markdown:
Tải bản đầy đủ
Cao đẳng - Đại học
Y - Dược
Nghiên cứu định lượng atenolol và các đồng phân đối quang trong một số chế phẩm thuốc và trong dịch sinh học
DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT
: 1- acid glycoprotein
: Chất phân tích (Analyte) ATN
: Atenolol
AN
: Cyclodextrin
CD
CM--CD : Carboxymethyl-β-cyclodextrin
: Nồng độ cực đại
: Dược động học
Cmax
DĐH
: Diethylamin
: Điện di đồ
DEA
ĐDĐ
: Đồng phân đối quang
: Ethanol
ĐPĐQ
EtOH
: Acid acetic
: Huyết tương
HAc
HT
: Methanol
: Acetonitril
MeOH
MeCN
: Người tình nguyện
: Khối phổ (Mass spectrometry)
NTN
MS
: Sinh khả dụng
: Sắc ký đồ
SKD
SKĐ
: Triethylamin
: Acid trifloroacetic
TEA
TFA
t1/2
: Thời gian bán thải
Tmax
: Thời gian đạt nồng độ cực đại
: Tương đương sinh học TRIS
: Tris(hydroxymethyl)aminomethan
TĐSH
: Tài liệu tham khảo
: Tử ngoại (Ultraviolet)
TLTK
UV
AUC
: Diện tích dưới đường cong (Area under the curve)
: Albumin huyết thanh bò (Bovine serum albumin)
BSA
: Điện di mao quản (Capillary electrophoresis)
CE
: Đầu dò mảng diod (Diode array detector)
DAD
: Cơ quan quản lý thuốc Châu âu (European Medicines Agency)
EMA
: Dòng điện thẩm (Electro-osmotic flow)
EOF
: Ion hóa phun sương điện tử (Electrospray ionization)
ESI
: Sắc ký khí (Gas chromatography)
GC
: Sắc ký lỏng hiệu năng cao (High performance liquid chromatography)
HPLC
: Mẫu kiểm tra nồng độ cao (High quality control)
HQC
: Albumin huyết thanh người (Human serum albumin)
HSA
: Chất nội chuẩn (Internal standard)
IS
: Sắc ký lỏng khối phổ (Liquid chromatography – Mass spectrometry)
LC-MS
LC-MS/MS : Sắc ký lỏng – khối phổ/khối phổ
(Liquid chromatography – tandem mass spectrometry)
: Giới hạn định lượng dưới (Lower limit of quantitation)
LLOQ
: Mẫu kiểm tra nồng độ thấp (Low quality control)
LQC
: Mẫu kiểm tra nồng độ trung bình (Medium quality control)
MQC
: Chiết pha rắn (Solid phase extraction)
SPE
: Cơ quan quản lý thực phẩm và dược phẩm Mỹ
US-FDA
(United States – Food and Drug Administration)
: Tổ chức Y tế thế giới (World Health Organization)
WHO
2-PrOH
: 2-Propanol
AGP
iii
MỤC LỤC
DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU
DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ
ĐẶT VẤN ĐỀ................................................................................................................. 1
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN ......................................................................................... 3
1.1. ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ......................... 3
1.1.1. Tổng quan về thuốc chứa dược chất đối quang ...............................................................3
1.1.1.1. Khái niệm đồng phân đối quang ....................................................................................3
1.1.1.2. Một số dược chất có các đồng phân đối quang tác dụng không giống nhau ..............4
1.1.1.3. Tầm quan trọng của việc phân tích các đồng phân đối quang .....................................5
1.1.1.4. Tình hình nghiên cứu phân tích đồng phân đối quang ở Việt Nam.............................7
1.1.2. Phương pháp phân tích đồng phân đối quang .................................................................9
1.1.2.1. Nguyên tắc chung............................................................................................................9
1.1.2.2. Phân loại tác nhân chọn lọc hoạt quang.......................................................................11
1.1.2.3. Một số phương pháp phân tích đồng phân đối quang thường gặp ............................17
1.2. PHÂN TÍCH THUỐC TRONG DỊCH SINH HỌC ........................................................28
1.2.1. Các kỹ thuật xử lý, chiết tách dược chất trong mẫu sinh học .......................................28
1.2.1.1. Kỹ thuật tủa protein.......................................................................................................29
1.2.1.2. Kỹ thuật chiết lỏng – lỏng ............................................................................................30
1.2.1.3. Kỹ thuật chiết pha rắn ...................................................................................................31
1.2.2. Phân tích thuốc trong dịch sinh học bằng phương pháp sắc ký – khối phổ.................32
1.2.2.1. Nguyên lý hoạt động của thiết bị phân tích khối phổ .................................................33
1.2.2.2. Cấu tạo các bộ phận thiết bị phân tích khối phổ .........................................................34
1.2.2.3. Định lượng thuốc trong dịch sinh học bằng LC-MS/MS với nguồn ESI..................35
1.2.3. Thẩm định phương pháp LC-MS/MS phân tích thuốc trong dịch sinh học .................37
1.2.3.1. Mục đích của thẩm định phương pháp phân tích ........................................................37
1.2.3.2. Các chỉ tiêu, tiêu chí trong thẩm định phương pháp phân tích...................................37
1.3. ATENOLOL, ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH ......39
1.3.1. Công thức cấu tạo và tính chất hóa lý của atenolol ......................................................39
1.3.1.1. Công thức cấu tạo..........................................................................................................39
1.3.1.2. Tính chất hóa lý .............................................................................................................40
1.3.2. Các đặc tính dược lý, dược động học của atenolol........................................................40
1.3.2.1. Tác dụng và cơ chế .......................................................................................................40
1.3.2.2. Chỉ định – chống chỉ định.............................................................................................40
1.3.2.3. Dạng thuốc và hàm lượng ............................................................................................41
iv
1.3.2.4. Dược động học ..............................................................................................................41
1.3.2.5. Nghiên cứu dược lý, dược động học các đồng phân đối quang atenolol .................42
1.3.3. Các phương pháp phân tích atenolol và đồng phân đối quang ....................................42
1.3.3.1. Phân tích atenolol và đồng phân đối quang trong nguyên liệu, chế phẩm thuốc ......42
1.3.3.2. Phân tích atenolol và đồng phân đối quang trong dịch sinh học................................46
CHƯƠNG 2. NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG
PHÁP NGHIÊN CỨU ................................................................................................. 49
2.1. NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ ..............................................................................49
2.1.1. Dung môi, hóa chất và chất chuẩn .................................................................................49
2.1.1.1. Chất chuẩn, chất đối chiếu............................................................................................49
2.1.1.2. Dung môi, hóa chất .......................................................................................................49
2.1.1.3. Huyết tương ...................................................................................................................49
2.1.2. Thiết bị, dụng cụ phân tích ..............................................................................................50
2.1.2.1. Thiết bị phân tích...........................................................................................................50
2.1.2.2. Dụng cụ phân tích .........................................................................................................50
2.2. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU ...........................................................................................50
2.2.1. Mẫu thuốc nghiên cứu .....................................................................................................50
2.2.1.1. Mẫu thuốc atenolol racemic .........................................................................................50
2.2.1.2. Mẫu thuốc S-Atenolol ...................................................................................................51
2.2.2. Mẫu huyết tương người chứa atenolol ...........................................................................51
2.3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU........................................................52
2.3.1. Nghiên cứu định lượng atenolol và đồng phân đối quang trong chế phẩm.................52
2.3.1.1. Khảo sát xây dựng phương pháp ................................................................................52
2.3.1.2. Thẩm định phương pháp định lượng atenolol và đồng phân trong chế phẩm .........55
2.3.1.3. Phân tích atenolol và đồng phân đối quang trong một số mẫu thuốc .......................56
2.3.2. Nghiên cứu định lượng ATN và ĐPĐQ trong huyết tương bằng LC-MS/MS .............57
2.3.2.1. Khảo sát xây dựng phương pháp LC-MS/MS ...........................................................57
2.3.2.2. Thẩm định phương pháp LC-MS/MS ........................................................................58
2.3.2.2. Phân tích atenolol và đồng phân trong huyết tương người bằng LC-MS/MS .........60
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .................................................................. 62
3.1. PHÂN TÍCH ATENOLOL VÀ CÁC ĐỒNG PHÂN TRONG CHẾ PHẨM.................. 62
3.1.1. Nghiên cứu phương pháp CE phân tích đồng phân đối quang atenolol ......................62
3.1.1.1. Khảo sát, lựa chọn các điều kiện điện di .....................................................................62
3.1.1.2. Thẩm định phương pháp CE phân tích atenolol và đồng phân trong chế phẩm.......65
3.1.2. Nghiên cứu định lượng các ĐPĐQ của ATN trong chế phẩm bằng HPLC ................70
3.1.2.1. Nghiên cứu xây dựng phương pháp HPLC.................................................................70
v
3.1.2.2. Thẩm định phương pháp HPLC phân tích đồng phân đối quang atenolol................75
3.1.3. Phân tích atenolol và đồng phân đối quang trong chế phẩm .......................................84
3.1.3.1. Định lượng atenolol và các đồng phân trong một số thuốc ........................................84
3.1.3.2. Xác định tạp đồng phân đối quang trong một số chế phẩm S-Atenolol ....................88
3.1.3.3. Định lượng atenolol và đồng phân trong so sánh độ hòa tan in vitro ........................89
3.2. PHÂN TÍCH ATENOLOL VÀ CÁC ĐỒNG PHÂN TRONG HUYẾT TƯƠNG......90
3.2.1. Định lượng các ĐPĐQ của ATN trong huyết tương bằng LC-MS/MS........................90
3.2.1.1. Nghiên cứu xây dựng phương pháp.............................................................................90
3.2.1.2. Thẩm định phương pháp LC-MS/MS định lượng ĐPĐQ của ATN trong HT ..... 100
3.2.2. Nghiên cứu định lượng atenolol toàn phần trong huyết tương bằng LC-MS/MS .... 112
3.2.2.1. Xây dựng phương pháp LC-MS/MS định lượng atenolol toàn phần ..................... 112
3.2.2.2. Thẩm định phương pháp LC-MS/MS định lượng atenolol toàn phần ................... 114
3.2.3. Phân tích atenolol và đồng phân trong huyết tương NTN, bệnh nhân ...................... 119
3.2.3.1. Định lượng atenolol toàn phần trong huyết tương ................................................... 119
3.2.3.2. Phân tích atenolol và các đồng phân trong huyết tương bệnh nhân ....................... 120
3.2.3.3. Phân tích atenolol và các đồng phân trong huyết tương người tình nguyện .......... 121
CHƯƠNG 4. BÀN LUẬN ......................................................................................... 130
4.1. PHÂN TÍCH ĐỒNG PHÂN ATENOLOL TRONG CHẾ PHẨM ............................ 130
4.1.1. Phân tích đồng phân đối quang atenolol bằng các phương pháp HPLC, CE.......... 130
4.1.2. Kết quả phân tích atenolol và đồng phân trong chế phẩm thuốc .............................. 134
4.2. PHÂN TÍCH ATENOLOL VÀ ĐỒNG PHÂN TRONG DỊCH SINH HỌC ............ 135
4.2.1. Phương pháp LC-MS/MS phân tích atenolol và đồng phân trong huyết tương ....... 135
4.2.2. Kết quả phân tích ĐPĐQ của ATN trong HT và sinh khả dụng các thuốc............... 140
4.3. CÁC ĐIỂM ĐÓNG GÓP MỚI CỦA LUẬN ÁN ........................................................ 142
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ................................................................................... 146
DANH SÁCH CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ
TÀI LIỆU THAM KHẢO
PHỤ LỤC
vi
DANH MỤC CÁC BẢNG
Trang
Bảng 1.1
Một số dược chất có ĐPĐQ tác dụng dược lý không giống nhau ..............
4
Bảng 1.2
Tính chất hóa lý của một số cyclodextrin tự nhiên.......................................
14
Bảng 1.3
Một số phương pháp GC với pha tĩnh đặc hiệu phân tích ĐPĐQ..............
19
Bảng 1.4
Một số thuốc thử được sử dụng trong phân tích ĐPĐQ bằng phương
20
pháp HPLC .....................................................................................................
Bảng 1.5
Một số nghiên cứu phân tích ĐPĐQ trong các mẫu nguyên liệu và chế
22
phẩm thuốc bằng phương pháp HPLC .........................................................
Bảng 1.6
Một số nghiên cứu phân tích ĐPĐQ trong dịch sinh học bằng phương
23
pháp HPLC và LC-MS ...................................................................................
Bảng 1.7
Tóm tắt một số ứng dụng phân tích ĐPĐQ bằng CE sử dụng chất chọn
27
lọc hoạt quang dẫn chất CD ..........................................................................
Bảng 1.8
Một số đặc điểm khác nhau giữa phân tích dược chất trong chế phẩm
28
bào chế và trong dịch sinh học ......................................................................
Bảng 1.9
Tóm tắt đặc điểm, phạm vi áp dụng phương pháp GC-MS và LC-MS.......
35
Bảng 1.10 Giá trị thông số dược động học của atenolol trong một số nghiên cứu .....
41
Bảng 1.11 Một số nghiên cứu định lượng ĐPĐQ atenolol trong nguyên liệu và
43
chế phẩm thuốc bằng phương pháp HPLC ..................................................
Bảng 1.12 Một số nghiên cứu định lượng ĐPĐQ của ATN trong chế phẩm bằng
45
phương pháp CE.............................................................................................
Bảng 1.13 Một số phương pháp HPLC định lượng atenolol trong dịch sinh học .......
47
Bảng 1.14 Một số nghiên cứu định lượng ĐPĐQ của atenolol trong dịch sinh học
48
bằng phương pháp HPLC..............................................................................
Bảng 2.1
Cách chuẩn bị các mẫu chuẩn ATN trong huyết tương ...............................
59
Bảng 3.1
Kết quả xác định độ phù hợp của hệ thống điện di ......................................
65
Bảng 3.2
Mối tương quan giữa nồng độ ATN và diện tích pic trên điện di đồ ..........
67
Bảng 3.3
Độ lặp lại và tái lặp của phương pháp CE ...................................................
68
Bảng 3.4
Kết quả xác định độ đúng của phương pháp CE .........................................
69
Bảng 3.5
Hàm lượng R-ATN và S-ATN trong chất chuẩn racemic ............................
76
Bảng 3.6
Độ phù hợp của hệ thống sắc ký....................................................................
77
Bảng 3.7
Khoảng nồng độ tuyến tính của phương pháp HPLC .................................
80
Bảng 3.8
Độ lặp lại trong ngày của phương pháp HPLC ...........................................
81
Bảng 3.9
Độ tái lặp của phương pháp HPLC ..............................................................
82
Bảng 3.10 Độ đúng của phương pháp HPLC ................................................................
83
Bảng 3.11 Kết quả định lượng atenolol và đồng phân đối quang trong mẫu thử........
85
vii
Bảng 3.12 So sánh độ chính xác của hai phương pháp HPLC, CE định lượng
85
ATN và các ĐPĐQ trong chế phẩm..............................................................
Bảng 3.13 Phân tích ANOVA kết quả định lượng ATN toàn phần trong chế phẩm
86
của các phương pháp .....................................................................................
Bảng 3.14 Kết quả xác định hàm lượng atenolol trong một số chế phẩm thuốc .........
87
Bảng 3.15 Hàm lượng tạp R-ATN trong một số chế phẩm thuốc S-ATN .....................
88
Bảng 3.16 Kết quả định lượng ATN và ĐPĐQ trong môi trường thử độ hòa tan .......
89
Bảng 3.17 Điều kiện khối phổ định lượng atenolol và nội chuẩn .................................
99
Bảng 3.18 Độ phù hợp của hệ thống LC-MS/MS...........................................................
100
Bảng 3.19 Đường chuẩn và khoảng tuyến tính của R-Atenolol ....................................
102
Bảng 3.20 Đường chuẩn và khoảng tuyến tính của S-Atenolol.....................................
103
Bảng 3.21 Giá trị LLOQ của phương pháp LC-MS/MS ................................................
103
Bảng 3.22 Kết quả đánh giá sự ảnh hưởng của nền mẫu ..............................................
104
Bảng 3.23 Độ chính xác trong ngày và khác ngày của R-Atenolol...............................
105
Bảng 3.24 Độ chính xác trong ngày và khác ngày của S-Atenolol ...............................
106
Bảng 3.25 Độ thu hồi các đồng phân đối quang atenolol của phương pháp ...............
107
Bảng 3.26 Độ thu hồi nội chuẩn esomeprazol của phương pháp .................................
108
Bảng 3.27 Độ ổn định của ATN trong mẫu HT bảo quản 6 giờ ở nhiệt độ phòng ......
109
o
Bảng 3.28 Độ ổn định của ATN sau xử lý mẫu và bảo quản ở 4 C .................................
110
Bảng 3.29 Độ ổn định của ATN sau ba chu kỳ đông lạnh – rã đông............................
110
Bảng 3.30 Độ ổn định dài ngày trong huyết tương của atenolol ..................................
111
Bảng 3.31 Điều kiện khối phổ định lượng atenolol và nội chuẩn diltiazem .................
113
Bảng 3.32 Khoảng nồng độ tuyến tính của phương pháp LC-MS/MS định lượng
115
ATN toàn phần trong huyết tương.................................................................
Bảng 3.33 Độ chính xác của phương pháp LC-MS/MS định lượng ATN toàn phần ..
116
Bảng 3.34 LLOQ của phương pháp LC-MS/MS định lượng ATN toàn phần ..............
117
Bảng 3.35 Ảnh hưởng nền mẫu trong phương pháp LC-MS/MS định lượng ATN
118
toàn phần.........................................................................................................
Bảng 3.36 Độ thu hồi nội chuẩn diltiazem của phương pháp LC-MS/MS định
118
lượng ATN toàn phần .....................................................................................
Bảng 3.37 So sánh nồng độ R,S-ATN xác định bằng các phương pháp LC-MS/MS...
119
Bảng 3.38 Nồng độ atenolol trong một số mẫu huyết tương bệnh nhân ......................
121
Bảng 3.39 Nồng độ R-ATN và S-ATN trong huyết tương 06 NTN sau khi uống
122
thuốc Atenolol STADA 50 mg ........................................................................
Bảng 3.40 Nồng độ R-ATN và S-ATN trong huyết tương 06 NTN sau khi uống
thuốc TENORMIN 50 mg ..............................................................................
viii
123
Bảng 3.41 Nồng độ S-ATN trong huyết tương 06 NTN sau khi uống các thuốc
124
®
Atpure 25 và viên nén S-Atenolol 25 mg.....................................................
Bảng 3.42 Nồng độ S-ATN trong huyết tương 06 NTN sau khi uống các thuốc
125
®
Atpure 25 và Tenormin 50 mg .....................................................................
Bảng 3.43 Thông số DĐH trung bình của một số thuốc ATN trên NTN Việt Nam .....
ix
128
DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ
Trang
Hình 1.1
Mô hình Easson-Stedman ................................................................................
5
Hình 1.2
Liên kết tạo phức giữa amylose tris (3,5-dimethylphenylcarbamat) với
10
(a): (1S, 2R)-(+)-norephedrin; (b): (1R, 2S)-(-)-norephedrin) .....................
Hình 1.3
Cấu trúc “phức lồng” của R-propranolol với heptakis (2,3-di-O-acetyl-
10
6-O-sulfo)-β-cyclodextrin trong (a): dung môi; (b): nước ............................
Hình 1.4
Cấu tạo, vị trí hình thành liên kết giữa HSA và các ĐPĐQ ..........................
12
Hình 1.5
Cấu tạo pha tĩnh đối quang dẫn chất polysaccharid cuả một số cột HPLC.....
12
Hình 1.6
Cấu tạo một số pha tĩnh liên kết tác nhân hoạt quang kiểu Pirkle ...............
13
Hình 1.7
Cấu tạo và kích thước hốc kỵ nước của các cyclodextrin..............................
14
Hình 1.8
Cấu trúc của một số tác nhân hoạt quang dẫn chất cyclodextrin .................
15
Hình 1.9
Một số chất chọn lọc đối quang có cấu trúc vòng ether thường dùng
16
trong phương pháp CE phân tích ĐPĐQ ......................................................
Hình 1.10 Cấu trúc phức hợp N-(2-hydroxypropyl)-L-4-hydroxyprolin và các đồng
17
phân đối quang của acid amin ........................................................................
Hình 1.11 Cấu tạo một số pha tĩnh đối quang dẫn chất CD của cột GC.......................
18
Hình 1.12 Sự hình thành dòng điện thẩm trong phương pháp CE .................................
24
Hình 1.13 Sơ đồ mô phỏng nguyên tắc phân tích ĐPĐQ bằng phương pháp CE
26
với tác nhân hoạt quang là dẫn chất CD ........................................................
Hình 1.14 Qui trình xử lý mẫu bằng kỹ thuật SPE...........................................................
31
Hình 1.15 Sơ đồ cấu tạo và nguyên lý hoạt động của thiết bị khối phổ .........................
33
Hình 1.16 Cấu tạo và cơ chế hoạt động của khối phổ tứ cực chập ba...........................
36
Hình 1.17 Công thức cấu tạo các đồng phân đối quang của atenolol ...........................
40
Hình 2.1
Các mẫu thuốc nghiên cứu ..............................................................................
51
Hình 2.2
Quy trình khảo sát thành phần, tỷ lệ pha động trên cột Ultron ES-OVM ....
52
Hình 2.3
Quy trình khảo sát thành phần, tỷ lệ pha động trên cột Chirex 3022 ...........
52
Hình 2.4
Quy trình khảo sát thành phần, tỷ lệ pha động trên cột Chiracel AGP ........
53
Hình 2.5
Quy trình khảo sát thành phần, tỷ lệ pha động trên cột Astec Cyclobond ...
53
Hình 2.6
Quy trình khảo sát thành phần, tỷ lệ pha động trên cột Chiralpak CBH .....
54
Hình 2.7
Cơ chế hoạt động của thiết bị LC-MS trong quá trình tối ưu hóa ................
57
Hình 3.1
Ảnh hưởng của các dung dịch đệm borat (a), Tetrabutylamoni sulfat 50
62
mM (b) và TRIS 50 mM (c) tới tm của atenolol...............................................
Hình 3.2
Điện di đồ của atenolol với 3 tác nhân chọn lọc đối quang: a) β-CD 20
63
mM; b) HP-β-CD 25mM, c) CM-β-CD 8mM ................................................
Hình 3.3
Ảnh hưởng của pH dung dịch đệm đến độ phân giải của atenolol ...............
x
64
Hình 3.4
Điện di đồ mẫu R,S-Atenolol nồng độ 100 ppb ..............................................
65
Hình 3.5
Điện di đồ các mẫu placebo (a), chuẩn R,S-Atenolol (b), chuẩn S-
66
Atenolol (c) và mẫu thử Atenolol STADA (d) .................................................
Hình 3.6
Phổ UV (a) và phổ tinh khiết (b) của các pic ATN trên ĐDĐ mẫu thử........
66
Hình 3.7
SKĐ mẫu chuẩn R,S-ATN phân tích trên cột Ultron ES–OVM ở bước
70
sóng =230 nm và các pha động: đệm phosphat 20mM, pH 3; 0,75
ml/phút (a) đệm phosphat 20 mM, pH 7–MeOH (99:1); 0,75 ml/phút (b)...
Hình 3.8
SKĐ phân tích R,S-ATN trên cột Chiral AGP với tốc độ dòng 0,75
71
ml/phút; đầu dò DAD ( = 230 nm) và các pha động (a): đệm NaH2PO4
10mM, pH 4,5 – 2-PrOH (99:1); (b): đệm NaH2PO4 10 mM, pH 7,0 –
MeOH (99,9:0,1) ..............................................................................................
Hình 3.9
SKĐ mẫu chuẩn R,S-ATN phân tích trên cột Astec Cyclobond cùng các
71
pha động (a): đệm amoni acetat, pH 4 – MeCN (25:75), (b): MeCN –
MeOH – acid acetic – triethylamine (99:1:0,1:0,1) với tốc độ 1,0
ml/phút và đầu dò DAD ( = 230 nm) ............................................................
Hình 3.10 SKĐ mẫu chuẩn R,S-ATN phân tích bằng cột Chirex 3022, DAD ( =
72
230 nm), pha động n-hexan – CH2Cl2 – MeOH – TFA với các tỷ
lệ 50:35:7,5:0,25 (a); 50:35:10:0,25 (b); 57,5:35:7,5:0,25 (c) và
50:35:5:0,25 (d)................................................................................................
Hình 3.11 SKĐ mẫu chuẩn R,S-ATN phân tích trên cột Chiralpak CBH, pha động
73
2- PrOH/đệm amoni acetat 10 mM, pH 7,0 với các tỷ lệ 1/99(a) và
15/85(b) .............................................................................................................
Hình 3.12 SKĐ mẫu chuẩn R,S-ATN phân tích trên cột Chiralpak CBH với các
73
pha động có pH dung dịch đệm 5,0 (a) và 7,0 (b)..........................................
Hình 3.13 SKĐ và phổ UV mẫu chuẩn R,S-ATN phân tích trên cột Chirex 3022 với
74
pha động n-hexan – 1,2 CH2Cl2 – MeOH – TFA (57,5 : 35 : 7,5 : 0,2),
1 ml/phút............................................................................................................
Hình 3.14 SKĐ và phổ 3D phân tích mẫu chuẩn R,S-ATN với cột Chiralpak CBH;
75
pha động 2-PrOH/đệm amoni acetat 10 mM, pH 5,9 (10/90);
0,7 ml/phút ........................................................................................................
Hình 3.15 Sắc ký đồ đánh giá tính chọn lọc – đặc hiệu của phương pháp HPLC
78
phân tích các đồng phân đối quang atenolol..................................................
Hình 3.16 So sánh phổ UV của các pic trong mẫu thử và chuẩn R,S-Atenolol .............
79
Hình 3.17 Đồ thị tương quan tuyến tính giữa diện tích pic và nồng độ R-ATN (trái)
80
và S-ATN (phải) ................................................................................................
Hình 3.18 SKĐ mẫu chuẩn R,S-ATN nồng độ: (a) 0,078 µg/ml và (b) 0,156 µg/ml.....
xi
84
Hình 3.19 Sắc ký đồ xác định hàm lượng tạp R-ATN trong một số thuốc: mẫu tạp
88
®
chuẩn (a); mẫu Atpure 25 (b) và mẫu viên nén S-atenolol 25 mg (c).........
Hình 3.20 Biểu đồ so sánh độ hòa tan của các thuốc trong môi trường pH 1,2 ...........
90
Hình 3.21 Phổ khối dung dịch chuẩn atenolol .................................................................
91
Hình 3.22 Giản đồ tối ưu điện thế “thấu kính hội tụ” ion có số khối 267 Da ...............
91
Hình 3.23 Phổ khối MS/MS phân mảnh ion [ATN+H]+ .................................................
92
+
Hình 3.24 Giản đồ năng lượng phân mảnh [ATN+H] tạo ion có tỷ số m/z = 190......
92
Hình 3.25 SKĐ phân tích mẫu chuẩn atenolol và IS trên cột Chiralpak CBH .............
95
Hình 3.26 Sơ đồ nghiên cứu chiết ATN trong HT bằng phương pháp chiết lỏng-lỏng ...
96
Hình 3.27 Sắc ký đồ dòng ion ATN và IS khi phân tích mẫu huyết tương trắng đã
97
xử lý tủa protein bằng MeCN ..........................................................................
Hình 3.28 Sắc ký đồ dòng ion ATN và IS khi phân tích mẫu huyết tương trắng đã
98
xử lý chiết lỏng - lỏng với chloroform .............................................................
Hình 3.29 SKĐ mẫu HT chứa R,S-ATN và IS phân tích bằng LC-MS/MS, (a): SKĐ
99
tổng các ion; (b): SKĐ chọn lọc ion atenolol; (c): SKĐ chọn lọc ion
esomeprazol ......................................................................................................
Hình 3.30 SKĐ tính chọn lọc–đặc hiệu của phương pháp LC-MS/MS định lượng
101
các đồng phân đối quang atenolol trong huyết tương ...................................
Hình 3.31 Sắc ký đồ mẫu huyết tương chứa R,S-ATN và IS phân tích bằng LC-
113
MS/MS (a): SKĐ tổng ion, (b): SKĐ chọn lọc ion atenolol, (c): SKĐ
chọn lọc ion diltiazem.......................................................................................
Hình 3.32 Độ đặc hiệu–chọn lọc của phương pháp LC-MS/MS định lượng ATN
114
toàn phần...........................................................................................................
Hình 3.33 SKĐ mẫu HT bệnh nhân T.V.H sau khi uống ATN 2 giờ .............................. 120
Hình 3.34 SKĐ mẫu HT bệnh nhân T.V.H sau khi uống ATN 24 giờ ............................ 120
Hình 3.35 SKĐ mẫu HT trước khi uống thuốc (điểm 0 h) của NTN 01 ......................... 126
Hình 3.36 SKĐ mẫu HT điểm 0 h của NTN 18 thêm nội chuẩn ..................................... 126
Hình 3.37 SKĐ mẫu HT của NTN 02 sau khi uống thuốc atenolol racemic 2,5 h ........ 126
Hình 3.38 SKĐ mẫu HT của NTN 02 sau khi uống thuốc atenolol racemic 24 h ......... 126
Hình 3.39 SKĐ mẫu HT của NTN 08 sau khi uống viên nén S-atenolol 2 giờ .............. 127
Hình 3.40 SKĐ mẫu HT của NTN 08 sau khi uống viên nén S-atenolol 24 giờ ............ 127
Hình 3.41 Đường cong trung bình nồng độ S-Atenolol – thời gian của các chế
128
phẩm thuốc trên người tình nguyện Việt Nam................................................
Hình 3.42 Đường cong trung bình nồng độ R,S-Atenolol – thời gian ............................ 129
xii
ĐẶT VẤN ĐỀ
Đồng phân đối quang (enantiomers) là hai đồng phân không gian dạng ảnh và vật
qua gương, chúng có công thức hóa học hoàn toàn giống nhau chỉ khác về cách bố trí
không gian của các nhóm thế quanh trung tâm bất đối xứng của phân tử. Sự khác nhau
về cấu trúc không gian làm cho mỗi dạng đồng phân có tương tác khác nhau với một
thụ thể sinh học xác định (tương tự như phản ứng đặc hiệu “chất mang-thụ thể” của
các enzym). Kết quả là các đồng phân đối quang (ĐPĐQ) của một thuốc có thể có các
đặc tính dược lý, lâm sàng khác nhau [50], [54]. Trong khi các protein, enzym, acid
amin, hydratcarbon tự nhiên chỉ tồn tại ở một dạng ĐPĐQ duy nhất, ví dụ như các acid
amin là đồng phân l (tả tuyền); các loại đường tự nhiên là đồng phân d (hữu tuyền) thì
phần lớn các chất tổng hợp hóa học và bán tổng hợp hóa học đều có ĐPĐQ. Theo
thống kê, gần 50% số hoạt chất đang lưu hành trên thị trường dược phẩm thế giới hiện
nay là các hợp chất có ĐPĐQ và gần ⅓ trong số này, các ĐPĐQ của dược chất có đặc
tính dược lý, dược lực học, dược động học, độc tính… không giống nhau [23], [85],
[88], [108], [198]. Atenolol (ATN) dẫn chất của benzenacetamid, có tác dụng ức chế
chọn lọc β–adrenergic, được dùng trong điều trị tăng huyết áp là một trong số những
dược chất có đặc điểm nêu trên. Chế phẩm ATN được cấp phép lưu hành lần đầu trên
thị trường dưới dạng hỗn hợp racemic của 2 đồng phân đối quang R-ATN và S-ATN.
Trong hai đồng phân, S-ATN có tác dụng ức chế β–adrenergic cao hơn khoảng 50 lần
và ít tác dụng phụ hơn so với R-ATN [146], [153], [177]. Hiện đã có một số chế phẩm
thuốc chỉ có dược chất S-ATN với hàm lượng bằng 1/2 thuốc ATN racemic đã được
cấp phép lưu hành tại Việt Nam và một số nước.
Xu hướng nghiên cứu phát triển dược phẩm mới chứa ĐPĐQ tinh khiết hoặc
chuyển từ thuốc hỗn hợp racemic chứa các ĐPĐQ có tác dụng dược lý không giống
nhau trong quá khứ thành thuốc chỉ chứa một ĐPĐQ có tác dụng dược lý với mục đích
giảm lượng dược chất đưa vào cơ thể, giảm tác dụng không mong muốn, tránh độc
tính của thành phần đối quang còn lại đang là một hướng phát triển mới của ngành
công nghiệp dược thế giới trong những năm gần đây [23], [85], [88]. Theo số liệu
thống kê đăng tải trên tạp chí Pharmaceutical Technology năm 2006, trong số 10 biệt
-1-
dược có doanh số bán lớn nhất toàn cầu có tới 9 dược chất đối quang, và 4/5 biệt dược
có doanh số lớn nhất đều là các dược chất đối quang tinh khiết [160]. Trên thế giới,
tầm quan trọng của việc kiểm soát chất lượng các thuốc đối quang đã được chú trọng
từ nhiều năm nay. Cơ quan quản lý Y tế của Mỹ, Canada, Australia, Châu Âu quy định
các thuốc chứa dược chất đối quang chỉ được cấp phép đăng ký, sản xuất và lưu hành
khi có đầy đủ số liệu nghiên cứu đặc điểm dược lý, dược động học… của từng đồng
phân; cũng như phải có các phương pháp phân tích phù hợp để kiểm soát chất lượng
thuốc [34], [65], [66], [89].
ĐPĐQ có cấu tạo hóa học tương tự nhau nên có nhiều tính chất vật lý, hóa học cơ
bản giống nhau, do vậy việc phát triển các phương pháp hóa lý phân tích, định lượng
đồng phân đối quang gặp nhiều khó khăn [23], [54], [77], [78]. Tại Việt Nam cũng
như nhiều nước đang phát triển trên thế giới, cho tới nay số lượng các nghiên cứu phân
tích, định lượng các ĐPĐQ của ATN nói riêng và các đồng phân có tác dụng dược lý
không giống nhau khác nói chung trong các chế phẩm thuốc và đặc biệt trong dịch
sinh học còn tương đối ít và chưa có hệ thống. Do vậy, luận án “Nghiên cứu định
lượng atenolol và các đồng phân đối quang trong một số chế phẩm thuốc và trong
dịch sinh học” được thực hiện với mục tiêu nghiên cứu các phương pháp phân tích
ATN và ĐPĐQ trong chế phẩm thuốc và trong huyết tương nhằm kiểm tra chất lượng
và so sánh sinh khả dụng (SKD), đánh giá tương đương sinh học (TĐSH) các thuốc
ATN bao gồm dạng thuốc racemic và dạng thuốc đơn ĐPĐQ (S-ATN) đang lưu hành
trên thị trường. Để đạt được mục tiêu này, luận án thực hiện các nội dung chính sau:
1. Nghiên cứu xây dựng, thẩm định phương pháp phân tích các ĐPĐQ của ATN
trong chế phẩm thuốc và ứng dụng trong kiểm tra chất lượng các thuốc ATN
2. Nghiên cứu xây dựng, thẩm định phương pháp phân tích ATN và các ĐPĐQ trong
huyết tương và ứng dụng trong nghiên cứu SKD, đánh giá TĐSH một số chế phẩm
thuốc ATN đang lưu hành trên thị trường.
-2-
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN
1.1. ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG VÀ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH
1.1.1. Tổng quan về thuốc chứa dược chất đối quang
1.1.1.1. Khái niệm đồng phân đối quang
Đồng phân đối quang (ĐPĐQ) có liên quan đến sự khác nhau về góc quay mặt phẳng
của ánh sáng phân cực. Chất có khả năng làm quay mặt phẳng của ánh sáng phân cực
một góc nào đó được gọi là chất hoạt quang. Điều kiện cho tính hoạt quang chính là
cấu trúc hình học của phân tử phải có tính chất bất đối xứng. Sự bất đối xứng thường
xảy ra khi trong phân tử có một nguyên tử C liên kết với 4 nhóm thế khác nhau, gọi là
nguyên tử carbon bất đối. Ngoài nguyên tử C bất đối, thì trung tâm bất đối của phân tử
còn có thể là các nguyên tử S, P hoặc N. Tính chất bất đối xứng của phân tử không
những chỉ liên quan đến trung tâm bất đối mà còn có thể hình thành từ trục bất đối
xứng vật - ảnh hoặc mặt phẳng bất đối xứng của phân tử. Hai dạng phân tử đối xứng
của cùng một chất nhưng không thể chồng khít giống vật với ảnh của chính nó qua
gương hay giống như tay phải và tay trái của một người được gọi là các ĐPĐQ
(enantiomer hoặc optical isomer) của chất đó [2], [128], [198].
Các ĐPĐQ có công thức hóa học hoàn toàn giống nhau, chỉ khác về cách bố trí
không gian của các nhóm thế quanh carbon bất đối. Ngoài sự khác biệt trong cấu trúc
phân tử theo kiểu như sự phân biệt của bàn tay phải và bàn tay trái, khả năng quay mặt
phẳng ánh sáng phân cực theo những góc bằng nhau nhưng ngược chiều nhau, còn lại
tất cả các tính chất lý hóa thông thường của các ĐPĐQ là giống nhau [2], [128], [198].
Các ĐPĐQ được phân chia thành đồng phân tả tuyền (l-isomer) và đồng phân hữu
tuyền (d-isomer) dựa trên khả năng làm quay ánh sáng phân cực sang bên trái hay bên
phải tương ứng (phân loại cấu hình theo quy tắc Fischer). Hỗn hợp có tỷ lệ bằng nhau
của đồng phân tả tuyền và hữu tuyền được gọi là hỗn hợp racemic. Do có tỷ lệ các
ĐPĐQ bằng nhau, nên hỗn hợp racemic không làm quay mặt phẳng của ánh sáng phân
cực. Ngoài hệ thống phân loại theo quy tắc Fischer, còn có hệ thống phân loại ĐPĐQ
dựa trên trục quay từ nguyên tử liên kết với C có phân tử lượng lớn nhất đến nguyên tử
có phân tử lượng bé hơn (hệ thống phân loại Cahn – Ingold Prelog). Nếu chiều quay
thuận chiều kim đồng hồ thì gọi là đồng phân hữu tuyền (Rictus - R: phải) và ngược lại
là đồng phân tả tuyền (Sinister - S: trái) – [75], [85].
-3-
1.1.1.2. Một số dược chất có các đồng phân đối quang tác dụng không giống nhau
Hiện tượng đồng phân quang học được phát hiện bởi Louis Pasteur năm 1848, khi ông
phân tách được ĐPĐQ l-natri amoni tartrat [75]. Tuy vậy, phải mất gần thế kỷ sau
nhân loại mới thấy được hiện tượng này không chỉ đóng vai trò quan trọng trong đời
sống của thực vật, động vật mà còn trong nền công nghiệp dược phẩm, nông nghiệp và
hóa chất [50], [54]. Trong khi các hợp chất tự nhiên như protein, enzym, acid amin,
hydratcarbon, nucleosid, một số alkaloid và hormon… đều là các hợp chất đối quang
và thường chỉ tồn tại ở một dạng đồng phân thì hầu hết các thuốc tổng hợp hóa học
được phát triển trong quá khứ đều có cấu trúc phân tử bất đối xứng nhưng không hoạt
quang do tồn tại ở dạng hỗn hợp racemic [58], [88], [108].
Nhiều nghiên cứu đã được thực hiện cho thấy, mặc dù có chung công thức hóa học
song các ĐPĐQ trong hỗn hợp racemic lại có tác dụng dược lý, dược lực học, độc
tính… không giống nhau. Bảng 1.1 liệt kê danh sách một số dược chất có cấu trúc phân
tử bất đối xứng và hoạt tính sinh học của từng ĐPĐQ trong hỗn hợp không giống nhau.
Bảng 1.1. Một số dược chất có ĐPĐQ tác dụng dược lý không giống nhau
Thuốc/ dược chất
Atenolol
Ethambutol
Tác dụng dược lý
TLTK
Đồng phân S-ATN có tác dụng chẹn kênh β-adrenergic [177],
gấp khoảng 46-100 lần so với đồng phân R-ATN
[178]
Đồng phân S có tác dụng diệt vi khuẩn lao. Đồng phân
[25]
R có thể gây viêm dây thần kinh thị giác
Levodopa
l-dopa là dạng dùng làm thuốc điều trị Parkinson. Đồng
[49]
phân d-dopa gây giảm bạch cầu hạt
Penicillamin
Đồng phân S-penicillamin có tác dụng chống viêm
[33]
khớp. Đồng phân R-penicillamin độc với tế bào
Propranolol
Tác dụng ức chế β-adrenergic của đồng phân S gấp
[178]
khoảng 100 lần so với đồng phân R
Thalidomid
Đồng phân hữu tuyền có tác dụng an thần, đồng phân tả
[132]
tuyền gây độc tế bào
Ngoài sự khác nhau về tác dụng dược lý và độc tính, các ĐPĐQ còn có thể khác
nhau về mức độ tác dụng dược lý hoặc khác nhau về dược động học (DĐH)... Một
trong các ví dụ điển hình về mức độ tác dụng dược lý khác nhau giữa các ĐPĐQ có
thể kể đến là các thuốc điều trị tim mạch, huyết áp nhóm chẹn β-adrenergic, chẹn kênh
-4-
calci hoặc ức chế men chuyển như ATN, propranolol, diltiazem, amlodipin và
verapamil [153], [167], [178], [189]. Dạng đồng phân tả tuyền của ATN có tác dụng
dược lý gấp khoảng 40–100 lần so với dạng ATN hữu tuyền, S-amlodipin có tác dụng
gấp khoảng 2 lần R-amlodipin và có ít tác dụng phụ hơn [153].
Sự khác nhau về tác dụng dược lý, dược lực học, DĐH, độc tính… của các ĐPĐQ
trên cơ thể sống có thể được giải thích bởi mô hình tương tác ba điểm của EassonStedman – Hình 1.1 [85].
Hình 1.1. Mô hình Easson-Stedman
Trong mô hình, ĐPĐQ có hoạt tính (bên trái) sẽ gắn với thụ thể (receptor) ở cả ba
vị trí tương ứng tạo thành các cặp liên kết Aa, Bb, Cc trong khi đó ĐPĐQ còn lại do vị
trí trong không gian của các nhóm chức không phù hợp với cấu trúc không gian của
thụ thể nên không thể tạo thành đủ cả ba cặp liên kết cần thiết với thụ thể, vì vậy
không gây ra các hoạt tính sinh học trên cơ thể sống [54], [85], [88]. Môi trường cơ thể
sống tồn tại nhiều yếu tố, tác nhân bất đối xứng như là các enzym, protein, receptor...
nên cơ thể sống có tính chọn lọc đối quang cao, cơ thể sống tương tác với mỗi ĐPĐQ
của một thuốc racemic theo cách khác nhau. Do vậy, các ĐPĐQ có tác dụng sinh học
trên cơ thể sống khác nhau.
1.1.1.3. Tầm quan trọng của việc phân tích các đồng phân đối quang
Trước những năm 1990, việc phân tích ĐPĐQ là một vấn đề khá khó khăn, các
phương pháp tổng hợp và phân tách chưa phát triển nhiều do vậy việc nghiên cứu về
các ĐPĐQ còn hạn chế. Một thảm họa y học liên quan đến ĐPĐQ xảy ra vào những
-5-
năm 50 – 60 của thế kỷ 20 đã được ghi nhận trong lịch sử y văn thế giới. Hàng nghìn
thai phụ sử dụng thuốc thalidomid dạng racemic để điều trị những triệu chứng như
chóng mặt, mất ngủ, buồn nôn trong giai đoạn đầu của thai kỳ đã sinh ra những đứa trẻ
bị dị tật bẩm sinh ở các chi (hội chứng phocomelia). Các nghiên cứu chuyên sâu thực
hiện sau thảm họa cho thấy, đồng phân S-thalidomid trong thuốc racemic ức chế miễn
dịch, gây độc đối với tế bào và là nguyên nhân gây ra hội chứng phocomelia [132].
Mặc dù vậy, số lượng các thuốc chứa dược chất đối quang (thuốc đối quang) vẫn
không ngừng gia tăng qua các năm. Sự chuyển dịch các thuốc đối quang từ dạng
racemic sang các thuốc chỉ chứa một ĐPĐQ cũng như sự phát triển các thuốc mới
chứa dược chất có cấu trúc bất đối với một dạng ĐPĐQ duy nhất vẫn là xu hướng phát
triển mạnh mẽ của ngành dược trong những năm gần đây [88], [160], [168], [192].
Hiện nay, để theo kịp sự phát triển của các thuốc đối quang, nhiều nước và tổ chức
quốc tế đã ban hành các quy chế, hướng dẫn nghiên cứu phát triển và quản lý chất
lượng thuốc chứa dược chất có tính đối quang [34], [65], [89], [91], [182]. Theo quy
định, có thể nghiên cứu phát triển và đăng ký lưu hành thuốc đối quang ở dạng
racemic trong trường hợp không có hoặc chỉ có sự khác biệt nhỏ về tác dụng dược lý,
độc tính giữa các đồng phân. Nếu tác dụng dược lý chính, chỉ do một đồng phân đem
lại nên xem xét phát nghiên cứu triển thuốc chỉ chứa một ĐPĐQ thay cho thuốc
racemic để đạt được hiệu quả điều trị tốt hơn. Trường hợp, độc tính do một đồng phân
gây ra, cần thiết phải phát triển thuốc chỉ với một ĐPĐQ duy nhất để đảm bảo an toàn
cho các chỉ định trên lâm sàng [65], [89], [182]. Các phương pháp phân tích phân biệt
ĐPĐQ thích hợp phải được sử dụng trong nghiên cứu phát triển cũng như quản lý chất
lượng các thuốc đối quang. Chỉ những trường hợp, khi chứng minh được việc chuyển
đổi giữa các ĐPĐQ không xảy ra thì mới có thể không cần thiết phải sử dụng phương
pháp phân tích phân biệt ĐPĐQ [67], [94]. Đối với các thuốc chứa một ĐPĐQ, tiêu
chuẩn chất lượng sản phẩm phải quy định mức giới hạn tạp ĐPĐQ hoặc chỉ tiêu tinh
khiết đối quang (enantiomeric purity) cùng với phương pháp phân tích phân biệt
ĐPĐQ phù hợp. Phương pháp phân tích xác định giới hạn tạp chất đối quang hoặc tinh
khiết đối quang phải có khả năng đánh giá tính toàn vẹn về lập thể của hoạt chất và sản
phẩm thuốc đồng thời phải có độ nhạy phù hợp với giới hạn phát hiện tạp chất đối
quang. Tùy theo từng hoạt chất mà giới hạn tạp đối quang có thể chấp nhận từ 0,1%
đến không quá 2,0% [92], [93], [130], [186]. Kể từ năm 2004, khi lần đầu tiên Dược
-6-
điển Anh và Dược điển châu Âu ban hành chuyên luận Levodropropizin (PhEur
monograph 1535) quy định mức giới hạn tạp chất đối quang Impurity A,
levodropropizin không quá 2,0% đến năm 2015, đã có gần 50 chuyên luận riêng quy
định giới hạn tạp chất ĐPĐQ [130]. Ngoài Dược điển Anh và Dược điển châu Âu,
Dược điển Mỹ 38 cũng có tới hơn 50 chuyên luận thuốc đối quang quy định mức giới
hạn tạp chất đối quang hoặc mức độ tinh khiết đối quang [186].
Như vậy, phương pháp phân tích ĐPĐQ không những có vai trò quan trọng trong
quá trình nghiên cứu phát triển thuốc chứa dược chất đối quang mà còn giữ vai trò
quan trọng trong việc kiểm tra, kiểm nghiệm, giám sát chất lượng thuốc đối quang đã
được cấp phép [47], [88], [160], [198].
1.1.1.4. Tình hình nghiên cứu phân tích đồng phân đối quang ở Việt Nam
Việc nghiên cứu phân tích và quản lý chất lượng các thuốc đối quang tại Việt Nam còn
nhiều hạn chế và mới được quan tâm trong những năm gần đây. Dược điển Việt Nam IV
xuất bản năm 2009, mới chỉ có 03 chuyên luận quy định mức giới hạn tạp chất đối
quang cho các dược chất dexchlorpheninramin maleat (giới hạn ĐPĐQ ≤ 1,0%);
lamivudin (giới hạn ĐPĐQ ≤ 0,3%, phân tích bằng phương pháp HPLC sử dụng cột sắc
ký pha tĩnh gắn β-CD) và timolol (giới hạn đồng phân hữu tuyền ≤ 2,0%, phân tích bằng
phương pháp HPLC sử dụng cột sắc ký pha tĩnh gắn amylose) [4].
Trong những năm gần đây, mới chỉ có một số ít các nghiên cứu kiểm tra chất
lượng nguyên liệu, chế phẩm thuốc đối quang được thực hiện và công bố như:
- Định lượng R-omeprazol bằng HPLC với cột sắc ký Chiralcel OD-H (250 x 4,6
mm; 5 µm) cùng hệ pha động n-hexan : ethanol của các tác giả Lê Trung Hậu, Nguyễn
Đức Tuấn năm 2014. Phương pháp phù hợp để định lượng tạp R-omeprazol trong
nguyên liệu và chế phẩm viên nén esomeprazol với mức giới hạn tạp chất 0,2% [14].
- Phân tích tạp ĐPĐQ của nguyên liệu omeprazol bằng phương pháp HPLC sử
dụng cột sắc ký chứa pha tĩnh hoạt quang AGP (Chiral AGP 150 x 4,6 mm, 5 µm) với
pha động chứa MeCN : dung dịch đệm NaH2PO4 10 mM pH 5, tỷ lệ 10 : 90 của các
tác giả Lê Đình Chi, Thái Nguyễn Hùng Thu năm 2013. Phương pháp có độ đúng,
chính xác đáp ứng yêu cầu và phù hợp để xác định giới hạn tạp chất R-omeprazol
trong các mẫu nguyên liệu esomeprazol [8].
- Phân tích ĐPĐQ của amlodipin bằng phương pháp CE sử dụng dung dịch điện ly
nền chứa tác nhân hoạt quang CM-β-CD của tác giả Lê Đình Chi và Thái Nguyễn
-7-
Hùng Thu năm 2013. Phương pháp có LOD đối với R-amlodipin là 3,1 µg/ml [9].
- Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ: phân tích các ĐPĐQ của chlorpheniramin,
dexchlorpheniramin bằng HPLC với cột sắc ký chứa pha tĩnh đối quang β-CD; phân
tách các ĐPĐQ của amlodipin bằng HPLC sử dụng cột sắc ký chứa pha tĩnh đối quang
AGP và phân tích ĐPĐQ của lamivudin bằng phương pháp CE với dung dịch điện ly
nền chứa tác nhân đối quang CM-β-CD của Lê Đình Chi và cộng sự năm 2012 [7].
- Ứng dụng tác nhân đối quang hydroxybutyl-β-CD trong phân tích ĐPĐQ của
promethazin bằng phương pháp CE của Lê Thị Thu Cúc, Từ Thị Minh Tâm và cộng
sự năm 2011. Phương pháp có thời gian phân tích khá dài (khoảng 40 phút) và thích
hợp để xác định tạp chất đối quang promethazin trong chế phẩm thuốc [11].
- Phân tích các ĐPĐQ của ketoconazol bằng phương pháp CE với dung dịch điện
ly nền chứa tác nhân đối quang hydroxybutyl-β-CD của Lê Thị Thu Cúc và cộng sự
năm 2011. Phương pháp có độ phân giải giữa hai đồng phân khoảng 2,6 và độ đúng,
chính xác đáp ứng yêu cầu [12].
- Xác định độ tinh khiết quang học của dẫn chất cis-N-alkyl-phthalazinon bằng
phương pháp HPLC dùng pha tĩnh bất đối là dẫn xuất tris (3,5-dimethylphenyl
carbamat) cellulose của tác giả Chương Ngọc Nãi và cộng sự năm 2011 [18].
Ngoài các nghiên cứu định lượng ĐPĐQ trong các mẫu nguyên liệu và chế phẩm
thuốc như đã nêu trên, cho đến nay tại nước ta mới chỉ một nghiên cứu phân tích, định
lượng thuốc đối quang trong mẫu dịch sinh học được công bố. Năm 2002, Bùi Tùng
Hiệp, Lê Quang Nghiệm và cộng sự đã tiến hành chiết tách chlorpheninramin trong
các mẫu huyết tương người bằng kỹ thuật chiết lỏng – lỏng với diethylether sau khi đã
kiềm hóa mẫu bằng dung dịch KOH 5%. Dung dịch mẫu sau khi chiết được sắc ký qua
cột cyanopropyl để loại tạp chất và ảnh hưởng của nền mẫu trước khi tiến hành phân
tách các ĐPĐQ của chlorpheninramin trên cột sắc ký gắn pha tĩnh đối quang dẫn xuất
của amylose. Kết quả nghiên cứu cho thấy phương pháp có khoảng tuyến tính từ 2 –
20 ng/ml; độ lặp lại liên ngày với giá trị RSD khoảng 20% [13].
Như vậy, mới chỉ có một số ít các nghiên cứu phân tách thuốc có ĐPĐQ được
triển khai. Vấn đề nghiên cứu phân tách các ĐPĐQ trong kiểm tra chất lượng thuốc và
đặc biệt là trong nghiên cứu sinh khả dụng (SKD), tương đương sinh học (TĐSH) các
thuốc racemic chứa ĐPĐQ có tác dụng dược lý khác nhau gần như chưa được triển
khai và thực hiện tại Việt Nam.
-8-
1.1.2. Phương pháp phân tích đồng phân đối quang
1.1.2.1. Nguyên tắc chung
Phân tích ĐPĐQ là một trong những chủ đề khó trong hóa phân tích do bản chất lý hóa
giống nhau của các đồng phân. Trên thực tế, ĐPĐQ trong hỗn hợp racemic có đáp ứng
giống nhau và không thể phân tách với các điều kiện phân tích thông thường. Đặc
điểm thường được sử dụng để phân tách hai ĐPĐQ của một hỗn hợp racemic bằng các
phương pháp phân tích hóa lý là khả năng tương tác khác nhau của các ĐPĐQ đối với
một chất chọn lọc hoạt quang (chiral selector) xác định.
Trong dung dịch, sự tương tác giữa tác nhân chọn lọc hoạt quang (Re-S) và các
đồng phân hữu tuyền R-A hoặc tả tuyền S-A tạo thành các phức hợp không có tính
hoạt quang (diastereomers) có thể được mô tả bằng các phương trình phản ứng:
R
R - A Re S K
R A (Re S)
S
S - A Re S K
S A (Re S)
Hỗn hợp các phức hợp phi đối quang tạo thành hoặc có các đặc tính hóa lý khác
nhau hoặc có năng lượng liên kết và độ bền khác nhau, được phân tách bằng các
phương pháp phân tích hóa lý phù hợp như GC, HPLC hoặc CE [24], [78], [109].
Sự khác biệt về hằng số tạo phức, các đặc điểm hóa lý cũng như sự khác biệt về độ
bền của các phức hợp phi đối quang tạo thành thường được giải thích bằng mô hình
tương tác ba điểm của Easson–Stedman. Theo các tác giả, giữa chiral selector và đồng
phân đối quang có ba điểm tương tác trong đó có ít nhất 1 trong 3 điểm tương tác này
đặc hiệu với một ĐPĐQ nhất định. ĐPĐQ có cấu trúc phù hợp sẽ liên kết với chiral
selector bằng ba cặp liên kết bao gồm cả cặp liên kết đặc hiệu để tạo phức hợp, trong
khi đó ĐPĐQ còn lại do cấu trúc không phù hợp nên không thể hình thành cặp liên kết
đặc hiệu với chiral selector mà chỉ tạo phức thông qua các liên kết không đặc hiệu. Do
vậy, hằng số tạo phức và độ bền của các phức hợp diastereomer tạo thành sẽ có giá trị
khác nhau [85]. Tuy vậy, mô hình Easson–Stedman mới chỉ giải thích sự tương tác
giữa ĐPĐQ với chất chọn lọc hoạt quang từ một phía, chưa phản ánh bản chất của sự
tương tác (lực hút hoặc đẩy giữa các tiểu phân) trong các phức hợp [50], [85]. Để giải
thích sự hình thành phức hợp diastereomer, bên cạnh mô hình tương tác ba điểm còn
có các mô hình khác như mô hình tương tác Van der Waal hình thành các liên kết
hydro hay liên kết π-π, tương tác lưỡng cực… giữa các phân tử và nhóm chức của
-9-
chúng (Hình 1.2) hay sự liên kết theo kiểu “phức lồng” giữa phân tử ĐPĐQ và “hốc”
chọn lọc đối quang (chiral cavity) trong cấu trúc tác nhân chọn hoạt quang (Hình 1.3).
Hình 1.2. Liên kết tạo phức giữa amylose tris(3,5-dimethylphenylcarbamat) với
(a): (1S, 2R)-(+)-norephedrin; (b): (1R, 2S)-(-)-norephedrin [106].
Hình 1.3. Cấu trúc“phức lồng” của R-propranolol với heptakis(2,3-di-O-acetyl-6-Osulfo)-β-cyclodextrin trong (a): dung môi; (b): nước [123].
Sự khác biệt giữa các hằng số tạo phức KR, KS và sự khác biệt về độ bền của các
phức hợp tạo thành giữa chất chọn lọc hoạt quang với các đồng phân tả tuyền hoặc
hữu tuyền là cơ sở hóa lý của việc phân tích ĐPĐQ bằng phương pháp sắc ký hoặc
điện di [24], [30], [32], [78], [109]. Để phân tách các ĐPĐQ, tác nhân chọn lọc hoạt
quang thường được thêm vào hệ thống phân tích theo cách trực tiếp hoặc gián tiếp.
Theo cách gián tiếp: Hai ĐPĐQ được tạo dẫn chất với một hợp chất đối quang khác
để tạo ra hai sản phẩm không đối quang ở ngoài hệ thống phân tích. Các sản phẩm của
quá trình tạo dẫn chất sẽ có tính chất hóa lý khác nhau nhiều hơn so với các ĐPĐQ
ban đầu và được phân tích bằng phương pháp sắc ký hoặc điện di thông thường.
- 10 -
Theo cách trực tiếp: Chất chọn lọc hoạt quang được đưa trực tiếp vào hệ thống phân
tích. Khi mức độ tương tác giữa hai ĐPĐQ với chất chọn lọc hoạt quang khác biệt đủ
lớn, các phức hợp tạm thời giữa các ĐPĐQ và tác nhân chọn lọc hoạt quang sẽ được
tách riêng ngay trên hệ thống phân tích [84], [164], [187].
So với phương pháp trực tiếp thì phương pháp gián tiếp có một số nhược điểm như:
tốn thời gian xử lý mẫu; tác nhân chọn lọc hoạt quang phải có độ tinh khiết cao; chỉ áp
dụng được đối với các ĐPĐQ có chứa nhóm chức hoạt động hóa học như amin,
hydroxyl, carboxylic… để phản ứng tạo phức diễn ra với tốc độ và hiệu suất đủ lớn.
Thông thường, không dễ dàng giải quyết tất cả các vấn đề này trong quá trình thực
nghiệm nên phương pháp phân tích gián tiếp ít được áp dụng trong thực tế. Phương
pháp gián tiếp chỉ áp dụng trong trường hợp phương pháp trực tiếp không thể áp dụng
được hoặc khi cần phương pháp phân tích có độ nhạy cao [77], [78], [109].
1.1.2.2. Phân loại tác nhân chọn lọc hoạt quang
Tác nhân chọn lọc hoạt quang đóng vai trò quan trọng trong phân tích ĐPĐQ, dựa trên
phản ứng và ái lực khác nhau giữa tác nhân chọn lọc hoạt quang và các đồng phân tả
tuyền, hữu tuyền mà các phức hợp phi đối quang với các đặc điểm hóa lý, năng lượng
liên kết và độ bền vững khác nhau được hình thành, trên cơ sở đó các ĐPĐQ trong hỗn
hợp được phân tách khỏi nhau. Chính vì vậy, trong quá trình phát triển phương pháp
phân tích ĐPĐQ, người ta luôn chú ý nghiên cứu, tìm kiếm tác nhân chọn lọc hoạt
quang phù hợp. Trên thực tế, tác nhân chọn lọc hoạt quang khá phổ biến, đa dạng về
nguồn gốc và cấu trúc hóa học. Tuy vậy chỉ có một số ít các chất chọn lọc hoạt quang
có ái lực khác nhau với các ĐPĐQ của một hỗn hợp racemic [24], [77], [78], [109].
Dựa trên nguồn gốc, bản chất hóa học và cơ chế tạo phức, các tác giả Alain Berthod
[24], Gerhard K.E. Scriba và cộng sự [78] đã chia tác nhân chọn lọc hoạt quang thành
năm nhóm chính:
Nhóm 1: Một số protein như albumin huyết thanh người (HSA), albumin huyết
thanh bò (BSA); α1- acid glycoprotein (AGP); ovalbumin trong trứng gà…; một số
cyclopeptid và một số kháng sinh nhóm macrocyclic glycopeptid (vancomycin,
teicoplanin, avoparcin, tubocuracin…). Các chất thuộc nhóm 1, có bản chất là các chất
hoạt quang tự nhiên, phân tử có nhiều trung tâm bất đối xứng có thể tạo phức hợp với
ĐPĐQ theo nhiều cơ chế khác nhau [48], [78], [79]. Ví dụ, cấu tạo và các vị trí hình
thành liên kết với các thuốc/ ĐPĐQ của phân tử HSA được trình bày ở Hình 1.4 [78].
- 11 -
Hình 1.4. Cấu tạo, vị trí hình thành liên kết giữa HSA và các ĐPĐQ
Chú thích hình: HSA: dải ruy băng, các phối tử (thuốc hoặc ĐPĐQ): quả cầu tô màu.
Nhóm 2: Các oligosaccharid không vòng và các dẫn chất polysaccharid (chủ yếu là
các dẫn chất của cellulose và amylose) như các dẫn chất ester, benzoat, carbamat của
amylose hay cellulose... Các chất thuộc nhóm này đều là các chất hoạt quang tự nhiên,
tạo phức hợp với ĐPĐQ thông qua liên kết hydro, liên kết π-π hay tương tác lưỡng
cực... [109], [139], [202]. Cấu tạo một số pha tĩnh HPLC gắn chất chọn lọc hoạt quang
dẫn chất của cellulose và amylose được trình bày ở Hình 1.5 [109].
Hình 1.5. Cấu tạo pha tĩnh đối quang dẫn chất polysaccharid cuả một số cột HPLC.
- 12 -
Ngoài các liên kết, tương tác nêu trên các chất chọn lọc hoạt quang thuộc nhóm
hai còn có thể tạo phức với ĐPĐQ thông qua cấu trúc thứ cấp “xoáy ốc” của phân tử
chất chọn lọc hoạt quang.
Nhóm 3: Các chất chọn lọc hoạt quang phân tử lượng nhỏ, tạo phức hợp với ĐPĐQ
dựa trên tương tác 3 điểm trong đó có ít nhất một tương tác giữa tác nhân chọn lọc
hoạt quang và ĐPĐQ là liên kết π-π giữa một nhóm cho điện tử π và một nhóm nhận
điện tử π (chất chọn lọc hoạt quang kiểu Pirkle). Cấu trúc chung của các chất chọn lọc
hoạt quang nhóm này thường có: một nhóm chức acid hoặc base liên kết với vòng
thơm (có khả năng hình thành các liên kết π); một nhóm chức/cấu trúc phân cực mạnh
có khả năng hình thành liên kết hydro và một nhóm chức/cấu trúc không phân cực
tương tác với phân tử ĐPĐQ bằng các lực liên kết Van der Wall. Nhóm chức/cấu trúc
không phân cực thường có cấu tạo “cồng kềnh” quyết định hình dạng cấu trúc phân tử
chất chọn lọc hoạt quang và ít nhất một trong 3 nhóm chức/cấu trúc nêu trên của tác
nhân chọn lọc hoạt quang sẽ phân bố ở gần vị trí nguyên tử carbon bất đối của phân tử.
Các chất chọn lọc hoạt quang nhóm này rất đa dạng, có cả các chất có nguồn gốc tự
nhiên và các chất bán tổng hợp hóa học như dẫn chất 3,5-dinitrobenzoyl của 1,2diaminocyclohexan; 3,5-dinitrobenzoyl leucin; 3,5-dinitrobenzoyl phenylglycin... hay
các dẫn chất của quinin, quinidin như tert-butylcarbamoylquinin... Hiện có tới gần 100
loại cột sắc ký lỏng mà thành phần pha tĩnh là silicagen liên kết với chất chọn lọc hoạt
quang thuộc nhóm này. Cấu tạo một số pha tĩnh của cột sắc ký lỏng chứa tác nhân
chọn lọc hoạt quang nhóm 3 được trình bày ở Hình 1.6 [164], [187].
Hình 1.6. Cấu tạo một số pha tĩnh liên kết tác nhân hoạt quang kiểu Pirkle
- 13 -
Nhóm 4: Các chất chọn lọc hoạt quang mà cấu trúc phân tử có các “hốc” chọn lọc
đối quang tạo “phức lồng” với đồng phân, bao gồm các cyclodextrin (CD) và dẫn chất,
các ether vòng và một số polymer... Trong nhóm này, CD và dẫn chất là tác nhân chọn
lọc hoạt quang tự nhiên, còn ether vòng và các polymer thường là tác nhân chọn lọc
hoạt quang tổng hợp hoặc bán tổng hợp hóa học.
Cyclodextrin và dẫn chất: Cyclodextrin (CD) là các oligosaccharid mạch vòng do
các đơn vị D-glucose liên kết với nhau bằng liên kết α(1-4) tạo thành. Các CD khác
nhau ở số đơn vị glucose và số lượng các nhóm hydroxyl. Các CD có cấu trúc hình
nón cụt rỗng với một “hốc” có bề mặt phía trong kỵ nước và phía ngoài thân nước.
Vành hẹp của hốc được tạo thành từ các nhóm 6-OH sơ cấp, vành rộng hơn được tạo
thành từ các nhóm 2- và 3-OH thứ cấp. Các liên kết -O- của dị vòng quay vào trong
tạo hốc rỗng kỵ nước. Cấu tạo chung của các CD được trình bày ở Hình 1.7, các đặc
điểm hóa lý của một số CD tự nhiên được trình bày ở Bảng 1.2 [53], [181], [196].
Bảng 1.2. Tính chất hóa lý của một số cyclodextrin tự nhiên
Số đơn vị glucose
α
6
Loại cyclodextrin
β
7
γ
8
Số nhóm hydroxyl
18
21
24
Trọng lượng phân tử (MW)
972
1135
1297
0,47-0,52
0,60-0,64
0,75-0,85
Tính chất
Đường kính trong của “hốc” (nm)
Đường kính ngoài của “hốc” (nm)
1,46 ± 0,05 1,54 ± 0,04
1,75 ± 0,04
Thể tích “hốc” (nm3)
0,176
0,346
0,510
Độ tan trong nước ở 250C (g/100ml)
14,50
1,85
23,20
Hình 1.7. Cấu tạo và kích thước hốc kỵ nước của các cyclodextrin.
- 14 -
Khi thay đổi hóa học ở các nhóm -OH tự do của CD bằng cách cho phản ứng tạo
liên kết với các nhóm thế khác nhau, người ta thu được các dẫn chất CD có mức độ
phân cực, độ tan, khả năng liên kết tạo phức… khác nhau [53], [181], [196]. Cấu trúc
của một số dẫn chất CD được trình bày ở Hình 1.8 [196].
Hình 1.8. Cấu trúc của một số tác nhân hoạt quang dẫn chất cyclodextrin
Sự hình thành “phức lồng” giữa ĐPĐQ (chất lạ) và tác nhân chọn lọc hoạt quang
dẫn chất CD liên quan đến quá trình “lồng” các gốc thân dầu của phân tử chất lạ vào
“hốc rỗng” của các CD thay thế cho phân tử dung môi (thông thường là nước) ở phía
trong của hốc rỗng [152], [196]. Các phân tử lạ ăn khớp toàn bộ phân tử hoặc phần kỵ
nước với hốc rỗng của phân tử CD. Tương tác kỵ nước với riêng hốc rỗng là không đủ
để có thể tách các chất ĐPĐQ, các liên kết yếu giữa các nhóm thế ở trung tâm bất đối
trong cấu trúc chất phân tích và các nhóm hydroxyl thứ cấp và/hoặc sơ cấp của CD
chịu trách nhiệm chính cho cơ chế nhận diện chọn lọc đối quang. Tùy vào chất tan,
loại CD và môi trường thực nghiệm mà quá trình lồng phân tử chất tan vào phân tử
CD có thể xảy ra ở vành sơ cấp hoặc vành thứ cấp [53], [152]. Các dẫn chất CD có các
nhóm -OH tự do liên kết với các nhóm thế khác nhau nên mức độ phân cực và khả
năng tạo phức với ĐPĐQ của các dẫn chất CD khác so với các CD tự nhiên. Tùy thuộc
vào số lượng các nhóm –OH tự do, số lượng và cấu trúc của các nhóm thế mà các dẫn
chất CD sẽ có độ phân cực, độ tan, khả năng và cơ chế tạo phức khác nhau. Ngoài
tương tác kỵ nước và hình thành “phức lồng” với các ĐPĐQ, các dẫn chất CD có thể
có thêm tương tác ion trong trường hợp nhóm thế tích điện hoặc tương tác π-π khi các
nhóm thế có chứa nhân thơm [53], [152].
Các ether dạng vòng [30], [142], [196]: Các ether dạng vòng là các polyether
macrocyclic có khả năng tạo phức chất với các cation vô cơ và hữu cơ. Sự thay đổi ở
vòng ether với việc có thêm bốn nhóm carboxylic làm cho nhóm này có thể sử dụng
làm chất chọn lọc đối quang. Phức hợp giữa ether dạng vòng và các ĐPQH có nhóm
chức amin được tạo thành nhờ các liên kết hydro giữa nhóm chức với các nguyên tử
- 15 -
Tài liệu liên quan
Nghiên cứu nâng cao chất lượng một số chế phẩm thuốc sản xuất trong nước pptx
Nghiên cứu ứng dụng công nghệ biến tính protein để sản xuất một số sản phẩm từ thịt cá mè
nghiên cứu định lượng trong kinh doanh
Nghiên cứu khoa học " Nghiên cứu nhu cầu tiêu dùng gỗ ván dăm ở Việt Nam - Một số vấn đề lý luận và thực tiễn " docx
Trình tự nghiên cứu định lượng cơ bản cho các nghiên cứu docx
Các phương pháp phân tích Bài giảng 9 Trình tự nghiên cứu định lượng cơ bản cho các nghiên cứu docx
Nghiên cứu một số sản phẩm từ vật liệu polyme sinh học trên cơ sở Chitin, Chitosan và dẫn xuất dùng trong y học
Tiểu luận: Nghiên cứu định lượng về tác động của tốc độ tăng trưởng GDP và độ mở thương mại đến dòng vốn FDI đăng ký tại Việt Nam
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƯỢNG
Nghiên cứu tối ưu hóa quy trình thủy phân cá tạp để sản xuất chế phẩm sinh học sử dụng làm thức ăn cho cá lóc bằng phương pháp quy hoạch thực nghiệm
Tài liệu bạn tìm kiếm đã sẵn sàng tải về
(8.64 MB) - Nghiên cứu định lượng atenolol và các đồng phân đối quang trong một số chế phẩm thuốc và trong dịch sinh học
Tải bản đầy đủ ngay
×

Server: Apache


markdown:
Chúc bạn luôn THÀNH CÔNG - HẠNH PHÚC - BÌNH AN
Showing 97–101 of 101 results
Sự nghiệp làm cha
Tớ đã học tiếng Anh như thế nào?
Bé ơi ngủ ngon
Ehon – Bộ ba dạy kỹ năng cho trẻ bằng thơ
Cha, con và những thước phim
Tên tài khoản hoặc địa chỉ email *
Mật khẩu *
Ghi nhớ mật khẩu
Quên mật khẩu?

WARC-Type: response

Content-Type: application/http; msgtype=response

Connection: close

Cache-Control: no-store, no-cache, must-revalidate, post-check=0, pre-check=0

Pragma: no-cache

Vary: Accept-Encoding,User-Agent

Content-Type: text/html; charset=UTF-8


markdown:
Chúc bạn luôn THÀNH CÔNG - HẠNH PHÚC - BÌNH AN
Lãnh đạo bằng sự khiêm nhường
Tên tài khoản hoặc địa chỉ email *
Mật khẩu *
Ghi nhớ mật khẩu
Quên mật khẩu?


markdown:
![ ](http://thammyhanquoc.vn/wp-content/themes/jw-theme_update/images/hotline.png)
[Siu Black được cảnh sát hộ tống khi bị chủ nợ bao vây](http://thammyhanquoc.vn/tin-tuc/siu-black-duoc-canh-sat-ho-tong-khi-bi-chu-no-bao-vay.html)
May mắn không có một sự cố đáng tiếc nào xảy ra vì lực lượng cảnh sát đã có mặt để giữ gìn an ninh trật tự. Tối qua (11/8), Siu Black đã lần đầu lộ diện sau lùm xùm nợ nần trong chương trình gây quỹ tại phòng trà Nam Quang, TPHCM. Do thông tin về chương trình được thông báo rộng rãi nên ngay từ sớm đã có rất đông các chủ nợ đến phòng trà đợi Siu Black kết thúc biểu diễn để đòi nợ. Sau khi đêm diễn kết thúc, vẫn còn rất đông thanh niên lạ mặt đứng bên ngoài phòng trà. May mắn không có một sự cố đáng tiếc nào xảy ra vì lực lượng cảnh sát đã có mặt để giữ gìn an ninh trật tự.
Xe cảnh sát bên ngoài để giữ gìn an ninh
Nữ ca sĩ được hộ tống ra xe, lúc này vẫn có rất đông người lạ mặt đúng xung quanh phòng trà
Nữ ca sĩ ra về bằng taxi
Và đến một khách sạn để nghỉ
Trước đó, theo dự kiến 8 giờ Siu Black sẽ có mặt ở địa điểm diễn nhưng phải đến 10 giờ kém nữ ca sĩ mới lộ diện. Ngay từ khi xuất hiện, Siu Black đã thu hút sự chú ý của mọi người, chị nở nụ cười rạng rỡ quen thuộc nhưng đâu đó vẫn phảng phất nét u buồn và nỗi lo sợ trên khuôn mặt.
Phải có người hộ tống Siu Black vào bên trong vì sợ các chủ nợ sẽ làm chuyện không hay
Đến khi một khán giả tặng hoa bày tỏ tình cảm thì nữ ca sĩ không cầm được nước mắt
Các đồng nghiệp hộ tống Siu Black lên sân khấu
nguon:kenh14
*Lưu Ý: kết quả thẩm mỹ phụ thuộc vào đường nét có sẵn và cơ địa của từng người
![ ](http://thammyhanquoc.vn/wp-content/themes/jw-theme_update/images/hotline.png)

Server: Apache/2.2.31 (Unix) mod_ssl/2.2.31 OpenSSL/0.9.8e-fips-rhel5 mod_bwlimited/1.4

Link: <http://thammyhanquoc.vn/wp-json/>; rel="https://api.w.org/", <http://thammyhanquoc.vn/?p=29121>; rel=shortlink


markdown:
Tôi đã có may mắn được biết một dân tộc anh em của chúng ta, đó là dân tộc Lự. Dù chỉ có một thời gian ít ỏi để tìm hiểu, nhưng tôi muốn kể lên đây để có thể một số anh chị em chưa biết thêm hiểu và thêm yêu con người và quê hương Việt Nam.
Theo trao đổi với thầy giáo hiệu trưởng trường tiểu học Ma Quai thuộc huyện Sìn Hồ - Lai Châu tôi được biết, dân tộc Lự sống ở bản Phìn Hồ hiện có khoảng 100 hộ với xấp xỉ 500 nhân khẩu. Khi tôi đến đây, bà con dân tộc nói rằng tại thời điểm này thì bản rất vắng bởi thanh niên mạnh khỏe đi làm xa hết và chỉ đông đủ khi tết cổ truyền.
Người Lự ở bản Phìn Hồ xã Ma Quai có vẻ rất thân thiện và cởi mở. Đến đâu tôi cũng thấy họ vui cười mặc dù người phụ nữ nào cũng đang làm công việc hàng ngày của họ là se sợi và dệt vải. Mỗi ngôi nhà sàn đều được lợp bằng đá (đá tự nhiên màu đen) và tương đối sạch sẽ, dưới mỗi gầm sàn đều có một khung dệt (có nhà có đến 2 khung dệt)
Họ sống tương đối biệt lập và chắc chắn còn nhiều khó khăn, ngay cả đường để đi đến nơi họ cũng vẫn còn vô vàn gian khó. Nhưng tôi tin, một trong 54 dân tộc anh em của chúng ta còn rất nhiều hứa hẹn để chúng ta đến và tìm hiểu cũng như học tập về cuộc sống - lao động của họ.
Mời anh chị và các bạn xem một số hình ảnh tôi ghi lại trong những ngày cuối tháng 11 vừa qua.
**Đoàn xe đợi thông đường trên QL 12**
**Con đường từ tỉnh lộ 128 vào Ma Quai dài 15km và lội qua 1 con suối**
**Ngựa chiến bị lầy và được 8 người kéo bằng dây da Trâu**
**Những ngôi nhà sàn rất đẹp, những hòn sỏi mồ côi quá thơ mộng**
**Mái đá ẩn hiện sau vườn rau xanh**
**Khung dệt**
**Gia đình này có tới 2 chiếc khung dệt vải**
**Căn nhà sàn này rất cao và tưởng chừng đơn giản nhưng không phải vậy đâu.**
Vào gần mới thấy nó khá công phu và chắc chắn. Cầu thang nằm giữa nhà
Vào gần mới thấy nó khá công phu và chắc chắn. Cầu thang nằm giữa nhà
**Đơn sơ hơn**
**Hình dạng thế này là chủ yếu**
**Ba người phụ nữ trẻ đi "hái rau" về**
**Một ngôi nhà đang được cất.**
Chính vì có công trình này mà ngựa chiến của tôi mới được kéo lên bằng dây da Trâu
Chính vì có công trình này mà ngựa chiến của tôi mới được kéo lên bằng dây da Trâu
**Bọn trẻ vô tư**
**Lốp xe được quấn thêm cao su tăng độ bám**
**Giờ ăn trưa bán trú**
**Những phụ nữ người Lự rất vui vẻ**
**Và thân thiện, chỉ có em bé là sợ khi chụp ảnh xong**
**Những phụ nữ đang se sợi dệt vải**
**Tha thẩn**
**Mái nhà bằng đá tự nhiên**
**Người phụ nữ này đang may vá áo quần**
**Nét hoa văn giản đơn cùng mái đá**
**Bé thơ người Lự**
**Và hầu như ai cũng nạm răng vàng (kể cả đàn ông)**
**Làm duyên**
**Người đàn ông này bảo "chụp ảnh tôi với"**
**Cô gái này chạy ra gọi thêm mọi người đến để chụp hình và nói chuyện**
**Cặp vợ chồng hạnh phúc**
**Người đàn ông này gọi mời tôi lên nhà ông ấy uống rượu!**
**Thêm nhiều người ngừng tay để ra nói chuyện rất vui vẻ và thân thiện!**
**Không một người phụ nữ nào tôi gặp mà họ không đang làm các công việc**
như may mặc, thêu thùa hay dệt vải
như may mặc, thêu thùa hay dệt vải
Cs thật đơn sơ bình dị và con người cũng thật thân thiện, dễ gần...Trả lờiXóa
Nhìn thấy họ mình lại nghẹn ngào rồi!Trả lờiXóa
Thương vô cùng!
Thương thì thương thật đấy, nhưng họ cũng rất hạnh phúc chị ạ, chả có gì để họ bon chen. Cuộc sống của họ là chuỗi những điều dung dị và bình yên nhất!Xóa
Những thông tin mới nhất mà anh em, đồng bào trong nước không thể không biết về:Trả lờiXóa
“Lưỡi Bò” và tình trạng hết sức nguy kịch của nhân dân Việt Nam! http://lytuongnguoiviet.com/index.php/baivietbinhluan/22442-li-bo-va-tinh-trng-ht-sc-nguy-kch-ca-nhan-dan-vit-nam

X-XSS-Protection: 1; mode=block

Server: GSE

Cache-Control: private, max-age=0

X-Content-Type-Options: nosniff


markdown:
[Doremon Dài – Ba chàng hiệp sĩ mộng mơ](http://thaophim.com/phim/doremon-dai-ba-chang-hiep-si-mong-mo/)
6 months ago1691 0
[Doremon Dài – Bí mật mê cung Buriki](http://thaophim.com/phim/doremon-dai-bi-mat-cung-buriki/)
6 months ago1551 0
[Doremon Dài – Nobita Tây Du Ký](http://thaophim.com/phim/doremon-dai-nobita-tay-du-ky/)
6 months ago2051 0
[Doremon Dài – Ngôi Sao Cảm (Thuyết Minh)](http://thaophim.com/phim/doremon-dai-ngoi-sao-cam-thuyet-minh/)
6 months ago1331 0
[Doremon dài – Thành phố thú nhồi bông (Vietsub)](http://thaophim.com/phim/doremon-dai-thanh-pho-thu-nhoi-bong-vietsub/)
6 months ago2101 0
[Doremon dài – Lạc vào vương quốc gió](http://thaophim.com/phim/doremon-dai-lac-vao-vuong-quoc-gio/)
6 months ago1531 0
[Doremon Dài – Nobita và chú khủng long lạc loài 2006](http://thaophim.com/phim/doremon-dai-nobita-va-chu-khung-long-lac-loai-2006/)
6 months ago1931 0
[Doremon – Truyền thuyết về vua mặt trời Nobita](http://thaophim.com/phim/doremon-truyen-thuyet-ve-vua-mat-troi-nobita/)
6 months ago2362 0
[Doremon – Nobita và những dũng sĩ có cánh](http://thaophim.com/phim/doremon-nobita-va-nhung-dung-si-co-canh/)
6 months ago1321 0
[Doremon – Tân Nobita và ngày nước Nhật ra đời](http://thaophim.com/phim/doremon-tan-nobita-va-ngay-nuoc-nhat-ra-doi/)
6 months ago1191 0
[Doremon – Nobita và truyền thuyết Người Cá](http://thaophim.com/phim/doremon-nobita-va-truyen-thuyet-nguoi-ca/)
6 months ago1221 0
[Doremon – Nobita và Người Khổng Lồ Xanh](http://thaophim.com/phim/doremon-nobita-va-nguoi-khong-lo-xanh/)
6 months ago1501 0

WARC-Truncated: length

Server: LiteSpeed

Vary: Accept-Encoding, Cookie

Accept-Ranges: bytes


markdown:
# Cơ hội sở hữu CHCC cao cấp tại khu đô thị mới Văn Phú chỉ với 900tr
Xem trong '
[Sọt rác](forum/trash/)' đăng bởi [dobichvic47], [31/8/13](threads/co-hoi-so-huu-chcc-cao-cap-tai-khu-do-thi-moi-van-phu-chi-voi-900tr.2946/), [ Mã Tin: 2946 ]
**[227 lượt xem - 0 bình luận]**
Xem trong '
[Sọt rác](forum/trash/)' đăng bởi [dobichvic47], [31/8/13](threads/co-hoi-so-huu-chcc-cao-cap-tai-khu-do-thi-moi-van-phu-chi-voi-900tr.2946/), [ Mã Tin: 2946 ]
**[227 lượt xem - 0 bình luận]**

Server: nginx

Vary: Accept-Encoding

X-Frame-Options: SAMEORIGIN


markdown:
Phong tro dang can ho biet lap tren duong Bach dang- P15- Q Binh Thanh. Khu dan cu on dinh, an ninh tot. Phong tro thoang mat, sach dep: toilet va bep nau trong phong. DTSD: 29m2 (co ban- con rieng). Dien nuoc theo gia nha nuoc. Co san truyen hinh cap va internet. Gio giac tu do, khong chung chu. Gia thue 3 trieu/thang. Lien he chu nha: C Khanh: 0913 835 543
# Phòng trọ trên đường Bạch Đằng P15 Quận Bình thạnh
**Tìm nhanh**
Đăng lúc:
**15/11/2014 05:08**
Đánh giá:
(1/1)
## Thông tin liên hệ
- Diện tích:
**29 m2**
- Giá:
- Liên hệ:
**0913835543@ming.vn**
- Điện thoại:
**0913835543**
- Email:
**0913835543@ming.vn**
## Trạng thái tin rao
Nếu bạn đã XEM NHÀ hoặc GỌI ĐIỆN HỎI THÔNG TIN mua bán, cho thuê
**nhà đất**này, bạn hãy BÌNH LUẬN về TÌNH TRẠNG của **nhà đất**đó ở bên dưới để giúp cho CỘNG ĐỒNG biết THÔNG TIN này **Ví dụ như:**
- Nhà này đã bán rồi
- Nhà này đã cho thuê rồi
- Chủ nhà này khó tính lắm
- Nhà này hay mất nước lắm ==> đừng thuê !
- Ở chung với chủ nhà này thật không chịu nổi
!
- etc...
**MỌI NGƯỜI**cùng biết thông tin **TÌNH TRẠNG NÀY**! Web nhà đất 24h **XIN CẢM ƠN !**
## TP Hồ Chí Minh
Cho thuê mặt bằng làm văn phòng, khu vực yên tĩnh, an ninh lịch sự, sạch sẽ, ngay trung tâm Bình Thạnh, giáp Q1. Hẻm có sân rộng, có chỗ để xe, free wifi. Nhà cách MT đường Điện Biên Phủ 20m. Nhà thoáng mát, sơn sửa mới. Diện tích 5x6m, 30m2. lối đi riêng. Công ty nào thật sự có nhu cầu vui lòng liên hệ wa fone 0939046663( Ms. Trinh). không trả lời tin ...Loại tin:
[Cho thuê nhà đất](/cho-thue-nha-dat)Giá:Diện tích: **30 m2**Quận/Huyện:Đăng lúc: [28/02 09:00](/28-02-2015)
Diện tích 70m2, 01pn, 01pk, đầy đủ nội thất, tầng cao. gia 800usd/th ~ 16trDiện tích 140m2, 03pn, 02 wc, nội thất đính tường, tầng cao. gia 1400usd/th ~ 28tr/th lien he ...Loại tin:
[Cho thuê nhà đất](/cho-thue-nha-dat)Giá: **800 usd**Diện tích: **70 m2**Quận/Huyện:Đăng lúc: [28/02 09:00](/28-02-2015)
Cho thuê Căn hộ cao cấp Phú Nhuận, số 20 Hoàng Minh Giám, phường 9, quận Phú Nhuận. Khu căn hộ cao cấp. Có hồ bơi, gần công viên, gần sân bay. Diện tích 100m2. Gồm phòng khách, 02 phòng ngủ, 02 toilet, bếp. Nội thất đẹp và hiện đại.LH : ...Loại tin:
[Cho thuê nhà đất](/cho-thue-nha-dat)Giá:Diện tích: **100 m2**Quận/Huyện:Đăng lúc: [28/02 08:56](/28-02-2015)
Cho thuê căn hộ chung cư quận 8. 02 phòng ngủ, 02 nhà vệ sinh, phòng khách, bếp. Địa chỉ: Chung cư Trương Đình Hội, 113 đường Trương Đình Hội – Phường 16 – Quận 8 – TPHCM. Diện tích: 71 m2 Ưu tiên cho gia đình ít người hoặc nữ CNVC. Liên hệ: 0909314376 gặp chị ...Loại tin:
[Cho thuê nhà đất](/cho-thue-nha-dat)Giá:Diện tích: **71 m2**Quận/Huyện:Đăng lúc: [28/02 08:56](/28-02-2015)
Cho thuê nhà MTNB Trần Nhật Duật Q. 1, DT: 5x18, trệt, 3 lầu, 5 PN, nhà đẹp, khu nhiều văn phòng cty, tiện làm văn phòng, nhà ở... Giá 26tr/tháng, LH: ...Loại tin:
[Cho thuê nhà đất](/cho-thue-nha-dat)Giá:Diện tích:Quận/Huyện:Đăng lúc: [28/02 08:49](/28-02-2015)
Nhà mới xây, có phòng đầy đủ tiện nghi cho nữ thuê (giá 2tr5/tháng) đường NTrãi Q1, ngay trung tâm Tp, gần Coop CQuỳnh, Galaxy NTrãi, Bv, chợ và các trường ĐH... 1. Phòng mới, thoáng mát, sạch sẽ, KDC yên tĩnh, an ninh 2. Giờ giấc tự do, lối đi riêng, không chung chủ 3. Trong phòng có tủ quần áo gỗ lớn, nệm, gối, mền, quạt, tủ lạnh ... 4. Có tắm ...Loại tin:
[Cho thuê nhà đất](/cho-thue-nha-dat)Giá:Diện tích:Quận/Huyện:Đăng lúc: [28/02 08:42](/28-02-2015)
DT 114m2, giá 900 usd/tháng, Nhà đầy đủ nội thất design đẹp, gồm 02 phòng ngủ, 02 wc , pk, bếp, view đẹp thoáng mát, khu căn hộ sang trọng theo phong cách Châu Âu. DT 160m2, giá 1200 usd/tháng, Nhà đầy đủ nội thất design đẹp, gồm 03 phòng ngủ, 03 wc , pk, bếp, view đẹp thoáng mát, khu căn hộ sang trọng theo phong cách Châu Âu. Liên hệ ...Loại tin:
[Cho thuê nhà đất](/cho-thue-nha-dat)Giá: **900 usd**Diện tích: **114 m2**Quận/Huyện:Đăng lúc: [28/02 08:42](/28-02-2015)
Phòng nội thất CAO CẤP, đường 6m Số nhà: 243/31 Tô Hiến Thành, P.13, Q 10, TP.HCM Giá: 4.500.000đ/tháng, phòng rộng 35m2, WC riêng, cửa sổ, Ban công thoáng mát, TL, tủ quần áo, TV, ML, Máy nước nóng, lạnh, giường, nệm • Wife, Truyền hình cáp. (Miễn phí) • Chổ để xe rộng rãi LH: Ms Ngọc, Tel. ...Loại tin:
[Cho thuê nhà đất](/cho-thue-nha-dat)Giá:Diện tích: **35 m2**Quận/Huyện:Đăng lúc: [28/02 08:35](/28-02-2015)
Nhà đẹp, phòng thiết kế, nội thất như KHÁCH SẠN, khu vực yên tĩnh, an ninh Số nhà: 80 ÚT TỊCH, P4, Q Tân Bình, TP.HCM (khu vực ĐỆ NHẤT KHÁCH SẠN, NH Đông Phương) Giá: 3.500.000đ/tháng, rộng 20m2, WC riêng, cửa sổ, Ban công thoáng mát, TL, tủ quần áo, TV, ML, Máy nước nóng, lạnh, giường, nệm. • Wife, Truyền hình cáp. (Miễn phí) • Chổ để xe ...Loại tin:
[Cho thuê nhà đất](/cho-thue-nha-dat)Giá:Diện tích: **20 m2**Quận/Huyện:Đăng lúc: [28/02 08:28](/28-02-2015)
Số nhà: 49/4 Hoàng Duy Khương, phường 12, quận 10, khu Hồ Kỳ Hòa.Giá: 4000000/tháng, rộng 35m2, WC riêng, cửa sổ, Ban công thoáng mát, tủ quần áo, TV, Máy Lạnh, Tủ lạnh, Máy nước nóng, lạnh, giường, nệm. Wifi miễn phí,nước miễn phí.LH: Thu Ngọc, Tel. 0907381948- ...Loại tin:
[Cho thuê nhà đất](/cho-thue-nha-dat)Giá:Diện tích: **35 m2**Quận/Huyện:Đăng lúc: [28/02 08:21](/28-02-2015)
## Tags (từ khóa) tin rao
## Rao vặt nhà đất 24h mới nhất
[Mua ngay kẻo hết Chung cư VINATA- 289 Khuất Duy Tiến- Cầu Giấy- Hà Nội](/ban-can-ho-chung-cu-cau-giay-ha-noi/mua-ngay-keo-het-chung-cu-vinata-289-khuat-duy-tien-cau-giay-bds623874) [Mua ngay kẻo hết Chung cư VINATA- 289 Khuất Duy Tiến- Cầu Giấy- Hà Nội](/ban-can-ho-chung-cu-cau-giay-ha-noi/mua-ngay-keo-het-chung-cu-vinata-289-khuat-duy-tien-cau-giay-bds623873) [Mua ngay kẻo hết Chung cư VINATA- 289 Khuất Duy Tiến- Cầu Giấy- Hà Nội](/ban-can-ho-chung-cu-cau-giay-ha-noi/mua-ngay-keo-het-chung-cu-vinata-289-khuat-duy-tien-cau-giay-bds623872) [Nhà phố Hồng Mai, xây khung chắc chắn, 31m2x5T, giá 3.1 tỷ](/ban-nha-rieng-hai-ba-trung-ha-noi/nha-pho-hong-mai-xay-khung-chac-chan-31m2x5t-gia-31-ty-bds623871) [Nhà phố 3.6 tỷ, DT47m2x4T, khu vực có phong thủy rất tốt, Lạc Long Quân, Tây Hồ.](/ban-nha-rieng-tay-ho-ha-noi/nha-pho-36-ty-dt47m2x4t-khu-vuc-co-phong-thuy-rat-tot-lac-lo-bds623870) [Cho thuê phòng trọ (Chính chủ)](/cho-thue-nha-tro-phong-tro-hoc-mon-tphcm/cho-thue-phong-tro-chinh-chu-bds623869) [Căn hộ Heaven Riverview, gần đại lộ Đông Tây, 2PN, dt 54m2, chỉ từ 790tr, trả trước 30%, ck lên đến 9%](/ban-can-ho-chung-cu-quan-8-tphcm/can-ho-heaven-riverview-gan-dai-lo-dong-tay-2pn-dt-54m2-chi--bds623868) [Căn hộ Heaven Riverview, gần đại lộ Đông Tây, 2PN, dt 54m2, chỉ từ 790tr, trả trước 30%, ck lên đến 9%](/ban-can-ho-chung-cu-quan-8-tphcm/can-ho-heaven-riverview-gan-dai-lo-dong-tay-2pn-dt-54m2-chi--bds623867) [CH liền kề Q1 -Tháng 7/2017 nhận nhà -Chỉ 900tr/căn -Trả trước 35% -Góp 3-6tr/th trong 20n](/ban-can-ho-chung-cu-quan-8-tphcm/ch-lien-ke-q1-thang-7-2017-nhan-nha-chi-900tr-can-tra-truoc--bds623866) [Căn hộ MT An Dương Vương - Thanh toán 35% nhận nhà - Góp 3-6t/thg -0913212922](/ban-can-ho-chung-cu-quan-8-tphcm/can-ho-mt-an-duong-vuong-thanh-toan-35-nhan-nha-gop-3-6t-thg-bds623865) [Chính chủ bán đất ngõ 74 Nguyễn Lân, Thanh Xuân, Hà Nội](/ban-dat-thanh-xuan-ha-noi/chinh-chu-ban-dat-ngo-74-nguyen-lan-thanh-xuan-ha-noi-bds623864) [Bán đất 300m biệt thự giáp ĐT Việt Hưng và Vincomvillage](/ban-dat-long-bien-ha-noi/ban-dat-300m-biet-thu-giap-dt-viet-hung-va-vincomvillage-bds623863) [Bán nhà ở hồ tây diện tích 210m2 mặt tiền 9m. Hiện đang có biệt thự kiểu pháp](/ban-nha-rieng-tay-ho-ha-noi/ban-nha-o-ho-tay-dien-tich-210m2-mat-tien-9m-hien-dang-co-bi-bds623862) [CHÍNH CHỦ CẦN CHO THUÊ GẤP NHÀ 4, 5T LÔ GÓC SỐ 88 GIÁ 25 TR/TH KHU PLÔ QĐ PHỐ NGUYÊN HỒNG GIÁ QÚA RẺ](/cho-thue-nha-rieng-cau-giay-ha-noi/chinh-chu-can-cho-thue-gap-nha-4-5t-lo-goc-so-88-gia-25-tr-t-bds623861) [GRAND NEST QUẬN 7 Hàng cao cấp - Giá bình dân](/ban-nha-rieng-quan-7-tphcm/grand-nest-quan-7-hang-cao-cap-gia-binh-dan-bds623860)
## cho thuê nhà đất
Nhà đất theo tỉnh/thành phố
[Hà Nội](/-ha-noi) [Hải Phòng](/-hai-phong) [Bắc Ninh](/-bac-ninh) [Vĩnh Phúc](/-vinh-phuc) [Đà Nẵng](/-da-nang) [TPHCM](/-tphcm) [Bình Dương](/-binh-duong) [Huế](/-hue) [TP Vinh](/-tp-vinh) [Nam Định](/-nam-dinh) [Ninh Bình](/-ninh-binh) [Phú Thọ](/-phu-tho) [Quảng Ninh](/-quang-ninh) [Thái Bình](/-thai-binh) [Thái Nguyên](/-thai-nguyen) [Đồng Nai](/-dong-nai) [Cần Thơ](/-can-tho) [Tiền Giang](/-tien-giang) [Trà Vinh](/-tra-vinh) [Vĩnh Long](/-vinh-long) [Quảng Trị](/-quang-tri) [Quảng Ngãi](/-quang-ngai) [Quảng Nam](/-quang-nam) [Quảng Bình](/-quang-binh) [Phú Yên](/-phu-yen) [Tây Ninh](/-tay-ninh) [Sóc Trăng](/-soc-trang) [Cà Mau](/-ca-mau) [Đồng Tháp](/-dong-thap) [Bến Tre](/-ben-tre) [Hậu Giang](/-hau-giang) [Kiên Giang](/-kien-giang) [Bạc Liêu](/-bac-lieu) [Bà Rịa - Vũng Tàu](/-ba-ria-vung-tau) [An Giang](/-an-giang) [Long An](/-long-an) [Ninh Thuận](/-ninh-thuan) [Nghệ An](/-nghe-an) [Lâm Đồng](/-lam-dong) [Hà Nam](/-ha-nam) [Lào Cai](/-lao-cai) [Lạng Sơn](/-lang-son) [Lai Châu](/-lai-chau) [Hưng Yên](/-hung-yen) [Hoà Bình](/-hoa-binh) [Hải Dương](/-hai-duong) [Hà Giang](/-ha-giang) [Điện Biên](/-dien-bien) [Cao Bằng](/-cao-bang) [Bắc Giang](/-bac-giang) [Sơn La](/-son-la) [Thanh Hoá](/-thanh-hoa) [Kontum](/-kontum) [Khánh Hoà](/-khanh-hoa) [Hà Tĩnh](/-ha-tinh) [Gia Lai](/-gia-lai) [Đắk Nông](/-dak-nong) [Đắk Lắk](/-dak-lak) [Bình Thuận](/-binh-thuan) [Bình Phước](/-binh-phuoc) [Bình Định](/-binh-dinh) [Yên Bái](/-yen-bai) [Tuyên Quang](/-tuyen-quang) [Bắc Cạn](/-bac-can) [Xem thêm](javascript:void(0);)
## Nhà đất theo quận/huyện
Chia sẻ bạn bè
*Nếu thấy nội dung này hữu ích giúp bạn tìm mua nhà, cho thuê nhà hoặc cần thuê nhà thì đừng quên chia sẻ với bạn bè của bạn !*
Đăng ký nhận tin rao qua email
Tags nhà đất 24h
Tin rao dự án HOT
[Premier Residences Phú Quốc](http://timdat.net/premier-residences-phu-quoc-emerald-bay) [Premier Village Phú Quốc](http://timdat.net/premier-village-phu-quoc-resort) [Vinhomes Gardenia Mỹ Đình](http://timdat.net/vinhomes-gardenia-my-dinh) [Vinpearl Condotel Nha Trang](http://timdat.net/vinpearl-condotel-nha-trang) [Vinpearl Paradise Villas Phú Quốc](http://timdat.net/vinpearl-paradise-villas-phu-quoc)
Liên kết website
[Vinhomes Gardenia Mỹ Đình](http://vinhomes365.com/vinhomes-gardenia-my-dinh/) [Vinhomes Gardenia Mỹ Đình](http://vinhomes365.com/2015/vinhomes-gardenia-my-dinh/) [Vinhomes Gardenia - Tag](http://vinhomes365.com/tag/vinhomes-gardenia/) [Vinpearl Condotel Nha Trang](http://vinhomes365.com/tag/vinpearl-condotel-nha-trang/) [Condotel Nha Trang Vinpearl](http://vinhomes365.com/condotel-nha-trang-vinpearl/) [Vinpearl Condotel Nha Trang](http://vinhomes365.com/2015/vinpearl-condotel-nha-trang/) [Vinpearl Condotel Nha Trang](http://lotuslandvn.com/vinpearl-condotel-nha-trang/) [Vinhomes Gardenia Mỹ Đình](http://lotuslandvn.com/vinhomes-gardenia-my-dinh/) [kết quả bóng đá euro 2016](http://ibongda.vn/tin-tuc/Bong-da-chau-au/ket-qua-bong-da-euro-2016-no-280284.html) [lịch thi đấu euro 2016](http://ibongda.vn/tin-tuc/Bong-da-chau-au/lich-thi-dau-euro-2016-no-280281.html) [Premier Residences Phú Quốc](http://lotuslandvn.com/premier-residences-phu-quoc/) [Premier Village Phú Quốc](http://lotuslandvn.com/premier-village-phu-quoc/) [Premier Residences Phú Quốc - Tag](http://lotuslandvn.com/tag/premier-residences-phu-quoc/) [Premier Village Phú Quốc - Tag](http://lotuslandvn.com/tag/premier-village-phu-quoc/) [Vinpearl Condotel Nha Trang - Tag](http://lotuslandvn.com/tag/vinpearl-condotel-nha-trang/) [Vinhomes Gardenia Mỹ Đình - Tag](http://lotuslandvn.com/tag/vinhomes-gardenia-my-dinh/) [Giá biệt thự Premier Village Phu Quoc Resort](http://lotuslandvn.com/gia-biet-thu-premier-village-phu-quoc-resort/) [Căn hộ nghỉ dưỡng Premier Residences Phú Quốc hút hàng ngày ra mắt](http://lotuslandvn.com/can-ho-nghi-duong-premier-residences-phu-quoc-hut-hang-ngay-dau-ra-mat/) [Cẩm nang đầu tư Premier Village Phú Quốc](http://lotuslandvn.com/cam-nang-dau-tu-du-an-premier-village-phu-quoc-resort/)


markdown:
[Ông Trump tuyên bố sẽ giải thể quỹ từ thiện dù đang bị điều tra](/ong-trump-tuyen-bo-se-giai-the-quy-tu-thien-du-dang-bi-dieu-tra.html)
(
[Quốc tế](/cat/the-gioi)) - **Tổng thống Mỹ đắc cử Donald Trump thông báo có ý định giải thể quỹ từ thiện của mình nhằm tránh xảy ra xung đột lợi ích sau khi nhậm chức.**
![ Ông Donald Trump nói sẽ giải thể quỹ từ thiện của mình nhằm ngăn chặn xung đột lợi ích khi ông làm tổng thống /// Reuters](http://cdn9.tolam.info/files/2016/12/viberimage-trym_qnip.jpg)
Ông Donald Trump nói sẽ giải thể quỹ từ thiện của mình nhằm ngăn chặn xung đột lợi ích khi ông làm tổng thống
Trong một tuyên bố ngày 24.12, ông Donald Trump cho biết đang giải thể quỹ từ thiện Trump nhằm tránh xảy ra xung đột lợi ích khi làm tổng thống, theo CNN cùng ngày.
Ông Trump nói rằng quỹ từ thiện của ông đã quyên góp cho những cựu binh, lực lượng hành pháp và trẻ em Mỹ trong nhiều năm. Dù giải thể quỹ này, nhưng ông tuyên bố sẽ theo đuổi việc thiện nguyện theo những cách khác. Theo hồ sơ thuế của quỹ, ông Trump không đóng góp cho quỹ từ năm 2008.
Tuyên bố là vậy, song ý định này có thể sẽ không được thực hiện do chưởng lý bang New York, ông Eric Schneiderman đang tiến hành điều tra quỹ từ thiện Trump vì không đăng ký với nhà chức trách bang. Việc điều tra còn tìm hiểu liệu ông Trump có dùng tiền từ thiện để giải quyết các tranh chấp pháp lý mà ông có liên quan trong thời gian qua hay không.
Người phát ngôn chưởng lý New York, bà Amy Spitalnick cho biết ông Trump không được quyền giải thể quỹ từ thiện này vì đang trong quá trình điều tra. Bà Spitalnick cũng nói rằng các hoạt động gây quỹ cũng đã bị hoãn lại.
Theo The New York Daily News, ông Trump đã đóng 2.500 USD tiền phạt cho Cơ quan thuế vụ Mỹ vì quỹ Trump từng chi một khoản tiền trái phép cho chưởng lý bang Florida năm 2013 khi chưởng lý này đang do dự về việc có nên điều tra cáo buộc Đại học Trump lừa đảo.
Trước đó, vào năm 2007, phu nhân ông Trump là bà Melania sử dụng 20.000 USD từ quỹ để mua bức tranh chân dung ông Trump do hoạ sĩ ký hoạ Michael Israel vẽ.
Quỹ từ thiện Trump được thành lập vào năm 1988. Trong bản kê thuế năm 2015, quỹ Trump có tổng tài sản là 1,12 triệu USD. Thông báo ngày 24.12 của ông Trump được đưa ra chỉ vài ngày sau khi con trai ông – Eric Trump cũng tuyên bố tương tự là sẽ giải thể quỹ Eric Trump nhằm ngăn chặn việc giới tài trợ giàu có tìm cách tiếp cận “Tổng thống Trump”.
Cũng trong ngày 24.12, ông Trump nói sẽ thông báo những bước tiếp theo vào tháng tới để giải quyết chuyện kinh doanh nhằm ngăn chặn xung đột lợi ích khi nhậm chức tổng thống, dù ông nhiều lần cho rằng không bắt buộc phải làm vậy.
(Theo Thanh Niên)
[banbientap@tolam.org](mailto:banbientap@tolam.org?subject=Bài viết: Ông Trump tuyên bố sẽ giải thể quỹ từ thiện dù đang bị điều tra)

Set-Cookie: desktop=true


markdown:
-
Manchester United
-
Manchester City
-
Liverpool
-
Chelsea
-
Arsenal
-
Real Madrid
-
Barcelona
-
Atlético Madrid
-
Milan
-
Juventus
-
Internazionale
-
Borussia Dortmund
-
Bayern München
-
PSG
# Senegal vs. Cameroon
*arrow_forward*Thông số trận đấu
Senegal
Cameroon
*arrow_forward*10 trận gần nhất của Senegal
Bàn thắng
Bàn thua
Sút
Sút trúng khung thành
*arrow_forward*10 trận gần nhất của Cameroon
Bàn thắng
Bàn thua
Sút
Sút trúng khung thành
*arrow_forward*Các trận gần đây của 2 đội
-
**24/01/17**
-
**20/01/17**
-
**16/01/17**
-
**11/01/17**
-
**08/01/17**
-
**12/11/16**
-
**09/10/16**
-
**28/05/16**
-
**11/02/16**
-
**18/11/15**
-
**13/11/15**
-
**23/01/17**
-
**19/01/17**
-
**15/01/17**
-
**11/01/17**
-
**05/01/17**
-
**12/11/16**
-
**10/10/16**
-
**07/09/16**
-
**31/05/16**
-
**06/01/16**
-
**17/11/15**
-
**13/11/15**

Content-Type: text/html; charset=utf-8

Vary: Cookie


markdown:
•• Âm nhạc cổ truyền
•• Nhạc mới
•• Tiểu sử nhạc sĩ
•••• Nghệ sĩ từ trần
•• Nghiên cứu gia VN
•• Nhạc thiểu số
•• Tiểu sử ca sĩ
•• CA TRU
•• HÁT XẨM & TRỐNG QUÂN
•• Nhạc Hàn Quốc
•• Nhạc Nhựt Bổn
•• Nhạc Trung quốc
•• Nhạc Đông Nam Á
•• Nhạc Mông Cổ
•• Nhạc sắc tộc
•• Nhạc Tuva
•• song thanh tác giả khác
•• song thanh TQH
•• Giọng trị bịnh
•••• Chakra - Yoga
•• Ca sĩ Khoomei
•• Nghiên cứu gia Khoomei
•• Âm thanh học
•• Ngôn ngữ khác
•• Đàn Mội Hmông
•• Tiêm ban sach và nhac cu
•• Tiểu sử dân tộc nhạc học gia
•• Trang nhà dân tôc nhac hoc
•• Phân mêm : Phân tach bôi âm
•• Muông
•• Tran Quang Hai
•• Nhac si Viêt Nam
•• Hat dông song thanh
•• Bach Yên
•• VIDEO/CD trên WEB
•• Nhạc Việt cổ truyền
•• Đàn Môi
•• Tiểu sử
•• Phỏng vấn báo, radio
•• Bài viết
Visitors: 19302528

Set-Cookie: unique_hit=set; expires=Thu, 20-Apr-2017 20:00:30 GMT; Max-Age=2419200


markdown:
Trong website này, ngoài những trang có tính cách Bút Ký của tôi ra, tôi đã sơ lược một thế phả họ Phạm và tôi sưu tập những tài liệu về bố tôi là nhà báo, tiểu thuyết gia Phạm Duy Tốn, các anh tôi là nhà văn Pháp Ngữ Phạm Duy Khiêm, nhạc sĩ Phạm Duy Nhượng, vợ tôi là ca sĩ Phạm Thị Thái Hằng, các con ruột tôi là ca sĩ, nhạc sĩ Duy Quang, Duy Minh, Duy Hùng, Duy Cường, Thái Hiền, Thái Thảo và con rể là Tuấn Ngọc... tất cả đều là văn nhân, nghệ sĩ đã liên tục đóng góp vào gia tài văn hóa Việt Nam trong hai thế kỷ vừa qua.
Mục đích của tôi là muốn ưu tiên cho các hậu duệ của tôi biết về tổ tiên của chúng và sau nữa cho bạn bè biết thêm những chuyện tưởng như đã cũ của một nghệ nhân, nhưng vẫn còn có thể thấy được nhiều cái mới. Và trong những chuyện mới thì lại thấy không thiếu những chuyện rất cũ…
Mời các dân mạng (netter) còn yêu nhạc, vào thăm “Phạm Duy trong những năm 2000”, với tấm lòng khách quan và vị tha hơn là chủ quan và nghiêm khắc, để thưởng thức nghệ thuật mà không cần phải phán xét một con người mới mẻ (mà vẫn cũ kỹ) trong bẩy năm trời hồi hương và hồi tịch.
Rất cám ơn,
Phạm Duy
http://phamduy2000.com/index.php?Module=Content&Action=view&id=6&Itemid=20
•• Âm nhạc cổ truyền
•• Nhạc mới
•• Tiểu sử nhạc sĩ
•••• Nghệ sĩ từ trần
•• Nghiên cứu gia VN
•• Nhạc thiểu số
•• Tiểu sử ca sĩ
•• CA TRU
•• HÁT XẨM & TRỐNG QUÂN
•• Nhạc Hàn Quốc
•• Nhạc Nhựt Bổn
•• Nhạc Trung quốc
•• Nhạc Đông Nam Á
•• Nhạc Mông Cổ
•• Nhạc sắc tộc
•• Nhạc Tuva
•• song thanh tác giả khác
•• song thanh TQH
•• Giọng trị bịnh
•••• Chakra - Yoga
•• Ca sĩ Khoomei
•• Nghiên cứu gia Khoomei
•• Âm thanh học
•• Ngôn ngữ khác
•• Đàn Mội Hmông
•• Tiêm ban sach và nhac cu
•• Tiểu sử dân tộc nhạc học gia
•• Trang nhà dân tôc nhac hoc
•• Phân mêm : Phân tach bôi âm
•• Muông
•• Tran Quang Hai
•• Nhac si Viêt Nam
•• Hat dông song thanh
•• Bach Yên
•• VIDEO/CD trên WEB
•• Nhạc Việt cổ truyền
•• Đàn Môi
•• Tiểu sử
•• Phỏng vấn báo, radio
•• Bài viết
Visitors: 19302568

Set-Cookie: unique_hit=set; expires=Thu, 20-Apr-2017 20:05:44 GMT; Max-Age=2419200


markdown:
HÀNG CHÍNH HÃNG, BẢO HÀNH 12 THÁNG HÃNG
LUÔN CAM KẾT GIÁ RẺ NHẤT . CHỦ NHẬT 9H LÀM VIỆC
Máy tính xách tay dell vostro 3560: 14.290.000 vndSẢN PHẨM MỚI NHẤT HIỆN NAY , CHẠY CHÍP IVY MỚI
Hotline: 0982.225.884 Thông tin sản phẩm: CPU: i5-3210M(2.5GHz), ram 4gb buss 1600, hdd 500Gb 7200PRM, vga rời Ati 7670M 1Gb, màn hình 15.6”, laptop dell vostro 3560 dòng sản phẩm cao cấp được trang bị vỏ nhôm, màn hình led chống loá đặc biệt được nâng cấp cấu hình chạy chíp Ivy mới nhất cho tốc độ xử lý vượt trội
============================================= Gía Có Thể Thay Đổi Mong Các Qúy Khách Hàng Liên Lạc Với Chúng Tôi Hoặc Truy Cập Web Để Biết Thêm Thông Tin Chi tiết .
Showroom 1: Số 43 Ngõ 173 Thái Hà – P.Trung Liệt – Q. Đống Đa – Hà NộiĐiện Thoại : 04 35 38 10 91 Hotline : 09 82 225 884 Showroom 2: Số 173/14 Nguyễn Thị Minh Khai – Q1– TP.HCMĐiện Thoại : 08-39260239 Hotline: 0915 200 091 Chi tiết xin vui long truy cập: http://khohangre.vn/
Laptop Sony Laptop Dell Laptop Acer Laptop Asus Laptop Lenovo Laptop SamSung Laptop HP Compaq Laptop Toshiba Macbook iphone ipad Máy Ghi Âm Máy Nghe Nhạc Hdd laptop ( Ổ Cứng Laptop ) Màn Hình Laptop ( LCD Laptop ) Ram Laptop Bàn Phím Laptop Adapter Laptop ( Bộ Sạc Nguồn Laptop ) Pin Laptop Ổ Cứng Di Đông Thẻ Nhớ USB Flash Nokia Blackberry SanSung LG HTC Phụ Kiện iphoen Phụ Kiện ipad Phụ Kiện Laptop

Cache-Control: public, max-age=360


markdown:
[Xem bóng đá trực tuyến](/xem-bong-da-truc-tuyen)- Chia sẻ kinh nghiệm cá cược [tại đây](http://forum.tructiepbongda.com/)- [Link xem bóng đá trực tuyến](/link-xem-bong-da-truc-tuyen) **V-League 2013 – Vòng 13:** **17:00, 22/06/2013 – SVĐ Gò Đậu(GMT +7)**
Hãy cùng xem trực tiếp và bình luận trận đấu này cùng Cuồng Nhiệt TV.
Nghe bình luận (được cung cấp bởi Báo Bóng Đá)[audio:http://tructiepbongda.com/audio/binhluan.mp3]
**Dự đoán: 1 – 2** **Cuồng nhiệt TV** sẽ tường thuật trận đấu này 30 phút trước khi trận đấu bắt đầu. Hãy chú ý đón xem **Hãy cùng chia sẻ: ** **Trận đấu đã kết thúc.** *Bạn có thể xem nhiều kênh hơn hoặc lấy link sopcast hay link trực tiếp ở phần Link Sopcast và Link Trực tiếp bên dưới. * **Link Sopcast sẽ được cập nhật chậm nhất là 1h trước khi trận đấu bắt đầu.** *(Link HD của sẽ được cập nhật gần thời điểm trận đấu bắt đầu. Refresh để xem cập nhật mới nhất)* **Link xem trực tiếp trên web sẽ được cập nhật chậm nhất là 1h trước khi trận đấu bắt đầu**
Hãy tham gia bình luận để chia sẻ ý kiến của bạn.
Để sử dụng, hãy đăng nhập Facebook của bạn và chia sẻ những nhận định, những bình luận về trận đấu mà bạn đang theo dõi hoặc xem lại.
Không: spam, post link, chửi nhau...

Set-Cookie: __cfduid=dbaccbbc09ec426bfed0a5426089d691f1490300395; expires=Fri, 23-Mar-18 20:19:55 GMT; path=/; domain=.tructiepbongda.com; HttpOnly

Server: cloudflare-nginx

X-Powered-By: W3 Total Cache/0.9.5.2

Cache-Control: max-age=0, no-cache

Pragma: public