sách được thuận tiện, hiệu quả, ba mẹ sẽ tìm thấy những hướng dẫn vô cùng hữu dụng ở phần Lời khuyên dành cho phụ huynh với các chỉ dẫn về cách thức dạy bé học, bé đọc và phần Phát âm để bé hiểu cách đọc, cách nhấn mạnh từ ra sao trước các ký hiệu (‘) hay (ֽ).
**Tác giả: Cẩm Tú** **NXB: Dân Trí** **Phát hành: Đông A** **Năm XB: 2010** **Giá: 145.000 VNĐ / Bộ ( 3 cuốn ).** **Hãy gọi 04.3350.6002 hoặc chat với yahoo ** **sach_thieu_nhi** ** để đặt mua cuốn sách này.**
Tôi tài giỏi, bạn cũng thế!
Bách khoa tri thức cho trẻ em - câu hỏi và trả lời
Bộ 365 chuyện kể hằng đêm
Bút chấm đọc thông minh Touch Talk 4GB - VTC E 9000
Ghế xe hơi Vantage - Safety 1st Xanh lá cây 22564TRI
Ghế xe hơi Summit màu xanh lá - Safety first 22566TRI
Ghế ăn ếch xanh GD 599
66430-Xe tập đi Safety1st Happy Play time (2 Trong 1)
|
|
Magic Nuudles
Bột ngô nặn Magic Nuudles - Đồ chơi sáng tạo và an toàn cho bé
Các bộ truyện tranh Doremon
Mua Robot Huna ở Nhà sách thiếu nhi
Big Book of pirates-Những tên cướp biển
Sách thiếu nhi tháng 12
Sách mới cho các bé tại www.sachthieunhi.net

Set-Cookie: history_raovat=2679712%7C0; path=/


text:
CÔNG TY CP SẢN XUẤT & THƯƠNG MẠI MAIKA
SẢN PHẨM MAIKA CUNG CẤP.
QUẦN ÁO ĐỒNG PHỤC: ( nhận theo đơn đặt hàng )
=>học sinh, nhân viên văn phòng, công sở, đồng phục công ty, bệnh viện, bảo vệ.
=>Khách sạn, nhà hàng: nhân viên, bảo vệ, đầu bếp.
=>Đồng phục văn phòng
=>Đồng phục học sinh, sinh viên.
=>Đồng phục nhóm, tập thể.
=>In, ấn Logo cty trên đồng phục
=>May đo, thiết kế thời trang nữ.
=>Đồng phục thu đông (áo gió, áo khoác, áo ấm 2 lớp, quần áo bảo hộ lao động chuyên nghiệp, áo dạ…)
QUẦN ÁO BẢO HỘ LAO ĐỘNG: ( nhận theo đơn đặt hàng )
=>Đồng phục công nhân, bảo hộ lao động
=>Đồng phục bảo hộ lao động cho các công ty, xí nghiệp.
=>Đồng phục thu đông (áo gió, áo khoác, áo ấm 2 lớp, quần áo bảo hộ lao động chuyên nghiệp, áo dạ…)
=>Đồng phục phòng sạch
CÁC TRANG THIẾT BỊ BẢO HỘ LAO ĐỘNG: ( nhận theo đơn đặt hàng )
=>Giày các loại. Mũ, Nón Bảo Hộ Lao Động, Găng tay các loại. Khẩu trang …... Cho các cơ quan, xí nghiệp, trường học trong và ngoài nước.
ÁO PHÔNG ĐỒNG PHỤC, BÁN HÀNG PG: ( nhận theo đơn đặt hàng )
=>Đồng phục mùa hè (áo phông, áo thời trang …)
=>Áo khuyến mãi, quảng cáo dành cho các công ty & doanh nghiệp
=>ÁO PHÔNG LACOSTE. ( 65%, 100% cotton )
=>ÁO PHÔNG POLO- Shirt. ( 65%, 100% cotton )
=>ÁO PHÔNG T - Shirt. ( 65%, 100% cotton )
=>Tư vấn mấu mã giá cả chất liệu vải, thiết kế theo yêu cầu
=>In, ấn Logo cty trên đồng phục
=>May đo, thiết kế thời trang nam nữ.
Chúng tôi rất hân hạnh được phục vụ quí khách hàng
CÔNG TY CP SẢN XUẤT VÀ THƯƠNG MAI MAIKA
Địa chỉ văn phòng: số 231 Nguyễn Tam Trinh Hoàng Mai Hà Nội
Mọi chi tiết xin vui lòng liên hệ:
Mobile: 0944.765.824
Email : dongphuccongsomaika@gmail.com
website :
MAIKA THỜI TRANG THƯƠNG HIỆU VIỆT.
Áo thun đồng phuc t 08
Thank you in advance ĐP1802880
Quần soọc công nhân túi hộp GL_BHLD_QACD01
Quần soọc công nhân có túi đa năng GL_BHLD_QACD02
Đồng phục vest nữ VN001
Đồng phục vest nữ VN003
Đồng phục vest nữ VN003
Đồng phục vest nữ VN004
Đồng phục vest nữ VN005
Đồng phục vest nữ VN006
Đồng phục vest nữ VN007
Đồng phục vest nữ VN008
Đồng phục vest nữ VN009
Đồng phục vest nữ VN010
Đồng phục vest nữ VN011
Đồng phục vest nữ VN012
Đồng phục vest nữ VN013
Đồng phục vest nữ VN014
Đồng phục vest nữ VN015
Đồng phục vest nữ VN016
Đồng phục vest nữ VN017
Đồng phục vest nữ VN018
Đồng phục vest nữ VN019
Đồng phục vest nữ VN020
Đồng phục vest nữ VN021
Đồng phục vest nữ VN022
Đồng phục vest nữ VN023
Đồng phục vest nữ VN024

markdown:
|Siêu VIP còn trống
|
Liên hệ Q.Cáo
0976.822.270
|Siêu VIP còn trống
|
Liên hệ Q.Cáo
0976.822.270
|Siêu VIP còn trống
|
Liên hệ Q.Cáo
0976.822.270
|Siêu VIP còn trống
|
Liên hệ Q.Cáo
0976.822.270
|Siêu VIP còn trống
|
Liên hệ Q.Cáo
0976.822.270
|Siêu VIP còn trống
|
Liên hệ Q.Cáo
0976.822.270
|Siêu VIP còn trống
|
Liên hệ Q.Cáo
0976.822.270
|Siêu VIP còn trống
|
Liên hệ Q.Cáo
0976.822.270
|
|
Tin rao vặt này đã hết hạn!
Bạn hãy vào mục
|
|
|
|
|
|
|Đăng bởi :||
|![]()
|Thông tin chung||
|
|Chất liệu|
|Thông tin chi tiết||
|
CÔNG TY CP SẢN XUẤT & THƯƠNG MẠI MAIKA
SẢN PHẨM MAIKA CUNG CẤP.
**: ( nhận theo đơn đặt hàng ) QUẦN ÁO ĐỒNG PHỤC**
Chúng tôi rất hân hạnh được phục vụ quí khách hàng
CÔNG TY CP SẢN XUẤT VÀ THƯƠNG MAI MAIKA
Địa chỉ văn phòng: số 231 Nguyễn Tam Trinh Hoàng Mai Hà Nội
Mọi chi tiết xin vui lòng liên hệ:
Mobile: 0944.765.824
Email :
[dongphuccongsomaika@gmail.com](mailto:dongphuccongsomaika@gmail.com)
website :
**MAIKA THỜI TRANG THƯƠNG HIỆU VIỆT.**
Áo thun đồng phuc t 08
Thank you in advance ĐP1802880
Quần soọc công nhân túi hộp GL_BHLD_QACD01
Quần soọc công nhân có túi đa năng GL_BHLD_QACD02
Đồng phục vest nữ VN001
Đồng phục vest nữ VN003
Đồng phục vest nữ VN003
Đồng phục vest nữ VN004
Đồng phục vest nữ VN005
Đồng phục vest nữ VN006
Đồng phục vest nữ VN007
Đồng phục vest nữ VN008
Đồng phục vest nữ VN009
Đồng phục vest nữ VN010
Đồng phục vest nữ VN011
Đồng phục vest nữ VN012
Đồng phục vest nữ VN013
Đồng phục vest nữ VN014
Đồng phục vest nữ VN015
Đồng phục vest nữ VN016
Đồng phục vest nữ VN017
Đồng phục vest nữ VN018
Đồng phục vest nữ VN019
Đồng phục vest nữ VN020
Đồng phục vest nữ VN021
Đồng phục vest nữ VN022
Đồng phục vest nữ VN023
Đồng phục vest nữ VN024
|
|

Set-Cookie: history_raovat=7656898%7C0; path=/


text:
Keywords:phim bo, phim hong kong, phim han quoc, phim tam ly, phim 18, hai kich, phim hoat hinh, tan co, cai luong, webcam videos
Category:Video, Phim, Hài Kịch, Nấu Ăn, Nhạc Việt Nam, Nhạc Hàn Quốc, Nhạc Vàng, Phim Việt Nam, Phim Trung Quốc, Phim Hồng Kông, Phim Nhật Bản, Phim Hàn Quốc, Phim Đài Loan, Phim Thái Lan, Phim Hành Động, Phim Hoạt Hình, Phim Tâm Lý, Phim Viễn Tưởng, Phim Dã Sử, Phim Kinh Dị - Ma, Phim Hài, Phim Tình Cảm, Phim Võ Thuật, Phim Thần Thoại, Tân Cổ - Cải Lương, Trang Điểm - Làm Đẹp, Việt Karaoke, Webcam Videos, Phim 18+, Hong Kong Movie, Hong Kong Drama, Japanese Drama, Japanese Movie, Chinese Drama, Chinese Movie, Korean Drama, Korean Show, Korean Movie, Hollywood Drama, Taiwan Movie, Taiwan Drama
Disclaimer: VideosViet.Com is a video search engine that indexing and organizing videos on the web. Everyday 1,000+ new videos, phim, ca nhac, hai kich, phong su.

Server: cloudflare-nginx

Set-Cookie: __cfduid=d1bda6b4d91a59ad085cffb15908a88d71397780790311; expires=Mon, 23-Dec-2019 23:50:00 GMT; path=/; domain=.videosviet.com; HttpOnly

Cache-Control: private, max-age=604800


markdown:
Keywords:phim bo, phim hong kong, phim han quoc, phim tam ly, phim 18, hai kich, phim hoat hinh, tan co, cai luong, webcam videos
Category:Video, Phim, Hài Kịch, Nấu Ăn, Nhạc Việt Nam, Nhạc Hàn Quốc, Nhạc Vàng, Phim Việt Nam, Phim Trung Quốc, Phim Hồng Kông, Phim Nhật Bản, Phim Hàn Quốc, Phim Đài Loan, Phim Thái Lan, Phim Hành Động, Phim Hoạt Hình, Phim Tâm Lý, Phim Viễn Tưởng, Phim Dã Sử, Phim Kinh Dị - Ma, Phim Hài, Phim Tình Cảm, Phim Võ Thuật, Phim Thần Thoại, Tân Cổ - Cải Lương, Trang Điểm - Làm Đẹp, Việt Karaoke, Webcam Videos, Phim 18+, Hong Kong Movie, Hong Kong Drama, Japanese Drama, Japanese Movie, Chinese Drama, Chinese Movie, Korean Drama, Korean Show, Korean Movie, Hollywood Drama, Taiwan Movie, Taiwan Drama
Disclaimer: VideosViet.Com is a video search engine that indexing and organizing videos on the web. Everyday 1,000+ new videos, phim, ca nhac, hai kich, phong su.

Set-Cookie: __cfduid=d0ff13c3a59b8693e18e023e2ec800daa1397780431933; expires=Mon, 23-Dec-2019 23:50:00 GMT; path=/; domain=.videosviet.com; HttpOnly

Cache-Control: private


text:
Trang chủ
|
Tin tức du lịch
|
Dịch vụ du lịch
|
Thư viện ảnh
|
Mua sắm online
|
Nhật ký đường xa
|
Kinh nghiệm du lịch
|
Giải trí
Đặt phòng Khách sạn
|
Đặt Nhà hàng
|
Vé Máy bay
|
Vé Tàu hỏa
|
Xe + Tàu Cánh Ngầm
|
Bảo hiểm Du Lịch
|
Tour Du lịch Việt Nam
|
Opentour
|
Thuê xe Du Lịch
|
Trang chủ
Dịch vụ du lịch
Đặt phòng Khách sạn
Liên hệ
Đăng nhập
Đăng ký
Khách sạn Hàng Không - Đà Lạt
( Lượt xem: 9743)
Giá từ: 385,000 đ/phòng
Khách sạn Hàng Không-Đà Lạt xếp hạng 2 sao với tổng số 37 phòng ngủ
Với hệ thống dịch vụ hoàn chỉnh: Nhà hàng 200 chỗ ngồi phục vụ các món Á - Âu; Quầy Bar - Cafe - Dance - Karaoke; 08 phòng Massage; phòng hội nghị; phòng bán vé máy bay trong nước, Wifi, xe đưa đón khách đi máy bay tại sân bay Liên Khương - Đà Lạt .
Địa chỉ: 40 Hồ Tùng Mậu, Đà Lạt
BẢNG GIÁ PHÒNG
2011
Loại phòng
Tổng số phòng
Ngày thường
Giường đôi loại 1
13 phòng
385.000đ
Giường đôi - loại 2
460.000đ
Giường đôi - loại 3
490.000đ
Hai giường đơn
8 phòng
390.000đ
Ba giường đơn
8 phòng
470.000đ
Một giường đôi + 1 giường đơn
1 phòng
470.000đ
Phòng Vip - loại 1
4 phòng
640.000đ
Phòng Vip - loại 2
590.000đ
Bốn giường đơn -
3 phòng
240.000đ/người
Lưu Ý:
* Giá phòng trên áp dụng cho khách đặt phòng của Vietbalo
* Giá phòng không áp dụng vào các ngày lễ, tết trong năm
* Giá phòng trên chưa bao gồm ăn sáng.
Để biết thêm thông tin về đặt phòng, xin liên hệ Du Lịch Vietbalo
:
192/52/7 Phú Thọ Hòa, P. Phú Thọ Hòa, Q. Tân Phú
Tel: 08.3972 1512 – 08.3978 6114 (giờ hành chính)
Hotline: 0937076819 (Ms. Trang)
Yahoo: hi.vietbalo
Email:
dichvu@vietbalo.vn
;
booking@vietbalo.vn
Vietbalo.vn
Đặt dịch vụ
Thảo luận
Thảo luận của bạn
Tiêu đề
:
Bạn vui lòng đăng nhập đăng nhập vào tài khoản để gửi thảo luận
Đăng nhập
Dịch vụ khác
Oriole Hotel
Ha Noi Golden 4 Hotel
Valencia Hotel
Ha Noi Golden 3 Hotel
Ha Noi Golden 2 Hotel
Khách sạn Kiều Anh
Hòa Bình Phú Quốc Resort
Majestic Nha Trang Hotel
Khách san SunDC
Vĩnh Hưng 2
Quay về
Lên trên
Khách sạn tại Đà Lạt
Bạn đã từng đến Phố núi Đà Lạt những ngày co ro lành lạnh, buổi sáng nắng đánh má hồng lên phố, chưa kịp nấn níu khen ngợi thì chiều trời đã vội mưa. Dầm dề mưa?
Thi Thảo - Gardenia Hotel Dalat
Khách sạn Sammy tọa lạc trên con đường khang trang và thơ mộng nhất thành phố Hoa – Giao lộ Giữa đường Lê Hồng Phong & Trần Phú , Sammy Dalat Hotel được xây dựng theo phong cách cổ điển của Pháp. Sammy Dalat Hotel được xây dựng theo phong cách cổ điển của Pháp. Đến với Sammy quý khách sẽ hoàn toàn hài lòng về dịch vụ và giá cả của chúng tôi.
Khách sạn Sammy Đà Lạt
Đà Lạt, thành phố của ngàn hoa, với nhiều thắng cảnh thiên nhiên và khí hậu tuyệt vời đã trở thành nơi nghỉ dưỡng nổi tiếng tại Việt Nam, và cũng là điểm đến lý tưởng cho những đôi uyên ương đi hưởng tuần trăng mật.
Khách sạn Ngọc Lan
Resort tại Phan Thiết
Lấy ý tưởng từ phong cảnh ruộng bậc thang của đồng bào Tây Bắc, Sea Links Beach Hotel được thiết kế rất hiện đại và độc đáo. Lợi thế toạ lạc trên đồi cát, khách sạn tiêu chuẩn 5 sao này có tất cả 188 phòng đều quay ra hướng biển.
Sea Links Beach Hotel
Mũi Né như một thiên đường nghỉ dưỡng với các bãi tắm hoang sơ, những đồi cát ngoạn mục và rừng dừa nhiệt đới xanh tươi. Đến đây, bạn như giải phóng mọi cảm giác để hòa mình vào vẻ đẹp thiên nhiên và mở lòng cùng tình cảm hồn hậu của người dân địa phương.
L'anmien Beach Resort
Khu nghỉ dưỡng bốn sao Sea Lion Beach Resort & Spa có số lượng phòng lớn nhất nằm cách TP. Hồ Chí Minh 200 km về phía Bắc và trải dài trên bờ biển Mũi Né đầy cát trắng nơi được mệnh danh là “ Thủ phủ của những khu nghỉ dưỡng” tại Việt Nam. Sea Lion Beach Resort & Spa là một khu nghỉ dưỡng yên tĩnh bên bờ biển nơi có kiến trúc truyền thống Việt Nam kết hợp một cách hài hoà với kiến trúc kiểu Pháp.
Sea Lion Beach Resort & Spa
SaiGon Mui Ne Resort được xây dựng tại địa chỉ 56-97 đường Nguyễn Đình Chiểu, phường Hàm Tiến, Thành phố Phan Thiết, là trung tâm du lịch đang phát triển của tỉnh Bình Thuận cách TP.Phan Thiết 12.2km, nằm trên tỉnh lộ 706 (khoảng 20 phút bằng đường bộ) theo hướng Đông và cách TP. Hồ Chí Minh 210km về hướng Bắc.
Sài Gòn Mũi Né Resort
Đơn vị tài trợ
Liên lạc Tài trợ
Gặp Ms Trang - Hotline: 0937 076 819
Dịch vụ Du Lịch
Open Tour
Thuê xe Du lịch
Tour trọn gói
Bảo hiểm du lịch
Đặt vé máy bay
Đơn vị Vận chuyển Du lịch
Tàu Greenlines
Vietnam Airlines
Jetstar - Giá rẻ
Trang chủ
|
Giới thiệu
|
Chính sách
|
Đăng ký
|
Diễn đàn
|
Quảng cáo
|
Sơ đồ website
|
Liên kết
|
Liên hệ
Copyright © 2007- 2010
Vietbalo.vn. All rights reserved
Giấy phép Số 547/GP-CBC do Cục Báo Chí, Bộ Văn Hóa- Thông tin cấp ngày 05/12/2007
Ghi rõ nguồn "
Vietbalo.vn
" khi phát hành lại thông tin từ website này
Mật ong nguyên chất
Mat ong
Tác dụng của mật ong


text:
là chương trình chuyển đổi định dạng file multimedia toàn diện nhất hiện nay. Không những giúp bạn trích xuất nhanh chóng nhạc audio từ các file video, chuyển đổi qua lại giữa các định dạng file audio và video khác nhau, còn cho phép chuyển những định dạng multimedia dành riêng cho điện thoại di động sang những định dạng sử dụng trên máy vi tính và thực hiện theo tiến trình ngược lại. chắc chắn là “bảo bối” không thể thiếu trong hành trang của các tín đồ âm nhạc. có thể đọc được những định dạng:rm, rmvb, mp4, 3gp, 3g2, psp, mpg, mpeg, vob, asf, wmv, avi, flv, mov, fli, flc, gif, dv (định dạng video); cda, mp3, mp2, wav, wma, ra, ogg, amr, ac3, au, swf (định dạng audio) và một số định dạng video sử dụng trên các hệ máy chơi game. Đồng thời hổ trợ trích xuất file dưới các định dạng: mp4, 3gp, 3g2, psp, mpg, mpeg, avi, swf, flv, gif, mov, fli, flc, dv, mp3, mp2, wav, wma, ogg, amr, ac3, au, mp4 audio. Download Total Video Converter 3.70 ( kèm serial + keygen ): Pass: izviet.com Serial:
6DEC207B-f3C6764f-0E90B64f-80f3052A-5fB4E1A9-A9050784-1DA74A30-6E95fC39-B4f627AB-406D07C1-97BAB567-806A4672-39A2B2A5-0C7E9E30-8DfDD3CD-B67f235C
hoặc
DfC5A0BA-023B98DA-320f9A39-71535f5f-5CfB7288-095258DA-45B477A5-D916E431-EA0DfCB3-525C12DE-C04285C4-7D78AB14-95DDAE18-D684A60B-B5f7BDC9-122DBEC hoặc
4D00f429-1fECE58B-DE027AC0-19ADEfB8-166B6D05-3457422C-f57D9f4B-fB0411D9-4f31A2f0-C74724B3-1ff8B8Af-3EEf0751-AD159250-0E7CE6B4-733B0E2E-CAf3DA59
Hướng dẫn sơ qua chút:
1. Từ giao diện chính của chương trình, bạn bấm vào thẻ New Task, chọn ra những file muốn convert, tiếp đó bấm vào thẻ Convert Now. Trong cửa sổ Please select the format to be converted xuất hiện, chương trình sẽ đưa ra 23 định dạng file multimedia khác nhau để bạn tùy chọn. Bạn bấm vào thẻ tương ứng với định dạng file muốn trích xuất.
2. Trước khi convert, bạn bấm vào thẻ Settings để xác lập một vài thông số quan trọng cho các file audio hoặc video sẽ được tạo ra. Trong cửa sổ Options, tại tab Audio Option, bạn lựa chọn mức Sample rate và tần số bit cho các file audio. Tại tab Video Option, bạn lựa chọn số khung hình trên giây và tần số bit cho các file video. Tại tab Video Resize, bạn có thể xác định lại kích thước khung hình cho các file video. Sau khi chọn ra các thông số vừa ý, bạn bấm OK.
3. Tại mục Default Converted folder, bạn bấm vào nút dấu ba chấm và chọn ra một thư mục mặc định sẽ lưu lại những file được trích xuất. Nếu muốn duyệt thử trước những file này, bạn bấm vào nút Play trên công cụ Media Player của . Sau cùng, bấm vào thẻ Convert Now để bắt đầu tiến trình chuyển đổi.
Thay đổi nội dung bởi ck_gabh; 11-04-2011 lúc 08:34.
caoson04 (09-06-2011),
chicharito_1991 (06-12-2011),
congluan120211 (18-01-2011),
edofate (13-01-2011),
ferdinand5 (16-03-2011),
hoanganhgiahan (07-06-2011),
ongtrum2010 (12-01-2011),
provn123456 (16-10-2011),
ShuuSui Zen (16-06-2011),
thaygiaovidai87 (30-03-2012),
vuatime (17-04-2011)
Cám ơn Pro đã chia sẻ, không rõ chất lượng sau khi chuyển đổi sẽ như thế nào, có bị giảm bớt % nào không vậy?
ongtrum2010 Cám ơn Pro đã chia sẻ, không rõ chất lượng sau khi chuyển đổi sẽ như thế nào, có bị giảm bớt % nào không vậy? Không bạn ơi ! sài rất ngon đầy đủ mọi định dạng
Hidden Content Fviet.Net Hidden Content Hidden Content
nghe nói bản này chuyển đổi hay bị lỗi không biết có phải không? hi vọng là không phải
Loading...!Hidden Content
bạn có thể nói rõ hơn về các thông số khi chỉnh không? Như mình chuyển mp3 sang wma đôi khi nghe kỳ kỳ
cho minh hỏi sao mình dùng phần mêm đổi đuôi nhạc hình từ đuôi Mp4 down tu mp3zing mà không nét được như họ nhỉ.nếu mjnh cho độ phân giải cao thì cung nét nhưng mà dung lượng cao lắm.híc không biết họ làm kiều gì.mình tìm mãi không ra.dùng rất nhiều loại phần mềm rồi.lên google tìm cung không thấy. hik.mong các pro chỉ giáo
huuhoang1204 nghe nói bản này chuyển đổi hay bị lỗi không biết có phải không? hi vọng là không phải
Ak` mình cũng đã sài qua rùi, chưa thấy tình trạng nào lỗi.. lỗi hầu như do hệ thống win edofate bạn có thể nói rõ hơn về các thông số khi chỉnh không? Như mình chuyển mp3 sang wma đôi khi nghe kỳ kỳ Ak` bạn add Y!M : kun.speed để được chỉ dẫn cụ thể hơn nhaz ! phamnoi cho minh hỏi sao mình dùng phần mêm đổi đuôi nhạc hình từ đuôi Mp4 down tu mp3zing mà không nét được như họ nhỉ.nếu mjnh cho độ phân giải cao thì cung nét nhưng mà dung lượng cao lắm.híc không biết họ làm kiều gì.mình tìm mãi không ra.dùng rất nhiều loại phần mềm rồi.lên google tìm cung không thấy. hik.mong các pro chỉ giáo Ak` bạn add Y!M : kun.speed để được chỉ dẫn cụ thể hơn nhaz ! Xin lỗi do sự cố mạng nên trả lời chậm trể Mong các bạn thông cảm cho KunIT
không có pass MF bạn ơi !
khaccong01 không có pass MF bạn ơi ! Sr nhaz Pas nè >> kunit
Bó tay, mình sài bản này một thời gian, cài lại win thì nhập key Serial rồi nhưng khi khởi động lại nó vấn con ô Serial. đang đau đầu
link down ngon =]]
Thay đổi nội dung bởi ferdinand5; 16-03-2011 lúc 15:44.
Bạn nên coi lại coi mình test rùi mới đưa lên
sao doi duoi cda => mp3 khong co' duoc ha ban! chon bai nhac tu duoi cda o cd tu nhien TVC thoat luon la sao!
Các bạn ơi cho mình hỏi sao mình convert cứ đến 25% là bị đơ luôn (Not Responding)
Mình dùng Win 7,không biết chuơng trình này có bị xung đột với cái nào không nữa
Hidden Content
luanbkdn88 Các bạn ơi cho mình hỏi sao mình convert cứ đến 25% là bị đơ luôn (Not Responding)
Mình dùng Win 7,không biết chuơng trình này có bị xung đột với cái nào không nữa bạn ơi hướng dẫn mình làm cái desktop như bạn đc ko,đẹp quá,cần những pm gì vậy
Xem Tag Cloud
Quy định và Điều khoản [V-Z]
Diễn Đàn Con

markdown:
[là chương trình chuyển đổi định dạng file multimedia toàn diện nhất hiện nay. Không những giúp bạn trích xuất nhanh chóng nhạc audio từ các file video, chuyển đổi qua lại giữa các định dạng file audio và video khác nhau,] [còn cho phép chuyển những định dạng multimedia dành riêng cho điện thoại di động sang những định dạng sử dụng trên máy vi tính và thực hiện theo tiến trình ngược lại.] [chắc chắn là “bảo bối” không thể thiếu trong hành trang của các tín đồ âm nhạc.]
[có thể đọc được những định dạng:rm, rmvb, mp4, 3gp, 3g2, psp, mpg, mpeg, vob, asf, wmv, avi, flv, mov, fli, flc, gif, dv (định dạng video); cda, mp3, mp2, wav, wma, ra, ogg, amr, ac3, au, swf (định dạng audio) và một số định dạng video sử dụng trên các hệ máy chơi game. Đồng thời hổ trợ trích xuất file dưới các định dạng: mp4, 3gp, 3g2, psp, mpg, mpeg, avi, swf, flv, gif, mov, fli, flc, dv, mp3, mp2, wav, wma, ogg, amr, ac3, au, mp4 audio.]
Download Total Video Converter 3.70 ( kèm serial + keygen ):
Pass: izviet.com
Serial:
6DEC207B-f3C6764f-0E90B64f-80f3052A-5fB4E1A9-A9050784-1DA74A30-6E95fC39-B4f627AB-406D07C1-97BAB567-806A4672-39A2B2A5-0C7E9E30-8DfDD3CD-B67f235C
hoặc
DfC5A0BA-023B98DA-320f9A39-71535f5f-5CfB7288-095258DA-45B477A5-D916E431-EA0DfCB3-525C12DE-C04285C4-7D78AB14-95DDAE18-D684A60B-B5f7BDC9-122DBEC
hoặc
4D00f429-1fECE58B-DE027AC0-19ADEfB8-166B6D05-3457422C-f57D9f4B-fB0411D9-4f31A2f0-C74724B3-1ff8B8Af-3EEf0751-AD159250-0E7CE6B4-733B0E2E-CAf3DA59
Hướng dẫn
sơ qua chút:
1. Từ giao diện chính của chương trình, bạn bấm vào thẻ
New Task, chọn ra những file muốn convert, tiếp đó bấm vào thẻ Convert Now. Trong cửa sổ Please select the format to be convertedxuất hiện, chương trình sẽ đưa ra 23 định dạng file multimedia khác nhau để bạn tùy chọn. Bạn bấm vào thẻ tương ứng với định dạng file muốn trích xuất.
2. Trước khi convert, bạn bấm vào thẻ Settings để xác lập một vài thông số quan trọng cho các file audio hoặc video sẽ được tạo ra. Trong cửa sổ Options, tại tab Audio Option, bạn lựa chọn mức Sample rate và tần số bit cho các file audio. Tại tab Video Option, bạn lựa chọn số khung hình trên giây và tần số bit cho các file video. Tại tab Video Resize, bạn có thể xác định lại kích thước khung hình cho các file video. Sau khi chọn ra các thông số vừa ý, bạn bấm OK.
3. Tại mục Default Converted folder, bạn bấm vào nút dấu ba chấm và chọn ra một thư mục mặc định sẽ lưu lại những file được trích xuất. Nếu muốn duyệt thử trước những file này, bạn bấm vào nút Play trên công cụ Media Player của
. Sau cùng, bấm vào thẻ Convert Now để bắt đầu tiến trình chuyển đổi.

Set-Cookie: vbseo_loggedin=deleted; expires=Thu, 01-Jan-1970 00:00:01 GMT; path=/

Pragma: private


text:
Xem Phim TV - Trang xem phim online hay, xem phim
miễn phí chất lượng tốt, Xem phim TV luôn cập nhật các bộ phim hành
động, phim chiếu rạp mới nhất với các thể loại phim tâm lý, phim hài ..v. Xem phim tại Xem phim
Tv sẽ luôn có phụ đề việt hoặc phim lồng tiếng đem đến sự thoải mái cho
các bạn khi xem phim. Xem phim tv sẽ hạn chế tối đa quảng cáo để luôn
là 1 sự lựa chọn phim online tốt nhất cho các bạn

Accept-Ranges: bytes


markdown:
Xem Phim TV - Trang xem phim online hay, xem phim
miễn phí chất lượng tốt, Xem phim TV luôn cập nhật các bộ phim hành
động, phim chiếu rạp mới nhất với các thể loại phim tâm lý, phim hài ..v. Xem phim tại Xem phim
Tv sẽ luôn có phụ đề việt hoặc phim lồng tiếng đem đến sự thoải mái cho
các bạn khi xem phim. Xem phim tv sẽ hạn chế tối đa quảng cáo để luôn
là 1 sự lựa chọn phim online tốt nhất cho các bạn


markdown:
♫ Phòng hát hay
♫ Phòng triển vọng
♫ Tiếng hát thành viên
♫ Phòng giao lưu
♫ Phòng sáng tác
♫ Phòng chờ feat
♫ Nhạc nền (Playback, Beat)
♫
Phòng chờ thẩm định
♫ Bài hát mới
♫ Phòng hát hay
♫ Phòng triển vọng
♫ Tiếng hát thành viên
♫ Phòng giao lưu
♫ Phòng sáng tác
♫ Phòng chờ feat
♫ Nhạc nền (Playback, Beat)
♫ Phòng chờ thẩm định
♫ Bài hát mới
♫ Phòng rap hay
♫ Phòng triển vọng
♫ Tiếng rap thành viên
♫ Phòng giao lưu
♫ Phòng sáng tác
♫ Phòng chờ feat
♫ Nhạc nền (Playback, Beat)
♫ Phòng chờ thẩm định
♫ Bài rap mới
♫ Video Clip hay
♫ Video Clip triển vọng
♫ Video Clip thành viên
♫ Tập làm Video Clip
♫ Offline Yeucahat
♫ Phòng chờ thẩm định
♫ Video Clip mới
» Cập nhật
» Xem tin nhắn
» Thay đổi lý lịch
Lần đăng nhập trước của bạn:
Yêu Ca Hát
Music
Studio
Đăng nhập
/
Đăng ký
Tên Bài Hát
Trình bày
Sáng tác
Lời bài hát
Việt Nam
Nước ngoài
Rap
Video Clip
Thông báo
C:
\
Việt Nam
\
Phòng chờ thẩm định
\
Tiếng Chuông Ngân Đêm Noel
Chấm điểm:
(
Xem tiêu chí
)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
uhmthedo
vvvb
Thực hiện:
cvbbn
Gởi:
uhmthedo
Kiểm duyệt:
Automatic
20/12/2010 19:14
Nghe:
829
Downloads:
17
Cảm nhận:
3
Tiếng Chuông Ngân Đêm Noel
Trình bày:
uhmthedo
Sáng tác:
chưa rõ
Mừng ngày Chúa sinh ra đời.
Nào mình nắm tay tươi cười.
Hòa bình đến cho muôn người.
Cùng cất tiếng ca mừng vui.
Mừng ngày giáng sinh an hòa.
Mừng hạnh phúc cho muôn nhà.
Từ thành phố hay đồng quê muôn nơi cất tiếng hát ca vang lừng.
Bong bing bong bong bing bong chuông giáo đường thanh vang.
Đêm noel chuông vang như bao yêu thương vang lan trong ánh sao sáng.
Bong bing bong bong bing bong.
Đêm giáng trần.
Thiên Chúa.
Xin dâng lên muôn kinh trong đêm.
Thiên Chúa giáng sinh ra đời
Mừng ngày Chúa sinh ra đời.
Nào mình nắm tay tươi cười.
Hòa bình đến cho muôn người.
Cùng cất tiếng ca mừng vui.
Mừng ngày giáng sinh an hòa.
Mừng hạnh phúc cho muôn nhà.
Từ thành phố hay đồng quê muôn nơi cất tiếng hát ca vang lừng.
Đêm Noel đêm Noel ta hãy cùng vui lên.
Đêm Noel đêm Noel.
Xin ơn trên ban hòa bình cho trần thế.
Đêm Noel chuông vang lên chuông giao đường vang lên.
Đêm Noel vui đêm Noel ta hay chúc nhau câu cười
A day or two ago.
I thought.
I'd take a ride.
And soon miss fan me bright was seated by my side.
The horse was lean and lank misfortune seemed his lot.
He got into a drifted bank and we've got up sot.
Jingle bells.
Jingle bells jingle all the way.
Oh what fun it is to ride in a one horse open sleigh.
Jingle bells.
Jingle bells jingle all the way.
Oh what fun it is to ride in a one horse open sleigh..
uhmthedo
Thành viên khác
Playback, Beat
Quà tặng âm nhạc
1-
Tiếng Chuông Ngân Đêm Noel
(
3
/828/17)
uhmthedo
2-
Cô Bé Mùa Đông
(
0
/505/27)
Beat
3-
Ước Mơ
(
1
/608/10)
uhmthedo
4-
Nhớ Lắm
(
6
/647/18)
uhmthedo
5-
D2-Thefirst
(
2
/913/11)
uhmthedo
6-
A Little Love
(
1
/1617/22)
uhmthedo
7-
Tập Đếm
(
3
/1774/26)
uhmthedo
8-
Way Back Into Love
(
6
/1587/30)
uhmthedo; Jelly
Xem tất cả
1-
Tiếng Chuông Ngân Đêm Noel
(
4
/15)
pinkpig_kunni
2-
Tiếng Chuông Ngân Đêm Noel
(
61
/27)
kiepgiangho_km
3-
Tiếng Chuông Ngân Đêm Noel
(
4
/22)
nhit.c4
4-
Tiếng Chuông Ngân Đêm Noel
(
3
/8)
TyNguyen
5-
Tiếng Chuông Ngân Đêm Noel
(
2
/17)
tapdoanannhau147
6-
Tiếng Chuông Ngân Đêm Noel
(
3
/17)
uhmthedo
7-
Tiếng Chuông Ngân Đêm Noel
(
0
/0)
Trahoanu
Xem tất cả
1-
Tiếng Chuông Ngân Đêm Noel
(
2
/472)
Beat
Xem tất cả
Cảm nhận
Người gởi:
uhmthedo
- 20/12/2010 19:16
Bài hát:
12
Cảm nhận:
28
Thẩm định:
35
x'mas hờ hờ
Tiếng Chuông Ngân Đêm Noel
- uhmthedo
Người gởi:
d0n_kj_h0_t3
- 05/01/2011 14:10
Bài hát:
16
Cảm nhận:
65
Thẩm định:
34
hết noen rồi mới nghe đc bài mụ Dâu hét
....thém noen lại
Hoàng Hôn Tháng Tám
- d0n_kj_h0_t3
Người gởi:
atm band
- 10/03/2011 22:59
Bài hát:
41
Cảm nhận:
692
Thẩm định:
69
uhm e nè nhe
Người Nơi Đâu
- ATM BAND
Trang
1
/ tổng
1
trang
Gởi trả lời
Kiểu gõ Tiếng Việt:
Tắt
Telex
Vni
VIQR
VIQR*
Tất cả
Kiểm lỗi chính tả
Nội dung cảm nhận:
Các biểu tượng
Xem thêm...
Màu chữ:
Mặc định
Dark Red
Red
Orange
Brown
Yellow
Green
Olive
Cyan
Blue
Dark Blue
Indigo
Violet
White
Black
Cỡ chữ:
Cỡ chữ
Rất nhỏ
Nhỏ
Bình thường
Lớn
Rất lớn
Đóng Tags
Điểm cao trong tuần
Chỉ Tại Dòng Sông Đa Tình
nguyentham2013
Được quan tâm
Em Còn Nhớ Mùa Xuân
le thi nhung
Đừng Buồn Ta Hỡi
nghesy
Chào bạn,
Khách
Tên truy cập:
Mật khẩu:
Thành viên mới
Chào mừng thành viên thứ
1.712.748
vừa gia nhập vào cộng đồng Yêu Ca Hát là:
lyvanhiep
Thời gian = Giờ VN [GMT+7]
Việt Nam
Nước ngoài
Rap
Video Clip
Thông báo
Phòng hát hay
Phòng triển vọng
Tiếng hát thành viên
Phòng giao lưu
Phòng sáng tác
Phòng chờ feat
Nhạc nền (Playback, Beat)
Phòng chờ thẩm định
Bài hát mới
Phòng hát hay
Phòng triển vọng
Tiếng hát thành viên
Phòng giao lưu
Phòng sáng tác
Phòng chờ feat
Nhạc nền (Playback, Beat)
Phòng chờ thẩm định
Bài hát mới
Phòng rap hay
Phòng triển vọng
Tiếng rap thành viên
Phòng giao lưu
Phòng sáng tác
Phòng chờ feat
Nhạc nền (Playback, Beat)
Phòng chờ thẩm định
Bài rap mới
Video Clip hay
Video Clip triển vọng
Video Clip thành viên
Tập làm Video Clip
Offline Yeucahat
Phòng chờ thẩm định
Video Clip mới
Nội quy Yêu Ca Hát
Danh sách phạm quy
Xem tin nhắn
Yêu Ca Hát Studio
Đăng nhập
Liên hệ
Máy chủ được đặt tại
Viettel IDC
Page generation time: 0.143s (PHP: 97% - SQL: 3%) - SQL queries: 3 - GZIP enabled - Debug on
Người gởi: uhmthedo - 20/12/2010 19:16 12
Cảm nhận:
28
Thẩm định:
35 Người gởi: d0n_kj_h0_t3 - 05/01/2011 14:10 16
Cảm nhận:
65
Thẩm định:
34 Người gởi: atm band - 10/03/2011 22:59 41
Cảm nhận:
692
Thẩm định:
69 1/ tổng 1trang

Server: nginx admin

Cache-Control: private, pre-check=0, post-check=0, max-age=0

Set-Cookie: ads_time=i%3A2%3B; expires=Sat, 18-Apr-2015 00:19:34 GMT; path=/; domain=.yeucahat.com