markdown:
|
|
Ông có thể phân tích cụ thể hơn vì sao hiệp hội đồng tình với kiến nghị trên?
Nghịch lý hiện nay là dù hàng tồn chất chồng nhưng giá bán mỗi căn hộ vẫn quá cao so với thu nhập của người dân. Nguyên nhân là do, những căn hộ tồn này thường có diện tích lớn, giá bán hai ba tỉ đồng, trong khi với thu nhập của đại đa số người dân không thể có khả năng tiếp cận được với những sản phẩm này. Minh chứng là, những giao dịch thành công trên thị trường vừa qua thường là những căn hộ dưới 1 tỉ đồng/căn.
Giảm diện tích căn hộ đâu có nghĩa là giá bán căn hộ trên 1m2 giảm?
Đúng vậy. Giải pháp giảm diện tích căn hộ mới chỉ có tác dụng với những căn hộ nhỏ thì bán giá thấp chứ chưa giúp hạ giá bán trên từng mét vuông. Cái khó nhất là các doanh nghiệp không còn cách nào để giảm giá bán, bởi như tôi đã phân tích nhiều lần, hiện nay những yếu tố tác động đến chi phí giá bán rất cao. Cụ thể doanh nghiệp phải mua đất hai lần; chi phí vốn, lãi vay quá cao, hầu hết các doanh nghiệp đang phải chịu lãi vay 18%/năm; chi phí xây dựng thì tăng chóng mặt; thủ tục hành chính kéo dài, dự án chậm triển khai...
Trước đây đã có doanh nghiệp kiến nghị nhưng bị cơ quan chức năng bác vì lo tình trạng “ổ chuột hoá”?
Tại hội thảo tìm giải pháp tháo gỡ khó khăn cho doanh nghiệp phát triển nhà mới đây, sở Quy hoạch kiến trúc đã đồng ý với quan điểm diện tích căn hộ nhỏ bao nhiêu hãy để thị trường quyết định. Để giải quyết bài toán nhà ổ chuột thì Nhà nước sẽ quản lý dân số, kiểm soát hạ tầng. Quan điểm của tôi là, trong dự án nhà bình dân, căn hộ diện tích nhỏ chiếm 25% và trung bình chiếm 75%. Trong hoàn cảnh người dân còn khó khăn như hiện nay, chúng ta phải chấp nhận một tỷ lệ nhà nhỏ, đông người ở nhất định.
Chia nhỏ căn hộ sẽ “đụng” luật thì giải quyết thế nào, bộ Xây dựng có đồng ý với đề xuất không thưa ông?
Khi chia nhỏ diện tích căn hộ sẽ đụng phải quy định về tiêu chuẩn thiết kế xây dựng. Tuy nhiên, tất cả những vấn đề này thuộc quyền hạn của bộ Xây dựng nên sẽ không quá khó khăn khi có điều chỉnh cho phù hợp. Hiện nay, bộ cũng đã có tờ trình lên Chính phủ xin được thực hiện chính sách xây dựng những căn hộ nhỏ. Tuy nhiên, tỷ lệ mà bộ Xây dựng đề xuất là 15% căn hộ nhỏ trong một chung cư, theo tôi tuy chưa phù hợp với thực tế nhưng cũng là một hướng mở.
Nếu đề xuất hạ thấp tầng, chia nhỏ căn hộ được UBND TP.HCM đồng ý thì có cứu được thị trường bất động sản?
Đề xuất này được thông qua thì sẽ giải quyết được nhu cầu thực của đại bộ phận dân số ở TP.HCM hiện nay. Đây cũng là động lực để thúc đẩy thị trường phát triển. Theo tôi được biết, hiện nay liên sở ngành đang hoàn thiện bản đề xuất cho phù hợp và chính xác các số liệu, dự kiến trong tháng 10 sẽ trình UBND thành phố xem xét.
-
[Cận cảnh Eco Lakeview](https://cafeland.vn/tin-tuc/can-canh-eco-lakeview-64400.html) [Thị Trường](https://cafeland.vn/tin-tuc/thi-truong/1/)- 16/01/2017 10:22 PM
Mới đây, TBKD đã phản ánh ban đầu về dự án Eco Lakeview đặt tại phố Đại Từ (quận Hoàng Mai) cũng như cách thức nhảy vào các khu đất vàng Thủ đô của Sông Đà 1.01. Hiện tại, bức tranh dự án đang được cụ thể hóa bằng nhiều chi tiết. Dẫu vậy, vẫn còn đó những nghi vấn mà đội quân tư vấn bán hàng chưa thể lý giải với người mua sản phẩm.
-
[Báo cáo thị trường bất động sản quý 4/2016](https://cafeland.vn/phan-tich/bao-cao-thi-truong-bat-dong-san-quy-42016-64392.html) [Báo cáo phân tích](https://cafeland.vn/phan-tich/bao-cao-phan-tich/10/)- 16/01/2017 1:51 PM
CafeLand - Thị trường căn hộ và biệt thự, nhà phố tại TP.HCM tiếp tục chuyển biến tích cực trong quý cuối cùng của năm 2016, trong khi đó thị trường Hà Nội số dự án mở bán trong quý 4/2016 cũng tăng vọt so với cùng kỳ năm 2015.
-
[Nguồn cung khan hiếm đẩy giá thuê căn hộ dịch vụ tăng](https://cafeland.vn/tin-tuc/nguon-cung-khan-hiem-day-gia-thue-can-ho-dich-vu-tang-64267.html) [Thị Trường](https://cafeland.vn/tin-tuc/thi-truong/1/)- 09/01/2017 2:17 PM
CafeLand - Nhu cầu về căn hộ dịch vụ tăng nhanh trong khi nguồn cung tăng trưởng chậm hơn đã đẩy giá thuê căn hộ dịch vụ tiếp tục tăng lên.
-
[Khám phá khu căn hộ của “những thương hiệu nổi tiếng”](https://cafeland.vn/tin-tuc/kham-pha-khu-can-ho-cua-nhung-thuong-hieu-noi-tieng-64113.html) [Thị Trường](https://cafeland.vn/tin-tuc/thi-truong/1/)- 30/12/2016 1:12 PM
Khi vẻ đẹp của những thương hiệu hàng đầu thế giới cùng cộng hưởng trong một không gian sống sẽ tạo nên bản hòa tấu “nghệ thuật và tinh tế”, khơi dậy nguồn cảm hứng sáng tạo bất tận và mang đến cho chủ nhân những trải nghiệm đẳng cấp khác biệt. Điều đặc biệt là chúng ta sẽ không phải tìm kiếm ở đâu xa xôi mà có thể dễ dàng có được những trải nghiệm “tuyệt vời” này khi trở thành chủ nhân của căn hộ Millennium, tọa lạc ngay trung tâm TP.HCM.
[căn hộ](https://cafeland.vn/tags/căn-hộ/), [diện tích](https://cafeland.vn/tags/diện-tích/), [Lê Hoàng Châu](https://cafeland.vn/tags/Lê-Hoàng-Châu/)


markdown:
Thông báo
Chưa có thông báo nào.
Chưa Chọn Sản Phẩm Nào
Đang Xử Lý...
* Chuyến bay mang hiệu số CRJ 900 của hãng hàng không Air Mekong khởi hành từ Buôn Mê Thuột đi Phú Quốc vào thứ 3 hàng tuần với mức giá cạnh tranh nhất trên thị trường. Vé máy bay đi Phú Quốc –*
Theo quy định của hãng hàng không Việt Nam, thời gian làm thủ tục cho chuyến bay là 2 giờ trước khi máy bay cất cánh, vì vậy bạn nên thu xếp công việc để có mặt tại sân bay đúng giờ, đảm bảo an toàn, tư trang đầy đủ cho chuyến đi của mình.
|
|CHUYẾN BAY |
|KHỞI HÀNH |
|ĐẾN
|
|THÀNH PHỐ |
|THỜI GIAN |
|THÀNH PHỐ |
|THỜI GIAN
|
|P8561/905 |
|BUÔN MÊ THUỘT |
|08:15 |
|PHÚ QUỐC |
|11:35
Trong trường hợp thời gian bay và lịch trình bay thay đổi theo sự điều chỉnh của các hãng hàng không, vui lòng xem thông tin chi tiết tại hệ thống lịch trình của các hãng hàng không, hoặc gọi điện trực tiếp cho chúng tôi để có được thông tin cần thiết và chính xác nhất.
**1. Các loại giá vé**
Air Mekong hiện đang cung cấp tới khách hàng hai hạng dịch vụ: Deluxe – Hạng cao cấp và Economy – Hạng phổ thông.
Tương ứng với từng hạng dịch vụ là các mức giá và điều kiện giá vé khác nhau.
|
|Deluxe – Hạng cao cấp |
|Economy – Hạng phổ thông
|Full Deluxe||Deluxe saver||Super flex||Eco Flex||Promotion|
|A||D||P||I||J||B||W||H||M||L||N||V||T||*E||E|**2. Đặt chỗ, xuất vé**
|
|Hạng đặt chỗ
|A/D/P/I/J/BL/B/WT||W/H/M||L/N||V/T/*E||E|
|Đặt chỗ||Chỗ phải được xác nhận cho cả hành trình trước khi xuất vé|
|Thời gian xuất vé||– Từ 6 ngày trở lên, thời hạn giữ chỗ là 96 giờ.
|
– Từ 4 ngày đến 5 ngày, thời hạn giữ chỗ là 24 giờ
– Từ 2 ngày đến 3 ngày, thời hạn giữ chỗ là 6 giờ.
– Trong vòng 1 ngày, thời hạn giữ chỗ là 60 phút và tối thiểu 2 giờ trước giờ khởi hành.
|– Từ 4 ngày trở lên, thời hạn giữ chỗ là 24 giờ- Từ 2 ngày đến 3 ngày, thời hạn giữ chỗ là 2 giờ và tối thiểu 24 giờ trước giờ khởi hành||– Thời hạn giữ chỗ là 24 giờ và tối thiểu 72 giờ trước giờ khởi hành||– Thời hạn giữ chỗ 24 giờ và tối thiểu 10 ngày trước giờ khởi hành.|
|Trong trường hợp các vé giá thấp được mở bán đến sát giờ bay, thời hạn giữ chỗ là 60 phút và tối thiểu 2 giờ trước giờ khởi hành.|
|Mùa cao điểm||– Từ 6 ngày trở lên, thời hạn giữ chỗ là 48h.
|
– Từ 2 đến 5 ngày, thời hạn giữ chỗ là 3 giờ.
– Trong vòng 1 ngày, thời hạn giữ chỗ là 60 phút và chậm nhất 2 giờ trước giờ khởi hành.
|Không áp dụng riêng|
|Chuyến bay đặc biệt||Tại bất cứ thời điểm nào, chuyến bay có yêu cầu đặc biệt Air Mekong có thể yêu cầu thời hạn giữ chỗ là 3 giờ cho các đặt chỗ trước 1 ngày so với ngày khởi hành.-Trong vòng 1 ngày, thời hạn giữ chỗ là 30 phút và tối thiểu 2 giờ trước giờ khởi hành.- Đối với hạng P, trong giai đoạn từ ngày 13/01/2012 đến 05/02/2012:+ Từ 4 ngày trở lên: thời hạn giữ chỗ 6 giờ+ Từ 2 đến 3 ngày: thời hạn giữ chỗ 3 giờ+ Trong vòng 1 ngày: thời hạn giữ chỗ 30 phút và tối thiểu 2 giờ trước giờ khởi hành||Không áp dụng riêng|**3. Xây dựng và kết hợp giá**
Được phép kết hợp giữa các giá khách lẻ.
Trong trường hợp kết hợp giá có điều kiện khách nhau, áp dụng điều kiện hạn chế nhất.
**4. Quảng cáo và bán**
Quảng cáo và bán: Áp dụng cho các phòng vé, đại lý của P8.
Hiệu lực: Vé xuất từ ngày 10/12/2011 đến 31/12/2012
Loại tiền: VND
**5. Thời gian không áp dụng (Blackout dates)**
Giá Deluxe và Super Flex A,D,P,I,J,BL,B,WT: không áp dụng điều kiện của mục này (nghĩa là áp dụng cả năm).
|
|Chặng bay (áp dụng theo đúng chiều) |
|Thời gian không áp dụng (Blackuot dates) |
|Áp dụng blackout date cho loại vé
|
|Từ |
|Đến
|TP. HCM||Hà Nội/ Vinh/ Quy Nhơn/ Pleiku/ Buôn Mê Thuột||13/01/2012 – 26/01/2012||W/H/M/L/N/V/T/E*/E|
|Buôn Mê Thuột/ Pleiku||Vinh|
|Đà Lạt/ Phú Quốc/ Côn Đảo||Hà Nội|
|Hà Nội/ Vinh/ Quy Nhơn/ Pleiku/ Buôn Mê Thuột||TP. HCM||25/01/2012 – 07/02/2012|
|Vinh||Buôn Mê Thuột/ Pleiku|
|Hà Nội||Đà Lạt/ Phú Quốc/ Côn Đảo|**6. Điều kiện về ngày đi (Travel restrictions): không áp dụng.** **7. Phạt / thay đổi (Penalties – changes/ Cancel)**
|
|Loại giá |
|Ghi chú |
|Chọn chỗ |
|Đổi tên |
|Nâng hạng |
|Hoàn vé |
|Thay đổi đặt chỗ |
|Thay đổi hành trình (*)
|A/P/BL||Giá cao điểm||Miễn phí||500,000 VND/lần||Được phép, phí 600,000 VND/lần|
|D/I/J/B/WT||Miễn phí||Được phép, phí 250,000 VND/lần||Miễn phí||250,000 VND/lần||Miễn phí||250,000 VND/lần|
|W/H/M/L/N/V/T/E*||Trong giờ khởi hành chặng bay ghi trên vé tối thiểu 02 giờ hoặc đã hủy chỗ trước giờ bay tối thiểu 2 giờ||50,000 VND||Được phép, phí 250,000 VND/lần (trừ giá E* không được nâng hạng, hoàn vé|
|Trong vòng 2 tiếng trước giờ khởi hành hoặc từ giờ khởi hành của chặng bay ghi trên vé mà không hủy chỗ (bao gồm cả Noshow)||Được phép, phí 500.000 vnd/ lần (trừ giá E* không được nâng hạng, hoàn vé)|
|E||Không được phép|
– Khi nâng hạng, ngoài phí nâng hạng, hành khách phải trả phần chênh lệch giữa mức giá cao hơn với mức giá khách hàng đã trả.
– (*) Thay đổi hành trình: chỉ được phép đổi sang hành trình mới bằng hoặc cao tiền hơn. Để đổi sang hành trình mới ít tiền hơn hành trình hiện tại, yêu cầu khách hoàn vé và xuất vé mới cho hành trình mới.
– Thay đổi đặt chỗ: nếu khách đã xuất vé vào giai đoạn giá vé cũ, khi có sự thay đổi về giá của Nhà nước, khách muốn thay đổi đặt chỗ sang giai đoạn áp dụng giá mới thì yêu cầu khách hủy đặt chỗ cũ và đặt lại, các mức phí và chênh lệch vé được áp dụng theo quy định.
– Không hoàn lại phí thay đổi / phí đổi tên/ phí dịch vụ xuất vé trong mọi trường hợp.
– Nếu vé đã sử dụng một phần, tiền hoàn vé được tính trên cơ sở giá trị còn lại của vé, không bao gồm các loại thuế, phí và lệ phí. Giá trị còn lại được tính bằng cách lấy giá khách đã mua trừ đi mức giá tương ứng của hạng đặt chỗ của chặng đã sử dụng.
– Trường hợp chặng bay có các chặng nối chuyến, nếu vé của khách có giá thẳng (điểm đầu, điểm cuối qua điểm nối chuyến) thì vé sử dụng 1 chặng trong các chặng nối chuyến không được hoàn các chặng còn lại cấu trúc lên giá thẳng. Ví dụ: vé Hà Nội – Phú Quốc có nối chuyến tại TP Hồ Chí Minh, khách đã đi Hà Nội – TP Hồ Chí Minh thì không hoàn TP Hồ Chí Minh – Phú Quốc.
– Trường hợp yêu cầu thay đổi của khách liên quan đến nhiều chặng bay, áp dụng mức phí cao nhất của các chặng bay thay đổi.
– Sau khi nâng giá và hạng đặt chỗ, áp dụng điều kiện của giá mới đối với các chặng bay được nâng giá và hạng đặt chỗ.
**Hành lý xách tay**
Mỗi hành khách được phép mang 01 kiện hành lý xách tay. Mỗi kiện hành lý xách tay có trọng lượng không vượt quá 7 kg và có tổng kích thước ba chiều không vượt quá 100cm (tương ứng 50 x 30 x 20 cm (23 x 14 x 9 inches). Air Mekong có thể từ chối vận chuyển hành lý xách tay và yêu cầu hành khách làm thủ tục ký gửi nếu hành khách mang hành lý xách tay vượt quá số lượng, trọng lượng, kích thước theo quy định nêu trên.
**Những vật dụng xách tay khác được mang lên máy bay**
Ngoài những hành lý được vận chuyển miễn cước theo quy định ở trên, mỗi hành khách có thể được mang lên máy bay các vật dụng dưới đây để sử dụng cho mục đích riêng hoặc sử dụng trên máy bay với điều kiện vật dụng này phải được hành khách tự thu xếp bảo quản:
**Hành lý kí gửi** **Hành lý quá cước** **Hành lý cho trẻ em**
Hành khách là trẻ em dưới 2 tuổi không mua ghế riêng được gửi 10 kg hành lý.
**Dụng cụ thể thao** **Các vật dụng bị hạn chế vận chuyển**
Những vật dụng sở hữu của hành khách có thể được coi như vũ khí hoặc những vật dụng nguy hiểm và không được chấp nhận là hành lý xách tay bao gồm:
Nếu bất kỳ vật dụng nào nêu trên được phát hiện trong hành lý xách tay của Quý khách, chúng sẽ bị tịch thu vì lý do an ninh, và sẽ không được trả lại. Air Mekong sẽ không chịu bất kỳ trách nhiệm về những vật dụng bị tịch thu trên. Các vật dụng nói trên chỉ được phép vận chuyển dưới dạng hành lý ký gửi.
**Tổn thất hành lý** [Du lịch Malaysia Free & Easy 3N2D - Crazy ](https://dulichviet.com.vn/loai-hinh-du-lich/du-lich-malaysia-free-easy-3n2d-crazy)
Giá từ: 1790000đ
[Du lịch Malaysia Free & Easy 2N1D - Kết hợp kiểm tra sức khỏe ](https://dulichviet.com.vn/loai-hinh-du-lich/du-lich-malaysia-free-easy-2n1d-ket-hop-kiem-tra-suc-khoe)
Giá từ: 1235000đ
[Du lịch Châu Âu lễ hội hoa Tulip Pháp Bỉ Hà Lan 7 ngày từ Hà Nội ](https://dulichviet.com.vn/du-lich-nuoc-ngoai/du-lich-chau-au-le-hoi-hoa-tulip-phap-bi-ha-lan-7-ngay-tu-ha-noi)
Giá từ: 45900000đ 47900000đ
[Du lịch Mỹ ngắm hoa anh đào 10 ngày giá tốt khởi hành từ Tp.HCM ](https://dulichviet.com.vn/du-lich-nuoc-ngoai/du-lich-my-ngam-hoa-anh-dao-10-ngay-gia-tot-khoi-hanh-tu-tp-hcm)
Giá từ: 77900000đ
Đăng ký
THÔNG BÁO

WARC-Type: response

Content-Type: application/http; msgtype=response

Cache-Control: private

Content-Type: text/html; charset=utf-8

Set-Cookie: languageId=1; expires=Sat, 21-Jan-2017 13:56:39 GMT; path=/

Access-Control-Allow-Headers: Origin, X-Requested-With, Content-Type, Accept

Connection: close


markdown:
**ĐẶT VẤN ĐỀ**
Toàn bộ ADN của tế bào, bao gồm tất cả gen và những vùng liên gen được gọi là bộ gen. Bộ gen người chứa khoảng 80.000 gen, nhưng những vùng mã hóa của gen này chiếm khoảng 3% của toàn bộ gen. Bộ gen của nấm chứa khoảng 6.000 gen. Bộ gen của một vài thực vật có nhiều trình tự lặp lại. Bộ gen của prokaryote rất nhỏ được chứa trong nhiễm sắc thể có dạng vòng, prokaryote cũng có thể có những gen nằm trong plasmid. Bộ gen của prokaryote không có intron và những trình tự lặp lại.
Hiểu được những thông tin chứa trong trình tự bộ gen là những thách thức lớn trong giai đoạn đầu của thế kỷ 21. Muốn nghiên cứu về bộ gen, kỹ thuật tinh chiết DNA là một trong những kĩ thuật sinh học phân tử đầu tiên vô cùng quan trọng góp phần cho sự thành công trong những bước tiếp theo.
Hiện nay có rất nhiều phương pháp đơn giản hơn, thời gian làm việc rút ngắn hơn tùy theo mục đích sử dụng DNA để làm gì, hoặc chiết xuất DNA từ loại mô nào, trên đối tượng gì.
Ở đây ta nghiên cứu việc ly trích DNA trên 3 nhóm đối tượng chính là thực vật, động vật và vi khuẩn với các đại điện của chúng là lá bưởi, tôm,
*E.Coli* *.*
## NỘI DUNG
## 1.KIẾN THỨC CƠ SỞ
## 1.1/Chiết xuất và tinh sạch DNA
**1.2.1/Nguyên tắc chung chiết xuất DNA**
|Chuẩn bị mẫu|
|Phá vở tế bào|
|Hòa tan DNA|
|Loại bỏ tạp chất ( protein, polysaccharide…)|
|Tủa DNA|
|Rửa DNA|
|Làm khô|
|Kiểm tra chất lượng DNA|**1. Chuẩn bị mẫu:** **– **Đối với thực vật thường thu lấy mẫu lá, động vật thu lấy mô trên cơ thể, vi khuẩn: nuôi vi khuẩn trong môi trường nuôi cấy từ 15-16 giờ để tăng sinh., thường nuôi trong 16 giờ cho kết quả tốt nhất. **2. Phá vỡ tế bào:** **– **Dùng phương pháp ly tâm để phá vỡ màng tế bào và phóng thích ADN trong nhân. Riêng mẫu lá thực vật, do còn có lớp vỏ cellulose bên ngoài, nên phải được nghiền trong nitơ lỏng, giúp làm cho vách cellulose trở nên giòn hơn, dễ vỡ hơn, đồng thời bảo vệ ADN phóng thích từ nhân không bị tiêu hủy bởi các protease trong tế bào. Ngoài ra, màng tế bào và màng nhân còn được phá vở bằng hỗn hợp chất tẩy (SDS – sodium dodecyl sulfate, sarcosyl) và proteinase. Các DNA sẽ được giải phóng ra môi trường. Các protein liên kết với DNA cũng tự bị phân hủy. **3. Hòa tan ADN: **
– Hòa tan DNA trong dung dịch đệm buffer TE (pH 8) giúp ADN không bị biến tính.
**4. Loại bỏ các thành phần không phải là ADN:**
– Proteinase K: loại bỏ thành phần protein.
– CTAB: loại bỏ polysaccharide và lipid.
– Chloroform: phân tách và kéo các thành phần không phải là DNA xuống mặt dưới dung dịch.
**5. Tủa ADN:**
– Sử dụng ethanol 96% hoặc isoproanol ủ ở – 20
0C để tủa DNA trong dung dịch. Mục đích là thu nhận nucleic acid dưới dạng cô đặc và bảo vệ chúng khỏi sự phân hủy của các enzyme. **6. Rửa DNA:**
– DNA được rửa lại bằng ethanol 70% để loại bỏ các muối và các dấu vết isopropanol.
**7. Làm khô:**
– DNA sau khi rửa được làm khô bằng cách phơi ở nhiệt độ phòng qua đêm hay sấy khô. Mục đích tránh mẫu DNA còn chứa ethanol sẽ ảnh hưởng đến DNA tổng số.
**8. ** **Kiểm tra chất lượng DNA:**
Đo quang phổ
Chạy điện di
### 1.2.2/Kiểm tra chất lượng DNA
Kiểm tra chất lượng DNA là bước cần thiết trong quy trình chiết xuất DNA.
Thí dụ:Số lượng và chất lượng DNA có thể ảnh hưởng đến kết quả của PCR vì một lượng DNA dư thừa có thể ức chế sự khuếch đại những đoạn DNA mong muốn.
Biết được nồng độ DNA sẽ dễ dàng tính toán được số lượng cần dùng của các loại enzyme cắt giới hạn để cắt DNA. Thông thường 1 unit enzyme cắt được 1 µg của DNA tinh khiết.
**1.2.2.** **1** **/Đo quang phổ** **Nguyên tắc**:
Nguyên tắc của phương pháp này là dựa vào sự hấp thụ mạnh ánh sáng của một chất ở một bước sóng xác định. Nucleic acid hấp thụ mạnh ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 260 nm do sự có mặt của base purine và pyrimidine. Giá trị mật độ quang ở bước sóng 260nm (OD
260nm) của các mẫu cho phép xác định nồng độ nucleic acid trong mẫu.
Đơn vị OD
260nm tương ứng nồng độ 50ng/ml cho một dung dịch ADN sợi đôi.
Do đó nồng độ ADN trong mẫu được tính theo công thức sau:
**C ADN (ng/** **ml) = OD** 260nm* 50 * Độ pha loãng
Để kiểm tra độ sạch của dung dịch, người ta đo thêm giá trị OD ở 280 nm (OD
280nm). Ở bước sóng này, các protein có mức hấp thụ cao nhất. Ngoài ra, các protein cũng hấp thụ ánh sáng ở bước sóng 260 nm như các nucleic acid và do đó làm sai lệch giá trị thật của nồng độ nucleic acid. Một dung dịch nucleic acid được xem là sạch (không tạp nhiễm protein) khi tỷ số: **OD 260nm/OD280nm nằm trong khoảng 1.8 – 2** ** Các bước đo OD:**
Chuẩn bị mẫu DNA đo OD: Hoà 10ml dịch ADN cần đo vào 90ml nước khử ion vô trùng
Đo đối chứng: Lấy 100ml nước khử ion vô trùng vào cuvet, đo ở bước sóng 260nm, 280nm.
Đo mẫu: Lấy 100ml mẫu DNA đã chuẩn bị ở trên vào cuvet, đo ở bước sóng 260nm, 280nm.
Đọc độ hấp thụ trên máy đo quang phổ ở bước sóng 260 nm, 280 nm. Xử lý số liệu theo công thức:
|Nồng độ DNA sẽ là: OD 260 * 50 ng/µl * độ pha loãng|**1.2.2.3/Điện di Gel Agarose** **Nguyên tắc**
Điện di gel agarose là phương pháp thông dụng, thích hợp dùng để tách rời các đoạn acide nucleic có kích thước từ 200bp đến 50kp.
Agarose là chất chiết xuất từ 1 loài rong biển, agarose có cấu trúc polymer thẳng, hiện nay người ta đã chế tạo được nhiều loại agarose đặc biệt để phân tích DNA, RNA như agarose tan ở nhiệt độ thấp như: low meeting agarose, metaphore agarose
Gel agarose được đổ bằng cách đun agarose trong dung dịch đệm thích hợp cho đến khi có màu trắng trong và cho đặc lại bằng cách đổ vào khuôn và để nguội. Khi đặc lại agarose tạo nên mạng lưới mà kích thước của nó phụ thuộc nồng độ agarose và dung dịch đệm.
Khi nằm trong gel có pH >7 DNA sẽ tích điện âm, dưới tác dụng của điện trường thì DNA sẽ chạy về phía anode. Vận tốc di chuyển của DNA phụ thuộc vào các thông số sau:
- Kích thước DNA: kích thước càng lớn thì DNA di chuyển càng chậm và ngược lại.
- Nồng độ agarose: tùy kích thước DNA muốn phân tích mà ta chọn nồng độ agarose thích hợp. Kích thước DNA càng nhỏ thì nồng độ agarose phải càng lớn.
- Kiến trúc DNA: với cùng kích thước, tùy kiến trúc: siêu xoắn, vòng hay thẳng mà tốc độ di chuyển của DNA khác nhau. Tốc dộ di chuyển cũng phụ thuộc vào dung dich đệm và lượng ethidium bromide. Ở đây chúng ta không nghiên cứu kỹ về vấn đề này.
- Cường độ dòng điện: Độ phân ly của gel agarose giảm khi cường độ dòng điện tăng cao. Cường độ điện trường không được lớn hơn 5V/cm (tính từ khoảng cách 2 điện cực)
- Thành phần base và nhiệt độ: trong trường hợp nồng độ agarose thấp hơn 0.5% thì phải điện di ở 4
0C nếu không thành phần các base sẽ ảnh hưởng đến sự chuyển động của các DNA
- Ethidium bromide: ethidium bromide ảnh hưởng đến 15% tốc độ di chuyển của các của các đoạn DNA thẳng
- Dung dịch đệm điện di: dung dịch đệm ảnh hưởng đến DNA trong gel. Trường hợp nồng độ dung dịch đệm quá cao gel sẽ bị chảy và DNA bị biến tính.
**Các bước thực hiện** **Bước 1**: Đổ gel:
Dùng băng keo dán chặt hai đầu của khay điện di, đặt lược sẳn ở 1 đầu khay. Đặt khay ở nơi bằng phẳng, dùng miếng bọt khí để kiểm tra.
Cân 0.4g agarose cho vào bình tam giác 250ml, thêm 50 ml nước cất. Lắc nhẹ cho agarose hòa lẫn trong nước.
Đặt bình tam giác vào lò vi song đun khoảng 3-5 phút. Dung dich trong bình tam giác trở thành màu trắng trong.
Lấy bình tam giác ra, đợi 15 phút rờ thấy vừa nóng (60
oC) thì đổ nhẹ dung dịch vào khay điện di. Khoảng 45 phút thì agarose đặc lại, gel đổi thành màu trắng đục. **Bước 2**: Chạy gel.
Đặt khay vào bể điện di, lấy nhẹ lược ra, không làm động đến gel.
Thêm dung dich đệm điện di phủ mặt gel khoảng 1mm.
Dùng pipette P100 hút 10ul loading buffer chia thành 4 giọt trên paraffin
Dùng pipette P100 hút 10ul mẫu, trộn với 1 giọt loading buffer sau đó load vào giếng. Giếng đầu tiên có thể chạy DNA chuẩn.
Khởi động nguồn điện, chọn voltage thích hợp. Nhấn nút Run.
DNA sẽ chạy từ cực âm sang cực dương. Do DNA mang điện tích âm (các gốc phosphate mang điện tích âm đưa ra ngoài)
Sau khi DNA chạy được hơn 2/3 mẫu gel thì nhấn nút stop. Lấy khay điện di ra.
Nhuộm gel với Ethidium Bromide.
Xem gel dưới đèn UV.
In kết quả.
## 1.2.3/Chuẩn bị các dung dịch , môi trường và dụng cụ
### 1.2.3.1/Các bước chuẩn bị dung dịch,môi trường
- Chuẩn bị dung dịch stock.
- Pha chế môi trường.
- Khử trùng
- Khử trùng nhiệt khô.
- Khử trùng nhiệt ướt.
- Khử trùng môi trường.
- Khử trùng vật dụng.
Chú ý khi khử trùng
- Ø Không bao giờ khử trùng micropipette.
- Không bao giờ khử trùng giấy thấm bằng nhiệt khô.
- Những chất kháng sinh không được khử trùng bằng autoclave.
- Những vật dụng bằng thủy tinh, nhựa phải được rửa sạch.
### Vật thủy tinh, nhựa
Vật dụng thủy tinh, nhựa rất thường được sử dụng trong phòng thì nghiệm sinh học phân tử. Các vật dụng này trước khi sử dụng phải được rửa cẩn thận. Những vật dụng không được rửa sạch, còn dính vi khuẩn có thể ức chế các phản ứng hoặc phân giải của DNA
Vật dụng thủy tinh phải được rửa sạch bằng xà phòng, tráng lại bằng nước cất và được khử trùng bằng nồi khử trùng nhiệt ướt hoặc nhiệt khô.
Đối với những thí nghiệm với RNA, vật dụng thủy tinh và các dung dịch phải được xử lý với diethylpyrocarbonate để ức chế RNase enzymes.
Đa số các vật dụng bằng nhựa như ống hút (pipette), Ống nuôi cấy (falcon), đĩa petri được cung cấp dưới dạng đã khử trùng rồi.
Các vật dụng khác như đầu cone, ống tube dùng cho máy ly tâm phải được khử trùng trước khi sử dụng.
## 1.2.4/Các hóa chất trong quá trình chiết xuất DNA
### 1.2.4.1/Ethidium Bromide (EtBr)
Ethidium Bromide là chất có khả năng gây đột biến, nếu chạm phải hoặc tẩy rửa không đúng cách sẽ có nguy cơ bị nhiễm Ethidium Bromide.
**Ethidium Bromide & the process of interlacation, illustrating the lengthening and untwisting of the DNA helix** ( [http://www.madsci.org](http://www.madsci.org))
**Ethidium Bromide** ( [http://en.wikipedia.org/wiki/Ethidium_bromide](http://en.wikipedia.org/wiki/Ethidium_bromide))
Đây là chất dùng trong phòng thí nghiệm Sinh học Phân tử, chủ yếu dùng để nhuộm, (đánh dấu) DNA/RNA khi chạy điện di. Hiện nay có các cách dùng như sau:
Bổ sung trực tiếp Ethidium Bromide vào dung dịch đệm chạy điện di (buffer chạy gel). Với cách này, lượng Ethidium Bromide cần phải thu hồi khi loại thải buffer chạy gel là rất lớn. Đây là cách ít được dùng nhất.
Ethidium Bromide được bổ sung vào dung dịch đệm load mẫu, vì chỉ có một lượng rất nhỏ dung dịch load mẫu được sử dụng mỗi khi chạy điện di nên lượng Ethidium Bromide sử dụng cũng sẽ rất ít. Nhưng sự bất lợi ở đây là lượng Ethidium Bromide cần lấy mỗi lần load mẫu là quá it, khó có thể lấy chính xác bằng micropipette.
Ethidium Bromide được bổ sung vào gel, lúc gel còn chưa đặc sau đó lắc trộn đều, với cách này DNA (load mẫu) vẫn được nhuộm tốt. Trong quá trình chạy điện di, khoảng 10% Ethidium Bromide trong gel sẽ khuếch tán ra ngoài buffer chạy gel. Trong trường hợp này, phần lớn Ethidium Bromide sẽ được loại bỏ dưới dạng rắn (dính trong gel). Nồng độ thích hợp thường là 5µg/ml gel solution.
Một vài quy trình chạy điện di thì thực hiện nhuộm DNA sau khi chạy điện di. Bằng cách này buffer chạy gel không bị nhiễm Ethidium Bromide và có thể loại bỏ trực tiếp không qua xử lý. Gel sau khi chạy điện di xong sẽ được ủ trong dung dich pha sẳn có chứa Ethidium Bromide và có thể tái sử dụng dung dịch này, tuy nhiên sau mỗi lần sử dụng phải bổ sung thêm cho đúng thể tích. Phương pháp này có thể không được ưa thích lắm đối với một số nhà nghiên cứu.
**Các yêu cầu đối với chất thải Ethidium Bromide:** **Gel chạy điện di chứa Ethidium Bromide:**
Tất cả những gel, chất rắn chứa Ethidium Bromide cần phải được thu nhặt và loại bỏ khỏi môi trường làm việc như là các chất thải độc hại.
Phải đóng gói riêng biệt
**Dung dịch chứa Ethidium Bromide:**
Những dung dịch đệm có nồng độ cao hơn 10µg/ml cần phải được lọc, khử, thiêu hủy Ethidium Bromide hoặc lưu trữ lại như là các chất thải hóa học nguy hiểm.
Khi dung dịch có nồng độ thấp hơn 10µg/ml có thể được loại thải qua cống rãnh.
**Dụng cụ thao tác đối với các đối tượng có chứa Ethidium Bromide:**
Những dụng cụ thí nghiệm liên quan đến Ethidium Bromide cần để ở những nơi riêng biệt và làm dấu rõ ràng.
**Các phương pháp xử lý EtBr hiện nay trên thế giới đang sử dụng** **:**
- ·
**Dùng kit lọc có bán sẵn để loại bỏ EtBr trong nước thải**.
Tác nhân lọc chủ yếu là than hoạt tính, nước thải sau khi lọc có thể đổ ra cống rãnh.
Những bộ kit lọc bán sẵn được cung cấp từ BIO 101, trong đó chủ yếu là than hoạt tính đựng dưới dạng túi trà, mỗi túi có thể hấp thụ 10mg EtBr, một bộ kit 50 túi nên có thể hấp thụ 500mg EtBr khỏi dung dịch. Túi than sau khi xử lý cần loại bỏ như là chất thải hóa học độc hại.
- ·
**Loại bỏ dung dịch có nồng độ thấp (chưa đến 100** **m** **g/ml)**. **Cách 1 (Lunn và Sanrone 1987):**
+ Thêm 2,9g Amberlite – XAD – 16 cho mỗi 100ml dung dịch xử lý.
+ Trữ dung dịch trong 12h ở nhiệt độ phòng thỉnh thoảng lắc đều.
+ Lọc dung dịch qua giấy lọc Whatman No.1. Đổ bỏ dịch lọc xuống cống.
+ Bỏ giấy lọc và Amberlite vào túi nhựa, buộc kín, loại bỏ.
**Cách 2 (Bensaude 1988).**
+ Thêm 300mg bột than hoạt tính cho mỗi 100ml dung dịch cần xử lý.
+ Để hỗn hợp ở nhiệt độ phòng, thỉnh thoảng lắc đều.
+ Lọc hỗp hợp qua giấy lọc Whatman No.1. Đổ bỏ dịch lọc xuống cống.
+ Bỏ giấy lọc và Amberlite vào túi nhựa, buộc kín, loại bỏ.
- ·
**Xử lý đối với những dung dịch có nồng độ đậm đặc (>= 0,5** **m** **g/ml) (Lunn và** **Sansone 1987).**
–
**Bước 1:** Thêm đủ nước để hạ nồng độ EtBr xuống đến 0,5mg/ml, hoặc thấp hơn (thực hiện trong tủ hút).
–
**Bước 2:** Bổ sung 20ml hypophosphorous acid 5% và 12ml 0,5mol Sodium nitrite, trộn cẩn thận. ( Hypophosphorous thường được lấy ra ở nồng độ 50% sau đó pha loãng 10 lần để được 5% ngay trước khi sử dụng).
–
**Bước 3:** Chuẩn bị sodium nitrite: Cân 3,45g sodium nitrite, sau đó hòa tan vào nước, đưa về thể tích 100ml (thực hiện trong tủ hút).
–
**Bước 4:** Sau khi ủ 24h ở nhiệt độ phòng, đưa pH về trong khoảng 5-9 bằng sodium bicarbonat. Sau đó đổ bỏ dịch xuống cống. ***** Không sử dụng hypochloride để xử lí EtBr. Vì xử lí với thuốc tẩy có thể tạo sản phẩm gây đột biến mạnh hơn và lượng EtBr còn thừa lại sau khi xử lý là 20%. **Khử nhiễm bề mặt do EtBr.**
– Lau chất lỏng rơi ra bằng giấy thấm. Bỏ rác vào túi nilon, làm dấu buộc kín và để nơi an toàn. Những vật dụng có nhiễm EtBr cần để riêng biệt và đánh dấu để phân biệt.
### 1.2.4.2/Cetyl Trimethylammonium Bromide (CTAB)
CTAB có khả năng liên kết thuận nghịch với ADN và polysaccharide, cụ thể ở nồng độ muối cao (trên 1.4 M NaCl có trong đệm chiết) thì CTAB kết hợp với ADN và polysaccharide nhưng phức hợp CTAB-ADN tồn tại ở trạng thái hòa tan, trong khi đó phức CTAB-polysaccharide lại kết tủa, phức này sẽ được loại đi ở bước ly tâm đầu tiên. Ở nồng độ muối dưới 0.7M thì phức CTAB-ADN lại kết tủa, cho phép thu hồi lại ADN ở bước tủa cồn. Ở nồng độ muối thấp phức CTAB-ADN sẽ tách nhau ra. Phức này sẽ tách ra gần như hoàn toàn trong bước rửa bằng cồn 70
0 **CTAB buffer:**
0.2M Tris-Cl pH7.5
2M NaCl
0.05M EDTA
2% (w/v) CTAB
### 1.2.4.3/TE buffer
Là một loại buffer thường sử dụng trong Sinh Học Phân Tử, TE buffer giúp bất hoạt enzyme nuclease góp phần bảo vệ DNA trong mẫu. Thành phần bao gồm:
10 mM Tris-Cl, pH 8
1 mM EDTA
Những nghiên cứu về enzyme nuclease từ những năm 1980 đã chỉ ra rằng enzyme này ít hoạt động nhất ở vùng pH 7,5 đối với RNA và pH 8 đối với DNA.
EDTA làm bất hoạt enzyme nuclease bằng cách lấy đi những ion kim loại cần thiết cho enzyme này.
### 1.2.4.4/Sodium Dodecyl Sulfate (SDS)
Có tác dụng giúp phá vỡ màng tế bào, giúp cho quá trình ly trích DNA được thuận lợi hơn.
### 1.2.4.5/Extraction Buffer (EB)
Thành phần bao gồm:
0.1M Tris-Cl
0.5M NaCl
0.05M EDTA
0.01M betamercaptho ethanol
Có tác dụng làm biến tính protein (cắt các cầu nối disulfite), đồng thời bảo vệ DNA trong mẫu không bị biến tính.
### 1.2.4.6/Proteinase K (endopeptidase K)
Trong quá trình ly trích DNA sẽ có sự hiện diện của rất nhiều protein, làm cho mẫu DNA không sạch, các protein đó cần phài được loại bỏ proteinase K được sử dụng để loại bỏ các protein này, góp phần làm sạch mẫu DNA. Ngoài ra proteinase K còn góp phần phân giải enzyme nuclease giúp cho DNA ít bị biến tính hơn. Proteinase K thường được duy trì trong sự hiện diện của SDS, EDTA và urea.
Tế bào vi khuẩn được hòa tan trong SDS và Proteinase K.
**1.2.4.7/Isopropanol**
Dùng để tủa DNA với tỷ lệ 1:1 với dung dịch cần tủa
**1.2.4.8/Hỗn hợp Chloroform:Isoamylalcohol (24:1)**
Dùng để loại bỏ protein, những polycaccharide và phức hợp. Sau khi li tâm với vận tốc 13000rpm trong 5 phút dung dịch chia ra thành 3 lớp: lớp thứ nhất là phần dịch trong ở trên cùng có chứa DNA, lớp thứ hai là một lớp protein, lớp kế tiếp có chứa chloroform và tất cả những thành phần cần loại bỏ khác (polysaccharides, protein,…).
**1.2.4.9/Ethanol 96% và 70%**
Ethanol 96% dùng để tủa DNA và bảo vệ chúng khỏi sự phân hủy của các enzyme. Chúng kết hợp với muối để tránh gây hại cho DNA.
Ethanol 70% dùng để rửa tủa, loại muối ra khỏi DNA
**2.PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP** **2.1/Trích DNA từ vi khuẩn gam âm** **2.1.1/Phương tiện**
- Micropipette
- Ống tube 1.5 và 2.2 ml
- Máy lắc ủ
- TE pH8
- Proteinase K
- Isopropanol
- Cloroform/Isoamylalchohol (24:1)
- SDS
- 10% CTAB/0.7M NaCl
**2.1.2/Phương pháp** **Chuẩn bị mẫu:**
Nuôi vi khuẩn
*E.Coli* trong 6ml môi trường LB (Luria Broth) nuôi qua đêm, ủ ở 37 0C **Trích DNA:** **Bước 1: Ly tâm thu sinh khối vi khuẩn:** Cho vào 3 túp (2,2ml) mỗi túp 2ml dung dịch vi khuẩn *E.coli* đã được nuôi cấy qua đêm. Sau đó, li tâm ở 13000rpm trong 10 phút. Li tâm xong loại bỏ phần trong lấy phần tủa phía dưới. **Bước 2: hòa tan DNA:** Bơm 250ml TE pH 8 vào túp thứ nhất để hòa tan kết tủa ở túp thứ nhất, sau đó chuyển phần dung dịch ở túp thứ nhất sang túp thứ hai, túp thứ hai sang túp thứ ba, hòa tan DNA ở túp thứ ba. **Bước 3: chiết xuất DNA:** Sau đó, cho thêm vào túp 50ml dung dịch 10% SDS cộng 5ml proteinase K lắc đều, ủ 20 phút ở nhiệt độ 65 oC, mỗi 5 phút đảo ngược túp một lần để trộn đều dung dịch, có tác dụng phá vỡ màng tế bào và màng nhân, chiết xuất và tinh sạch DNA. **Bước 4: tạo phức với CTAB**: Sau khi hòa tan hết tủa ta cho thêm vào túp 400ml CTAB và ủ ở 65 oC trong 20 phút, khoảng 5 phút đảo ngược ống túp để trộn đều. **Bước 5: loại bỏ protein và các phức hợp:** Tiếp tục thêm 600ml chloroform:isoamylalcohol (24/1), lắc đều và li tâm ở 13000 vòng trong 10 phút để loại bỏ protein, những polysaccharide và các phức hợp trên. **Bước 6: tủa DNA**: Li tâm xong, chuyển 500ml phần trong ở phía trên vào túp mới và thêm 1ml isopropanol lắc đều, giữ ở – 20 oC trong 30 phút nhằm mục đích tủa DNA, không cho DNA biến tính, thu được DNA nhiều hơn và bảo vệ chúng khỏi sự phân hủy của các enzyme. Tiến hành li tâm ở 13000 vòng trong 10 phút để tập trung lượng DNA kết tủa xuống đáy túp. **Bước 7: loại bỏ phần dịch trong**: Sau khi li tâm, ta loại bỏ phần dịch trong ở phía trên và thu phần kết tủa ở phía dưới. **Bước 8: rửa tủa**: Rửa tủa với 1ml ethanol 70% ly tâm ở 13000rpm trong 5 phút, làm 2 lần để loại bỏ muối bám trong DNA và loại bỏ lượng isopropanol còn lại trong DNA (mỗi lần đổ bỏ ethanol). **Bước 9: phơi khô DNA:** Rửa DNA xong, ta tiến hành phơi DNA qua đêm ở nhiệt độ phòng cho sạch hết ethanol tránh ảnh hưởng đến DNA tổng số.
Sau đó, hòa tan DNA bằng 30ml nước cất, lắc đều cho DNA tan ra và tiến hành đo OD
**2.2/Trích DNA từ tôm** **2.2.1/Phương tiện**
- Cơ tôm hay biểu bì dưới da đầu tôm
- Dung dịch trích Lysis buffer
- TE buffer 0.1X
- Máy ly tâm
- Micropipette
- Ống tube 1.5 và 2.2 ml
- Kéo, kẹp, đủa thủy tinh
**2.2.2/Phương pháp** **Chuẩn bị mẫu:**
Tôm đem bốc bỏ vỏ ở phần lưng tôm, dùng kéo cắt khoảng 100mg thịt tôm cho vào túp 2,2ml. Sau đó, dùng đũa thủy tinh nghiền mẫu thành bột mịn.
**Trích DNA:** **Bước 1: phá vở màng tế bào:** Mẫu sau khi nghiền mịn cho thêm vào túp 400ml dung dịch trích buffer D giúp phá vở màng tế bào, lắc đều và ủ qua đêm ở nhiệt độ 50 oC **Bước 2: tách protein và các thành phần hữu cơ ra khỏi DNA:** Sau khi ủ xong, ta cho thêm vào túp 400ml dung dịch chloroform:isoamylalcohol (24:1) để tách protein và các thành phần hữu cơ khác (polysaccharides, polyphenols, lipids,…), lắc nhẹ rồi đem ly tâm với vận tốc 13000 vòng/phút trong thời gian 10 phút. **Bước 3: tủa DNA**: Ta tiến hành hút 300ml phần dịch trong ở phía trên cho qua một túp 2,2ml mới, sau đó thêm vào túp này 150ml 7,5M ammonium acetate và 600ml ethanol 96% có tác dụng giúp DNA kết tủa. Lắc nhẹ và tiến hành li tâm với vận tốc 13000 vòng/phút trong 5 phút. **Bước 4: rửa DNA:** Sau khi li tâm xong, ta loại bỏ phần dịch trong ở trên lấy phần cặn ở phía dưới. Rửa phần cặn với 600ml ethanol 70% 2 lần để loại bỏ muối ra khỏi DNA. Ly tâm 13000 vòng/phút trong 5 phút sau mỗi lần rửa. Đổ bỏ ethanol sau mỗi lần rửa. **Bước 5: sấy khô DNA**: Sấy khô bằng máy ly tâm chân không ở nhiệt độ 45 oC trong 15 phút, tránh trường hợp mẫu DNA còn chứa ethanol sẽ ảnh hưởng đến DNA tổng số. **Bước 6: hòa tan DNA**: Sau khi sấy mẫu xong, hút 30ml nước cất cho vào túp chứa DNA để hòa tan DNA.
Sau đó hút 10ml dung dịch này cho vào túp 1,5ml mới đã hút sẳn 90ml nước cất, lắc đều. Sau đó đem mẫu đo OD.
**2.3/Trích DNA từ thực vật** **2.3.1/Phương tiện**
- Lá bưởi Diễn
- Bộ điện di minisub gel.
- Kéo cắt mẫu, chày và cối nghiền mẫu
- Micropipette
- Ống tube 1.5 và 2.2 ml
- Extraction buffer (EB)
- CTAB buffer
- Agarose
- Isopropanol
- Cloroform/Isoamylalchohol (24:1)
- SDS
- Nitơ lỏng
**2.3.2/Phương pháp** **Chuẩn bị mẫu:**
Mẫu lá bưởi được khử trùng bằng cồn 70
o (dùng bông gòn thấm cồn và lau đều trên cả hai bề mặt lá), dùng kéo cắt lấy phần thịt lá ở hai bên và bỏ phần gân lá ở giữa. Phần thịt lá được gói trong giấy nhôm và ngâm nitơ lỏng trong thời gian 15 phút. Sau đó, nghiền kỉ mẫu bằng cối và chày đã được khử trùng bằng cách ngâm nitơ lỏng. Trong quá trình nghiền ta thêm nitơ lỏng vào nhằm mục đích ức chế các enzym gây biến tính DNA của lá, mẫu được nghiền cho đến khi thành bột mịn. **Trích DNA** **:** **Bước 1: phá vở màng tế bào và màng nhân:** Chuyển phần bột mịn vào túp 2,2ml. Tiếp tục cho 50ml dung dịch SDS 10% vào túp có tác dụng giúp DNA dễ hòa tan hơn, sau đó lắc nhẹ túp (tránh DNA bị gãy). **Bước 2: ủ mẫu**: Mẫu sau khi thêm các dung dịch đem ủ ở nhiệt độ 65 oC trong 30 phút, trong quá trình ủ khoảng 5 phút đảo nhẹ túp để trộn mẫu. **Bước 3: li tâm:** Sau thời gian ủ, mẫu được đem li tâm với vận tốc 13000rpm trong 10 phút, để tách các thành phần khác nhau của tế bào. **Bước 4: tủa DNA**: Li tâm xong ta hút 800ml phần dung dịch trong ở phía trên cho vào túp mới, sau đó cho 800ml dung dịch isopropanol vào túp và tiến hành ủ trong thời gian khoảng 30 phút ở -20 oC để kết tủa DNA, không cho DNA biến tính, giúp tăng khả năng thu DNA. Ở điều kiện này nhiều protein và các chất khác cũng bị kết tủa cùng ADN nên trong mẫu sẽ bị lẫn tạp. Sau đó, tiến hành li tâm với vận tốc 13000rpm trong 10 phút. **Bước 5: hòa tan tủa**: Li tâm xong, phần dịch trong được bỏ vào một cái hộp mũ có chứa nước và thu phần kết tủa. Hòa tan tủa DNA trong 400ml TE, TE giữ DNA ổn định, không bị biến tính. **Bước 6: tạo phức với CTAB**: Sau khi tủa hòa tan hết ta cho thêm vào túp 400ml CTAB và ủ ở 65 oC trong 15 phút, khoảng 5 phút đảo ngược ống túp để trộn đều **Bước 7: loại bỏ protein và các phức hợp:** Sau đó cho thêm vào túp 800ml Chloroform/Isoamylalcohol lắc đều và li tâm với vận tốc 13000rpm trong 5 phút để loại bỏ protein, những polycaccharide và phức hợp trên **Bước 8: tủa DNA:** Sau khi ly tâm ta tiến hành hút 650ml phần dịch trong ở phía trên cho qua một túp 2,2ml mới, thêm vào túp này 1.4ml Ethanol 96% ủ ở nhiệt độ phòng trong vòng 15 phút để tủa DNA và bảo vệ chúng khỏi sự phân hủy của các enzyme. Sau đó, li tâm ở 13000rpm trong 10 phút. **Bước 9: rửa DNA**: Li tâm xong đổ bỏ phần dịch trong ở phía trên vào hộp mũ có chứa nước, thu lấy phần kết tủa ở phía dưới. Sau đó, tiến hành rửa kết tủa với ethanol 70% để loại bỏ muối ra khỏi DNA. Phần kết tủa được rửa 2 lần với ethanol 70% (không gây hại cho DNA do ở nồng độ thấp). Mỗi lần rửa cho 400ml ethanol 70% vào túp, lắc nhẹ và đem li tâm trong 5 phút với vận tốc 13000rpm, sau đó loại bỏ ethanol. **Bước 10: sấy khô DNA**: Sấy khô bằng máy ly tâm chân không ở nhiệt độ 45 oC trong 15 phút, tránh trường hợp mẫu DNA còn chứa ethanol sẽ ảnh hưởng đến DNA tổng số. **Bước 11: hòa tan DNA:** DNA sau khi sấy khô được hòa tan với 100ml TE 0.1. Dung dịch DNA được dùng để chạy điện di. **3.KIỂM TRA CHẤT LƯỢNG MẪU** **3.1/Đo OD đối với mẫu vi khuẩn và tôm**
Lấy 100ml nước khử ion vô trùng vào cuvet 100ml, đo đối chứng.
Hoà 10ml dịch ADN cần đo vào 90ml nớc khử ion vô trùng, bơm vào cuvet, đo ở bước sóng 260nm, 280nm
Đọc độ hấp thụ trên máy đo quang phổ ở bước sóng 260 nm, 280 nm. Xử lý số liệu
**3.2Điện di đối với mẫu lá**
Khay điện di được đặt lược sẳn ở một đầu khay. Sử dụng lược có số răng là 17. Khay được đặt ở nơi bằng phẳng.
Gel sử dụng chạy điện di lá: 40ml với nồng độ 1% agrarose.
Trước tiên cân 0,4g agrarose cho vào chai thủy tinh, sau đó cho vào chai 50ml Bufer TE, trừ hao trong quá trình nấu bốc hơi hết 10ml. Lắc chai cho agrarose hòa tan vào Buffer TE, sau đó đem nấu trong microwave trong 2 phút ở 450W (nấu cho agrarose hòa tan hoàn toàn và trong như nuớc), agrarose sau khi nấu xong để nguội khoảng 60
oC rồi đổ nhẹ dung dịch vào một đầu khay dung dịch sẽ tự trải đều khay. Khoảng 45 phút sau gel đặc lại, ta dùng tay lấy lược ra nhưng phải cẩn thận tránh bị bể gel.
Đặt khay vào bể điện di, thêm dung dịch điện di phủ mặt gel khoảng 2mm.
Sau khi gel chuẩn bị xong, ta tiến hành load mẫu vào các giếng của gel
**+ Load mẫu:**
Đầu tiên hút dung dịch loading buffer (một dung dịch tải DNA chứa 30% glycerol, 0,25% bromophenol blue (BPB) và 0,25% xylencyanol (XC), trong thành phần có chứa glycerol có tỷ trọng cao sẽ kéo DNA nằm trong giếng không bị trôi ra ngoài trong khi load mẫu) và nhỏ thành từng giọt nhỏ khoảng 2ml ra giấy paraflim, sau đó hút 10ml dung dịch mẫu trộn điều với dung dịch loading buffer và tiến hành load mẫu vào giếng của gel. Bắt đầu load từ giếng thứ 2, giếng thứ nhất dùng để load thang chuẩn.
Sau khi load xong ta đậy nấp bể điện di lại và tiến hành chạy điện di. Thời gian điện di thay đổi phụ thuộc vào độ lớn của DNA, nồng độ agarose của gel và cường độ dòng điện. Sau khi chạy điện di xong bản gel được lấy nhẹ ra khỏi khuôn gel và ngâm vào dung dịch EtBr trong thời gian 30 phút có tác dụng đánh dấu phân tử DNA, hóa chất này có khả năng gắn xen vào giữa các base của nucleic acid và sẽ phát huỳnh quang dưới tác dụng của tia tử ngoại. Sau đó rửa sạch bản gel bằng nước cất.
Quan sát và chụp hình: Bản gel được quan sát dưới ánh sáng tử ngoại λ = 260-360 nm trên bộ đọc gel bio-rad. Quan sát thấy ADN hiện lên dưới dạng các vạch sáng.
** 4** **.KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN** **4.1/Kết quả**
Kết quả đo OD các mẫu DNA.
|
|
|
|OD260 |
|OD260/OD280 |
|Nồng độ DNA (ng/µl)
|
|Tôm |2.5825||1.9888||1291.25|
|
|E.Coli |1.4437||2.0032||721.85|
### Kết quả chụp gel điện di mẫu lá
##
Vạch số 5 là vạch được đề cập trong báo cáo này ![Biorad_2010-07-14_14hr_52min ](https://duybiotech.files.wordpress.com/2010/07/biorad_2010-07-14_14hr_52min.jpg?w=840)
![Biorad_2010-07-14_14hr_52min ](https://duybiotech.files.wordpress.com/2010/07/biorad_2010-07-14_14hr_52min.jpg?w=840)
## 4.2/Thảo luận
**4.2.1/Mẫu tôm**
Kết quả OD260/OD280 là 1.9888 cho thấy DNA của mẫu tôm là khá tinh sạch,không bị nhiễm Protein cũng như Chlorofrom,đồng thời nồng độ DNA thu được cũng khá cao (1291.25 ng/µl)
**4.2.2/Mẫu vi khuẩn**
Kết quả đo OD260/OD280 (2.0032) cho ta biết độ tinh sạch của mẫu là khá tốt, tuy nhiên mẫu có thể bị nhiễm một ít Chloroform do sai sót trong quá trình thực hiện, có thể là sai sót trong quá trình rút mẫu sau khi ly tâm với cloroform/isoamylalchohol. đồng thời nồng độ DNA thu được cũng khá cao (721.85 ng/µl)
**4.2.3/Mẫu lá bưởi**
Mẫu ở giếng số 5, cho ta thấy DNA ít bị nhiễm muối(ít sáng ở vị trí giếng) và không có trường hợp bị gãy(chỉ có vạch sáng lớn, không có các vạch sáng ở dưới vạch sáng lớn) , tuy nhiên vạch sáng hơi mờ chứng tỏ nồng độ DNA thu được là không cao.
**TRẢ LỜI CÂU HỎI** **Câu 1:** **Công dụng của các chất:** **Sodium Dodecyl Sulfate (SDS**): Có tác dụng phá vỡ màng tế bào, DNA thoát ra môi trường ngoài.
### Cetyl Trimethylammonium Bromide (CTAB): CTAB có khả năng liên kết thuận nghịch với ADN và polysaccharide, cụ thể ở nồng độ muối cao (trên 1.4 M NaCl có trong đệm chiết) thì CTAB kết hợp với ADN và polysaccharide nhưng phức hợp CTAB-ADN tồn tại ở trạng thái hòa tan, trong khi đó phức CTAB-polysaccharide lại kết tủa, phức này sẽ được loại đi ở bước ly tâm đầu tiên. Ở nồng độ muối dưới 0.7M thì phức CTAB-ADN lại kết tủa, cho phép thu hồi lại ADN ở bước tủa cồn. Ở nồng độ muối thấp phức CTAB-ADN sẽ tách nhau ra. Phức này sẽ tách ra gần như hoàn toàn trong bước rửa bằng cồn 70
0.
### Proteinase K (endopeptidase K): Trong quá trình ly trích DNA sẽ có sự hiện diện của rất nhiều protein, làm cho mẫu DNA không sạch, các protein đó cần phài được loại bỏ proteinase K được sử dụng để loại bỏ các protein này, góp phần làm sạch mẫu DNA. Ngoài ra proteinase K còn góp phần phân giải enzyme nuclease giúp cho DNA ít bị biến tính hơn. Proteinase K thường được duy trì trong sự hiện diện của SDS, EDTA và urea.
**Isopropanol: **Dùng để tủa DNA (thể tích isopropanaol tỷ lệ 1:1 với dung dịch cần tủa) **Hỗn hợp Chloroform:Isoamylalcohol (24:1): **Dùng để loại bỏ protein, polycaccharide và các phức hợp không phải DNA. Sau khi li tâm với vận tốc 13000rpm trong 5 phút dung dịch chia ra thành 3 lớp: lớp thứ nhất là phần dịch trong ở trên cùng có chứa DNA, lớp thứ hai là một lớp protein, lớp kế tiếp có chứa chloroform và tất cả những thành phần cần loại bỏ khác. **Ethanol 96% và 70%: **Ethanol 96% dùng để tủa DNA và bảo vệ chúng khỏi sự phân hủy của các enzyme. Chúng kết hợp với muối để tránh gây hại cho DNA.
Ethanol 70% dùng để rửa tủa, loại bỏ isopropanol, muối CTAB ra khỏi DNA
**Câu 2: ** **Sự khác nhau khi dùng TE 0.1X và nước để hòa tan DNA** **Câu 3** **:** ** DNA cần phải được làm khô trước khi hòa tan** **Câu 4:** ** Nồng độ và số lượng DNA ở mẫu tôm:**
Ta có: OD
260nm = 1 Þ DNA = 50ng/ml
Qua kết quả đo OD của Tôm ta có: OD
260nm = 2.5825
Trước khi tiến hành đo OD, mẫu đã được pha loãng 10 lần. Vậy nồng độ DNA trong mẫu Tôm thu được:
**C DNA= OD260nm * 50ng/** **m** **l*10 = 2.5825*50ng/** **m** **l*10 =** **1291.25** **ng/** **m** **l.**
Dung dịch DNA trước khi pha loãng là 30 ml nên số lượng DNA thu được là: 30*1291.25 = 38,737.5ng
Kết quả OD260/OD280 là 1.9888 cho thấy DNA của mẫu tôm là khá tinh sạch,không bị nhiễm Protein cũng như Chlorofrom,đồng thời nồng độ DNA thu được cũng khá cao (1291.25 ng/µl)
**Tương tự:** **Nồng độ và số lượng DNA ở mẫu vi khuẩn:** **C DNA= OD260nm * 50ng/** **m** **l*10 = 1.4437*50ng/** **m** **l*10 = 721.85ng/** **m** **l.**
Dung dịch DNA trước khi pha loãng là 30 ml nên số lượng DNA thu được là: 30*721.85= 21,655.5 ng
Kết quả đo OD260/OD280 (2.0032) cho ta biết độ tinh sạch của mẫu là khá tốt, tuy nhiên mẫu có thể bị nhiễm một ít Chloroform do sai sót trong quá trình thực hiện, có thể là sai sót trong quá trình rút mẫu sau khi ly tâm với cloroform/isoamylalchohol. đồng thời nồng độ DNA thu được cũng khá cao (721.85 ng/µl)
**Câu 5** **:** **Chất lượng và số lượng DNA lá dựa trên kết quả điện di**
Mẫu ở giếng số 5, cho ta thấy DNA ít bị nhiễm muối và không có trường hợp bị gãy, tuy nhiên vạch thể hiện hơi mờ chứng tỏ nồng độ DNA thu được là không cao.
**Bài tập**
a.Lượng hóa chất để hòa tan các dung dịch Stock có nồng độ sau:
Đồng nhất thể tích dung dịch pha V= 1lit
* Tris 1M (M= 121.13g/mol)
C
M Tris = n/V=m/(M*V) => m= C M Tris * (M*V) = 1x (121.13 *1) =121.13g
*EDTA 0.5M (M=372.24 g/mol)
C
M EDTA = n/V=m/(M*V) => m= C M EDTA* (M*V) = 0.5 x (372.24 *1) =186.12g
*NaCl 5M( M=58.4 g/mol)
C
M NaCl = n/V=m/(M*V) => m= C M NaCl * (M*V) = 5 x (58.4*1) = 292 g
b
**.**Pha V 2 ml Buffer A (0.1M Tris; 0.5M NaCl, 0.005M EDTA pH 8) từ các dung dịch gốc Tris 1M, NaCl 5M, EDTA 0.5M. Phải mất bao nhiêu dung dịch gốc để pha Buffer A.
Dựa vào công thức C
1V 1=C 2V 2 ta tính được các thể tích các dung dịch gốc cần pha như sau: **V 1 = C2V2 / C1**
* V
Tris.HCl = 0.1* V 2/1 = V 2/10 ml
* V
NaCl = 0.5* V 2/5 = V 2 /10 ml
* V
EDTA = 0.005* V 2/0.5 = V 2 /100 ml
Tổng thể tích của dung dịch gốc = V
2/10 + V 2/10 +V 2/100 =21V 2/100 ml
Þ Thể tích nước cất thêm vào = V
2– 79 V 2/100= 79V 2/100 ml

WARC-Truncated: length

X-ac: 1.dca _dca

X-hacker: If you're reading this, you should visit automattic.com/jobs and apply to join the fun, mention this header.

Server: nginx

Link: <http://wp.me/pZ8aA-2S>; rel=shortlink

Vary: Cookie

Content-Type: text/html; charset=UTF-8


markdown:
# Màn hình BenQ Gaming 27" XL2730Z
- Tình trạng: Còn hàng
- Nhà sản xuất:
[BenQ](https://gear.gamebank.vn/benq)
- Bảo hành : 36 tháng (đổi mới)
- Loại: Màn hình
**Màn hình BenQ Gaming 27" XL2730Z**
**Mô tả sản phẩm:**
144Hz | LED | Panel TN | 27" | 2560 x 1440 | 16:9
Độ sáng 350 cd/m2 | 1000:1 | 16.7 triệu màu
Góc nhìn 170* / 160* | T/g đáp ứng 1ms (GTG)
Kết nối D-sub/ DVI-DL/ HDMI2.0x1/ HDMI1.4x1 / DP1.2 / Headphone jack / Mic jack
Công suất 65W | 0.5W (nghỉ)
Xoay ngang dọc, điều chỉnh độ cao (140mm)
Tính năng: Motion Blur Reduction | Low Blue Light | Black eQualizer | Game Mode Loader | Flicker-free Technology | AMA
Đặc biệt: hub USB 3.0 x2, S switch, giá treo tai nghe
Trọng lượng 7.5kg | 557.4 x 663.7 x 226.0 | Treo tường VESA 100 x 100mm
### Sản phẩm liên quan
[Màn hình Dell 24" E2416H](https://gear.gamebank.vn/man-hinh-dell-e2416h)
3.900.000 đ
[Màn hình Dell 23" E2316H](https://gear.gamebank.vn/man-hinh-dell-e2316h)
3.600.000 đ
[Màn hình Dell 21.5" E2216H](https://gear.gamebank.vn/man-hinh-dell-e2216h)
3.300.000 đ
[Màn hình LG 24MP58VQ](https://gear.gamebank.vn/man-hinh-lg-24mp58vq)
3.650.000 đ
Xu hướng tìm kiếm:
[Màn hình BenQ Gaming 27" XL2730Z](https://gear.gamebank.vn/index.php?route=product/search&tag=Màn hình BenQ Gaming 27" XL2730Z),
[màn hình BenQ](https://gear.gamebank.vn/index.php?route=product/search&tag=màn hình BenQ),
[màn hình máy tính](https://gear.gamebank.vn/index.php?route=product/search&tag=màn hình máy tính),
[pc game](https://gear.gamebank.vn/index.php?route=product/search&tag=pc game),

Server: Apache/2.2.15 (CentOS)

Set-Cookie: currency=GBP; expires=Sun, 19-Feb-2017 14:02:12 GMT; path=/; domain=gear.gamebank.vn

Cache-Control: no-store, no-cache, must-revalidate, post-check=0, pre-check=0

Pragma: no-cache


markdown:
Giỏ Hàng đang trống!
3.490.000 đ
5.490.000 đ
1.590.000 đ
1.759.000 đ
2.490.000 đ
2.990.000 đ
4.990.000 đ
3.390.000 đ
3.890.000 đ
4.090.000 đ
Bản quyền của GamebankGear © 2017

Set-Cookie: currency=GBP; expires=Sun, 19-Feb-2017 14:01:45 GMT; path=/; domain=gear.gamebank.vn


markdown:
# BHD Cinema - Ngày hội thành viên B'Day
![](https://i.moveek.com/media/cache/profile/media/cb2ab191cb21c57f2d0f6110d4437ca0b1a9d83e.png)
Chương trình kéo dài từ ngày
**22/04/2016** đến hết ngày **31/12/2018**.
Như một món quà dành tặng đến các khách hàng thân thiết của BHD Star, vào Thứ 4 đầu tiên của mỗi tháng, BHD Star mang đến chương trình NGÀY HỘI THÀNH VIÊN B’DAY với ưu đãi siêu hấp dẫn
- Chỉ với 45,000đ/vé 2D
- Và chỉ 45,000đ/combo 1 bắp & 1 nước
- Thành viên được nhân đôi điểm thưởng (RP) khi giao dịch trong ngày B’Day
Quy định khác:
- Thành viên phải xuất trình thẻ Thành Viên trước khi giao dịch
- Không áp dụng kèm các chương trình khuyến mãi, giảm giá khác
- Một thành viên được mua nhiều vé xem phim và nhiều combo
- Áp dụng cho thành viên mua vé tại rạp

Vary: Accept-Encoding

Set-Cookie: device_view=full; expires=Mon, 20-Feb-2017 13:54:59 GMT; Max-Age=2678400; path=/; httponly

Cache-Control: private, must-revalidate


markdown: Tìm đối tác để làm ăn, tìm đối tác để kết bạn, tìm bạn đời có khó không, quá khó, vì chúng ta không tự tìm được cơ hội, tất cả tùy duyên. Tham vọng là cầu nối thúc đẩy các cơ hội gặp gỡ, giao lưu và kết hợp, muaban.net giúp bạn đưa lên đây các thông tin Tìm đối tác kinh doanh, đại lý phân phối hàng nhanh, uy tín, đảm bảo tại Huyện Cẩm Khê Phú Thọ. Đồng thời cung cấp thông tin giúp tìm kiếm, kết bạn ... Muaban.net chỉ cung cấp thông tin, xử lý thông tin là công việc dành cho bạn. Nhanh chóng hay chậm trễ, sẽ đều phụ thuộc vào mức độ tương thích giữa các đối tác. Mọi thông tin đã sẵn sàng, các bạn chỉ cần thêm một chút may mắn là các bạn có nhau.


markdown:
# Mua bán quần áo thời trang tại Huyện Côn Đảo Bà Rịa - Vũng Tàu
Rao vặt, mua bán cho hơn 4,500 mặt hàng quần áo thời trang, giá rẻ tại Huyện Côn Đảo Bà Rịa - Vũng Tàu. muaban.net mang đến cho bạn đa dạng sản phẩm đầm công sở, áo sơ mi, quần jean, quần short, đầm, váy, ... với giá rẻ nhất.
[](https://muaban.net/quan-ao-huyen-con-dao-l0202-c21/chuyen-may-ban-trang-phuc-vay-mua-gia-mem-id36161910)
![Chuyên may bán trang phục váy múa giá mềm Chuyên may bán trang phục váy múa giá mềm](https://cdn.muaban.net/cdn/images/thumb-list/201612/20/559/848a53e4d2b440a6972cf88d8e48bc99.jpg)
[](https://muaban.net/quan-ao-huyen-con-dao-l0202-c21/chuyen-may-ban-trang-phuc-vay-mua-gia-mem-id36161910)


markdown:
# Tìm đối tác nhanh chóng, uy tín tại Huyện Con Cuông Nghệ An
Trang thông tin rao vặt, đăng tin tìm đối tác kinh doanh, đại lý phân phối hàng hóa trong và ngoài ngước nhanh chóng, uy tín tại Huyện Con Cuông Nghệ An ... Thông tin cập nhật 24/7 tại muaban.net
[](https://muaban.net/tim-doi-tac-huyen-con-cuong-l4102-cA7/toi-nang-ha-1-tan-2-tan-5-tan-10-tan-toi-keo-mat-dat-toi-keo-nam-id35094218)
![Tời nâng hạ 1 tấn -2 tấn -5 tấn –10 tấn -tời kéo mặt đất –tời kéo nằm Tời nâng hạ 1 tấn -2 tấn -5 tấn –10 tấn -tời kéo mặt đất –tời kéo nằm](https://cdn.muaban.net/cdn/images/thumb-list/201610/13/550/0e33b5f0a55f4df1ade4fe5e250db608.jpg)
[](https://muaban.net/tim-doi-tac-huyen-con-cuong-l4102-cA7/toi-nang-ha-1-tan-2-tan-5-tan-10-tan-toi-keo-mat-dat-toi-keo-nam-id35094218)


markdown:
Đặt phòng trực tuyến, hoặc gọi
Hà Nội: (04) 7109 9999
- (04) 7309 9899
Hồ Chí Minh: (08) 7309 9899
- (08) 7109 9998
T2 - CN: 08:00 - 23:00
Bạn không có thông báo nào
189 Lam Sơn, Vĩnh Yên , Vĩnh Phúc
(Xem bản đồ)
~ 1.67km
Bảo tàng Vĩnh Phúc
(46
đánh giá)
Đăng ký email để nhận khuyến mãi lên đến 70%
Công ty TNHH Mytour Việt Nam
Số ĐKKD: 0105983269 cấp ngày 30/08/2012
Văn phòng Hà Nội: Tầng 4, tòa nhà GP Invest, 170 Đê La Thành, Đống Đa
Văn phòng HCM: Tầng 5, Tòa Nhà HDTC, Số 36 Bùi Thị Xuân, Q.1
GIẢM NGAY 15%
Cho mọi đơn phòng đặt qua ứng dụng Mytour.vn
Xem ngay >>>

Connection: Close


markdown:
07/04/2016 761
**Đường hầm điêu khắc đã trở thành một điểm đến không thể bỏ qua trong sổ tay du lịch của bất kì ai ghé thăm Đà Lạt.**
*Chính thức mở cửa cho khách tham quan từ năm 2012, con đường điêu khắc trải dài hơn 1.200 m là lựa chọn của nhiều du khách khi tới Đà Lạt. Nằm bên hồ Tuyền Lâm thơ mộng, du khách có thể kết hợp ghé thăm thác Datanla, thiền viện Trúc Lâm trước khi dừng chân trên con đường điêu khắc.* *Điểm thu hút của con đường này là các công trình đều được làm bằng đất sét bazan - loại đất đặc trưng cho núi rừng Tây Nguyên. Được biết tới với nhiều tên gọi như con đường điêu khắc, con đường đất sét, đường hầm đất đỏ… nhưng tụ lại, đây là nơi để khách tham quan chiêm ngưỡng nhiều tuyệt tác từ đất.* *Những công trình đều được xây dựng theo chủ đề với nội dung cụ thể. Theo dòng lịch sử, bạn sẽ bắt gặp quang cảnh trái đất khi bắt đầu có dạng sống, với loài vượn người và người tiền sử.* *Với mong muốn thổi hồn cho đất, anh Trịnh Bá Dũng – chủ sở hữu của khu đường hầm này đã tạo nên những công trình mang nhiều nét đẹp tiêu biểu của Đà Lạt và Tây Nguyên. Những đàn voi là một phần không thể thiếu trong kho tàng văn hóa và lịch sử của mảnh đất này.*
**Xem thêm: ** *Các khách sạn giá rẻ tại Đà Lạt* *Núi Lang Biang hiện lên hùng vỹ với thác nước chảy. Dưới chân núi là đàn rùa đang giao chiến với thủy quái.* *Nét hiện đại pha trộn giữa không gian văn hóa với hình ảnh chiếc xe Vespa cổ.* *Con đường chạy qua nhiều công trình, căn nhà mang dáng dấp kiến trúc châu Âu. Bước đi trên con đường, khách tham quan tưởng chừng như đang lạc trong một thành phố cổ kính châu Âu.* *Âm nhạc và nghệ thuật cũng là chủ đề được tái hiện nhiều tại con đường đất sét.* *Bản nhạc “Ai lên xứ hoa đào”, một bài ca nức lòng bao người khi nghĩ về thành phố ngàn hoa Đà Lạt.*
**Xem thêm: ** *Khách sạn khuyến mãi đến 51% tại Đà Lạt* *Một trong những nét đặc sắc của con đường điêu khắc là tái hiện lại các công trình tiêu biểu của thành phố hoa. Trên hình là ga Đà Lạt, một điểm đến thu hút du khách với kiến trúc ấn tượng và những toa tàu cổ kính.* *Chiếc máy bay khổng lồ nằm gần lối ra.* *Hiện lên trên bức tường là phù điêu hoa quả, trái cây, những sản vật đặc trưng cho thành phố Đà Lạt. Không chỉ có những bức tượng, công trình với màu nâu đỏ của đất, tác giả còn sử dụng nhiều màu sắc để tôn lên vẻ đẹp cho các tác phẩm của mình.*
*Giới thiệu Đường hầm điêu khắc Đà Lạt*
**Xem thêm: ** *Các tour du lịch Đà Lạt giá rẻ*
**Mytour.vn - Nguồn: Vnexpress**


markdown:
Đặt phòng trực tuyến, hoặc gọi
Hà Nội: (04) 7109 9999
- (04) 7309 9899
Hồ Chí Minh: (08) 7309 9899
- (08) 7109 9998
T2 - CN: 08:00 - 23:00
Bạn không có thông báo nào
Giá từ: 590,000 đ
1 ngày 0 đêm
Giá từ: 3,920,000 đ
4 ngày 3 đêm
Giá từ: 2,590,000 đ
2 ngày 1 đêm
Giá từ: 4,950,000 đ
3 ngày 2 đêm
Giá từ: 760,000 đ
05/12/2016
495
Xem thêm
12/10/2016
1386
29/07/2016
1139
18/06/2016
1011
31/05/2016
878
12/04/2016
488
11/04/2016
1012
14/03/2016
686
04/03/2016
525
23/02/2016
428
19/02/2016
1502
26/08/2015
1592
Đăng ký email để nhận khuyến mãi lên đến 70%
Công ty TNHH Mytour Việt Nam
Số ĐKKD: 0105983269 cấp ngày 30/08/2012
Văn phòng Hà Nội: Tầng 4, tòa nhà GP Invest, 170 Đê La Thành, Đống Đa
Văn phòng HCM: Tầng 5, Tòa Nhà HDTC, Số 36 Bùi Thị Xuân, Q.1
GIẢM NGAY 15%
Cho mọi đơn phòng đặt qua ứng dụng Mytour.vn
Xem ngay >>>


markdown:
## Biên Bức – Chương 1 – Quyển hạ
Tác giả: Phong Lộng
Edit: Nguyệt Cầm Vân
Bạch Thiếu Tình thầm nghĩ: Phong Long đã trở thành kẻ thù chung của võ lâm, võ công của hắn xem chừng không ai địch nổi, thật muốn nhìn xem người trong võ lâm có thể nghĩ ra biện pháp gì để đối phó với hắn. Thế rồi bèn chắp tay nói với Hòe nhị ca: “Thiếu Tình đã lâu không nghe ngóng truyện trong giang hồ, may mà gặp được Hòe nhị ca, khắp Giang Nam Giang Bắc đều biết tới danh hào của Hòe nhị ca, dọc đường đi vẫn mong nhận được nhiều sự chiếu cố của huynh.”
Hòe nhị ca được hắn tâng bốc đến lâng lâng, bật cười ha hả, “Bạch công tử xin cứ yên tâm, Hòe mỗ công phu bình thường, nhưng bằng hữu thì cũng có nhiều, việc ăn uống thết đãi trên dọc đường đi xin cứ để ta lo.”
Tiểu Mạc hưng phấn vỗ bụp lên vai Hiểu Kiệt, “Chúng ta sẽ đi cùng đường với Bạch công tử đấy!”
Hòe nhị ca gọi những người khác tới giới thiệu một lượt, thì ra ngoại trừ hắn, Tiểu Mạc và Hiểu Kiệt, những người khác đều là tôi tớ thiếp thân, đi cùng để thị hầu.
Nhi nữ giang hồ đa số đều tự do tự tại, mang theo bên mình cả một nhóm người thế này quả thật không nhiều lắm.
Tiểu Mạc phiền chán nói: “Đã bảo bọn họ không cần đi theo rồi, nương cẩn thận quá đi mất, ta cũng đâu phải tiểu cô nương.”
Bạch Thiếu Tình quan sát kỹ lưỡng, trong đám tôi tớ có hai người mang nhãn thần sắc bén, công phu còn cao hơn cả Hòe nhị ca, xem ra là đang âm thầm bảo vệ tiểu chủ nhân, không biết nhà ai có thể mời được những người này cam nguyện đi theo làm tôi tớ suốt lộ trình ngàn dặm?
Niên kỷ của Hòe nhị ca dù sao cũng có chút lớn, vừa thấy Bạch Thiếu Tình quét mắt liếc nhìn đám tôi tớ, liền đoán ra tất cả, bèn nói: “Tiểu Mạc là con trai độc nhất của Thái Hồ Tiêu gia, lần đầu tiên hắn xuất môn, Tiêu phu nhân đặc biệt muốn ta coi sóc hắn. Ài, nhi tử xuất môn, người làm nương đều khó tránh khỏi sợ hãi âu lo.”
Thái Hồ Tiêu gia từ trước đến nay dùng tửu kiếm phong lưu để xưng tụng trong chốn võ lâm, tên tuổi mặc dù kém hơn võ lâm tứ đại gia tộc, nhưng cũng là một danh môn đại phủ có tiếng vang, không nghĩ tới lại dưỡng ra một nhi tử hào sảng hoạt bát thế này. Bạch Thiếu Tình khẽ gật đầu, “Nhìn căn cốt của hắn, cũng là một người có thiên tư học võ.”
Tiểu Mạc mừng đến vò đầu bứt tai, dùng bả vai khẽ huých huých vào Hiểu Kiệt một chút, vẻ mặt đắc ý. Hiểu Kiệt bực mình, dựng thẳng lông mày nói: “Mới khen ngươi hai câu ngươi đã phát khùng rồi? Bạch công tử người ta là đang nói lời khách khí đấy! Nếu ngươi thực sự lợi hại, tại sao ngay cả ta cũng đánh không lại?”
Tiểu Mạc bị vạch trần tại chỗ, mặt đỏ lựng hơn nửa, ngượng ngùng giậm chân nói, “Đều tại nương, cứ sợ ta bị bệnh, không cho phép ta ngày đêm luyện võ.”
Hiểu Kiệt hừ một tiếng, quay đầu đi, nhịn không được lén nở nụ cười.
Bạch Thiếu Tình nhìn cảnh tượng giữa hai người bọn họ, trong lòng hiểu được vài phần. Hắn xem như cũng là một người từng trải, kinh nghiệm phong phú, vừa liếc nhìn liền nhận ra Hiểu Kiệt này là nữ phẫn nam trang, nhưng cũng không vạch trần, nói với Hòe nhị ca: “Tối nay chỉ có thể ở lại miếu này ngủ một đêm.” Hắn đạm nhiên nói một câu, cũng không nhắn nhủ gì nữa, tự đi về hướng nội đường.
Tiểu Mạc đối với hắn phi thường ngưỡng mộ vội vàng đứng lên định đi theo, nhưng bị Hiểu Kiệt kéo lại, quát nói: “Ngươi là tên ngốc sao? Ban nãy Bạch công tử vừa nói thương thế của hắn mới khỏi, hiển nhiên cần yên tĩnh, ngươi đi theo sẽ chỉ làm ồn người ta.”
Tiểu Mạc cười hì hì: “Đúng đúng, vẫn là ngươi nói đúng.”
Bạch Thiếu Tình nghe thấy thế, cũng không khỏi thầm khen nha đầu kia hiểu chuyện.
* * *
Ngày tiếp theo mọi người cùng lên đường, Hòe nhị ca tính tình nghĩa khí, bằng hữu quả nhiên rất nhiều, giang hồ nhân sĩ hầu hết đều hào sảng rộng rãi, suốt dọc đường đi dâng lên bao nhiêu là rượu ngon cùng đồ ăn ngon, lại biết Tiểu Mạc là người của Thái Hồ Tiêu gia, hiển nhiên càng khách khí thêm đôi phần.
Chỉ có điều Bạch Thiếu Tình đã dặn đi dặn lại với Hòe nhị ca, nói công lực của mình còn chưa hoàn toàn khôi phục, không muốn để người ngoài biết được hành tung của mình, lúc thường đều đeo khăn sa đen che đi hơn nửa khuôn mặt, chỉ ăn qua loa một chút rượu thịt, cũng không nói cười với người khác, một mình đi vào phòng nghỉ ngơi.
Đi đã nhiều ngày, võ lâm nhân sĩ trên đường dần dần đông lên, đa số đều là hướng về Thiếu Thất sơn. Người người mặc giáp đeo đao, tụ tập lại cùng nhau đàm luận về Phong Long, đều nghiến răng nghiến lợi, chửi rủa ầm ĩ.
Bạch Thiếu Tình thầm than Phong Long lần này không ổn rồi, vốn nên thích chí, thế nhưng không hiểu sao tâm tình càng lúc lại càng nặng nề. Bình thường hắn không thích uống rượu, nhưng càng tới gần Thiếu Thất sơn, lại càng thích tìm tửu quán.
Tiểu Mạc ra vẻ thông minh nói: “Tình hình trước mắt thế này, thời gian còn lại của tên họ Phong kia nhất định không nhiều, hẳn là nên uống mừng chén lớn.” Kiên quyết muốn theo Bạch Thiếu Tình đi tới tửu quán, hai người bao trọn một sương phòng nhỏ.
Chưa uống được ba chén, Hiểu Kiệt đã mày liễu dựng thẳng tìm tới tận nơi, nhéo lỗ tai Tiểu Mạc nói: “Càng ngày càng không tiền đồ, lại dám giấu ta đi uống rượu?” Thấy Bạch Thiếu Tình ngạc nhiên nhìn nàng, mới chợt nhớ ra mình đang giả làm nam hài, loại hành động của nữ hài tử khi tức giận này quả thực không nên làm, liền đỏ mặt thả tai Tiểu Mạc ra, ha hả cười gượng để che giấu đi, “Uống rượu sao có thể thiếu phần của ta, chưởng quầy đâu, mang rượu lên đây.” Tự mình uống hai chén, đã đổ gục xuống.
“Hai chén đã gục? Không phải bị trúng mê dược đấy chứ?” Tiểu Mạc thấy nàng nằm rũ trên bàn, gấp đến xoay mòng mòng xung quanh Hiểu Kiệt.
Bạch Thiếu Tình cảm thấy buồn cười, “Nàng là say (1).”
“Ồ, thì ra là say.” Tiểu Mạc vuốt vuốt ngực, bỗng nhiên mặt mũi lại nhăn nhó. “Nguy rồi, say rượu sẽ đau đầu, ngày mai nàng tỉnh dậy đau đầu, nhất định sẽ mắng ta bằng chết.”
Bạch Thiếu Tình thấy hắn sốt ruột đến toát mồ hôi lạnh, môi mỏng hơi mím lại, khẽ cười, “Trước mắt đừng vội lo chuyện ngày mai, cứ bế nàng về đi đã.”
“Bế? Bế thế nào?” Tiểu Mạc lượn một vòng xung quanh Hiểu Kiệt, duỗi tay ra bế ngang nàng lên, trên mặt cư nhiên có chút đỏ hồng, nói với Bạch Thiếu Tình: “Cái này lại càng gay go, nếu sáng mai nàng tỉnh dậy, biết được chuyện ta đã bế nàng, không biết sẽ giận ta bao lâu đây? Ài, bế như vậy, thực sự… thực sự…” Hắn muốn nói thực sự rất không ổn, nhưng lại luyến tiếc không nỡ bỏ Hiểu Kiệt xuống, chỉ một mực cúi đầu nhìn hai gò má đỏ bừng vì say trong mộng của nàng.
Bạch Thiếu Tình chợt thấy đau nhói trong tâm, im lặng vô ngôn, chỉ tự rót cho mình một chén rượu, ngửa đầu uống cạn, lạnh lùng nói: “Các ngươi về trước đi, ta uống thêm vài chén nữa.”
Đuổi Tiểu Mạc đi rồi, một mình độc ẩm không thú vị, duỗi tay vào trong lồng ngực mới sực nhớ ngọc tiêu đã bị mình dùng một chưởng đánh gãy, lại giật mình ngẩn ngơ.
* * *
Khi tới Thiếu Thất sơn, các lộ giang hồ cũng đã đến gần đủ, mọi người lũ lượt nối tiếp nhau, chen chúc đến nỗi Thiếu Lâm tự ngày thường yên tĩnh trang nghiêm bây giờ cũng phải y hệt như một cái chợ. Tăng lữ phụ trách tiếp đãi khách nhân vội vàng chạy tới chạy lui, võ lâm nhân sĩ không có thói quen chịu gò bó, cũng có người dùng tay trực tiếp bắt thỏ rừng ngoài chùa, sát sinh nướng ăn ngay trước cổng, khiến tăng nhân trông cửa chỉ đành trưng ra vẻ mặt bất đắc dĩ.
Bạch Thiếu Tình hưởng ké hào quang của Thái Hồ Tiêu gia Tiểu Mạc, được an trí đến một gian khách phòng nho nhỏ. Hắn không muốn cùng người ngoài nhàn rỗi giao thiệp, thường một mình tránh ở trong phòng tĩnh tọa, thỉnh thoảng mới ra ngoài thưởng thức chút mỹ cảnh của ngôi miếu cổ trăm năm này, lại vẫn tình cờ nghe được mấy lời, đều là khoác lác muốn đem Phong Long không biết trời cao đất dày xử lý thế này thế nọ, trong lòng càng cảm thấy phiền chán.
Trong chùa không rượu, lại không có ngọc tiêu, cũng may còn có hai tiểu quỷ Tiểu Mạc và Hiểu Kiệt thường hay lui tới, nghe bọn họ đấu võ mồm cũng có chút thú vị.
Lại qua thêm hai ngày, đã đến mùng bảy.
Mới sáng sớm, Thiếu Lâm tự đã ồn ào huyên náo, mọi người ăn xong bữa sáng nhạt nhẽo vô vị, sôi nổi kéo nhau đến tụ họp ở đại điện. Sớm đã có tăng lữ dựng lên một đài cao, trên đài bày năm cái ghế.
Duệ Trí đại sư của Thiếu Lâm tự đức cao vọng trọng, ngồi ở chính giữa, hiển nhiên không có ai dị nghị. Thấy mọi người đều đã ồn ào an vị, Duệ Trí khẽ ho một tiếng, chắp tay hướng xuống dưới đài, thong thả nói: “Lão nạp Duệ Trí, thay mặt cho toàn thể Thiếu Lâm đa tạ các vị thí chủ đã đường sá xa xôi lặn lội tới đây. Mấy ngày qua võ lâm rộ lên tin đồn, minh chủ võ lâm tiền nhiệm đã mất tích lại chính là giáo chủ của Chính Nghĩa giáo. Đây là sự tình trọng đại, nếu thực sự có người gây gió tạo mưa, từ nay võ lâm tất nhiều hiểm họa. Thiếu Lâm cũng là một mạch của võ lâm, xét thấy như vậy, lão nạp mạo muội phát đi võ lâm thiếp, thỉnh các vị anh hùng tới đây cùng thương nghị.”
Nhắc tới cái tên Phong Long, quần hùng dưới đài nhất thời sôi trào mãnh liệt, đều ầm ầm quát lớn: “Đúng vậy! Nhất định phải đem tên tặc tử này bầm thây vạn đoạn, mới có thể hả được nỗi hận của võ lâm chúng ta.”
Duệ Trí gật đầu nói: “Đại sự bực này rất cần toàn thể võ lâm thống nhất một lòng. Sau khi Phong Long mất tích, vị trí võ lâm minh chủ vẫn luôn bỏ trống, hôm nay mời các vị võ lâm đồng đạo tới đây, cũng là để cùng nhau thương nghị một chút xem nên tuyển chọn tân minh chủ thế nào.”
Cụm từ “võ lâm minh chủ” này, hiển nhiên còn có sức hấp dẫn hơn so với Phong Long. Dưới đài lập tức tĩnh lặng, không ít người âm thầm hưng phấn. Giữa lúc trầm mặc, bỗng có người trốn trong đám đông cất giọng the thé khó nghe: “Cứ đơn giản treo thưởng, ai giết được Phong Long, người đó liền là tân võ lâm minh chủ, mọi người cùng hợp sức liều mạng với Phong Long!”
Lão vừa hô như vậy, mọi người lập tức đều ồn ào, rất nhiều người phụ họa theo: “Đúng là nên như vậy. Ta thấy cũng chẳng cần phải chọn, ai giết được Phong Long, chúng ta liền tôn hắn lên làm minh chủ.”
“Có thể giết được Phong Long, đương nhiên võ công cao cường nhất rồi.”
“Nếu là kẻ vô danh tiểu tốt giết được Phong Long thì sao? Minh chủ từ trước tới nay đều được đảm đương bởi người trong danh môn mà.”
“Cút mẹ đi! Phong Long cũng là con cháu của võ lâm tứ đại gia tộc đấy thôi! Có con rùa mới đi tin cái danh môn đã nuôi dưỡng ra tên cẩu tặc kia.” Lại là giọng nói the thé khó nghe ban nãy.
Bạch Thiếu Tình hơi nghiêng đầu, ánh mắt sáng lấp lánh ẩn dưới chiếc mũ rộng vành bắn thẳng về phía người có giọng nói kỳ quái kia. Người nọ dáng vẻ xấu xí, cầm trên tay một tẩu thuốc đen xì, lão vừa nói một lời, liền giành được không ít sự tán đồng của những đại hán giang hồ xuất thân không phải danh môn, đang dương dương đắc ý chắp tay gật đầu với xung quanh.
Hòe nhị ca đứng bên cạnh Bạch Thiếu Tình, thấy hắn nhìn người nọ, bèn thấp giọng nói: “Lão gọi là Can Tử, hận nhất võ lâm danh môn cao cao tại thượng, tính tình kỳ thực cũng không tồi, chỉ có điều miệng lưỡi hơi xấu một chút.”
Ánh mắt Tiểu Mạc lóe sáng, nhịn không được mở miệng nhận xét, “Nếu nói tới việc đối phó với Phong Long, ai có thể so được với Bạch đại ca? Những kẻ này chỉ dám ở đây khua môi múa mép thôi, nếu bảo bọn họ thực sự ẩn mình vào Chính Nghĩa giáo tìm Phong Long quyết đấu, chỉ e sớm đã cong đuôi chạy.” Nói xong, thần tình ngưỡng mộ nhìn Bạch Thiếu Tình.
Lúc này mọi người đã hình thành hai phe lưỡng lập, tranh chấp chuyện võ lâm danh môn.
“Lão Can Tử ngươi ít nói xàm đi! Cái gì mà có con rùa mới tin danh môn? Ta tin danh môn đây. Danh môn xuất ra bao nhiêu anh hùng hảo hán, có thể nào chỉ vì một Phong Long mà quy chụp tất cả?”
“Phong Long là người của Phong gia dương danh hiển hách, cư nhiên lại là giáo chủ tà giáo, các danh môn khác nói không chừng cũng đều là loạn thất bát tao.”
“Không thể nói như vậy được. Bạch gia cũng là võ lâm danh môn, người ta vì đối phó với tà giáo, phải bồi thượng cả tính mệnh toàn gia, mấy trăm năm cơ nghiệp bị hủy hoại chỉ trong một thoáng, đó là cỡ nào anh dũng cương liệt? Ngươi thử sờ lương tâm của chính mình xem, có làm được như vậy hay không? Bạch gia tam công tử kia bất chấp an nguy trà trộn vào Chính Nghĩa giáo, muốn lột trần chân tướng của Phong Long, còn hẹn Phong Long quyết chiến, đây không phải là việc do danh môn làm?”
Lời này vừa nói ra, liền có rất nhiều người ban đầu ở phe trung lập cũng gật đầu nói: “Đúng là như vậy. Họ Phong sai trái là lỗi của họ Phong, không thể kéo những nhà khác cùng chìm xuống được.”
“Ta từng được gặp lão gia của họ Tư Mã, quả thực là một nhân vật hảo hán.”
“Nói đến hảo hán, ta thấy ai cũng không sánh bằng Bạch gia tam công tử, cái đó gọi là đại trí đại dũng, năm xưa hắn đã phải chịu bao nhiêu ánh mắt khinh thường? Bạch lão gia vì muốn loại trừ sự cảnh giác của Phong Long, không ít lần khiến Bạch tam công tử phải chịu khổ, nghe nói trong lòng lão mặc dù cực thích đứa con này, nhưng trước mặt người khác lại luôn làm ra vẻ lạnh nhạt với hắn, không phải ngày đại lễ thì còn không cho hắn về nhà. Nếu Bạch tam công tử ở đây, Thiết kim cương Dung Tứ ta xin là người đầu tiên chọn hắn làm minh chủ!”
Tiểu Mạc lớn tiếng hô: “Nói rất phải!” Mặt mày hớn hở liếc nhìn Bạch Thiếu Tình, nhưng bị Bạch Thiếu Tình lạnh lùng liếc lại từ dưới vành mũ, lập tức thu liễm nét cười, không dám lên tiếng nữa.
“Lời này của Dung đại ca nói trúng suy nghĩ trong lòng ta. Còn ai có thể đủ tư cách hơn Bạch tam công tử, dẫn dắt chúng ta đối phó với Phong Long? Chỉ có điều từ sau khi quyết đấu với Phong Long, Bạch gia tam công tử không còn tin tức gì nữa, bảo chúng ta biết đi đâu mà tìm?”
Duệ Trí ngồi trên đài, nhìn chúng nhân nghị luận sôi nổi, ầm ĩ không ngừng, liền khẽ ho một tiếng. Công lực của lão thâm hậu, âm thầm vận nội kình, mặc dù chỉ khụ một tiếng cực nhỏ, chúng nhân lại cảm thấy trái tim như bị người gõ khẽ, âm thầm kinh ngạc. Mọi người đều nói Duệ Trí đại sư là Thiếu Lâm đệ nhất cao thủ, hôm nay được diện kiến mở rộng tầm mắt, quả nhiên không tầm thường. Mọi người đều im miệng, ánh mắt tập trung về phía Duệ Trí.
“Tứ gia Phong – Bạch – Tư Mã – Từ, từ xưa tới nay luôn là trụ cột vững vàng của võ lâm, mấy trăm năm qua, tứ đại danh môn trừ ma vệ đạo, vì tạo phúc cho võ lâm mà chết ít nhiều môn đồ, xuất ra ít nhiều anh kiệt…” Duệ Trí ngừng một chút, chắp tay niệm một tiếng Phật hiệu (a di đà Phật), thở dài nói: “Đáng tiếc thanh danh của Phong gia lại bị ô uế bởi tay Phong Long, cả nhà Bạch gia thì gặp nạn, Bạch gia tam công tử không rõ tăm tích, bốn nhà đã mất đi hai. Nhưng Tư Mã gia và Từ gia vẫn còn không ít con cháu tinh anh, lão nạp đã phát thiếp, mời hai nhà này tham gia võ lâm đại hội, cùng thương nghị đại sự.”
Nói đến đây, ánh mắt của Duệ Trí chợt rung động, nhìn về hướng xa. Quần hùng phía sau dường như có dị động, mọi người đều ào ào xoay người lại.
Trên thông đạo dẫn vào đại điện, hai hàng thị nữ nối đuôi nhau cùng đi, diện mục diễm lệ, nhưng trên mặt không mang chút ý cười, cử chỉ ưu nhã, hệt như người của nhà quan lại, chỉ có bội kiếm đeo bên hông là hiển lộ ra ít nhiều khí tức giang hồ, y phục trên người bất ngờ đều là tang phục màu trắng.
Đám thị nữ tổng cộng hai mươi tám người, lần lượt đi tới phía trước đại điện, đối diện với ánh nhìn lom lom của hơn một nghìn giang hồ hào kiệt, không chút động dung, tách ra đứng yên như đã được huấn luyện nghiêm chỉnh.
Chính chủ lúc này mới xuất hiện.
Trên thông đạo hiện ra một thân ảnh cao lớn tuấn đĩnh đang đi tới, trường sam trắng toát, khuôn mặt thanh tú, tư văn nho nhã, như một công tử thư sinh của nhà quan lại, giữa hai hàng lông mày lại mang vài phần anh khí. Mặc dù bờ môi đang khép, nhưng sự thân thiết mang trên khuôn mặt lại khiến người ta vừa nhìn liền biết, khi y cười lên đặc biệt sẽ khiến người ta cảm thấy ấm áp vui vẻ.
Mọi người thầm thán: phong thái bực này, không biết là vị danh môn công tử nào? Sao chưa từng nhìn thấy?
Mấy nàng nữ kiệt đang độ thanh xuân, chỉ cảm thấy trái tim mình đập thình thịch càng lúc càng dữ dội.
Bạch Thiếu Tình cũng chấn động toàn thân, suýt nữa bật kêu thất thanh. Không ngờ Tư Mã Phồn lại dám ngang nhiên xuất hiện ở võ lâm đại hội, thế này chỉ e Tư Mã gia và Từ gia đều đã rơi vào tay y, bị y khống chế cả rồi. Tầm nhìn hạ xuống, liền phát hiện Đồ Long kiếm mà mình đánh rơi, lúc này đang được Tư Mã Phồn đeo bên hông.
Tư Mã Phồn đi tới trước mặt chúng nhân, đầu tiên cung kính thi lễ với Duệ Trí đại sư, sau đó chắp tay hướng về phía võ lâm hào kiệt, nhẹ nhàng nói: “Tư Mã Phồn tới trễ, xin các vị lượng thứ.” Y mưu đồ chấn nhiếp quần hùng, trong âm giọng ngầm chứa kình khí, chấn động đến cả khoảng không trước điện cũng phải mơ hồ vọng lại thanh âm, như sóng cuộn từng đợt từng đợt chấn động màng tai.
Hòe nhị ca thấp giọng khen: “Danh môn đúng là danh môn, vô thanh vô tức lại xuất ra một cao thủ trẻ tuổi.”
“Tư Mã thí chủ đường xa tới đây, dọc đường cực khổ rồi.” Duệ Trí thoáng ngừng một chút, thay tất cả mọi người nói ra nghi vấn trong lòng, “Không biết vì sao thí chủ cùng các vị nữ thí chủ này đều mặc đồ trắng? Lẽ nào…” Chăm chú nhìn Tư Mã Phồn.
Tư Mã Phồn lặng im trong chốc lát, như có nỗi niềm bi phẫn vô hạn mà thở dài một tiếng, nghiến răng nghiến lợi trầm giọng đáp: “Không giết sạch đám tặc tử của Chính Nghĩa giáo, Tư Mã Phồn thề không làm người!” Trong mắt mơ hồ lóe lên lệ quang, nắm thật chặt chuôi kiếm, “Biểu huynh Tư Mã Thiên, muội phu Từ Hòa Thanh của ta, đều gặp phải độc thủ của tặc tử Chính Nghĩa giáo. Thật đáng thương cho hài nhi mới tròn ba tháng trong bụng muội muội của ta.”
Tất cả mọi người cùng ồ lên, ngay cả nét mặt già nua của Duệ Trí cũng hơi biến sắc.
Tư Mã Thiên là tộc trưởng đương nhiệm của Tư Mã gia, tuổi trẻ tài cao, võ công mưu trí đều thuộc hàng thượng thừa, Từ Hòa Thanh thì là con trai độc nhất của Từ gia, hiện giờ Chính Nghĩa giáo cư nhiên giết nốt cả hai nhân vật quan trọng nhất của hai nhà còn lại trong tứ đại danh môn.
Tư Mã Phồn rưng rưng nói: “Hôm nay Tư Mã Phồn mang cả biểu tẩu và muội muội tới, để mọi người cùng thấy tội ác tày trời của tên tặc tử Phong Long này, xin mọi người hãy tác chủ cho Tư Mã gia và Từ gia.”
Phía sau Tư Mã Phồn vang lên tiếng bước chân đều đặn, hai cỗ kiệu trắng âm trầm xuất hiện sau lưng Tư Mã Phồn, tiểu kiệu tới trước đại điện liền được đặt xuống nhẹ nhàng, gã khiêng kiệu hơi khom người hướng về phía kiệu, sau đó vô thanh vô tức lùi xuống. Mọi người trong điện đều nín thở chờ đợi, liền có một giọng nói trẻ tuổi đã khóc đến hơi khàn đi truyền ra từ cỗ kiệu bên trái, “Hiện giờ Từ gia đã không còn gì để nói về nam nhân này, xin ca ca hãy thay ta báo thù cho Hòa Thanh đi!”
Bạch Thiếu Tình nhận ra đó là giọng Tư Mã Yến – muội muội của Tư Mã Phồn. Nàng bây giờ là góa phụ của Từ Hòa Thanh, lại mang trong mình cốt nhục của Từ Hòa Thanh, hiển nhiên trở thành tộc trưởng của Từ gia, có sự cho phép của nàng, Tư Mã Phồn khống chế Từ gia thật dễ như trở bàn tay.
Tư Mã Phồn dịu dàng nói: “Yến Nhi đừng thương tâm, ca ca có phải liều mạng cũng quyết lấy mạng Phong Long cho ngươi.” Đi tới đằng trước một cỗ kiệu trắng khác, cúi người gần sát mặt đất, mười phần cung kính nói khẽ: “Biểu tẩu, hiện giờ Duệ Trí đại sư và võ lâm đồng đạo đều ở đây, bây giờ Đa Tình Lâm là do biểu tẩu cai quản, nên làm thế nào, xin biểu tẩu hãy nói một câu đi!” Người trong kiệu hiển nhiên là góa phụ của Tư Mã Thiên.
Tư Mã phu nhân kia dường như không muốn nói nhiều trước mặt mọi người, đám đông rướn cổ chờ đợi suốt một hồi lâu, từ sau tấm màn kiệu mới chầm chậm duỗi ra một cánh tay cực đẹp, nhẹ nhàng làm động tác ra hiệu. Một nam hài khoảng chừng bảy tám tuổi, anh khí bừng bừng, diện mục thanh tú, nãy giờ vẫn đứng cạnh kiệu lúc này liền chui vào trong kiệu, lát sau lại chui ra, nói với Tư Mã Phồn: “Nương nói mọi việc đều dựa vào biểu thúc.” Tuổi tác tuy nhỏ, nhưng thần thái khi nói chuyện lại phi thường trầm ổn, lúc này mọi người mới biết đó là nhi tử của Tư Mã Thiên.
Bạch Thiếu Tình nhíu mày, Tư Mã Phồn tập hợp được thế lực của lưỡng đại gia tộc, chỉ cần lựa chọn một thời cơ thích hợp là đủ để lợi dụng tất cả võ lâm đồng đạo có mặt ở đây, hại Phong Long vào chỗ chết, sau đó trèo lên bảo tọa của võ lâm minh chủ.
Đương nhiên, vị trí giáo chủ Chính Nghĩa giáo cũng sẽ là của y.
Hiểu Kiệt nói nhỏ với Tiểu Mạc: “Bàn tay của Tư Mã phu nhân vừa nhỏ vừa trắng, nhất định là trẻ trung mỹ mạo, thực không nhìn ra nàng lại có một nhi tử lớn như vậy.” Nữ nhân đúng là nữ nhân, lúc này mà còn đi lo nghĩ được chuyện tay người ta có trắng hay không.
Sau khi Tư Mã Phồn hoàn thành việc xác lập địa vị của mình trước mặt mọi người, khóe môi lại dật ra một tia tiếu ý không khiến người ta chú ý, giả bộ khiêm tốn nhìn về phía Duệ Trí, “Việc lấy mạng Phong Long, xin được nghe theo toàn bộ sự sai bảo của đại sư.” Trong mắt ngầm ẩn tinh quang, đảo nhìn một vòng xung quanh điện, lại nói: “Tư Mã Phồn nguyện dốc tẫn sức lực nhỏ bé, trừ khử thứ ung nhọt này vì võ lâm của chúng ta, trước hết xin được dâng lên một món lễ mọn, bày tỏ tấm lòng của ta.” Y giơ tay lên giữa không trung, vỗ nhẹ một tiếng giòn vang.
Có gã thị tòng dáng người bậc trung đi tới từ phía sau, hai tay nâng một khay bạc, bên trên đặt một chiếc hộp làm từ gỗ đàn hương. Gã thị tòng tự quay người về phía đám đông, khom lưng hành lễ, rồi lại nhìn về phía Tư Mã Phồn. Tư Mã Phồn khẽ gật đầu, một gã thị tòng khác tiến lên mở hộp gỗ ra, một mùi huyết tinh nhàn nhạt lan tỏa.
Mọi người tập trung nhìn vào, thấy trong hộp đặt ngay ngắn một cái đầu người, hẳn là đã dùng biện pháp chống phân hủy đặc biệt, mặt mũi trông vẫn rất sống động, hai mắt trợn trừng, thần sắc không dám tin.
Gã thị tòng nâng khay bằng hai tay, đi một vòng trước mặt mọi người, lúc này Tư Mã Phồn mới chậm rãi nói: “Đây là phó giáo chủ của Chính Nghĩa giáo, Hướng Lãnh Hồng. Kẻ này tâm ngoan thủ lạt không kém gì Phong Long, không ít võ lâm đồng đạo đã phải táng thân dưới Triền Miên Chưởng của hắn. Tại hạ tình cờ biết được tung tích về hắn, truy đuổi tới tận sào huyệt của tên tặc tử này, tốn một phen công phu, cuối cùng cũng đòi lại được một chút công đạo cho các vị bằng hữu từng phải chịu thiệt dưới tay hắn.”
Hướng Lãnh Hồng là nhân vật đứng thứ hai chỉ sau Phong Long trong Chính Nghĩa giáo, hoành hành võ lâm đã nhiều năm, ỷ vào công phu cường ngạnh trong tay và uy thế của Chính Nghĩa giáo, cơ hồ không ai có thể làm gì được hắn. Hôm nay lại bị một công tử trẻ tuổi vô tiếng vô tăm xách đầu đến, toàn điện lập tức chấn động, ánh mắt kinh ngạc cùng bội phục tập trung hết lên người Tư Mã Phồn.
Bạch Thiếu Tình thầm kêu gay go. Nếu không phải đã hoàn toàn nắm được lực lượng của Hướng Lãnh Hồng trong Chính Nghĩa giáo, Tư Mã Phồn tuyệt đối sẽ không giết Hướng Lãnh Hồng. Bất quá chỉ trong khoảng thời gian một nén hương ngắn ngủi, Tư Mã Phồn đã thể hiện ra ngón nghề khiến người khác phải kiêng nể.
Duệ Trí liếc nhìn cái đầu của Hướng Lãnh Hồng, lộ vẻ xúc động nói: “Tà giáo hung hăng ngang ngược, thí chủ dũng cảm đứng ra, đáng phục đáng kính. Chuyện ngày hôm nay, vẫn nên thỉnh Tư Mã thí chủ đứng ra chủ trì thì tốt hơn.”
“Tư Mã Phồn không dám. Chỉ là…”
“Chỉ là thế nào?”
“Chính Nghĩa giáo làm hại võ lâm đã nhiều năm, có rất nhiều cao thủ, giáo đồ đa phần lại ẩn núp trong bóng tối, muốn thanh trừng toàn bộ, cần phải có sự sắp xếp kỹ càng tỉ mỉ. Hiện giờ đồng đạo tuy nhiều, nhưng chuyện thương nghị lại lộn xộn lung tung, mặc dù đã quyết định chủ ý. Tư Mã Phồn cả gan đề nghị, thỉnh các vị bằng hữu chọn ra vài người có lòng dũng cảm và mưu trí, lập thành một Đồ Long tiểu tổ, chế định sách lược. Chỉ cần là chủ ý do Đồ Long tiểu tổ thương định ra, mọi người đều phải tuân theo, Tư Mã Phồn ta sẽ là người đầu tiên cam nguyện chịu sai sử.”
Bạch Thiếu Tình thoáng cong môi lên, dật ra một tia cười lạnh.
Quả nhiên, chúng nhân đều sôi nổi gật đầu, tán đồng nói: “Đúng là nên có một nhóm quyết định. Nếu chỉ dựa vào quyết định của một người, chỉ e lại là một Phong Long khác, mấy người cùng nhau thương nghị sẽ tốt hơn nhiều.”
Lão Can Tử giơ tẩu thuốc lên khua khua giữa không trung, dùng giọng nói đặc biệt kỳ quái của lão để hô: “Duệ Trí đại sư nên tính là một chân.”
Mọi người ào ào nói: “Cái đó là đương nhiên!”
“Vị Tư Mã công tử này cũng tính một chân.”
Tư Mã Phồn liên miệng đáp: “Không dám nhận, không dám nhận.” Chắp tay hướng về phía hào kiệt tứ phương nói một hồi những lời khiêm tốn, sau đó lại chắp tay ra sau lưng, nhìn khắp xung quanh sinh huy, nhất phái thoát tục.
Mọi người lời qua tiếng lại, đều sôi nổi đề cử người được chọn, đến cuối cùng bầu ra được bốn vị.
“Duệ Trí đại sư của Thiếu Lâm tự, Tư Mã Phồn công tử của Đa Tình Lâm, Thiên Cực đạo trưởng của Võ Đang, Phương chưởng môn Phương Mục Sinh của Hoa Sơn, cả bốn vị đều là người đức cao vọng trọng trong võ lâm, các vị bằng hữu có dị nghị gì không?”
“Không có! Không có!”
“Lão nhân có một chút!” Lão Can Tử lại giơ tẩu thuốc lên khua khoắng giữa không trung.
Người ngoài sốt ruột nói: “Lại là ngươi.”
“Rõ ràng là các người hỏi có dị nghị gì không.” Lão Can Tử thủng thẳng nhóm tẩu thuốc, con ngươi liếc xéo Tư Mã Phồn, “Vị Tư Mã công tử này, lại hoàn toàn không phải đức cao vọng trọng, lão Can Tử ta đến hôm nay mới biết còn có nhân vật này đấy!”
Duệ Trí sau khi niệm một tiếng Phật hiệu mới nói: “Tư Mã thí chủ mặc dù còn trẻ, nhưng cũng là người đại biểu cho Từ gia và Tư Mã gia Đa Tình Lâm. Vả lại, ai có thể hạ kiếm giết được Hướng Lãnh Hồng mà không bị thương? Chính bởi vậy…”
Lão Can Tử phun ra một hơi thuốc, gật đầu nói: “Rồi rồi rồi, ta cũng đâu có bảo hắn không xứng, chỉ là nói thế thôi.” Mọi người thấy lão vạch lá tìm sâu, đều lộ ra ánh mắt khinh thường. Lão Can Tử lại làm như không nhìn thấy, chỉ nói lời mà mình muốn nói. “Thế nhưng còn một vấn đề nữa. Nếu đã chọn ra Đồ Long tiểu tổ, vậy mọi người cũng phải lập ra một ước định, từ nay về sau hành sự đều phải nhất nhất tuân theo sự chỉ thị của bốn vị này, bằng không lỡ có người sợ chết trái lệnh, hoặc ngấm ngầm thông đồng cùng tà giáo, vậy biết phải làm sao?”
Bạch Thiếu Tình vô thanh vô tức lùi về phía sau Tiểu Mạc, dùng đầu ngón tay viết viết mấy chữ xuống lòng bàn tay Tiểu Mạc. Chưởng môn Phương Mục Sinh của Hoa Sơn phái trầm ngâm nói: “Lời này cũng có lý vài phần. Chính Nghĩa giáo hoành hành võ lâm nhiều năm, tai mắt nằm vùng cực nhiều, muốn diệt trừ tà giáo, hẳn là nên lập một chút quy tắc mới phải.”
Lão Can Tử dương dương đắc ý nhìn Tư Mã Phồn, “Tư Mã công tử, ngươi là anh tài mới của võ lâm, phía sau còn có hai đại danh môn chống lưng nữa! Chẳng bằng thử nói một chút quy tắc, chỉ giáo lão Can Tử ta xem.”
Tư Mã Phồn không mất tự nhiên chút nào, thoải mái mỉm cười với lão Can Tử, không nhanh không chậm đáp: “Chỉ giáo thì thật không dám. Về phần quy tắc…” Hơi ngừng lại một chút, thong thả kể ra, “Thứ nhất, bốn thành viên của Đồ Long tiểu tổ đã được mọi người cùng bầu ra, ai có dị nghị, giờ phút này hãy nói ra luôn, tương lai không ai được phép nghi ngờ tư cách của bốn người ấy. Phồn vốn không đủ tự tin gánh vác trọng trách này, bất quá đã là vì võ lâm mà xuất lực, Phồn không dám chối từ.”
Ai cũng nhận ra chính vì chuyện ban nãy nên y mới phản lại lão Can Tử một câu này, lại thấy y vẫn ôn hòa nhã nhặn, chẳng hề có chút giận dữ, đều âm thầm ngợi khen.
“Thứ hai, các nơi một khi đã có tin tức của Phong Long, lập tức phải truyền lên. Thứ ba, việc mà Đồ Long tiểu tổ thương nghị chính là cơ mật, những người khác không được lén lút dò la.” Quần hùng nghe xong điểm này, đều có phần mất tự nhiên, Tư Mã Phồn lại chầm chậm nói: “Tai mắt của Phong Long rất nhiều, khó mà đảm bảo trong chúng ta không có gián điệp của hắn. Nếu kế hoạch của chúng ta mà truyền ra ngoài, sớm bị Phong Long biết được, vậy còn đồ long thế nào nữa?” Mọi người thấy y nói cũng có lý, đều sôi nổi gật đầu.
“Tên cẩu nào dám mật báo, ta liền một rìu băm nát hắn!”
“Nên bảo mật vẫn hơn.”
“Tư Mã công tử suy nghĩ thật chu đáo.”
“Thứ tư, phàm là mệnh lệnh của Đồ Long tiểu tổ, có duyên biết được, quyết không từ. Ai thông đồng với địch nhân, thì chính là kẻ thù chung của võ lâm chúng ta. Nếu không như vậy, khó mà thống nhất được võ lâm trên dưới một lòng, sớm ngày diệt trừ tà giáo.”
Vừa dứt lời, một tiếng cười chế nhạo sang sảng lại có đôi phần trẻ măng vang lên, “Khẩu khí thật lớn! Xem ra các ngươi không phải muốn đồ long, mà là muốn làm võ lâm minh chủ. Một ngày nào đó nếu Tư Mã công tử hạ lệnh muốn Tiêu gia ta phải tự vẫn hết, có phải ta và phụ mẫu cũng phải chấp hành theo?” Trên gương mặt anh tuấn của Tiểu Mạc mang một nụ cười xán lạn như mặt trời, hắn chắp tay với những ánh mắt đang tập trung về phía mình, cất cao giọng nói: “Thái Hồ Tiêu Mạc, bái kiến các vị tiền bối.” Lại quay về phía Tư Mã Phồn, dùng âm giọng mà tất cả mọi người trong điện đều có thể nghe được để nói: “Tư Mã công tử, điều lệ thứ tư mà ngươi vừa nói cũng có đạo lý, thế nhưng còn thiếu mất một điều.”
Tư Mã Phồn không cho là đúng, hỏi: “Thiếu mất điều gì?”
“Thứ năm, Đồ Long tiểu tổ chỉ quản được việc về Phong Long và Chính Nghĩa giáo, không thể chen tay vào việc nhà của các môn phái khác, cũng không thể sai sử chúng ta đi làm những việc không liên quan tới diệt trừ Chính Nghĩa giáo.”
Mọi người ầm ầm kêu lên: “Đúng thế thật. Tiểu oa nhi này cũng có chút kiến thức.”
Bạch Thiếu Tình cúi thấp đầu, đội mũ rộng vành có rủ hắc sa (3), đứng phía sau người có liên quan, che giấu thân mình.
Tiểu Mạc cười càng thêm vui vẻ, lộ ra hàm răng trắng bóc, nháy nháy mắt với Hiểu Kiệt bên cạnh. Chỉ chốc lát sau lại ngẩng đầu nói: “Ôi chao! Không chỉ thiếu một điều, còn có điều thứ sáu nữa.”
“Điều thứ sáu lại là cái gì?”
“Tiểu oa nhi, nói thử nghe nào.”
“Đồ Long tiểu tổ chỉ có bốn người, vạn nhất tương lai nổi lên tranh cãi, hai người chống lại hai người, vậy biết nghe theo chủ ý của ai mới tốt đây? Theo ta, điều thứ sáu chính là, Đồ Long tiểu tổ phải chọn ra thêm một vị thứ năm.”
Phần lớn giang hồ hào kiệt đều thích xem náo nhiệt, thấy một tên nhóc trẻ tuổi như vậy mà dám khiêu chiến với Tư Mã Phồn của Đa Tình Lâm, đều cảm thấy hứng thú, ồn ào nghị luận: “Nói rất đúng. Đã có bốn người, còn thiếu một người nữa!”
“Ta đề cử Thiện Âm lão sư thái của Nga Mi!”
“Ta đề cử chưởng môn của Vô Song môn.”
“Chưởng môn của Vô Song là đôi huynh đệ song sinh Vô Công, Vô Đức. Là hai người mất rồi, vị trí chỉ có một thôi.”
“Bọn họ là hai huynh đệ, cân không rời cán*, cứ xem như một là được rồi.”
(*dùng để hình dung hai người có quan hệ mật thiết, không tách rời nhau)
Quần hùng bật cười ha hả, trong điện ồn ào nhốn nháo. Tư Mã Phồn nghiến răng khẽ cười, cất lời hỏi Tiểu Mạc: “Tiêu gia huynh đệ nếu đã đề xuất điểm này, trong lòng nhất định đã có người đề cử chứ!”
Tiểu Mạc gật đầu, “Chính thế.”
Tư Mã Phồn hỏi: “Là Tiêu môn chủ?”
Tiểu Mạc làm mặt quỷ, “Không phải, không phải, Đồ Long tiểu tổ đã có ba vị tiền bối đức cao vọng trọng trong võ lâm rồi, nên chọn một người trẻ tuổi giàu sức sống mới tốt.”
Tư Mã Phồn bật cười, “Vị mà Tiêu huynh đệ đang nói lẽ nào là chính mình?”
“Không phải, không phải!” Tiểu Mạc bỗng nhiên sửa khuôn mặt cười đùa lúc đầu thành nghiêm trang, trịnh trọng nói: “Người này, thiên hạ kính ngưỡng, luận về việc đồ long chân chính, tuyệt đối không ai thích hợp hơn hắn.”
Tất cả mọi người đều cảm thấy hắn hơi khoa trương, không khỏi duỗi cổ chờ đợi hắn nói ra một cái tên. Nhưng Tiểu Mạc lại không mở miệng nữa, bước sang ngang hai bước, để lộ vị trí phía sau, một thân ảnh cao lớn hiện ra.
Tư Mã Phồn khẽ chấn động.
Ngón tay thon dài trắng nõn hơi hướng lên một chút, vén mở chiếc mũ rộng vành, Bạch Thiếu Tình mâu quang sáng ngời, khóe môi hàm cười, trên thắt lưng buộc dây đai màu xanh lam, cũng không phối kiếm, chỉ cắm một cây quạt giấy, hay cho một vị công tử phong thái phiên phiên.
“Bạch gia tam tử Bạch Thiếu Tình, nguyện vì võ lâm dốc tẫn một hồi sức lực.” Hắn nghênh phong mà đứng, đôi mắt như hắc thủy ngân nhẹ nhàng lưu chuyển khắp đám đông, nhìn đến khiến lòng người phải run rẩy, như dây đàn trong lòng bỗng nhiên bị người gảy một cái, toàn tràng đều sợ hãi đến tĩnh lặng.
Hiểu Kiệt ho khụ một tiếng, nói với Duệ Trí: “Đại sư, vị Bạch công tử này chính là đại anh hùng năm đó đã lẻn vào Chính Nghĩa giáo vạch trần thân phận của Phong Long. Các ngươi muốn đồ long, hẳn là nên tính cho hắn một chân mới phải!”
Mọi người lúc này mới phục hồi tinh thần.
“Ha! Quả thật chỉ có hắn mới đủ tư cách nhất.”
“Thế nào lại không biết hắn đã lên núi?”
“Bạch công tử người ta là thần long kiến thủ bất kiến vĩ, tung tích có thể để ngươi biết được sao?”
“Tương đồn Bạch công tử là mỹ nam đệ nhất võ lâm, quả nhiên danh bất hư truyền.”
Tư Mã Phồn thần sắc phức tạp đăm đăm nhìn Bạch Thiếu Tình hồi lâu, gợi lên một nụ cười khẽ, bước nhanh tới trước mặt Bạch Thiếu Tình, cúi người nói: “Cư nhiên là Bạch huynh. Tư Mã Phồn ngưỡng mộ uy danh của Bạch huynh đã lâu, hôm nay cuối cùng cũng được diện kiến, thực sự là thống khoái.” Thay lên mặt một bộ thần thái vui mừng hoan hỉ, y nắm lấy tay Bạch Thiếu Tình kéo tới trước mặt Duệ Trí đại sư, nghiêm cẩn nói: “Đại sư, người thứ năm được lựa chọn nhất định phải là Bạch huynh. Bằng không, Tư Mã Phồn liền không có mặt mũi nào tham gia Đồ Long tiểu tổ.”
Việc này lại càng không có ai dị nghị, nhất tề ầm ầm khen ngợi, lão Can Tử cầm tẩu thuốc gõ loạn xạ một hồi lên mặt đất lát đá, dập tắt lửa, quái thanh gào lên: “Đã chọn xong người rồi, bây giờ chúng ta chỉ cần chờ nghe chủ ý của Đồ Long tiểu tổ là được. Cái ngày thằng nhãi Phong Long phải té dập mặt không còn xa nữa đâu!”
Lập tức quần hùng bạo phát ra một hồi âm thanh phụ họa.
Náo loạn nửa ngày, đã gần đến trưa, đám tăng lữ bưng cơm chạy vào. Mọi người sau khi lang thôn hổ yết càn quét hết sạch, liền thi nhau gặng hỏi Bạch Thiếu Tình chuyện hắn lẻn vào Chính Nghĩa giáo năm đó.
Bạch Thiếu Tình sớm đã nghĩ sẵn trong đầu, ngay cả những chi tiết rất nhỏ cũng đã cân nhắc qua vô số lần, thong dong điềm tĩnh đem lời nói dối lặp lại một lượt, nhịp nhàng ăn khớp, cư nhiên khiến người ta không thể tìm ra một chút lỗ hổng. Tiểu Mạc đứng ở một bên, vừa ngưỡng mộ vừa tự hào, thỉnh thoảng xen miệng vào: “Chính là như vậy! Vách núi kia hiểm trở vô cùng, lúc Bạch công tử ngã xuống cũng may thần trí chưa mất, gắng gượng duỗi tay ra, nắm được một gốc cây già mọc xiên trên vách đá. Ài, các ngươi chưa từng tận mắt nhìn thấy, đều không biết đó là nguy hiểm cỡ nào đâu.” Kỳ thực hắn nào đã được nhìn thấy.
“Hai vị đều là danh môn tân tú, một người dám cùng Phong Long quyết đấu, một người có thể lấy đầu Hướng Lãnh Hồng.”
Bạch Thiếu Tình liếc nhìn Tư Mã Phồn một cái, vừa khéo Tư Mã Phồn cũng đang nhướng mày nhìn về phía mình, ánh mắt hai người giao nhau, như lóe tinh quang.
Thuật lại sự tình một lượt, trả lời rất nhiều vấn đề, sắc trời dần tối. Bạch Thiếu Tình vận công bức ra nét mặt nhợt nhạt, đứng dậy mang theo ý áy náy nói: “Nội thương chưa khỏi, Thiếu Tình phải về tĩnh tọa rồi, xin thứ cho Thiếu Tình không phụng bồi được nữa.” Hắn chắp tay một cái.
Mọi người thấy sắc mặt Bạch Thiếu Tình tái nhợt, đều biết hắn bị Phong Long đả thương nghiêm trọng, không dám giữ lại thêm.
Duệ Trí đại sư nói: “Sáng sớm ngày mai, Đồ Long tiểu tổ mở họp thương nghị.”
“Rõ rồi.”
__Hết chương 1 – Quyển hạ__
(1) Trong tiếng Trung, từ 他 nghĩa là “anh ấy”, từ 她 nghĩa là “cô ấy”. Cách viết khác nhau nhưng cách đọc thì giống nhau, đều phát âm là “tā”. Cái này bạn nào từng học tiếng Trung chắc cũng không còn lạ lẫm gì nữa ^^
Bởi vậy ở đây, mặc dù Bạch Thiếu Tình và Tiểu Mạc vẫn gọi Hiểu Kiệt là 她 (tức “nàng”), nhưng nếu chỉ nói không thôi thì sẽ không lộ ra chuyện Hiểu Kiệt là nữ phẫn nam ^^
(2) cái tẩu thuốc của lão Can Tử nó như vầy nè ^^
Lão thường xuyên cầm tẩu thuốc khua khoắng nên mới gọi là lão Can Tử (“can” ở đây chính là cái cần tre dài dài của tẩu thuốc đó)
(3) mũ mà Thiếu Tình đội nó là như vầy nè: xung quanh mũ có phần hiên rộng, dưới hiên may một lớp tơ lụa mỏng rủ xuống, thông thường dùng hắc sa để chế thành, dài tới phần gáy, dùng để che mặt.
May 14, 2014@ 10:52:36
Phong ca xuất hiện chớp nhoáng r lại đi :(((
Trả lời
May 14, 2014@ 18:30:17
Uh ảnh cứ thoắt ẩn thoắt hiện ý :'(
Trả lời
May 10, 2016@ 01:45:02
Cái danh môn chính phái này nhọ kinh, một lần chọn minh chủ lại là giáo chủ tà giáo, lần 2 chọn thì chọn phải đồ đệ kiêm tâm can bảo bối của giáo chủ tà giáo, max nhọ luôn
Trả lời

Link: <http://wp.me/p1u0h6-Ry>; rel=shortlink


markdown:
** Giờ mở cửa: 06:30 AM - 10:30 PM ( 30 khách)**
**Giá: 15,000 - 50,000 đ ** **Thời gian hoạt động**
Buổi sáng
Buổi tối
Buổi trưa
Buổi xế
**Mục đích**
Giao tận nơi - Mang về
Hẹn hò - Mua sắm
Hội thảo - Họp nhóm
**Ẩm thực**
Miền Nam
**Nổi bật**
Cafe, Kem
Sinh tố - Nước ép
**Tiện ích**
Cho mua về
Có bàn ngoài trời
Có Internet Wifi
Giữ xe máy miễn phí
##### Pavilion The Garden Cafe
- Không gian thoáng mát, lịch sự.
- Với menu đồ uống đa dạng, pha chế thơm ngon.
- Phục vụ nhanh nhẹn, chu đáo với khách hàng.

X-Powered-By-Plesk: PleskWin


markdown:
Thành công là khi bạn đứng dậy nhiều hơn số lần vấp ngã. (Success is falling nine times and getting up ten.)Jon Bon Jovi
Cơ học lượng tử cho biết rằng không một đối tượng quan sát nào không chịu ảnh hưởng bởi người quan sát. Từ góc độ khoa học, điều này hàm chứa một tri kiến lớn lao và có tác động mạnh mẽ. Nó có nghĩa là mỗi người luôn nhận thức một chân lý khác biệt, bởi mỗi người tự tạo ra những gì họ nhận thức. (Quantum physics tells us that nothing that is observed is unaffected by the observer. That statement, from science, holds an enormous and powerful insight. It means that everyone sees a different truth, because everyone is creating what they see.)Neale Donald Walsch
Bạn sẽ không bao giờ hạnh phúc nếu cứ mãi đi tìm những yếu tố cấu thành hạnh phúc. (You will never be happy if you continue to search for what happiness consists of. )Albert Camus
Với kẻ kiên trì thì không có gì là khó, như dòng nước chảy mãi cũng làm mòn tảng đá.Kinh Lời dạy cuối cùng
Nếu không yêu thương chính mình, bạn không thể yêu thương người khác. Nếu bạn không có từ bi đối với mình, bạn không thể phát triển lòng từ bi đối với người khác.Đức Đạt-lai Lạt-ma XIV
Chiến thắng hàng ngàn quân địch cũng không bằng tự thắng được mình. Kinh Pháp cú
Muôn việc thiện chưa đủ, một việc ác đã quá thừa.Tủ sách Rộng Mở Tâm Hồn
Người hiền lìa bỏ không bàn đến những điều tham dục.Kẻ trí không còn niệm mừng lo, nên chẳng bị lay động vì sự khổ hay vui.Kinh Pháp cú (Kệ số 83)
Nghệ thuật sống chân chính là ý thức được giá trị quý báu của đời sống trong từng khoảnh khắc tươi đẹp của cuộc đời.Tủ sách Rộng Mở Tâm Hồn
Chúng ta không có khả năng giúp đỡ tất cả mọi người, nhưng mỗi người trong chúng ta đều có thể giúp đỡ một ai đó. (We can't help everyone, but everyone can help someone.)Ronald Reagan
Người trí dù khoảnh khắc kề cận bậc hiền minh, cũng hiểu ngay lý pháp, như lưỡi nếm vị canh.Kinh Pháp Cú - Kệ số 65
[Trang chủ](Home.html) »»
[Danh mục](danh-muc_thu-vien_tongquat_rong-mo-tam-hon.html) »»
[Từ điển đa ngôn ngữ Hán Anh Việt Pháp](tu-dien_da-ngon-ngu_none_rong-mo-tam-hon.html) »»
Đang xem mục từ: fbi »»
**Hiện đang có tổng cộng
354.286 mục từ.
**
*viết tắt
- Cục điều tra liên bang của Mỹ (Federal Bureau of Investigation)
Chọn từ điển để xem theo vần A, B, C...
Để giới hạn kết quả tìm kiếm chính xác hơn, quý vị có thể nhập 2 hoặc 3 chữ cái đầu vần. Ví dụ, để tìm những chữ như thiền, thiện... quý vị nên nhập
**thi** thay vì **t**... sẽ cho một kết quả gần với yêu cầu của quý vị hơn.
**Quý vị đang truy cập từ IP 54.211.179.232 và chưa ghi danh hoặc đăng nhập trên máy tính này. **Nếu là thành viên, quý vị chỉ cần đăng nhập một lần duy nhất trên thiết bị truy cập, bằng email và mật khẩu đã chọn.
Chúng tôi khuyến khích việc
**ghi danh thành viên **để thuận tiện trong việc chia sẻ thông tin, chia sẻ kinh nghiệm sống giữa các thành viên, đồng thời quý vị cũng sẽ nhận được sự hỗ trợ kỹ thuật từ Ban Quản Trị trong quá trình sử dụng website này.
** Việc ghi danh là hoàn toàn miễn phí và tự nguyện**.
Ghi danh hoặc đăng nhập


markdown:
Sự vắng mặt của yêu thương chính là điều kiện cần thiết cho sự hình thành của những tính xấu như giận hờn, ganh tỵ, tham lam, ích kỷ...Tủ sách Rộng Mở Tâm Hồn
Sự vắng mặt của yêu thương chính là điều kiện cần thiết cho sự hình thành của những tính xấu như giận hờn, ganh tỵ, tham lam, ích kỷ...Tủ sách Rộng Mở Tâm Hồn
Người ta vì ái dục sinh ra lo nghĩ; vì lo nghĩ sinh ra sợ sệt. Nếu lìa khỏi ái dục thì còn chi phải lo, còn chi phải sợ?Kinh Bốn mươi hai chương
Một người sáng tạo được thôi thúc bởi khát khao đạt đến thành công, không phải bởi mong muốn đánh bại người khác. (A creative man is motivated by the desire to achieve, not by the desire to beat others.)Ayn Rand
Học vấn của một người là những gì còn lại sau khi đã quên đi những gì được học ở trường lớp. (Education is what remains after one has forgotten what one has learned in school.)Albert Einstein
Hương hoa thơm chỉ bay theo chiều gió, tiếng thơm của người hiền lan tỏa khắp nơi nơi. Kinh Pháp cú (Kệ số 54)
Quy luật của cuộc sống là luôn thay đổi. Những ai chỉ mãi nhìn về quá khứ hay bám víu vào hiện tại chắc chắn sẽ bỏ lỡ tương lai. (Change is the law of life. And those who look only to the past or present are certain to miss the future.)John F. Kennedy
Điều quan trọng không phải vị trí ta đang đứng mà là ở hướng ta đang đi.Sưu tầm
Kẻ yếu ớt không bao giờ có thể tha thứ. Tha thứ là phẩm chất của người mạnh mẽ. (The weak can never forgive. Forgiveness is the attribute of the strong.)Mahatma Gandhi
Sống trong đời cũng giống như việc đi xe đạp. Để giữ được thăng bằng bạn phải luôn đi tới. (Life is like riding a bicycle. To keep your balance you must keep moving. )Albert Einstein
Cho dù không ai có thể quay lại quá khứ để khởi sự khác hơn, nhưng bất cứ ai cũng có thể bắt đầu từ hôm nay để tạo ra một kết cuộc hoàn toàn mới. (Though no one can go back and make a brand new start, anyone can start from now and make a brand new ending. )Carl Bard
[Trang chủ](Home.html) »»
[Danh mục](danh-muc_thu-vien_tongquat_rong-mo-tam-hon.html) »»
[Đại từ điển Hán Việt](tu-dien_han-viet_none_rong-mo-tam-hon.html) »»
Đang xem mục từ: hiệu/kiểu - 皎 »»
**Chú ý**: Nếu quý vị copy chữ Hán dán (paste) vào đây để tra thì kết quả sẽ chính xác hơn rất nhiều.
Quý vị cũng có thể bôi đen (select) những chữ Hán đã hiển thị trên màn hình rồi dùng chuột kéo thả vào khung để tra.
① Sáng, sáng sủa: 皎月 Trăng sáng; ② Trong trắng, sạch. (
*Từ điển Trần Văn Chánh*) **Quý vị đang truy cập từ IP 54.211.179.232 và chưa ghi danh hoặc đăng nhập trên máy tính này. **Nếu là thành viên, quý vị chỉ cần đăng nhập một lần duy nhất trên thiết bị truy cập, bằng email và mật khẩu đã chọn.
Chúng tôi khuyến khích việc
**ghi danh thành viên **để thuận tiện trong việc chia sẻ thông tin, chia sẻ kinh nghiệm sống giữa các thành viên, đồng thời quý vị cũng sẽ nhận được sự hỗ trợ kỹ thuật từ Ban Quản Trị trong quá trình sử dụng website này.
** Việc ghi danh là hoàn toàn miễn phí và tự nguyện**.
Ghi danh hoặc đăng nhập


markdown:
Người nhiều lòng tham giống như cầm đuốc đi ngược gió, thế nào cũng bị lửa táp vào tay. Kinh Bốn mươi hai chương
Khó thay được làm người, khó thay được sống còn. Khó thay nghe diệu pháp, khó thay Phật ra đời!Kinh Pháp Cú (Kệ số 182)
Người biết xấu hổ thì mới làm được điều lành. Kẻ không biết xấu hổ chẳng khác chi loài cầm thú.Kinh Lời dạy cuối cùng
Ðêm dài cho kẻ thức, đường dài cho kẻ mệt, luân hồi dài, kẻ ngu, không biết chơn diệu pháp.Kinh Pháp cú (Kệ số 60)
Nếu người nói nhiều kinh, không hành trì, phóng dật; như kẻ chăn bò người, không phần Sa-môn hạnh.Kinh Pháp cú (Kệ số 19)
Kẻ hung dữ hại người cũng như ngửa mặt lên trời mà phun nước bọt. Nước bọt ấy chẳng lên đến trời, lại rơi xuống chính mình.Kinh Bốn mươi hai chương
Nay vui, đời sau vui, làm phước, hai đời vui.Kinh Pháp Cú (Kệ số 16)
Kẻ làm điều ác là tự chuốc lấy việc dữ cho mình.Kinh Bốn mươi hai chương
Như ngôi nhà khéo lợp, mưa không xâm nhập vào. Cũng vậy tâm khéo tu, tham dục không xâm nhập.Kinh Pháp cú (Kệ số 14)
Nên biết rằng tâm nóng giận còn hơn cả lửa dữ, phải thường phòng hộ không để cho nhập vào. Giặc cướp công đức không gì hơn tâm nóng giận.Kinh Lời dạy cuối cùng
Không nên nhìn lỗi người, người làm hay không làm.Nên nhìn tự chính mình, có làm hay không làm.Kinh Pháp cú (Kệ số 50)
[Trang chủ](Home.html) »»
[Kinh Bắc truyền](kinh-bac-truyen_hien-thi_none_0.html?welcome=welcome) »»
Bản khắc gỗ Vĩnh Lạc Bắc tạng Thập Địa Kinh Luận [十地經論] »»
Bấm
[ vào đây](?PDF) để xem và tải dạng PDF. **Quý vị đang truy cập từ IP 54.211.179.232 và chưa ghi danh hoặc đăng nhập trên máy tính này. **Nếu là thành viên, quý vị chỉ cần đăng nhập một lần duy nhất trên thiết bị truy cập, bằng email và mật khẩu đã chọn.
Chúng tôi khuyến khích việc
**ghi danh thành viên **để thuận tiện trong việc chia sẻ thông tin, chia sẻ kinh nghiệm sống giữa các thành viên, đồng thời quý vị cũng sẽ nhận được sự hỗ trợ kỹ thuật từ Ban Quản Trị trong quá trình sử dụng website này.
** Việc ghi danh là hoàn toàn miễn phí và tự nguyện**.
Ghi danh hoặc đăng nhập