markdown:
Tải bản đầy đủ
Thạc sĩ - Cao học
Khoa học tự nhiên
Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật PCR trong chẩn đoán viêm âm đạo, cổ tử cung do chlamydia trachomatis tại bệnh viện đại học y thái bình
MỞ ĐẦU
Hiện nay, một trong các vấn đề nóng bỏng về chăm sóc sức khỏe sinh sản mà
các nước trên thế giới đang đối mặt là bệnh lây truyền qua đường tình dục. Viêm
đường sinh dục do Chlamydia trachomatis được coi là bệnh lây truyền qua đường tình
dục đứng đầu trên thế giới. Nhiễm Chlamydia trachomatis thường gây viêm niệu đạo,
viêm cổ tử cung. Tuy nhiên nếu không điều trị có thể dẫn đến các biến chứng như
viêm phần phụ, đau vùng chậu mãn tính, thai ngoài tử cung, vô sinh do tổn thương ống
dẫn trứng, viêm mào tinh đòi hỏi phải chăm sóc y tế với phí tổn cao.
Tổ chức Y tế thế giới ước tính hàng năm có khoảng 90 triệu ca nhiễm
Chlamydia trachomatis được phát hiện mới [34]. Bệnh do Chlamydia trachomatis hay
gặp ở những người trẻ tuổi, trong độ tuổi sinh đẻ.
Các nghiên cứu mới đây cho thấy, tỷ lệ mắc bệnh này đang tăng lên. Tại Châu
Âu từ năm 1996-2003, số bệnh nhân nhiễm Chlamydia trachomatis đã tăng gấp đôi,
tại Hoa Kỳ con số này cũng tăng 14% trong giai đoạn 2000-2005 [15, 18].
Ở Việt Nam trong khoảng vài năm gần đây vấn đề nhiễm khuẩn do Chlamydia
trachomatis mới được chú ý. Một vài nghiên cứu đưa ra tỷ lệ khoảng 30% các trường
hợp đến khám phụ khoa có tiết dịch đường âm đạo bất thường là do Chlamydia
trachomatis. Nguy hiểm nhất của nhiễm Chlamydia trachomatis qua đường sinh dục là
có tới 75% nữ giới và 50% nam giới mắc bệnh mà không có triệu chứng, người bệnh
hoàn toàn không biết mình nhiễm vi khuẩn [2,9].
Để chẩn đoán nhiễm Chlamydia trachomatis người ta thường dùng xét nghiệm
nuôi cấy- tiêu chuẩn vàng để chẩn đoán xác định nhiễm Chlamydia trachomatis. Tuy
nhiên xét nghiệm này có hạn chế là phải bảo đảm vi khuẩn còn sống trong quá trình
vận chuyển đến phòng xét nghiệm, thời gian xét nghiệm dài.
Khuếch đại acid nucleic (nucleic acid amplification tests – NAATs) là kỹ thuật
sinh học phân tử đã được ứng dụng rộng rãi trong y học để phát hiện sự tồn tại của các
vi sinh vật trong các mẫu bệnh phẩm. Phản ứng chuỗi trùng hợp (Polymerase Chain
Reaction– PCR) là một NAATs có độ nhạy và độ đặc hiệu rất cao, nhiều nghiên cứu
đã xem PCR là một tiêu chuẩn vàng để khảo sát giá trị của các xét nghiệm chẩn đoán
1
khác. Đối với bệnh nhiễm Chlamydia trachomatis, xét nghiệm này cho phép xác định
sự tồn tại của vi khuẩn trong dịch âm đạo, tử cung của bệnh nhân.
Với mong muốn đóng góp vào công tác chăm sóc sức khỏe nói chung và công
tác chăm sóc sức khỏe sinh sản nói riêng, chúng tôi thực hiện đề tài “Nghiên cứu ứng
dụng kỹ thuật PCR trong chẩn đoán viêm âm đạo, cổ tử cung do Chlamydia
trachomatis tại Bệnh viện Đại học Y Thái Bình” với mục tiêu:
- Chuẩn hóa được quy trình kỹ thuật thực hiện phản ứng PCR phát hiện vi
khuẩn Chlamydia trachomatis.
- Xác định được tỷ lệ nhiễm Chlamydia trachomatis ở bệnh nhân viêm âm đạo,
cổ tử cung.
2
Chương 1: TỔNG QUAN
1.1. Vi khuẩn Chlamydia trachomatis.
Chlamydia trachomatis thuộc chi Chlamydia, họ Chlamydiaceae, lớp
Chlamydiae, ngành Chlamydiae, giới Bacteria [2, 9].
Về hình thái khi quan sát dưới kính hiển vi quang học, vi khuẩn có hình cầu
hoặc hình bầu dục, kích thước khác nhau, là vi khuẩn Gram âm có màng là
lipopolisaccharide. Vì thiếu một số enzyme tổng hợp các hợp chất cao năng sử dụng
cho tế bào, vi khuẩn này phải ký sinh nội bào bắt buộc, không có khả năng sống sót
bên ngoài tế bào.
Hệ gen của Chlamydia trachomatis gồm phân tử DNA dài 1.042.519 nucleotide
với 894 trình tự mã hóa cho protein.
Hình 1.1. Cấu trúc hệ gen của vi khuẩn Chlamydia trachomatis
( Theo Deborah Dean et al., (2009) Predicting Phenotype and Emerging Strains
among Chlamydia trachomatis Infections, CDC Home Vol. 15.(9))
Chlamydia trachomatis (C.trachomatis) chứa 7 đến 10 bản sao của plasmid có
kích thước 7.5 kb. Trình tự nucleotide của plasmid là trình tự bảo thủ cao (có dưới 1%
nucleotide thay thế), chứa 8 khung đọc mở (Open Reading Frame) mã hoá các gen và
các kháng nguyên. Mặc dù chức năng của plasmid còn chưa xác định hết nhưng trình
3
tự nucleotide và sự có mặt của plasmid trong tế bào chứng tỏ nó có vai trò quan trọng
đối với vi khuẩn C.trachomatis.
C.trachomatis được chia thành 15 loại tuýp huyết thanh khác nhau bao gồm:
Tuýp huyết thanh (A-K), L1, L2, L3, Ba, Da, Ia và L2a. Trong đó tuýp A, B, Ba và C
gây bệnh mắt hột. Tuýp D, E, F, G, H, I, J và K gây bệnh viêm đường sinh dục. Tuýp
L1, L2 và L3 gây bệnh lympho hạt, một bệnh viêm hạch bạch huyết hoa liễu ở bẹn
[2,9].
Chu kỳ phát triển của C.trachomatis trong bào tương tế bào kéo dài 48-72 giờ
[34]. Vòng đời của C.trachomatis gồm 2 giai đoạn: Thể cơ bản và thể lưới.
- Thể cơ bản (Elementary Body- EB) là những tế bào tròn có đường kính
khoảng 0.3µm, nhân đậm. Thể này xâm nhập vào các tế bào theo kiểu thực bào.
- Thể lưới (Reticulate Body- RB): Sau khi xâm nhập vào tế bào C.trachomatis
chuyển hóa nhờ tế bào và tạo thành thể lưới (đường kính 1µm), sinh sản theo hình
thức phân đôi kiểu trực phân khoảng 2-3 giờ một lần. Sau đó thể lưới lại chuyển thành
thể cơ bản và giải phóng khỏi tế bào thông qua hình thức ngoại tiết bào (exocytosis).
Thông thường mỗi thể lưới giải phóng 100-1000 thể cơ bản rồi tiếp tục xâm nhập vào
các tế bào mới.
Hình 1.2. Chu kỳ vòng đời của vi khuẩn C.trachomatis (theo Yvonne Pannekoek).
4
Đường truyền bệnh:
Vi khuẩn C.trachomatis là vi khuẩn ký sinh nội bào bắt buộc, không có khả
năng sống sót ngoài tế bào nên đường truyền chủ yếu là đường tình dục hoặc lây từ mẹ
sang con khi người mẹ mang thai bị nhiễm C.trachomatis.
Khả năng gây bệnh:
C.trachomatis có khả năng gây nên 2 bệnh chính ở người: Bệnh mắt hột và
bệnh nhiễm trùng sinh dục tiết niệu, trong đó bệnh sinh dục tiết niệu do nhiều tuýp (D,
E, F, G, H, I, J và K) gây ra, tăng nhanh số lượng người mắc.
Trẻ sơ sinh có thể bị mắc bệnh viêm kết mạc hoặc viêm phổi do C.trachomatis
nếu bị lây từ mẹ.
Ở phụ nữ
Có tới 75% phụ nữ không có biểu hiện triệu chứng lâm sàng và triệu chứng nếu
có cũng không điển hình [3], nên việc chẩn đoán và sàng lọc nhiễm C.trachomatis đơn
thuần dựa vào triệu chứng lâm sàng hoàn toàn không khả thi. Cho đến khi có biểu hiện
viêm vùng chậu hoặc khi bệnh nhân khám vô sinh phát hiện có tổn thương ống dẫn
trứng thì C.trachomatis đã gây biến chứng khó phục hồi. Vì vậy cần thiết phải có
những phương pháp chẩn đoán chính xác và phù hợp giúp phát hiện C.trachomatis
nhằm ngăn chặn những hậu quả mà nó gây ra.
Ở nữ giới, vi khuẩn C.trachomatis có thể gây viêm âm đao, cổ tử cung và niệu
đạo. Các biến chứng thường gặp ở bệnh nhân nhiễm C.trachomatis mạn tính bao gồm:
- Tắc vòi trứng ở phụ nữ: Một trong những nguyên nhân gây tắc vòi trứng là
do viễm nhiễm ở vòi trứng, buồng trứng, dây chằng quanh tử cung vòi trứng do
C.trachomatis.
- Chửa ngoài tử cung: Nguyên nhân viêm nhiễm vòi trứng do C.trachomatis
khiến phôi thai tắc ngay tại điểm hẹp. Phôi thai lớn dần lên, đến một mức nào đó sẽ
phá vỡ các mạch máu nơi nó đậu lại trên vòi trứng, gây chảy máu dữ dội trong ổ bụng,
có thể làm thai phụ tử vong nhanh chóng. Nhiều thống kê cho thấy có tới 9% phụ nữ
nhiễm C.trachomatis bị chửa ngoài tử cung.
5
- Viêm vùng chậu: Phần lớn, viêm vùng chậu do vi khuẩn lậu và C.trachomatis
gây ra. Viêm vùng chậu là một bệnh thầm lặng, nhiều tác giả thống kê cho thấy có tới
40% phụ nữ nhiễm C.trachomatis bị viêm nhiễm vùng tiểu khung, trong số đó có 20%
bị vô sinh làm ảnh hưởng không nhỏ tới chất lượng cuộc sống.
- C.trachomatis có thể kết hợp cùng với HPV (Human papilloma virus) – một
virus gây u nhú có khả năng đưa đến ung thư cổ tử cung.
Ở nam giới
Ở nam giới triệu chứng lâm sàng của nhiễm C.trachomatis càng mờ nhạt hơn,
biểu hiện đầu tiên là viêm niệu đạo có mủ mà giới chuyên khoa gọi là viêm niệu đạo
không do lậu, sau đó có thể dẫn đến viêm mào tinh hoàn. Tại túi tinh, vi khuẩn gây
độc cho tinh trùng, làm giảm số lượng tinh trùng, đời sống tinh trùng ngắn lại, chất
lượng giảm xuống. Đây chính là lý do gây vô sinh nam.
Tuy nhiên, vì C.trachomatis lây qua đường tình dục nên nam giới nhiễm bệnh
nếu không được phát hiện và điều trị sẽ là nguồn tái nhiễm cho bạn tình. Ngoài ra, một
số nghiên cứu còn cho thấy C.trachomatis ở nam giới có khả năng bám vào tinh trùng
và theo tinh trùng đi qua cổ tử cung lên ống dẫn trứng, giúp phát tán C.trachomatis
trong vòi trứng của phụ nữ.
1.2. Các xét nghiệm chẩn đoán vi khuẩn Chlamydia trachomatis [32]
1.2.1. Nuôi cấy
Để phát hiện C.trachomatis, người ta có thể dùng biện pháp nuôi cấy để chờ vi
khuẩn gia tăng số lượng. C.trachomatis không phát triển ngoài tế bào sống được nên
không thể nuôi cấy theo phương pháp thường dùng mà phải tiến hành nuôi cấy trên
các tế bào như McCoy hoặc Hela 229, tế bào nhau thai...
- Đối với bệnh mắt hột, người ta lấy nang bằng cách nạo các nang rồi cấy vào
các tế bào nhau thai người để phát hiện các hạt vùi trong nguyên sinh chất của tế bào.
- Đối với bệnh viêm sinh dục– tiết niệu: lấy mủ chất tiết niệu đạo (nam giới);
chất tiết cổ tử cung, âm đạo (nữ giới) nuôi cấy trong môi trường có chứa tế bào
McCoy hoặc Hela 229 ở 370C- 5% CO2. Quan sát tính chất xâm nhiễm sau 48 giờ nuôi
6
cấy và phát hiện C.trachomatis bằng kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang: ủ với kháng thể
đánh dấu huỳnh quang đặc hiệu cho kháng nguyên vỏ lipopolysaccharide (LPS) hoặc
protein màng (major outer membrane protein- MOMP).
Xét nghiệm này được đánh giá là tiêu chuẩn vàng trong nhóm xét nghiệm vì có
độ đặc hiệu rất cao (100%), cho phép lưu giữ vi khuẩn làm kháng sinh đồ phát hiện
chủng kháng thuốc. Nhược điểm của phương pháp này là đòi hỏi thời gian dài, phải
bảo đảm vi khuẩn còn sống trong quá trình vận chuyển đến phòng thí nghiệm, đội ngũ
cán bộ thành thạo về nuôi cấy tế bào. Bên cạnh đó xét nghiệm này có độ nhạy thấp
(70-85%), thấp hơn so với khuếch đại nucleic acid (nucleic acid amplification tests–
NAATs) [32].
1.2.2. Kỹ thuật miễn dịch gắn enzyme (enzyme immunoassays– EIAs)
Phương pháp này dựa trên phản ứng hóa miễn dịch giúp phát hiện kháng
nguyên LPS của C.trachomatis bằng kháng thể đơn dòng hoặc đa dòng được đánh dấu
bằng enzyme, phức hợp kháng nguyên - kháng thể sẽ hoạt hóa enzyme chuyển cơ chất
không màu thành có màu, phát hiện được bằng phản ứng tạo màu hay đo bằng quang
phổ kế.
Khi mẫu xét nghiệm được thêm vào màng, kháng nguyên của C.trachomatis sẽ
gắn với kháng thể được phủ sẵn trên màng. Sau đó bổ sung kháng thể đặc hiệu với
C.trachomatis liên kết với kháng nguyên đã được bắt giữ bởi kháng thể trên màng.
Dung dịch enzyme được thêm vào sẽ liên kết với kháng thể đặc hiệu của
C.trachomatis. Bước tiếp theo là rửa để loại bỏ các thành phần không gắn với màng.
Bổ sung cơ chất đặc hiệu với enzyme vào màng. Nếu có kháng nguyên, cơ chất phản
ứng với enzyme tạo sự thay đổi màu sắc phát hiện và đo được bằng máy quang phổ kế.
Xét nghiệm này có hiệu quả với quy mô sàng lọc lớn, không đòi hỏi vi khuẩn
còn sống, rẻ tiền hơn nuôi cấy và yêu cầu kỹ năng xét nghiệm vừa phải. Tuy vậy nó có
nhược điểm là không sử dụng được với nhiều loại mẫu lấy từ đại tràng, cơ quan hô hấp
và âm đạo do giảm độ nhạy và độ đặc hiệu với các mẫu này, được sử dụng sàng lọc
quần thể có tỷ lệ dương tính thấp (≤ 5%) [32]. Xét nghiệm này có độ nhạy thấp hơn
NAATs và độ đặc hiệu thấp hơn nuôi cấy tế bào.
7
1.2.3. Kỹ thuật kháng thể huỳnh quang trực tiếp (direct fluorescent antibody- DFA)
Phương pháp này sử dụng kháng thể đơn dòng hay đa dòng đặc hiệu được đánh
dấu huỳnh quang để phát hiện trực tiếp kháng nguyên vỏ LPS hay kháng nguyên mã
hóa protein màng MOMP.
Mẫu bệnh phẩm được thu thập, mẫu được đánh dấu tên và địa chỉ bệnh nhân. Sau
đó, mẫu được phết nhẹ nhàng lên lam kính và được cố định ngay lập tức bằng
methanol. Sau khi được làm khô trong không khí từ 2 đến 3 phút, lam kính được vận
chuyển đến phòng thí nghiệm, nhuộm bằng kháng thể đánh dấu huỳnh quang đặc hiệu
với C.trachomatis. Kháng thể liên kết đặc hiệu với C.trachomatis có trong mẫu. Tiếp
đó là bước rửa để loại bỏ những kháng thể không liên kết. Quan sát dưới kính hiển vi
huỳnh quang, mẫu dương tính C.trachomatis dạng cơ bản màu xanh táo tương phản
với màu đỏ đất của tế bào.
Xét nghiệm áp dụng được cho nhiều loại mẫu khác nhau, không yêu cầu vi khuẩn
còn sống, đòi hỏi kỹ năng xét nghiệm vừa phải, thích hợp chẩn đoán trên các đối
tượng có nguy cơ cao. Sự thành công của kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang phụ thuộc
vào nhiều yếu tố: Có kháng thể đánh dấu huỳnh quang đặc hiệu với C.trachomatis, đủ
kháng thể để kết hợp, kính hiển vi huỳnh quang chất lượng tốt. Kỹ thuật này không
thích hợp cho số lượng mẫu lớn và đối tượng có nguy cơ thấp, độ nhạy thấp hơn
NAATs và độ đặc hiệu thấp hơn nuôi cấy tế bào [32].
1.2.4. Kỹ thuật khuếch đại nucleic acid (nucleic acid amplification tests– NAATs).
NAATs là kỹ thuật sinh học phân tử đã được ứng dụng rộng rãi trong y học để
phát hiện sự tồn tại của các vi sinh vật trong các mẫu bệnh phẩm, độ nhạy trên 90%,
độ đặc hiệu tương đương với nuôi cấy tế bào. Kỹ thuật NAATs có ưu điểm là có thể áp
dụng ở những nơi không có khả năng nuôi cấy, xét nghiệm không đòi hỏi vi khuẩn còn
sống, thời gian xét nghiệm ngắn (trong 1 ngày).
Phản ứng chuỗi trùng hợp (Polymerase Chain Reaction– PCR) là xét nghiệm có
độ nhạy và độ đặc hiệu cao thích hợp cho sự phát hiện C.trachomatis [21]. Nhiều
nghiên cứu đã xem PCR là một tiêu chuẩn vàng để khảo sát giá trị của các xét nghiệm
chẩn đoán khác. Đối với bệnh nhiễm C.trachomatis, xét nghiệm này cho phép xác
8
định sự tồn tại của vi khuẩn trong dịch quết cổ tử cung hoặc trong mẫu nước tiểu của
bệnh nhân với các cặp mồi trên plasmid, trên gen mã hóa protein màng hoặc trên
rRNA. Tuy nhiên, xét nghiệm này có thể giảm độ nhạy do sự có mặt các chất ức chế
có trong mẫu hoặc không đủ độ nhạy để phát hiện mẫu chứa quá ít dạng cơ bản của vi
khuẩn C. trachomatis. Do vậy có thể tạo ra sản phẩm âm tính giả. Theo Saiki và cộng
sự (1985) [23], để phát hiện 25 ng DNA trên gel agarose nhuộm ethidium bromide sau
35 chu kỳ khuếch đại từ 10 phân tử ban đầu ở mẫu cần hiệu quả khuếch đại cao hơn
90%.
Nested PCR là kỹ thuật sử dụng hai cặp mồi thay vì một cặp mồi như kỹ thuật
PCR cổ điển. Cặp mồi thứ hai được thiết kế nằm trong đoạn gen mà cặp mồi thứ nhất
khuếch đại. Quá trình chạy PCR lần đầu không khác gì PCR thông thường. Sản phẩm
của phản ứng PCR lần đầu sẽ làm khuôn cho phản ứng PCR lần thứ hai cùng với cặp
mồi thứ hai. Kết quả sau hai lần PCR thu được sản phẩm đặc hiệu hơn nhiều. Kỹ thuật
này có độ nhạy rất cao, có thể phát hiện vi khuẩn ở mật độ rất thấp mà các phương
pháp thông thường khó có thể phát hiện được (1-5 ký sinh trùng/1 µl máu). Đây được
xem là “tiêu chuẩn vàng” mới trong phát hiện vi khuẩn trong các mẫu bệnh phẩm do
độ nhạy và độ đặc hiệu cao của nó. Theo Pamela Cribb và cộng sự (2002) [22], xét
nghiệm này có thể phát hiện DNA tương ứng với nhỏ hơn 10 dạng cơ bản (EB) của vi
khuẩn C.trachomatis trong hỗn hợp phản ứng, cho phép phát hiện kết quả âm tính giả
và đáp ứng được với sự thay đổi ở các phòng thí nghiệm khác nhau.
Mẫu được xử lý để tách DNA của C.trachomatis. Các thành phần của phản ứng
PCR được thiết lập gồm primer, dNTP, Taq polimerase, MgCl 2. Các primer liên kết
với DNA đích đặc hiệu của C.trachomatis. Enzym Taq polymerase kéo dài mỗi trình
tự DNA sử dụng các nucleotide tự do để tạo trình tự DNA bổ sung. Quá trình khuếch
đại này xảy ra khi hỗn hợp phản ứng được ủ trong máy luân nhiệt. Mỗi chu kỳ làm
tăng số lượng DNA đích theo hàm mũ. Sau khi khuếch đại, sản phẩm lần 1 được sử
dụng làm khuôn cho phản ứng PCR lần 2. Sau phản ứng PCR lần 2, sản phẩm được
điện di trên gel agarose 1%, nhuộm ethidium bromide và phân tích trên hệ thống chụp
ảnh gel .
9
Xét nghiệm này có thể phát hiện vi khuẩn C.trachomatis trên mẫu nước tiểu
(độ nhạy của mẫu này thấp hơn mẫu dịch phết), nhiều loại mẫu lấy từ đại tràng, cơ
quan hô hấp và âm đạo.
Xét nghiệm này độ nhạy trên 90%, độ đặc hiệu tương đương với nuôi cấy tế
bào, có ưu điểm là có thể áp dụng ở những nơi không có khả năng nuôi cấy, không đòi
hỏi vi khuẩn còn sống, thời gian xét nghiệm ngắn (trong 1 ngày) [13, 17]. Nhược điểm
của xét nghiệm này là yếu tố ngoại nhiễm cao, tuy vậy có thể tránh bằng cách sử dụng
đầu côn lọc và dùng enzyme uracil- N- glycosylase trong phản ứng.
1.3. Các nghiên cứu về Chlamydia trachomatis trên thế giới và trong nước
1.3.1. Các nghiên cứu trên thế giới
Số người
nhiễm trên
100.000
Năm
Hình 1.3. Tỷ lệ nhiễm Chlamydia trachomatis ở một số nước Châu Âu
Theo ECDC năm 2009 [15], tỷ lệ dương tính C.trachomatis ở một số nước
Châu Âu thay đổi từ năm 1998 đến năm 2007. Ở Thụy Điển và Phần Lan, nơi những
nghiên cứu được tiến hành từ đầu những năm 90, tỷ lệ này giảm ở đầu những năm 90
(tương tự với tỷ lệ các bệnh lây truyền qua đường tình dục khác ở Châu Âu) do sự thay
đổi thói quen sinh hoạt tình dục và mối lo từ hiểm họa AIDS. Tỷ lệ này tăng lên từ
năm 1995. Tại Anh và Đan Mạch, tỷ lệ này tăng dần theo mỗi năm, nguyên nhân có
10
thể do không được nghiên cứu từ đầu những năm 90, sử dụng các chẩn đoán có độ
nhạy cao hơn, đối tượng nghiên cứu nằm trong các nhóm có nguy cơ cao.
Theo một nghiên cứu về tỷ lệ nhiễm vi khuẩn này tại Châu Âu [20] cho thấy:
Phần Lan
Nghiên cứu 298 phụ nữ tuổi từ 18 đến 40, từ năm 1977 đến năm 1980 tại một
trung tâm y tế sinh viên tại Đại học Helsinki. Những phụ nữ trên được chăm sóc y tế
về các biện pháp tránh thai, vấn đề nội tiết và vô sinh hoặc đã được kiểm tra dịch phết
cổ tử cung định kỳ (đối với bệnh nhân có triệu chứng). Các xét nghiệm được sử dụng
là nuôi cấy dịch niệu đạo và dịch phết cổ tử cung. Bỏ qua mô tả về cách lựa chọn, tỷ lệ
đáp ứng, lý do đáp ứng và loại trừ. Tỷ lệ dương tính C.trachomatis là 6%.
Thụy Điển
Nghiên cứu thứ nhất (Persson et al., 1991) liên quan đến 306 phụ nữ tuổi từ 12
đến 25 (trung bình 22 tuổi) tại một phòng khám thai từ năm 1989 và 1990. Nuôi cấy
được sử dụng làm phương pháp xét nghiệm, tỷ lệ dương tính C.trachomatis là 6%.
Nghiên cứu thứ hai (Svensson et al., 1994) đã so sánh hai nhóm phụ nữ nghiên cứu
vào năm 1991- 1992. Nhóm A bao gồm 751 học sinh trung học với độ tuổi 16 đến 20
năm (trung bình 18 tuổi). Các tỷ lệ đáp ứng là 77%. Nhóm B bao gồm 619 phụ nữ đến
khám tại phòng khám kế hoạch hóa gia đình thanh thiếu niên và độ tuổi phù hợp với
nhóm A. Cả hai nhóm đã được thử nghiệm bằng cách sử dụng xét nghiệm EIA. Tỷ lệ
dương tính C.trachomatis là 2% trong nhóm A và 6% trong nhóm B.
Vương quốc Anh
Nghiên cứu được tiến hành đầu tiên (Smith et al., 1991) liên quan đến 197 phụ
nữ tuổi từ 19 đến 58 (trung bình 30 tuổi) tại một phòng khám soi cổ tử cung. Nghiên
cứu cho thấy không có sự khác biệt giữa phụ nữ có dịch phết cổ tử cung bình thường
và bất thường. Bệnh phẩm dịch phết cổ tử cung được sử dụng để nuôi cấy. Tỷ lệ
dương tính C.trachomatis là 12%. Nghiên cứu thứ hai (Thompson và Wallace, 1994)
liên quan đến 287 phụ nữ từ 15 tuổi đến 40. Các mẫu dịch phết cổ tử cung đã được xét
nghiệm bằng kỹ thuật DFA. Tỷ lệ nhiễm C.trachomatis ở phụ nữ nhỏ hơn 30 tuổi là
3.5% (5/145). Tỷ lệ dương tính C.trachomatis chung là 1.7%. Nghiên cứu thứ ba
11
(Hopwood và Mallinson, năm 1999) đánh giá trên các phụ nữ 16 đến 25 tuổi bằng xét
nghiệm DFA. Tỷ lệ nhiễm C.trachomatis là 3.9%. Nghiên cứu thứ tư (Kirkwood et
al., 1999) nghiên cứu phụ nữ độ tuổi nhỏ hơn 20 tại phòng khám kế hoạch hóa gia
đình. Các mẫu được kiểm tra bằng kỹ thuật PCR. Cỡ mẫu là 97 với 65 phụ nữ đến từ
thành phố. Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn này ở phụ nữ thành phố là 3% và thị trấn nông thôn
12.5%. Tỷ lệ dương tính C.trachomatis tổng thể là 6.2%.
Sự phổ biến của C.trachomatis phụ nữ không có triệu chứng ở Châu Âu dao
động từ 1.7 đến 17% tùy thuộc vào bối cảnh và quốc gia. Tỷ lệ dương tính C.
trachomatis là 6% ở phụ nữ sử dụng biện pháp tránh thai và 4% với đ ối tượng phụ nữ
xét nghiệm dịch phết cổ tử cung [15].
James B. Mahony và cộng sự (1992) nghiên cứu tỷ lệ dương tính C.trachomatis
ở nam giới ở những địa điểm được lựa chọn tại Hoa Kỳ [18]. Sự sàng lọc phụ thuộc
một phần vào chi phí sàng lọc C.trachomatis cũng như phương pháp sàng lọc. Sàng
lọc ở những địa điểm có tỷ lệ nam giới dương tính cao sẽ nâng cao chất lượng chương
trình kiểm soát C.trachomatis. Đánh giá các chương trình sàng lọc vi khuẩn này trong
số những người đàn ông không có triệu chứng tại các phòng khám từ năm 1995 đến
tháng 6 năm 2007, thông qua PubMed thu được kết quả: Tỷ lệ dương tính trung bình
tổng thể là 5.1%. Mức cao nhất được quan sát thấy ở nam giới thử nghiệm tại các cơ
sở giam giữ trẻ vị thành niên (7.9%) và người lớn (6.8%), ở người da đen (6.7%), 1519 tuổi (6.1%) và 20-24 tuổi (6.5%). Tỷ lệ nhiễm C.trachomatis trên nam giới cao ở
những địa điểm nhất định.
C.trachomatis là bệnh lây truyền qua đường tình dục phổ biến nhất ở Canada
[27]. Có gần 63.000 trường hợp nhiễm C.trachomatis được báo cáo vào năm 2004,
con số cao nhất kể từ khi vi khuẩn này được đề cập vào năm 1990. Tỷ lệ nhiễm
C.trachomatis ở Canada đã tăng hơn 70% từ năm 1997. Tuy nhiên, những con số này
đánh giá thấp gánh nặng thực sự của bệnh như một số bệnh nhiễm trùng (40% đến
70% các bệnh nhiễm trùng) là không có triệu chứng nên không bị phát hiện. Có một sự
khác biệt giới tính trong tỷ lệ nhiễm C.trachomatis, phụ nữ chiếm hơn hai phần ba các
trường hợp được báo cáo vào năm 2004. Trong khi số lượng các bệnh nhiễm trùng
C.trachomatis báo cáo ở phụ nữ cao hơn nam giới, tỷ lệ lây nhiễm đang gia tăng
nhanh hơn ở nam giới. Từ năm 1997, tỷ lệ ở nam giới nhiều hơn gấp đôi, từ 59 đến
12
129.5 trên 100.000 người, trong khi tỷ lệ ở phụ nữ tăng ít hơn một nửa, từ 168 đến 263
trên 100.000. Sự chênh lệch giới tính có thể một phần là do số phụ nữ được sàng lọc vi
khuẩn C.trachomatis lớn hơn. Việc cải thiện công nghệ chẩn đoán có thể sử dụng mẫu
nước tiểu để xét nghiệm dự đoán sẽ làm tăng số lượng đàn ông kiểm tra. Tỷ lệ thanh
thiếu niên nhiễm C.trachomatis cũng không tương xứng, gần 70% của tất cả các
trường hợp được báo cáo xảy ra ở tuổi từ 15 đến 24 trong nghiên cứu. Trong năm
2004, tỷ lệ nhiễm trong thanh thiếu niên từ 15 đến 19 tuổi là 847 trên 100.000. Tỷ lệ là
1.087 trên 100.000 trong độ tuổi 20-24. Các vùng lãnh thổ phía Bắc nói riêng phải
chịu tỷ lệ nhiễm C.trachomatis cao, trung bình năm 2003 là gần 8 lần so với toàn
quốc. Nunavut có tỷ lệ nhiễm C.trachomatis cao nhất ở Canada vào năm 2003 (2.520
trên 100.000) trên 13 lần mức trung bình toàn quốc [27].
Năm 2004 ở Trinidad và Tobago bằng phương pháp nested multiplex PCR với
các cặp mồi HO1, HO3, Chlam5/Chlam3, KL1/KL2 và Gon 5/Gon 3, các tác giả đã
phát hiện đồng thời hai loại vi khuẩn lậu và C.trachomatis trong mẫu nước tiểu của
phụ nữ mang thai [19]. Các mẫu nước tiểu được thu thập từ tháng 3 đến tháng 9 năm
2004 từ 273 phụ nữ mang thai khỏe mạnh ở các phòng khám tư nhân và bệnh viện. Tất
cả phụ nữ mang thai có mặt trong phòng khám tại thời điểm lấy mẫu đã được mời
tham gia. 15-20 ml mẫu nước tiểu đầu dòng được thu thập, bảo quản ở 4°C, vận
chuyển đến phòng thí nghiệm trong vòng 24 giờ, và bảo quản ở -20°C cho đến khi
DNA được tách chiết (trong vòng hai tháng). DNA từ nước tiểu được chuẩn bị bằng
cách sử dụng Chelex 100 (Sigma Chemical Co, St Louis, Hoa Kỳ). Phản ứng PCR thứ
nhất và nested multiplex PCR được tối ưu hóa ở các nồng độ MgCl 2 1.5; 2 và 3 mM, ở
nhiệt độ thay đổi từ 45°C đến 65°C (sử dụng máy Gradient Master Cycler Eppendorf)
với mồi phát hiện vi khuẩn lậu hoặc C.trachomatis. Để tránh nhiễm, sử dụng bốn
phòng riêng biệt, một để pha mix, một để chuẩn bị mẫu và PCR lần 1, một tạo phản
ứng nested PCR và một phòng điện di. Sản phẩm khuếch đại được điện di trên gel
agarose 2%, nhuộm ethidium bromide và quan sát. Phản ứng PCR đầu tiên dùng 0.2
mM mỗi loại dNTP; 3 mM MgCl 2; 0.5 pmol/µl mỗi mồi HO1, HO3, Chlam5 (5'CATTATGT-CGGAGTCTG-AGC- 3’), Chlam3 (5'-GGATGACTCAAGGAATAGTCG- 3’), 1 µl Internal Amplification Control (IAC), 0.4 pmol/µl mồi IAC (5'TGTTTGACAGCTTATCAT), 5 µl DNA mẫu, 0.5 U Taq polymerase, và nước khử
ion đến 25 µl với chu trình nhiệt 94°C/15s, 60°C/30s, 72°C/60s, 40 chu kỳ. Phản ứng
13
nested PCR chứa 0.2 mM mỗi loại dNTP; 2 mM MgCl 2; 0.5 pmol/µl mỗi mồi KL1,
KL2, Gon5 (5'-GTTCT-TGACGCTCC-ATATCG- 3’) và Gon3 (5'-ACGAGGCATTGAAGCAAAGC- 3’); 0.4 pmol/µl IAC; 1 µl sản phẩm PCR lần 1; 0.5 U Taq
polymerase, nước khử ion đến 25 µl, chu trình nhiệt 94°C /15s, 58.5°C/30s,72°C/30s,
40 chu kỳ. Kết quả ở PCR lần 1 là 21 mẫu dương tính C.trachomatis và 1 mẫu nhiễm
cả C.trachomatis và lậu. Kết quả phản ứng nested multiplex PCR thu được mẫu dương
tính C.trachomatis là 57 mẫu (20.9%), trong đó 5 mẫu nhiễm cả hai loại vi khuẩn trên.
Kết quả này chứng tỏ multiplex nested PCR có độ nhạy và độ đặc hiệu cao hơn hẳn
phản ứng PCR đơn.
Farhad B. Hashemi, Babak Pourakbari và Javad Zaeimi Yazdi [16] nghiên cứu
tổng cộng 123 phụ nữ đã kết hôn (tuổi từ 20-55) với triệu chứng viêm cổ tử cung đến
khám tại phòng khám sản phụ khoa của bệnh viện Mirza Kouchek Khan ở Tehran,
Iran, từ giữa tháng 12/2004 đến tháng 6/2005, chủ yếu do đau vùng chậu và (hoặc) tiết
dịch âm đạo. Tất cả những phụ nữ điều trị kháng sinh trong vòng ba tuần trước khi đến
khám được loại trừ khỏi nghiên cứu. Người tham gia đồng ý hoàn thành một bảng câu
hỏi về nhân khẩu học và lịch sử bệnh lây truyền qua đường tình dục trước khi kiểm tra
cổ tử cung. Sau khi loại bỏ chất nhầy cổ tử cung, mẫu dịch cổ tử cung được thu thập,
lưu trữ ở -20°C. DNA chiết xuất bằng DIAtom Prep100 kit (IsoGene Inc, Moscow,
Nga) và bảo quản tại -20°C cho đến khi sử dụng. Phản ứng PCR khuếch đại đoạn 377
bp của cryptic plasmid với chu trình nhiệt: 94°C/3.5 phút; (94°C/30s, 52°C/30s,
72°C/3 phút) x 30 chu kỳ trong 25 μl đệm phản ứng PCR (bao gồm 10 mmol/l Tris,
pH 8,3; 50 mmol/l KCl; 2.5 mmol/l MgCl 2 và 0.1% gelatin); 0.2 mmol/l mỗi loại
dNTP; 2.5 U Taq DNA polymerase, và 0.5 μmol/µl mỗi loại mồi BP1 (5’AACCGTTTTTAATAGTGGCA-3’) và BP2 (5’-TTCTGGCCAAGAATTATCC-3’).
Tỷ lệ nhiễm trùng sinh dục do C.trachomatis trên phụ nữ đã kết hôn ở Iran là 17%
(cao hơn tỷ lệ 7% báo cáo tại nước này vào đầu những năm 1980). Mặc dù các bệnh
nhân trong nghiên cứu không phải là đại diện chung dân số (bao gồm cả phụ nữ không
có triệu chứng), hiện tại tỷ lệ nhiễm C.trachomatis cao hơn so với tỷ lệ 4-11% tại
Slovenia, Hà Lan, Colombia, Canada, và Hoa Kỳ. Sự khác biệt tỷ lệ trong nghiên cứu
này so với gần đây báo cáo từ Tehran có thể liên quan đến sự cải thiện độ nhạy của xét
nghiệm cũng như đối tượng bệnh nhân và các mẫu phân tích. Kết quả cần được khẳng
định bởi cỡ mẫu lớn hơn.
14
Theo các công trình nghiên cứu của Gaydos CA, Svensson LO [20], tần suất
nhiễm C.trachomatis cao gặp ở đối tượng trẻ dưới 25 tuổi, có lẽ do nam nữ thanh niên
các nước Châu Âu thường có quan hệ tình dục tự do ngoài hôn nhân, vì vậy họ dễ mắc
các bệnh lây truyền qua đường tình dục trong đó có nhiễm C.trachomatis. Tỷ lệ nhiễm
vi khuẩn này ở người lớn tại Nam Thái Bình Dương là 73%, Papua New Guinea là
20%, Nhật Bản 7%, Senegan 7%.
Một nghiên cứu của Achchhe L Patel và cộng sự [11] trường đại học y khoa
Indiana, Ấn Độ sử dụng các phương pháp phát hiện vi khuẩn C.trachomatis như
Roche Amplicor test, DFA và PCR. Trong suốt quá trình nghiên cứu (2003–2009), tỷ
lệ bệnh nhân nhiễm C.trachomatis dao động từ 24.0% đến 30.0%. Các phụ nữ hành
nghề mại dâm ở Surat, Ấn Độ, có tỷ lệ dương tính (xét nghiệm bằng PACE2 test) là
8.5%, trong khi ở Ahmedabad, tỷ lệ này tăng gấp đôi. Tỷ lệ bệnh nhân nhiễm
C.trachomatis trong quần thể nghiên cứu ở thủ đô của Ấn Độ chỉ chiếm 4.0% mặc dù
tỷ lệ mắc bệnh lây truyền qua đường tình dục là 36.5%. Tỷ lệ này tương tự với các
nghiên cứu trên bệnh nhân ở Azerbaijan 3.1% và Bangladesh 3.4%. Tỷ lệ nhiễm cao
được đề cập ở Manila 23.3%, Cebu, Philippines 37.0% và 14.0% ở Nicaragoa [11] .
Anahita Jenab và cộng sự (năm 2008) [12] nghiên cứu giá trị chẩn đoán PCR và
ELISA trên vi khuẩn C.trachomatis ở phụ nữ không có triệu chứng và triệu chứng tại
Isfahan, Iran nhằm xác định sự hiện diện của C.trachomatis bằng phản ứng chuỗi
trùng hợp polymerase (PCR) và ELISA. Mẫu được thu thập sau khi có sự đồng ý bằng
văn bản từ 80 bệnh nhân khám phụ khoa tại bệnh viện Shahid Beheshti ở Isfahan, Iran.
Bệnh phẩm được thu thập từ 80 phụ nữ, 22 người trong số họ không có triệu chứng và
58 người có triệu chứng. 58 phụ nữ có triệu chứng khác nhau, từ 20-60 tuổi (có nghĩa
là 36.3 ± 8.8 năm) và 22 phụ nữ không có triệu chứng khác nhau, từ 19 đến 56 tuổi (40
± 10.5 năm). Tất cả các phụ nữ này được kiểm tra lâm sàng kỹ lưỡng. Độ tuổi trung
bình của phụ nữ ở cả hai nhóm là 37.5 ± 9.4 năm. Những người đã dùng kháng sinh
trong vòng 4 tuần qua được loại trừ khỏi nghiên cứu. Các mẫu đã được kiểm tra bằng
phương pháp PCR được thiết kế để phát hiện C.trachomatis bằng cặp mồi KL1, KL2
trên cryptic plasmid của vi khuẩn này. Huyết thanh IgG và IgA kháng thể kháng
C.trachomatis sử dụng phát hiện bằng phương pháp ELISA. Một tăm bông chứa dịch
phết cổ tử cung của mỗi bệnh nhân được đặt vào một lọ nhựa 15 ml có chứa 5 ml dung
dịch đệm (PBS) vô trùng và lưu trữ ở -70ºC cho đến khi tách chiết DNA. Ngoài ra,
15
5ml máu ngoại vi được thu thập từ mỗi bệnh nhân để điều tra huyết thanh học. Kit
ELISA được sử dụng trong nghiên cứu rất cụ thể để phát hiện C.trachomatis và không
có bất kỳ phản ứng chéo nào với các các loài khác của Chlamydia. Do đó, nó chỉ cho
phép phát hiện các kháng thể kháng C.trachomatis trong mẫu, tức là IgG, IgA. Phát
hiện C.trachomatis bằng phương pháp PCR: Để phát hiện sự hiện diện của
C.trachomatis trong mẫu dich phết cổ tử cung, đoạn gen 241 bp trên plasmid vi khuẩn
đã được khuếch đại nhờ cặp mồi KL1 (5’-TCCGGAGCGAGTACGAAGA-3’) và
KL2 (5’-AATCAATGCCCGGGATT GGT-3’). Phản ứng PCR được thực hiện trên 5
μl chiết xuất DNA mẫu trong một hỗn hợp phản ứng cuối cùng là 25 μl. Hỗn hợp phản
ứng cuối cùng có 3 mM MgCl2, 0.28 mM dNTP, 16 pmol của mỗi loại mồi và 1 U Taq
polymerase. Chu trình nhiệt đã được thực hiện như sau: (94ºC/1 phút, 55ºC/1 phút,
72ºC/1 phút) × 40 chu kỳ, 72ºC trong 8 phút. Các sản phẩm PCR được phân tích bằng
điện di trên gel agarose 1.5%. Kết quả: tỷ lệ nhiễm C.trachomatis khi xét nghiệm bằng
phương pháp PCR là 27.2% ở phụ nữ không có triệu chứng và 18.9% trên đối tượng
có triệu chứng. Kiểm tra huyết thanh học được thực hiện trên tất cả các mẫu cho kết
quả nhiễm C.trachomatis là 29.4% và 17.6% tương ứng [12].
Theo CDC, số các trường hợp chẩn đoán đã gia tăng đến 19% ở đàn ông và
25% ở phụ nữ giữa năm 2008 và 2009. Theo một điều tra mới đây với quy mô lớn, các
bệnh gây nên bởi C.trachomatis có thể có một vai trò quan trọng trong nguy cơ sinh
non. Hơn 4000 phụ nữ có thai đã tham dự vào điều tra này bằng bảng câu hỏi và lấy
mẫu nước tiểu xét nghiệm C.trachomatis bằng kỹ thuật sinh học phân tử (PCR). Kết
quả có 4% các phụ nữ dương tính với vi khuẩn này [15]. Mặc dầu có tính đến những
yếu tố khác (tuổi dưới 21, nhiều bạn tình), nhưng nguy cơ sinh non, sinh con từ 35
tuần thai nghén ở các trường hợp nhiễm trùng do C.trachomatis cao gấp đôi. Vì vậy,
điều tra phát hiện các phụ nữ có nguy cơ và sử dụng thuốc kháng sinh thích hợp trong
thời kỳ thai nghén sẽ cho phép làm giảm nguy cơ này. Nhiễm C.trachomatis có xu
hướng ngày càng tăng, tỷ lệ phát hiện tại Mỹ năm 1987 là 50.8 ca (trong 100.000 dân);
đến năm 2007 là 370.2 ca. Chi phí dành cho điều trị khoảng 3 tỷ USD/năm [18].
Hầu hết các phương pháp khuếch đại phát hiện C.trachomatis trong mẫu dịch
niệu đạo, cổ tử cung và nước tiểu đã chứng minh là có độ nhạy cao hơn so với nuôi
cấy tế bào hoặc các phương pháp phát hiện kháng nguyên (Black 1997). Các phương
16
pháp hiện đang có sẵn, chẳng hạn như Amplicor CT PCR, Roche phát hiện sản phẩm
khuếch đại bằng cách sử dụng peroxidase (HRP). Các phương pháp thương mại có lợi
thế quan trọng, nhưng chi phí cao, không thích hợp với nhiều phòng thí nghiệm. Một
số phương pháp khuếch đại phi thương mại cũng được mô tả. Hầu hết bao gồm một
phản ứng PCR đơn có sản phẩm được phân tích dựa vào sản phẩm điện di trên gel
agarose và nhuộm với ethidium bromide. Tuy nhiên phương pháp này giảm độ nhạy
do các chất ức chế có trong các mẫu lâm sàng. Ngay cả trong trường hợp không có
chất ức chế, phản ứng PCR có thể không đủ nhạy để phát hiện mẫu có chứa số lượng
quá ít thể cơ bản (EB) của C.trachomatis.
Theo nghiên cứu của Pamela Cribb, Juan Pablo Scapini và Esteban Serra [22],
phản ứng nested PCR sử dụng hai cặp oligonucleotides (KL5/KL6 và KL1/KL2) làm
mồi có trình tự bổ sung với các đoạn nằm trên cryptic plasmid của C.trachomatis và
sau hai vòng khuếch đại tạo ra một sản phẩm cuối cùng 241 bp. Ban đầu, phản ứng
đầu tiên đã được chuẩn bị trong thể tích cuối cùng 50 µl có chứa 10 mM Tris (pH 9,0),
50 mM KCl, 3.5 mM MgCl2, 5 nmol mỗi loại dNTP, 20 pmol mỗi mồi KL5 (5TTGCCTTAACCCCACCATT-3) và KL6 (5-CGTCCTTCCTAAAAGAG-CTA-3) và
1.25 U Taq polymerase (Promega). Sau 35 chu kỳ bao gồm 1 phút ở 94ºC, 1 phút ở
55°C, và 1 phút ở 72°C và một bước kéo dài trong 7 phút ở 72°C; 1 µl sản phẩm của
phản ứng PCR đầu tiên đã được chuyển sang một ống phản ứng thứ hai với cùng thành
phần ngoại trừ mồi là 20 pmol mỗi loại mồi KL1 (5-TCCGGAGCGAGTTACTAAGA-3) và KL2 (5-ATCAATGCCCGGGATTGGT- 3) đã được thêm vào
hỗn hợp phản ứng, và 35 chu kỳ mới được thực hiện. Các sản phẩm được phân tích bởi
điện di trên gel agarose và nhuộm ethidium bromide. Độ nhạy của nested PCR được
xác định bằng cách sử dụng số lượng DNA của C.trachomatis giảm dần. Khảo nghiệm
đã có thể phát hiện DNA tương ứng với một EB trong phản ứng. Tuy nhiên, độ nhạy
theo thử nghiệm lâm sàng có thể thấp hơn do chất ức chế PCR bị loại bỏ không hoàn
toàn trong quá trình tách chiết DNA. Các kết quả độ nhạy trong thực nghiệm khác
nhau dao động từ 1 đến 10 thể cơ bản (EB) mỗi phản ứng. Để tìm những điều kiện tốt
nhất cho các xét nghiệm, thử nghiệm nồng độ khác nhau cho các thành phần của phản
ứng, khối lượng và số chu kỳ khuếch đại. Kết quả tối ưu đạt được với phản ứng PCR
đầu tiên trong 30 µl thể tích cuối cùng, có chứa 2.5 nmol dNTP mỗi loại, KL5/KL6 6
pmol mỗi mồi và 25 chu kỳ, tiếp theo với 50 µl của hỗn hợp phản ứng thứ hai và 35
17
chu kỳ. Cuối cùng, để xác định xem phản ứng có là một thử nghiệm chung xác định
C.trachomatis hay không, các thí nghiệm tiến hành bằng cách sử dụng các mẫu khác
để xét nghiệm. Kiểm tra cho thấy độ nhạy tương tự đối với mẫu nước tiểu, dịch niệu
đạo, dịch nhày mũi họng, và bệnh phẩm từ mắt. Kết quả cho thấy nested PCR đối với
phát hiện của C.trachomatis trong các mẫu lâm sàng là rất nhạy, có thể phát hiện ít
hơn 10 EB mỗi phản ứng trong các mẫu sinh học khác nhau; loại bỏ đến mức thấp
nhất việc phát hiện các kết quả âm tính giả bằng cách sử dụng một kiểm soát nội bộ
khuếch đại; đủ mạnh để đối phó với các điều kiện thay đổi trong các phòng thí nghiệm
khác nhau.
1.3.2. Các nghiên cứu trong nước
Tại Thành phố Hồ Chí Minh, một số nghiên cứu trong cộng đồng cho thấy tỷ lệ
nhiễm C.trachomatis ở phụ nữ thay đổi từ 18% đến 32.5%, trong đó một số yếu tố
nguy cơ được nhận diện như số bạn tình, độ tuổi bắt đầu quan hệ tình dục, tiền căn
bệnh phụ khoa.
Năm 1995, khảo sát tỷ lệ hiện mắc bệnh lây truyền qua đường tình dục được Vụ
Sức Khỏe Bà Mẹ Trẻ Em và Kế Hoạch Hóa Gia Đình của Bộ Y Tế thực hiện ở Việt
Nam [29]. Đối tượng là các phụ nữ đến khám tại Trung Tâm Sức Khỏe Bà Mẹ Trẻ Em
và Kế Hoạch Hóa Gia Đình thành phố Hồ Chí Minh trong 10 tuần gồm 812 phụ nữ ở
độ tuổi 15 đến 39. Chẩn đoán bệnh lậu dựa trên nuôi cấy và xác nhận bằng một xét
nghiệm kháng thể đơn dòng đặc hiệu cho N.gonorrhoea. Sự hiện diện của
C.trachomatis được xác định bằng kỹ thuật ELISA phát hiện kháng nguyên (IDEIA)
trong bệnh phẩm nội mạc cổ tử cung. TPHA được thực hiện cho tất cả các mẫu máu để
tìm bệnh giang mai. Tỷ lệ bệnh lây truyền qua đường tình dục phát hiện được ở giang
mai 0.5%, lậu 0.7% và C.trachomatis 2.5%.
Một nghiên cứu cắt ngang về nhiễm HIV và các yếu tố nguy cơ ở phụ nữ mại
dâm tại phía nam Việt Nam đã được Nguyễn Thị Thanh Thủy, Võ Tuyết Nhung,
Nguyễn Văn Thục, Trương Xuân Liên và Hạ Bá Khiêm thực hiện vào 1995-1996 [24].
Tổng cộng 968 phụ nữ mại dâm ở thành phố Hồ Chí Minh, Cần Thơ và An Giang
được làm xét nghiệm. Các xét nghiệm bệnh lây truyền qua đường tình dục được thực
hiện là: nuôi cấy để phân lập N.gonorrhoeae, ELISA (Sanofi, Organon) để phát hiện
18
nhiễm HIV được xác nhận bằng Western Blot, TPHA cho giang mai, DIF cho
C.trachomatis và ELISA HBsAg cho HBV. Tỷ lệ hiện mắc của các bệnh lây truyền
qua đường tình dục được phát hiện là 40.4% cho giang mai, 3.3% cho lậu, 5.8% cho
C.trachomatis, 5.2% cho HIV và 9% cho HBV.
Trong thời gian từ tháng 2/1998 đến 3/1999, các tác giả đã khảo sát 415 phụ nữ
từ 15-49 tuổi có gia đình đang sống tại huyện Hóc Môn thành phố Hồ Chí Minh [3].
Các đối tượng được chọn một cách ngẫu nhiên, nếu có đủ điều kiện nghiên cứu thì lập
danh sách theo phương pháp ngẫu nhiên đơn, sau đó gửi thư mời đối tượng đến trạm y
tế xã khám phụ khoa và lấy mẫu. Cách xử lý bệnh phẩm cũng như cách đọc kết quả
được tuân theo quy trình hướng dẫn của bộ xét nghiệm do Bio Merieux cung cấp. Kết
luận dương tính với C.trachomatis khi có hơn 10 thể phát huỳnh quang trên quang
trường với vật kính 40; bệnh phẩm âm tính khi không có thể C.trachomatis phát huỳnh
quang và ít nhất phải có hơn 50 tế bào thượng bì trên bề mặt của giếng. Kết quả 75
nguời có hiện diện của C.trachomatis trên bệnh phẩm phết cổ tử cung, như vậy tần
suất lưu hành của viêm cổ tử cung do C.trachomatis là 18.07%.
Tỷ lệ viêm cổ tử cung do C.trachomatis ở phụ nữ đi khám phụ khoa là 32.5%
của Trần Thị Lợi tiến hành năm 1999 [8].
Năm 2001-2002, Huỳnh Thị Trọng, Nguyễn Quốc Chinh và Nguyễn Văn Tú đã
thực hiện một nghiên cứu cắt ngang với phương pháp chọn mẫu xác suất với cỡ mẫu
để xác định tỷ lệ hiện mắc các nhiễm khuẩn đường sinh sản dưới của 2234 phụ nữ đã
kết hôn, ở lứa tuổi mang thai, sống tại thành phố Hồ Chí Minh [25]. Các xét nghiệm
được thực hiện là: nuôi cấy để phân lập N.gonorrhoea, Smart Check Chlamydia cho
C.trachomatis. Tỷ lệ hiện mắc lậu là 0.2%, C.trachomatis là 0.6%,
Năm 2002-2003, Ủy Ban Dân Số, Gia Đình và Trẻ Em Việt Nam – Cục Phòng Chống
AIDS Bộ Y Tế và Viện Pasteur thành phố Hồ Chí Minh đã tiến hành nghiên cứu bệnh
lây truyền qua đường tình dục ở phụ nữ mãi dâm tại 5 tỉnh biên giới Lai Châu, Quảng
Trị, Đồng Tháp, An Giang và Kiên Giang [26]. Có tất cả 703 phụ nữ mãi dâm của 5
tỉnh tham gia vào nghiên cứu cắt ngang này. Xét nghiệm bệnh lậu và C.trachomatis
qua mẫu nước tiểu bằng kỹ thuật Roch Amplicor. Tỷ lệ mắc lậu, C.trachomatis,
lậu/C.trachomatis tại Lai Châu 2.0%, 1.0%, 27.3%; Quảng Trị 1.0%, 12.9%, 32.7%;
19
Đồng Tháp 4.7%, 11.4%, 16.0%; An Giang 7.0%, 10.7%, 11.3% và Kiên Giang 4.0%,
13.4%, 24.4%.
Năm 2003, Trung tâm phòng chống bệnh tật Hoa Kỳ (CDC) cùng Viện Da Liễu
trung ương tiến hành một cuộc điều tra về tỷ lệ lưu hành STI/HIV của các nhóm quần
thể dân cư khác nhau tại 5 tỉnh của Việt Nam [29]. Nhiễm C.trachomatis được phát
hiện bằng phản ứng PCR và tỷ lệ mắc là 9% trong nhóm tân binh tại Hà Nội và 0.5-5%
trong nhóm bệnh nhân đến phòng khám bệnh lây truyền qua đường tình dục. Trong
nhóm phụ nữ có thai, tỷ lệ mắc C.trachomatis từ 1.5% đến 5.8%.
Năm 2003, Viện Pasteur thành phố Hồ Chí Minh và Văn Phòng Phòng Chống
AIDS cùng Trung Tâm Phòng Chống Bệnh Xã Hội Sóc Trăng nghiên cứu về bệnh lây
truyền qua đường tình dục ở 395 phụ nữ mại dâm của tỉnh Sóc Trăng [29]. Các kỹ
thuật được sử dụng để xét nghiệm lây truyền qua đường tình dục là PCR (Amplicor
CT/NG, Roch, 2002) để tìm N.gonorrhoea và C.trachomatis trong nước tiểu. Tỷ lệ
hiện mắc lậu, C.trachomatis, lậu/C.trachomatis là 14.9%, 48.4%, 54.9%.
Tần suất nhiễm C.trachomatis ở phụ nữ đã được nhiều tác giả quan tâm nghiên
cứu và đã có một số số liệu ban đầu ghi nhận tỉ lệ nhiễm C.trachomatis ở một số đối
tượng trong cộng đồng như phụ nữ đang mang thai, phụ nữ lứa tuổi sinh đẻ, cũng như
ở những đối tượng nguy cơ cao như phụ nữ đến khám phụ khoa và phụ nữ vô sinh do
tắc ống dẫn trứng. Tần suất nhiễm C.trachomatis thay đổi theo từng tác giả, từng
nhóm đối tượng, tuy vậy đều thống nhất trong khoảng 20 – 40% ở đối tượng trong
cộng đồng [1]. Điểm chung của các nghiên cứu trên là sử dụng kỹ thuật miễn dịch
huỳnh quang trực tiếp để tìm kháng nguyên, xác định tình trạng hiện đang nhiễm
C.trachomatis.
Lần đầu tiên tại Việt Nam, xét nghiệm kháng thể kháng C.trachomatis được sử
dụng như một xét nghiệm sàng lọc. Đối tượng nghiên cứu là tất cả các trường hợp điều
trị vô sinh có chỉ định thực hiện thủ thuật thụ tinh nhân tạo (TTNT) tại khoa Hiếm
muộn, bệnh viện Từ Dũ trong thời gian từ 20/2/2004 đến 20/7/2004 [31]. Bệnh nhân
được tư vấn về tình hình nhiễm C.trachomatis trong cộng đồng, khả năng nhiễm bệnh
của bản thân và ảnh hưởng của nhiễm C.trachomatis lên hiệu quả điều trị. Bệnh nhân
cũng được tư vấn về xét nghiệm kháng thể kháng C.trachomatis và đồng ý tham gia
nghiên cứu. Khi được nhận vào nghiên cứu, bệnh nhân đã được ghi nhận về bệnh sử,
20
thăm khám lâm sàng, thực hiện những xét nghiệm cơ bản. Vào ngày thứ 2 hoặc 3 của
kỳ kinh, bệnh nhân được lấy máu thử kháng thể kháng C.trachomatis loại IgG và được
bắt đầu dùng toa thuốc kích thích phát triển nang noãn theo phác đồ chuẩn tại khoa.
Quy trình thực hiện thủ thuật TTNT được tiến hành theo phác đồ chuẩn tại khoa Hiếm
muộn, bệnh viện Từ Dũ. Xét nghiệm Platelia® Chlamydia IgG được thực hiện tại
khoa xét nghiệm bệnh viện Từ Dũ, sử dụng máy và bộ xét nghiệm của hãng Bio-Rad
bằng kỹ thuật ELISA. Trong thời gian từ 1/3 đến 20/7/2004 có 425 bệnh nhân điều trị
vô sinh bằng thủ thuật TTNT được nhận vào nghiên cứu. Tuổi trung bình của bệnh
nhân là 28.3 (từ 19 đến 35), thời gian vô sinh trung bình là 3.7 năm (từ 1 đến 6 năm).
Có 99 bệnh nhân cho kết quả dương tính với xét nghiệm kháng thể kháng
C.trachomatis (nhóm Ct IgG+), chiếm tỷ lệ 23.3%. Mặc dù không ghi nhận sự khác
biệt có ý nghĩa thống kê về kết quả điều trị (tỷ lệ beta-hCG dương tính và tỷ lệ thai
lâm sàng) giữa hai nhóm bệnh nhân, vẫn có thể ghi nhận tỷ lệ có thai trong nhóm xét
nghiệm âm tính với C.trachomatis (nhóm Ct IgG-) cao hơn hẳn (gấp 8 lần) so với kết
quả của nhóm xét nghiệm dương tính với C.trachomatis (nhóm Ct IgG+).
Từ tháng 8 đến tháng 12 năm 2006, một nghiên cứu áp dụng kỹ thuật PCR xét
nghiệm chẩn đoán C.trachomatis được thực hiện tại Viện da liễu quốc gia trên 555
bệnh nhân [7]. Bệnh nhân là đối tượng trên 15 tuổi đến khám có biểu hiện tiết dịch
niệu đạo và tiết dịch âm đạo. Bệnh phẩm là dịch tiết niệu đạo (đối với bệnh nhân nam)
và dịch tiết cổ tử cung (đối với bệnh nhân nữ). Tiến hành tách chiết DNA bằng Qiamp
DNA Mini Kit của hãng Qiagen, chẩn đoán nhiễm C.trachomatis bằng kỹ thuật PCR
với hai cặp mồi KL1/KL2 (nhân đoạn 241 bp trên plasmid của C.trachomatis) và
T1/T2 (nhân đoạn 200 bp trên plasmid của C.trachomatis). Bệnh nhân được khẳng
định kết quả dương tính khi cả hai cặp mồi đều cho kết quả dương tính. Kết quả có 90
bệnh nhân dương tính với cả hai cặp mồi, chiếm tỷ lệ 16.2%. Trong đó tỷ lệ nhiễm
C.trachomatis ở nữ giới là 21/205, chiếm 10.2%. So sánh PCR sử dụng cặp mồi
T1/T2, phương pháp PCR sử dụng cặp mồi KL1/KL2 có độ nhạy 100% và độ đặc hiệu
là 99.8%. Độ nhạy và độ đặc hiệu này cao tương đương với các kết quả đã công bố.
Tỷ lệ nhiễm C.trachomatis ở Việt Nam năm 2007 khoảng 5897 ca. Tại Viện Da
liễu quốc gia, bằng phương pháp miễn dịch sắc ký phát hiện tỷ lệ nhiễm khoảng 10%
số bệnh nhân STI, bằng kỹ thuật PCR phát hiện 16.2%. Trong đó các yếu tố nguy cơ
21
bao gồm bệnh nhân nữ nhỏ hơn 25 tuổi; bệnh nhân nam có viêm đỏ quy đầu hoặc tiết
dịch đục, bệnh nhân độc thân [10].
Lấy mẫu kiểu ngẫu nhiên các đối tượng hút thai ba tháng đầu thai kỳ trong giờ
hành chính, tại khoa kế hoạch hóa gia đình Bệnh viện Từ Dũ từ 01/08/2007 đến
30/01/2008, thu thập bệnh phẩm tại kênh cổ tử cung làm xét nghiệm PCR (Amplicor ® của
hãng Roche) được thực hiện tại viện Pasteur, Phạm Văn Đức và cộng sự đã thu được kết
quả: trong 1.003 trường hợp nghiên cứu tỷ lệ nhiễm C.trachomatis là 9.2%, phần lớn rơi
vào các đối tượng trẻ dưới 30 tuổi, kinh tế trung bình [4].
Tại bệnh viện Phong-Da liễu Trung ương Quy Hoà, tác giả Nguyễn Phúc Như Hà
và cộng sự [5,30] đã sử dụng phản ứng multiplex PCR phát hiện vi khuẩn
C.trachomatis. Mẫu thử là DNA tách chiết từ các huyền dịch vi khuẩn C.trachomatis
và mẫu bệnh phẩm lâm sàng như dịch niệu đạo, nước tiểu nam giới, dịch phết cổ tử
cung. Sử dụng mồi đặc hiệu (đặt TaKaRa tổng hợp) cho đoạn DNA dài 241 bp trên
cryptic plasmid của C.trachomatis trong thể tích phản ứng là 25 µl. Kết quả nghiên
cứu cho thấy, Multiplex PCR có khả năng phát hiện rất cao, có thể nói là lý tưởng đạt
mức phát hiện tối thiểu chỉ cần 1 DNA bộ gen của vi khuẩn đích có mặt trong mẫu thử
là có thể phát hiện được. Kết quả xét nghiệm bệnh nhân thu được 12.1% trường hợp
dương tính trên các tổng số các trường hợp được chẩn đoán viêm cổ tử cung.
Trong một nghiên cứu khác, bệnh nhân tiết dịch âm đạo đến khám tại bệnh viện da
liễu thành phố Hồ Chí Minh từ tháng 6 năm 2007 đến tháng 6 năm 2008 được xét
nghiệm quick test và PCR [6]. 245 bệnh nhân trên 18 tuổi, chia 3 nhóm bị tiết dịch
niệu đạo (95), tiết dịch âm đạo (70), bệnh nhân nữ không triệu chứng nhưng có yếu tố
nguy cơ (80). Kết quả xét nghiệm bằng PCR: tỷ lệ dương tính với C. Trachomatis ở
nhóm bị tiết dịch niệu đạo là 26/95 (27.4%), bệnh nhân có triệu chứng tiết dịch âm đạo
là 25/70 (35.7%), bệnh nhân không triệu chứng là 21/80 (26.3%).
22
Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
2.1.1. Đối tượng nghiên cứu
- Mẫu DNA vi khuẩn Chlamydia trachomatis do Viện Công nghệ sinh họcViện Khoa học Việt Nam cung cấp.
- Các bệnh nhân nữ trong độ tuổi sinh sản (15-49 tuổi) có biểu hiện viêm âm
đạo, cổ tử cung đến khám tại phòng khám Sản phụ khoa - Bệnh viện Đại học Y Thái
Bình trong thời gian từ 01/04/2011 đến 10/2011.
2.1.2. Thời gian nghiên cứu: từ 01/04/2011.
2.1.3. Địa điểm nghiên cứu
+ Lấy mẫu dịch phết cổ tử cung tại phòng khám Sản phụ khoa - Bệnh viện Đại
học Y Thái Bình.
+ Chuẩn quy trình kỹ thuật, xử lý mẫu, tách chiết DNA và thực hiện phản ứng
PCR tại Lab sinh học phân tử - Trung tâm KHKT Y Dược - Đại học Y Thái Bình.
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.1. Phương pháp chọn mẫu và cỡ mẫu
Phương pháp chọn mẫu
Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân:
Bệnh nhân trong độ tuổi sinh sản, đã từng quan hệ tình dục.
Được khám và chẩn đoán là viêm âm đạo, cổ tử cung.
Đồng ý tham gia nghiên cứu.
Tiêu chuẩn loại trừ:
23
Bệnh nhân đang trong giai đoạn kinh nguyệt, bị rong kinh, rong huyết.
Bệnh nhân đã từng điều trị kháng sinh trong vòng 1 tháng trước đó.
Không đồng ý tham gia nghiên cứu.
Những bệnh nhân được lựa chọn vào nghiên cứu sẽ được lấy mẫu dịch phết cổ
tử cung để tiến hành làm xét nghiệm PCR phát hiện Chlamydia trachomatis tại Trung
tâm KHKT Y Dược - Đại học Y Thái Bình.
Cỡ mẫu:
Để xác định cỡ mẫu cho việc ước tính tỷ lệ nhiễm Chlamydia trachomatis ở
những phụ nữ viêm cổ tử cung chúng tôi sử dụng công thức:
2
1,96
n≥
p (1 − p )
m
Trong đó: n là cỡ mẫu, m là độ sai số, p là tỉ lệ nhiễm Chlamydia trachomatis ở
phụ nữ viêm cổ tử cung.
Với p = 17% (theo nghiên cứu của Farhad B. Hashemi và cộng sự [16]) và lựa
chọn giá trị độ sai số m = 0,05 thì cỡ mẫu n tối thiểu là 217 bệnh nhân.
2.2.2. Kỹ thuật xét nghiệm
2.2.2.1. Phương pháp lấy mẫu
Những bệnh nhân được lựa chọn tham gia nghiên cứu đều được thăm khám bởi
các bác sĩ Sản phụ khoa để xác định tình trạng viêm âm đạo, cổ tử cung trước khi lấy
mẫu. Dùng tăm bông lau sạch dịch tiết cổ tử cung. Dùng tăm bông tiếp theo đưa sâu
vào ống cổ tử cung 2 cm, xoay tăm bông và miết tăm bông vào thành ống cổ tử cung
từ 15 đến 30 giây. Khi kéo tăm bông ra không chạm vào vách âm đạo. Mẫu phết cổ tử
cung được giữ trong tuýp Falcol 15 ml có chứa 2 ml dung dịch 2SP (2-sucrosephosphate transport medium), bảo quản ở 4oC và đưa về phòng thí nghiệm trong vòng
2- 3 giờ và thực hiện phản ứng PCR trong vòng 24 giờ.
Tại phòng thí nghiệm, bệnh phẩm được chia nhỏ vào hai tuýp eppendorf 1.5 ml
(1ml/tuýp), một tuýp được sử dụng để tách chiết DNA, tuýp còn lại được bảo quản ở
-70oC.
24
2.2.2.2. Xử lý mẫu
- Lấy 500 µl bệnh phẩm cho vào tuýp eppendorf 1.5 ml, bổ sung 500 µl dung
dịch TTE, vortex, ly tâm 13.000 rmp/3 phút, loại dịch nổi, giữ lại khoảng 200 µl dịch
đáy.
- Bổ sung 500 µl dung dịch PBS, vortex, ly tâm 13.000 rmp/3 phút, loại dịch
nổi, giữ lại khoảng 200 µl dịch đáy.
2.2.2.3. Tách chiết ADN
Tuýp trên được sử dụng để tách chiết theo phương pháp Boom [14].
Bước 1: Phá tế bào giải phóng DNA
- Bổ sung 1000 µl dung dịch L6, vortex, bổ sung 30 µl SiO 2, vortex đều, ly tâm
13.000 rmp/30s, loại dịch nổi, thu cặn.
Bước 2: Tinh sạch DNA
- Bổ sung 1000 µl dung dịch L2, vortex tan cặn, ly tâm 13.000 rmp/30s, loại
dịch nổi, thu cặn.
- Làm lại bước trên.
- Bổ sung 1000 µl dung dịch ethanol 70% lạnh, vortex tan cặn, ly tâm 13.000
rmp/30s, loại dịch nổi, thu cặn.
- Làm lại bước trên.
- Bổ sung 1000 µl dung dịch acetone 100%, vortex tan cặn, ly tâm 13.000
rmp/30s, loại dịch nổi, thu cặn.
- Làm khô cặn bằng cách sấy ở 60oC trong 10 phút, mở nắp eppendorf.
Bước 3: Thu hồi DNA
- Bổ sung 50 µl TE, ủ ở 60oC trong 10 phút, đóng nắp eppendorf. Ly tâm
13.000rmp/30s. Hút dịch nổi sang một eppendorf mới, ghi tên dán nhãn.
- Làm lại bước trên.
Dịch nổi chứa DNA thu được bảo quản ở -20oC sử dụng chạy PCR.
25
Tài liệu liên quan
Tài liệu Ứng dụng kỹ thuật Mac - Elisa chẩn đoán Viêm não Nhật Bản tại bệnh viện Bạch Mai trong 5 năm (1997 - 2001) doc
Phát triển và áp dụng kỹ thuật PCR trong chẩn đoán nhanh một số căn nguyên vi khuẩn gây tiêu chảy
Phát triển và áp dụng kỹ thuật PCR trong chẩn đoán nhanh một số căn nguyên vi khuẩn gây tiêu chảy
nghiên cứu ứng dụng và đánh giá kết quả phẫu thuật nội soi cắt túi mật tại bệnh viện đại học y hà nội
Khảo sát mức độ hài lòng của điều dưỡng kỹ thuật viên làm việc tại bệnh viện đại học y hà nội trong giai đoạn từ 11-2009 đến 06-2010
Kỹ thuật PCR trong chẩn đoán lao pptx
Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật QFPCR trong chẩn đoán trước sinh một số hội chứng lệch bội NST
áp dụng kỹ thuật pcr trong chẩn đoán nhiễm chlamydia trachomatis đường sinh dục tiết niệu
nghiên cứu lâm sàng, cận lâm sàng và đánh giá kết quả điều trị bệnh lý viêm xương tại bệnh viện đại học y dược huế và bệnh viện trung ương huế
ÁP DỤNG KỸ THUẬT CAO TRONG CHẨN ĐOÁN VÀ ĐIỀU TRỊ HIẾM MUỘN NAM DO BẾ TẮC pptx
Tài liệu bạn tìm kiếm đã sẵn sàng tải về
(1.07 MB) - Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật PCR trong chẩn đoán viêm âm đạo, cổ tử cung do chlamydia trachomatis tại bệnh viện đại học y thái bình
Tải bản đầy đủ ngay
×


WARC-Type: response

Content-Type: application/http; msgtype=response

WARC-Identified-Payload-Type: application/xhtml+xml

Connection: close

X-Powered-By: UrlRewriter.NET 2.0.0

Cache-Control: no-cache

Pragma: no-cache

Content-Type: text/html; charset=utf-8


markdown:
[Mẫu phòng ngủ cổ điển Châu Âu – Tạp chí không gian đẹp 2018](http://thoitrangwiki.com/mau-phong-ngu-co-dien-chau-au-tap-chi-khong-gian-dep-2018.html)
Xin giới thiệu tới mọi người ý tưởng thiết kế nội thất phòng ngủ phong cách tân cổ điển Châu Âu, đón đầu xu hướng mới giữa năm 2017 và đầu năm 2018...

WARC-Truncated: length

WARC-Identified-Payload-Type: text/html

Accept-Ranges: bytes

Vary: Cookie,Accept-Encoding

Content-Type: text/html; charset=UTF-8


markdown:
date
Trang chủ
Giới thiệu
Tiềm năng của huyện
Di tích - Lễ hội
Email
Danh bạ cơ quan chức năng
Đăng nhập
Tổng quan
Giới thiệu
Cộng đồng dân cư
Lịch sử hình thành
Tiềm năng của Huyện
Định hướng phát triển
Thành tựu
Hệ thống chính trị
Huyện ủy
Hội đồng nhân dân
Ủy ban nhân dân huyện
UB MTTQ và các Đoàn thể
Lãnh đạo qua các thời kỳ
Xây dựng Đảng
Cấp ủy Đảng
Tổ chức - Cán bộ
Tuyên giáo
Kiểm tra
Dân vận
Kinh tế - Đầu tư
Thông tin quy hoạch
Chính sách thu hút đầu tư
Tình hình kinh tế - xã hội
Dự án - cơ hội đầu tư
Thủ tục hành chính
TTHC Cấp huyện
TTHC cấp xã
Văn bản pháp quy
Văn bản của Chính phủ
Văn bản của tỉnh
Văn bản của huyện
Tin tức - Sự kiện
Tin Kinh tế - chính trị
Tin Văn hóa & Thể thao
An ninh - Quốc phòng
Xây dựng nông thôn mới
Tin tức xã - thị trấn
Di tích - Lễ hội
Di tích cấp Quốc gia
Di tích cấp tỉnh
Lễ hội
Dành cho du khách
Phương tiện vận tải
Di tích - Lễ hội
Ẩm thực - nhà hàng
Khách sạn - nhà nghỉ
Làng nghề truyền thống
Doanh nghiệp
Doanh nghiệp Nhà nước
Doanh nghiệp tư nhân
Công ty Cổ phần
Công ty TNHH
Hợp tác xã
Cơ sở sản xuất
Thư viện
Thư viện video
Thư viện ảnh
Liên hệ - góp ý
Ý kiến thăm dò
Truy cập
Hôm nay:
11
Hôm qua:
10
Tuần này:
112
Tháng này:
355
Tất cả:
16111
Huyện Triệu Sơn: Sau 3 năm xây dựng nông thôn mới
Phát huy kết quả đã đạt được trong phong trào chung tay xây dựng nông thôn mới. Năm 2013, trên cơ sở các Nghị quyết của Huyện ủy, HĐND huyện; UBND huyện đã chỉ đạo, điều hành theo đúng Quy chế hoạt động và xác định 4 nhiệm vụ trọng tâm, trọng điểm để tổ chức chỉ đạo thực hiện đó là:
Tin tức sự kiện
Phát huy kết quả đã đạt được trong phong trào chung tay xây dựng nông thôn mới. Năm 2013, trên cơ sở các Nghị quyết của Huyện ủy, HĐND huyện; UBND huyện đã chỉ đạo, điều hành theo đúng Quy chế hoạt động và xác định 4 ...
Huyện Triệu Sơn: Sau 3 năm xây dựng nông thôn mới
Huyện Triệu Sơn: Sau 3 năm xây dựng nông thôn mới
Trong không khí đón chào xuân mới Ất Mùi, hưởng ứng Năm Du lịch Quốc gia 2015 – Thanh Hóa, sáng 27-2 (tức mồng 9 tháng Giêng, năm Ất Mùi), UBND huyện Triệu Sơn đã khai mạc trọng thể Lễ hội đền Nưa – Am Tiên năm 2015.
Khai hội đền Nưa – Am Tiên năm 2015
Khai hội đền Nưa – Am Tiên năm 2015
Trên đường dẫn chúng tôi đi thăm trường lớp, cô giáo Lê Thị Lương, Hiệu trưởng Trường Tiểu học Thọ Thế, cho biết: Những năm qua, bằng sự nỗ lực của cấp ủy, chính quyền và sự đóng góp của các bậc phụ huynh, cơ sở ...
Huyện Triệu Sơn nỗ lực xây dựng trường chuẩn quốc gia
Huyện Triệu Sơn nỗ lực xây dựng trường chuẩn quốc gia
Sáng 5/3, tại xã Đồng Tiến, huyện Triệu Sơn (Thanh Hóa), Tỉnh Đoàn Thanh Hóa tổ chức gặp mặt, động viên và giao lưu các tân binh trước khi lên đường nhập ngũ năm 2015.
Gặp gỡ, tặng quà tân binh lên đường nhập ngũ năm 2015
Gặp gỡ, tặng quà tân binh lên đường nhập ngũ năm 2015
Chiều ngày 06/11/2014, tại Trụ sở UBND huyện Triệu Sơn, đồng chí Nguyễn Đình Xứng - Ủy viên Ban Thường vụ Tỉnh ủy, Phó Chủ tịch UBND tỉnh, Chủ tịch Hội đồng thẩm định chủ trì Hội nghị Hội đồng thẩm định Dự án ...
Điều chỉnh quy hoạch tổng thể phát triển kinh tế - xã hội...
Điều chỉnh quy hoạch tổng thể phát triển kinh tế - xã hội huyện Triệu Sơn đến năm 2020.
Ngày 30/6/2014, Thượng tướng Đặng Văn Hiếu - Uỷ viên TW Đảng, Thứ trưởng thường trực Bộ Công an cùng các ông trong đoàn Đại biểu Quốc hội tỉnh Thanh Hoá gồm: ông Lê Nam – Phó đoàn Đại biểu Quốc hội tỉnh Thanh Hoá; ...
Tiếp xúc cử tri tại 2 huyện Triệu Sơn và Thọ Xuân, tỉnh...
Tiếp xúc cử tri tại 2 huyện Triệu Sơn và Thọ Xuân, tỉnh Thanh Hoá
Đó là cô Trần Thị Vang - giáo viên, đoàn viên CĐ Trường Mầm non xã Bình Sơn, huyện Triệu Sơn (tỉnh Thanh Hóa).
Một nữ giáo viên ở Triệu Sơn được trao nhà “Mái ấm công...
Một nữ giáo viên ở Triệu Sơn được trao nhà “Mái ấm công đoàn”
Ngày 16/1/2015 Ban Tuyên Giáo huyện ủy đã tổ chức hội nghị tổng kết công tác Khoa giáo năm 2014, triển khai phương hướng nhiệm vụ năm 2015.
Ban Tuyên Giáo huyện ủy tổ chức hội nghị tổng kết công tác...
Ban Tuyên Giáo huyện ủy tổ chức hội nghị tổng kết công tác khoa giáo năm 2014, phương hướng nhiệm vụ năm 2015
Lịch tiếp dân
UBND xã
Đảng Ủy xã
Tin Kinh tế - Chính trị
Hơn 5.300 hộ nghèo được vay vốn của Phòng giao dịch Ngân hàng Chính sách xã hội huyện
Hết năm 2014, Phòng giao dịch Ngân hàng Chính sách xã hội huyện Triệu Sơn đã thực hiện cho vay 10 chương trình tín dụng với tổng dư nợ hơn 350 tỷ đồng, trong đó dư nợ cho vay hộ nghèo đạt 128 tỷ đồng, với trên 5.300 hộ nghèo, cận nghèo và các đối tượng chính sách.
Mô hình “Cánh đồng mẫu lớn” đạt hiệu quả cao
Tiếp xúc cử tri tại 2 huyện Triệu Sơn và Thọ Xuân, tỉnh Thanh Hoá
Huyện Triệu Sơn tập trung chuyển dịch cơ cấu kinh tế
Xây dựng Đảng
Bồi dưỡng công tác dân vận, mặt trận trong xây dựng nông thôn mới
Trong thời gian qua, Ban Thường vụ Huyện ủy Triệu Sơn đã tổ chức tập huấn công tác dân vận, công tác mặt trận trong thực hiện xây dựng nông thôn mới cho 2.358 cán bộ là phó bí thư đảng ủy, trưởng khối dân vận, các xã, thị trấn và ban công tác mặt trận cơ sở gồm bí thư chi bộ, trưởng thôn, chi hội trưởng các đoàn thể.
Huyện ủy Triệu Sơn: Tăng cường công tác kiểm tra, giám sát tổ chức Đảng và đảng viên
Ban Tuyên Giáo huyện ủy tổ chức hội nghị tổng kết công tác khoa giáo năm 2014, phương hướng nhiệm vụ năm 2015
Huyện Triệu Sơn triển khai đồng bộ các giải pháp đưa nghị quyết của Đảng vào cuộc sống
Tin văn hóa - xã hội
Khai hội đền Nưa – Am Tiên năm 2015
Trong không khí đón chào xuân mới Ất Mùi, hưởng ứng Năm Du lịch Quốc gia 2015 – Thanh Hóa, sáng 27-2 (tức mồng 9 tháng Giêng, năm Ất Mùi), UBND huyện Triệu Sơn đã khai mạc trọng thể Lễ hội đền Nưa – Am Tiên năm 2015.
Huyện Triệu Sơn nỗ lực xây dựng trường chuẩn quốc gia
Nhiều hoạt động nâng cao chất lượng đời sống văn hóa cơ sở
Gần 1.000 hộ dân huyện Triệu Sơn hiến đất làm đường
An ninh - Quốc phòng
Gặp gỡ, tặng quà tân binh lên đường nhập ngũ năm 2015
Sáng 5/3, tại xã Đồng Tiến, huyện Triệu Sơn (Thanh Hóa), Tỉnh Đoàn Thanh Hóa tổ chức gặp mặt, động viên và giao lưu các tân binh trước khi lên đường nhập ngũ năm 2015.
Công an huyện Triệu Sơn: Tọa đàm doanh nghiệp với công tác đảm bảo ANTT
Công an huyện Triệu Sơn: Tổng kết công tác năm 2014, triển khai nhiệm vụ và phát động phong trào thi đua vì An ninh tổ quốc năm 2015
Công an huyện Triệu Sơn: Triệt xóa tụ điểm ma túy trên địa bàn thị trấn Giắt, huyện Triệu Sơn
Thông tin quy hoạch & đầu tư
Điều chỉnh quy hoạch tổng thể phát triển kinh tế - xã hội huyện Triệu Sơn đến năm 2020.
Chiều ngày 06/11/2014, tại Trụ sở UBND huyện Triệu Sơn, đồng chí Nguyễn Đình Xứng - Ủy viên Ban Thường vụ Tỉnh ủy, Phó Chủ tịch UBND tỉnh, Chủ tịch Hội đồng thẩm định chủ trì Hội nghị Hội đồng thẩm định Dự án điều chỉnh quy hoạch tổng thể phát triển kinh tế - xã hội huyện Triệu Sơn đến năm 2020.
Hội nghị thẩm định, trình duyệt Đồ án quy hoạch chi tiết xây dựng 1/500 dự án Công viên Nghĩa trang Vĩnh Hằng tại xã Minh Sơn, huyện Triệu Sơn
Huyện Triệu Sơn: Tập trung mọi nguồn lực thu hút đầu tư
Các Xã, Thị Trấn
Xã Xuân Thọ
Xã Thọ Tân
Thị trấn Triệu Sơn
Xã An Nông
Xã Bình Sơn
Xã Dân Lực
Xã Dân Lý
Xã Dân Quyền
Xã Đồng Lợi
Xã Đồng Thắng
Xã Đồng Tiến
Xã Hợp Lý
Xã Hợp Thành
Xã Hợp Thắng
Xã Hợp Tiến
Xã Khuyến Nông
Xã Minh Châu
Xã Minh Dân
Xã Minh Sơn
Xã Nông Trường
Xã Tân Ninh
Xã Thái Hòa
Xã Tiến Nông
Xã Triệu Thành
Xã Thọ Bình
Xã Thọ Cường
Xã Thọ Dân
Xã Thọ Ngọc
Xã Thọ Phú
Xã Thọ Sơn
Xã Thọ Thế
Xã Thọ Tiến
Xã Thọ Vực
Xã Xuân Lộc
Xã Vân Sơn
Xã Xuân Thịnh
Thông báo
Phê chuẩn việc bầu cử bổ sung Ủy viên UBND huyện Triệu Sơn, nhiệm kỳ 2011 - 2016
Giao đất cho Kho bạc Nhà nước Thanh Hóa thực hiện dự án xây dựng Trụ sở Kho bạc Nhà nước Triệu Sơn tại thị trấn Triệu Sơn, huyện Triệu Sơn
Giao đất cho Ban Trị sự Phật giáo huyện Triệu Sơn để mở rộng khuôn viên chùa Hòa Long tại xã Tiến Nông, huyện Triệu Sơn
Thu hồi đất và cho Công ty Cổ phần Đầu tư Hồng Uy thuê đất tại thị trấn Triệu Sơn, huyện Triệu Sơn
Công nhận thêm 30 làng nghề, làng nghề truyền thống và 10 nghề truyền thống
Video
Hình ảnh
Xây dựng nông thôn mới
Huyện Triệu Sơn: Sau 3 năm xây dựng nông thôn mới
Làm giàu từ đề án xóa nghèo
Những cái mới ở vùng nông thôn Triệu Sơn
Chị Lê Thị Mùa xã Vân sơn phát triển mô hình trồng nấm tại gia đình
Thoát nghèo từ mô hình “Xóa nghèo bền vững dựa vào cộng đồng”
Tình hình kinh tế - xã hội
Tình hình kinh tế - xã hội năm 2014 và Kế hoạch phát triển kinh tế - xã hội năm 2015
BẢN QUYỀN SỬ DỤNG THUỘC HUYỆN TRIỆU SƠN - THANH HÓA
ĐC: Phố Lê Lợi - Thị trấn Triệu Sơn - Huyện Triệu Sơn - Tỉnh Thanh Hóa
Điện thoại: 037 3867 124. Fax: 037 3867 267. Email: trieuson@thanhhoa.gov.vn
Tổng biên tập: ......................................................................................................................
Bản quyền sử dụng thuộc UBND huyện Triệu Sơn - Thanh Hóa
Ghi rõ nguồn tin "trieuson.gov.vn" khi phát hành lại nội dung trên Cổng thông tin điện tử huyện Triệu Sơn

Cache-Control: no-store, no-cache, must-revalidate, post-check=0, pre-check=0

Vary: Accept-Encoding


markdown:
**THÔNG BÁO** ** VỀ VIỆC TỔ CHỨC GIAO LƯU “ TÀI NĂNG ANH NGỮ- ENGLISH TO MASTER”**
Ban tổ chức giao lưu“
**Tài năng Anh ngữ - English to Master 2017**” – Trường THCS Đoàn Thị Điểm thông báo về việc tổ chức cuộc thi như sau: **1/Số báo danh và phòng thi: **Quý phụ huynh và học sinh vui lòng tra cứu thông tin tạ Tài liệu đính kèm hoặc xem tại bảng tin tại địa điểm thi trước giờ thi. **2/ Địa điểm thi**: Trường THCS Đoàn Thị Điểm, Cơ sở 1 – Số 48 Lưu Hữu Phước, Mỹ Đình 1, Nam Từ Liêm, Hà Nội. **3/ Lịch trình làm việc: **
**4/ Một số lưu ý khi đi thi:**
+ Thí sinh dự thi cần có mặt tại địa điểm thi đúng giờ theo lịch thi. Xuất trình giấy đăng ký dự thi hoặc giấy khai sinh ( bản sao).
+ Thí sinh nhận thẻ và đeo thẻ trong suốt quá trình tham dự kỳ thi.
+ Thí sinh chỉ được mang vào phòng thi: Bút mực hoặc bút bi, bút chì, gọt bút chì, tẩy chì.
Thông tin chi tiết về việc tổ chức giao lưu xin mời liên hệ Hotline BTC: 0912609841.
Chúc các thí sinh bình tĩnh, tự tin, hoàn thành thật tốt bài thi.
** BAN TỔ CHỨC**

Server: nginx

Cache-Control: no-store, no-cache, must-revalidate

X-Cache: MISS

X-Frame-Options: SAMEORIGIN


markdown:
Chợt chạm anh giữa khúc hát ngọt ngào
Hai đứa mình cùng trao nhau duyên nợ
Một câu thơ tình thả vào nỗi nhớ
Nét đàn ông khiến ngơ ngẩn đáy hồn
Biết cách trời anh mãi ngóng hoàng hôn
Buồn lãng đãng, bồn chồn trong chờ đợi
Dấu tự đáy lòng một câu anh hỏi
Biết bao giờ cho mình được gặp nhau?
Sợ hứa trước sẽ gieo nỗi u sầu
Em không muốn làm đau lòng người... nhớ
Nên câu hỏi giữa hồn anh trăn trở
Chờ bên nhau, hoa nở giữa xuân thì....
Hai đứa mình cùng trao nhau duyên nợ
Một câu thơ tình thả vào nỗi nhớ
Nét đàn ông khiến ngơ ngẩn đáy hồn
Biết cách trời anh mãi ngóng hoàng hôn
Buồn lãng đãng, bồn chồn trong chờ đợi
Dấu tự đáy lòng một câu anh hỏi
Biết bao giờ cho mình được gặp nhau?
Sợ hứa trước sẽ gieo nỗi u sầu
Em không muốn làm đau lòng người... nhớ
Nên câu hỏi giữa hồn anh trăn trở
Chờ bên nhau, hoa nở giữa xuân thì....
Vòng quay bốn mùa cứ thế trôi đi
Đêm từng đêm Biển thầm thì ước hẹn
Trăng dịu ngọt ghé bên thềm rón rén
Đặt làn môi cho biển thẹn .....sóng trào....
TSB
## Không có nhận xét nào:
## Đăng nhận xét

Server: GSE

X-Content-Type-Options: nosniff

Cache-Control: private, max-age=0

X-XSS-Protection: 1; mode=block


markdown:
Tác Giả: Kinh Bích Lịch
Kể từ tháng Bảy năm 1994, khi Mỹ và Việt Nam tái lập quan hệ ngoại giao bình thường thì càng có nhiều người Việt định cư tại nước ngoài trở về nước. Và kể từ lúc đó chuyện tình cảm và hôn nhân đã vượt khỏi những giới hạn về biên giới quốc gia và biên giới chính. Cùng lúc đó thì các văn phòng dịch vụ di trú, đoàn tụ, luật sư và du lịch cũng như sở xã hội đã phải giải quyết những hồ sơ của các chàng trai Mỹ gốc Việt xin cho hôn thê hay vợ sang định cư tại Hoa Kỳ. Nhưng có số có quá ít ỏi so với nhu cầu khá khẩn trương cần lấy chồng Việt Kiều của phụ nữ trong nước nên thời gian gần đây các phụ nữ Việt Nam đãõlục lạo tìm tòi báo chí ở các mục Tìm Bạn Bốn Phương và nhứt là các website như là
[Vietdating.us](http://www.vietdating.us), [Timbanonline.us](http://www.timbanonline.us), Vietsingle, hay là Vietlove trên Internet để mong tìm được một Việt Kiều để mà “tiến tới hôn nhân”.
Bích Lựu là một người con gái được sinh ra và lớn lên trong cái thời kỳ kinh tế đầy khó khăn tại Việt Nam, một nước vẫn còn bị các cơ quan tài chính quốc tế xếp hạng là một trong những quốc gia nghèo nhất thế giới . Bích Lựu từ nhỏ đã sống trong một gia đình nghèo khó ở cái đất Sóc Trăng. Tuy vậy so sánh với các cô gái cùng trang lứa ở trong xóm thì nàng trội hơn hết về ngoại hình dáng dóc, và nhan sắc. Tánh tình của nàng thì hiền lành dễ thương từ lúc nhỏ, nhưng những lúc gần đây tình hình kinh tế thay đổi, chính quyền có vẻ cởi mở hơn về vấn đề ngoại thương với các nước ngoài, nên cuộc sống của các thanh niên thiếu nữ cũng thay đổi theo lối sống mới . Họ có phần ăn chơi đua đòi hơn trước . Bích Lựu cũng là một người trong thành phần đó, bước vào cái năm 20 tuổi nàng bỗng nhiên đổi tánh ăn chơi, chưng diện và bắt đầu có cái mộng cưới người nước ngoài để có một cuộc sống vật chất “tương đối” . Chính vì thế nàng mới có ý định lên thành phố nơi mà có rất nhiều Việt Kiều về nước. Và Bích Lựu được sự đồng ý của gia đình để lên thành phố học may, nàng mướn một căn phòng nho nhỏ cùng chung với một đứa bạn tên Lệ Liễu. Qua lời khuyến dụ của bè bạn, nàng quyết định dấu gia đình chuyện nàng đi học may để tìm đến văn phòng dịch vụ hôn nhân nhờ đăng giùm nàng một quản cáo với giá là $100,000 VN. Sau khi được văn phòng dịch vụ phỏng vấn tuyển lựa để xác thực là nàng là có thực không phải là giả thì được đăng lên Web với vài hàng như sau: “Hoàng Triều Bích Lựu, cao 1 m 60, nặng 50 ký, dễ thương, thích xem phim, ca nhạc và đi du lịch . Mong làm quen với tất cả các bạn trai ở nước ngoài, không phân biệt tuổi tác, tôn giáo, nghề nghiệp, dân tộc và thể hình, nếu hợp sẽ tiến tới hôn nhân. Đặc biệt , tận tình hướng dẫn đi du lịch. Xin Lựu lạc về địa chỉ sau : Hoàng T B Lien 1234 đường Trần Văn A, Phường X, Quận Z, TP HCM hoặc điện thơ về htrbl@ nvnva1234.com” Bên dưới với vài hàng dịch tiếng Anh: “Cindy Hoang, 5’3″, 110 lbs, cute, love movies, music, and travel . I would like to know all people in the world. Age, religion, occupation, nationality and look are not important. Potential marriage. Travel any time. Address above”
Tấm hình nàng thích nhất mới rữa lại hồi hôm trước được gởi kèm theo. Nàng cố tình lấy tấm hình có vẻ sexy, phô bày phần trên hơi lộ liểu, cầu vai nho nhỏ nghiêng nghiêng về phía trước, bộ ngực vun đầy trắng ngần úp úp mở mở bên dưới lớp áo reng mỏng, miệng cười chúm chím, mắt liếc gợi tình . Chỉ hai ngày sau nàng nhận được khá nhiều email gởi từ khắp các nước với nội dung đại khái “em dễ thương lắm, anh chưa từng gặp em trong đời, chắc bên ngoài em còn đẹp hơn trong ảnh nhiều, em cười có duyên lắm chắc em nói chuyện dễ thương lắm”. Còn một số khác thì không có thành ý, chỉ viết đại khái cho vui như là “em đẹp lắm, sao em không cởi cái áo luôn, để kín kín hở hở anh nhìn thấy khó chịu quá, em ở truồng chụp càng đẹp hơn”. Còn một vài người thì bậy bạ hơn với những lời đại loại như “anh thấy em cũng đẹp đó, làm sao anh mới biết là em có thể tiến tới hôn nhân với anh. Nếu anh về Việt Nam thì em sẽ đi riêng với anh phải không ? Em nói thẳng ra đi, giá cả một chuyến đi như vậy là bao nhiêu, chơi không giới hạn phải không ? Nếu được thì email lại cho anh nhé”.
Qua nhiều lần thư từ qua lại nàng chỉ chấm có một người tự xưng với nàng là anh Don , 30 tuổi , kỹ sư sống ở tiểu bang Texas, Hoa Kỳ . Anh Don là một người từng trải với nhiều đàn bà ở cái lứa tuổi 30, nên chàng rất rành về tâm lý con gái. Những bức thư anh gởi đi cho Lựu thật là dài và tình cảm “chân thật” làm cho Lựu dù có ăn chơi sành sỏi thì cũng mắc bẩy, nhất là cái bằng Kỹ sư máy Điện Toán đã làm chóa mắt nàng cũng như biết bao cô gái ở Việt Nam ước mơ có được một tấm chồng như anh. Nhưng thực tế thì anh Don sống tại Quận hạt Santa Clara nơi mà phái nam nhiều hơn phái nữ đến gần 4,000 người. Anh Don cũng như biết bao chàng trai khác ở cái đất San Jose này thì khó mà kiếm bạn gái hay kiếm vợ với tình trạng trai thừa gái thiếu. Vì thế mà ngày ngày sau khi đi làm công cật lực thì anh Don chỉ có biết vào trong các quán cafe ngồi uống một mình và đốt thuốc liên tục, lim dim đôi mắt mơ được làm bạn với các nữ ca sĩ đẹp như mộng trên màn hình video . Nhưng anh Don thừa hiểu rằng những giấc mơ đó thì cũng sẽ mãi mãi là giấc mơ mà thôi. Và thế là anh Don quyết định giành dụm mốt tiền và ngày nghĩ phép để về Việt Nam một chuyến. Trước khi đi, anh quyết định email cho Lựu vài hàng để làm tin:
Lựu Thương,
Từ ngày quen biết em đến nay cũng được nữa năm rồi, anh thấy càng ngày càng thương em hơn . Em thì cứ nằn nặc đòi là anh phải về thăm em, anh cũng đã hứa nhiều rồi về chuyện đó nhưng chưa làm được. Hôm nay ngồi trong quán cafe, anh cảm thấy nhớ em da diết nên anh đã quyết định bỏ hết công việc kỹ sư còn dang dở của anh để về thăm em một chuyến. Anh đã mua vé máy bay rồi, ngày mai anh sẽ đi, ngày mốt là ngày 5 tháng 2 thì anh sẽ đáp xuống phi trường Tân Sơn Nhấtlúc 12 giờ trưa . Nếu em có rãnh thì ra rước anh, còn không thì anh đi tắc xi mướn khách sạn trước rồi liên lạc với em sau cũng được.
anh Don của em,
Tái bút: em có nhờ anh mua quà gì cho em thì em điện thơ qua gắp cho anh.
Anh Don bước xuống phi trường Tân Sơn Nhất mắt ngó quanh, anh thấy bồi hồi xúc động nhớ tới 10 năm qua cũng tại phi trường này anh bước chân ra đi. “Đã 10 năm rồi, lẹ thiệt” -anh lẫm bẩm trong miệng rồi bước qua khu lấy hành lý. Túi hành lý của anh bị một tên hải quan mở tung ra, bên trong hai túi sách toàn là quần zin, quần áo lót và dầu thơm của đàn bà mà anh đã theo lời của Lựu mà mua về.
– Mang chi nhiều vậy, định bán hả – tên hải quan nói to vừa đủ nghe .
– Không, mua tặng thôi, anh cằm 5 đồng này uống cafe-anh trả lời rồi dúi vào tay hắn. Hắn chụp lẹ như sợ ai sẽ trông thấy, rồi cho anh qua.
Anh bước ra ngoài sân bay với một cảm giác khác lạ ngỡ ngàng. Tiếng ồn ào của các anh chàng tắc-xi rao in ỏi, tiếng xe, tiếng còi, tiếng ồn ào khắp nơi . Anh còn đang hoang mang sợ mất đồ, nên hai tay cứ kè kè hai cái va-li lầm lũi bước.
– Anh đi tắc xi, anh … đi … không ? – vài ba đứa tắc xi lên tiếng chào gọi .
– Tôi có thân nhân tới rước mấy anh khỏi …-anh trả lời rồi ngó quanh như là đang kiếm thân nhân nhưng thực sự anh đâu có ai rước, tất cả thân nhân của anh đều đã định cư ở Mỹ hết rồi .
Mấy anh chàng tắc-xi vẫn cứ bám riết lấy anh không buông, dường như họ không tin vào lời nói của anh vậy. Anh còn đang lúng túng chưa biết tính sao thì bỗng anh nghe có ai khều phía sau lưng của anh:
– Có phải là anh Don-giọng nho nhỏ dễ thương của một người con gái .
Anh Don quay người lại bắt gặp trước mặt anh là một người con gái không mấy gì sắc xảo lắm nhưng rất có duyên.
– Em có phải là Lựu không ? – anh hỏi .
– Em nè, anh khỏe không ?!
Lúc này thấy Lựu xuất hiện hai, ba anh chàng tắc-xi bỗng nhiên lùi lại, đi tìm mối khác, nhường chỗ cho Lựu bước tới. Lựu đưa tay đẩy tiếp hai cái va-li cho anh Don lên xe kéo, cả hai vừa đi vừa nói chuyện rôm rã. Lựu có phần lanh lẹ hơn anh Don nên nói năng chí choé, anh Don vì đi đường xa mệt mỏi nên chị ậm ừ và gật đầu, chốc chốc anh nhìn Lựu một cách chăm chú. Anh thấy Lựu tướng cao ráo, tuy nhan sắc không đẹp như trong hình, nhưng dáng vóc thì nảy nở bất giác làm anh phải buột miệng lên tiếng hỏi:
– Em có tập thể dục không sao nhìn em có vẻ thể thao …?
– Ít khi lắm, sao anh hỏi vậy- Lựu nheo mắt như đọc trong ý nghĩ của Don rồi trả lời .
– À anh thấy em dáng dấp như model … như người mẫu nên mới hỏi vậy thôi.
Cả hai vừa nói vừa đi, Lựu đưa tay chỉ về hướng một chiếc “xe mười hai chỗ ngồi” chắc đã đậu ở đó từ lâu rồi . Anh tài xế thấy Lựu cùng một thanh niên đang đi tới thì lon ton chạy ra .
– Chào anh-anh tài xế nói rồi đưa tay ra bóc cái va-li lên vai ra vẻ sốt sắn lắm .
– Đó là anh Ben, em quen với ảnh, có nhờ ảnh ra rước anh đó – Lựu trả lời một cách nhí nhãnh, gọn hơ.
Bước lên xe, Lựu tự nhiên nắm tay của anh kéo vào lòng nàng như là đã thân thuộc lắm rồi. Anh Don cũng chẳng mắc cỡ gì bèn để tay hờ hững trên đùi nàng một cách “vô tư”. Anh cảm giác được làn da mát rượi toát ra từ đùi của Lựu, cái váy ngắn cũn cỡn màu đen kia như bức bình phong làm nổi lên cái đùi trắng hếu của nàng.


markdown:
![](https://encrypted-tbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcRbuqsuvJslhQnev000PeTUNH0c2r4wki17thPNbUJXw4XHenVx)
**Sau Vatican II,thế giới Cơ- Đốc đã thay đổi nghiêm trọng. Virus thần học Đa Nguyên Tôn Giáo bắt đầu tác động toàn bộ thế giới Cơ-Đốc. WCC và Giáo hội Công giáo La Mã làm việc tích cực tay trong tay để khởi sự đối thoại tương tác niềm tin với các tôn giáo khác vì hòa bình thế giới.** **Là một phần của toan tính như vậy, Ngày Thế Giới Cầu Nguyện cho Hòa Bình được tổ chức tại Đại Giáo đường St. Mary of Angles ở Assisi, Italy, ngày 27 tháng Mười năm 1986. Trong buổi nhóm cầu nguyện nầy, Dalai Latma, lãnh đạo Phật giáo Tây Tạng, Tổng Giám Mục Canterbury, lãnh đạo của Giáo hội Anh quốc và Khối Liên Hiệp khắp Thế Giới, Tổng Giám mục Chánh Tống giáo Hi Lạp và những người khác, đã tham dự và cầu nguyện, kiêng ăn cho hòa bình thế giới. Ghi lại sự kiện này, các hãng thông tấn đại chúng quốc tế ca ngợi sự kiện này– những chương trình và tin tức đầy hi vọng của đài truyền thanh và truyền hình khắp thế giới báo rằng hòa bình thế giới sẽ đến không lâu. Do đó, phong trào của Đa Nguyên Tôn Giáo dần dần đạt được quyền lực.** **Mười sáu năm sau Ngày Thế giới Cầu nguyện cho Hòa Bình lần thứ nhất, ngày Thế Giới Cầu Nguyện cho Hòa bình lần thứ hai diễn ra một lần nữa tại cùng một địa điểm nhưng thực chất ở một diện lớn hơn nhiều. Có sự tham dự của mười bảy đại diện từ các nhà thờ Chánh Thống giáo (Chánh Thống giáo phương Đông, Chánh thống giáo Đông phương, Chánh Thống giáo A-si-ri, Chánh Thống giáo Nga, Chánh Thống giáo Coptic Ai Cập, Chánh Thống giáo Ê-thi-ô-bi, v.v…), mười bốn đại diện từ Anh giáo và các Hội thánh Tin lành, ba mươi từ Hồi giáo, mười Ra-bi từ Do thái giáo, cũng có những nhà lãnh đạo từ Phật giáo, đạo Tenrikyo, thần Đạo, đạo Bahai, Jain giáo, đạo Sikh, Ấn giáo, Bái hỏa giáo, Khổng giáo, và các tôn giáo dân gian truyền thống Phi Châu.** **Sau buổi họp cầu nguyện, phong trào dành cho đối thoại tương tác niềm tin với các tôn giáo khác và cầu nguyện cho hòa bình được tiến hành tích cực hơn khắp thế giới. Gần đây vào ngày 27 tháng Mười năm 2011, một sự kiện quan trọng kỷ niệm năm thứ 25 ngày thế giới cầu nguyện cho hòa bình được diễn ra cùng địa điểm ở Assisi, Italy. Giáo hoàng Benedict XVI, người lãnh đạo tối cao các tôn giáo thế giới bảo trợ từ độ năm mươi quốc gia họp lại và kiêng ăn cầu nguyện với các thần và các linh họ phục vụ.** ![](data:image/jpeg;base64,[encoded data, 9220 characters])
**Những người tham dự trong buổi họp gồm có Tổng giám mục Anh giáo, Giáo Trưởng Bartholomew I phụ trách Đại Kết của Giáo hội Chánh Thống Hi Lạp, một đại diện của Chánh Thống giáo Nga cùng với 8 linh mục địa phương, một hồng y từ Chánh Thống giáo Cyprus, một hồng y từ Giáo hội Chánh thống Coptic, một đại diện của Giáo hội Lutheran, David Rosen, là cố vấn về Những Công Tác Tương Tác Tôn giáo cho Ra-bi Trưởng của Y-sơ-ra-ên, Olav Fykse Tveit, là Tổng Thơ Ký của WCC, đại diện của Chánh Thống giáo Nga, tổng thơ ký của Hội Nghị Quốc tế về các Trưởng Hồi Giáo, Setri Nyomi là tổng thơ ký của Liên Hiệp Các Hội thánh Cải cách Thế Giới, chủ tịch của Hiệp Hội Lão giáo từ Hongkong, chủ tịch của Hiệp Hội Khổng giáo từ Nam Hàn, hai địa diện Thần giáo từ Nhật Bản, bốn mươi tám đại diện Hồi giáo, các đại diện của các tôn giáo dân gian từ Phi Châu, Mỹ Châu và Á Châu, năm đại diện Ấn giáo, ba đại diện của Jain giáo, năm đại diện của đạo Sikh, một đại diện của Bái Hỏa giáo, một đại diện của đạo Bahai, sáu mươi bảy đại diện Phật giáo từ mười một quốc gia Phật giáo, năm người vô thần và v.v…. Tất cả những người tham dự đồng ý rằng họ phải tiếp tục tổ chức những buổi họp cầu nguyện như vậy trong tương lai.** **Những người này xuất hiện bên ngoài là những người từ thiện nhân đạo, mỗi người sở hữu một tấm lòng yêu thương toàn thể nhân loại đáng khâm phục. Đó là lý do hầu hết những người nam và nữ có tôn giáo đều cảm thông với Đa Nguyên Tôn Giáo. Chúa Giê-xu nói tiên tri rằng vào thời cuối cùng sẽ có những kẻ lừa dối với con cái Đức Chúa Trời bằng cách tuyên bố Chúa Jesus ở đây hay là ở đó (Math. 24:23-27). Lời tiên tri nầy thật sự đang diễn ra bây giờ trong thời đại của chúng ta.** **Đối thoại Tương Tác Niềm tin** **Khi Trụ Sở của Giáo hội Công giáo La Mã, Vatican, triệu tập Ngày Thế giới cầu nguyện cho Hòa Bình, đồng lúc giáo hội cố gắng họp với những người lãnh đạo hai tôn giáo, Hồi giáo và Do thái giáo, những tôn giáo có mối liên hệ rắc rối, để hòa giải với họ. Năm 1986, trong một nỗ lực làm mới lại mối liên hệ với người Do thái, lần thứ nhất trong lịch sử, Giáo hoàng John Paul II của Giáo hội Công giáo La Mã đã thăm viếng một nhà hội Do thái giáo và ban sứ điệp hòa giải.** **Nắm lấy cơ hội này, cuối cùng Giáo hoàng thăm Y-sơ-ra-ên vào tháng ba năm 2000. Ông thăm đài Kỷ Niệm Diệt Chủng và công khai hóa lập trường chính thức của giáo hội Công giáo La Mã không thừa nhận chủ nghĩa chống Do thái. Rồi Giáo hoàng cầu nguyện tại Bức Tường than khóc ở Giê-ru-sa-lem: “Nguyện tội lỗi của Giáo hội Công giáo La Mã chống lại người Do thái trong 1.500 năm qua được tha thứ, đặc biệt những tội Giáo Hội Công giáo kết ước chống lại người Do thái trong Chiến Dịch Thập Tự quân (1096 ~ 1291 SC.). Chúng con muốn kết ước chính chúng con với tình anh em chân thật cùng người Do thái.”** **Giáo hoàng John Paul II cũng đến với Hồi giáo để hòa giải. Năm 1995, ông thăm viếng Morocco, một quốc gia Hồi giáo ở Bắc Phi, và nói với người Hồi giáo ở đó: “Vì chúng ta tin Đức Chúa Trời giống nhau, chúng ta là một.” Sau đó vào tháng ba năm 2000 khi ông đang phát biểu tại Đài Kỷ niệm Diệt Chủng ở Y-sơ-ra-ên, ông cũng gởi một sứ điệp cho những nhà lãnh đạo Hồi giáo xin sự tha thứ về những tội lỗi của các Thập Tự Chinh (1096~1291 SC).** **Vào tháng Tư năm 2001, Giáo hoàng John Paul II đã thăm Đền thờ Ummayad ở** , Sy-ri, một trong đền thời Hồi giáo xưa nhất. Tại đó ông nhấn mạnh rằng cả hai tôn giáo đều tin một Đức Chúa Trời và họ có nhiều điều chung, như các tiên tri, Chúa Giê-xu, Ma-ri, Giê-ra-sa-lem, và tin sự sống sau khi chết. Vì thế, họ là những người đồng công trong thuộc linh”, và họ nên hiểu nhau, cùng làm việc cho hòa bình thế giới. Damascus **Giáo hội Công giáo La mã muốn hiệp nhất tất cả các tôn giáo trên thế giới thành một thực thể dựa trên thần học Đa Nguyên Tôn Giáo như đã công bố trong Vatican II. Hi vọng về một điều không tưởng được thể hiện trên đất, họ đã tiếp tục tích cực hoạt động trong phong trào hòa bình thế giới cùng với các giáo hội là những thành viên của WCC.** **Công nhận sự góp phần của Giáo hoàng John Paul II của Giáo hội Công giáo La Mã đối với hòa bình thế giới, nhiều nhà lãnh đạo tối cao của thế giới, bao gồm chính vua và hoàng tử, ba mươi tám tổng thống, ba phó tổng thống, mười bảy thủ tướng, mười bảy thủ tướng, mười ngoại trưởng, sáu bộ trưởng, Tổng Thơ Ký Liên Đoàn Á-Rập, Tổng Thơ Ký Liên Hiệp Quốc, Ra-bi Trưởng của Do thái giáo, Hồng y của Anh giáo, Giáo trưởng Chánh Thống giáo Hi Lạp, Giáo trưởng Chánh Thống giáo Nga, Giáo trưởng Chánh Thống giáo Ê-thi-ô-bi, đại diện của Ấn giáo và Hồi giáo, v.v… tham dự tang lễ của ông vào tháng Tư 2005. Đây là một thí dụ cho thấy cách Đa Nguyên Tôn Giáo phổ biến trên toàn cầu. Bây giờ sự phổ biến của Đa Nguyên Tôn Giáo vượt ra ngoài lĩnh vực chính trị, kinh tế, văn bản, tôn giáo và chủng tộc. Điều này đơn giản cho thấy cách con người trên thế giới bị Đa Nguyên Tôn Giáo lừa dối cách dễ dàng.** **Người kế thừa Giáo hoàng John Paul II là Giáo hoàng Benedict XVI tái xác nhận mục tiêu của người tiền nhiệm của ông. Ông đã thăm Đền thờ Xanh của Hồi Giáo ở Istanbul, Thổ Nhĩ Kỳ từ ngày 20 đến 30 tháng 11 năm 2006 và nhấn mạnh tinh thần đồng công của cả hai tôn giáo.** **Những hoạt động tích cực như vậy bởi các hệ phái tự do hoàn toàn chống lại những sự dạy dỗ của Chúa Giê-xu. Chúa Giê-xu là Con Đường Cứu Rỗi duy nhất. Chỉ có Chúa Giê-xu là Sự sống và Hi vọng thật. Các Cơ-Đốc nhân không được theo đuổi hòa bình thế tục của thế giới. Hơn nữa, chúng ta giảng Chúa Giê-xu là con đường duy nhất của sự sống, để cứu những người đã được Đức Chúa Trời định sẵn nhận sự cứu rỗi và được sự sống đời đời trong Vương quốc của Đức Chúa trời. Đây là Đại Mạng Lịnh mà các Cơ-Đốc nhân đã được Chúa Giê-xu ban cho (Math. 28:19; Công vụ 1:8).** ![](https://encrypted-tbn3.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcTLpRYVV9BYGFsDF6bbSlrXyqUwhM2e9dYzJIjJL9YG775qYTmi)
**Những nhóm tự do, bao gồm Giáo hội Công giáo La Mã, đã không quan tâm đến mạng lịnh này và đã tiếp tục tiến hành những hoạt động chống Cơ-Đốc, tìm kiếm hòa bình thế tục của thế giới. Trái với sự tranh luận của họ, Chúa Giê-xu tiên tri rằng sẽ phải chịu đau đớn, không phải hòa bình trong thời tận thế (Math. 24;6-13). Chúa Giê-xu phán rằng hiện tượng xã hội và thiên nhiên sẽ xảy ra trước khi Chúa tái lâm không phải là hòa bình mà là chiến tranh, đói kém và động đất, cùng với việc cá Cơ-Đốc nhân bị thế giới này bắt bớ.** **Trong những năm tới, phong trào đại kết vì sự hiệp nhất của các tôn giáo thế giới và phong trào hòa bình thế giới sẽ được khuếch trương do Vatican lãnh đạo. Họ sẽ truyền bá nhanh chóng những sứ điệp giả dối và đáng ghê tởm. Loại hòa bình thế giới họ biện luận nhìn có vẻ đúng hoàn toàn theo quan điểm của con người, nhưng chúng ta phải biết rằng đây là con đường dẫn tới sự hủy diệt đời đời. Như đã được nói tiên tri thành trì Ba-by-lôn lớn sẽ bị hủy diệt chỉ trong một giờ (Khải. 18:10), chúng ta cần phải khôn ngoan để không bị lừa dối bởi những lời dối trá của họ.** **Sự Đáp Ứng của Các Hệ Phái Tin lành: Liên Hiệp Tin Lành Thế Giới (WEA)** **Để chống lại ảnh hưởng của chủ nghĩa tự do, những hệ phái Tin lành từng chia rẽ trong lịch sử đã bắt đầu kết sức lại vào thế kỷ thứ 19. Vào năm 1846. Lần đầu tiên, những nhà lãnh đạo Tin Lành đã họp nhau ở London. Ở đó, họ hình thành Liên Hiệp Tin Lành (EA) chống lại ảnh hưởng của chủ nghĩa tự do đang lớn mạnh từng ngày. Sau đó họ đã thường xuyên gặp nhau để thảo luận những biện pháp đối phó, và thực hiện, họ thành lập những văn phòng chi nhánh Liên Hiệp Tin Lành trong các vùng khác. Dần dần, nhiều ngành được thành lập ở Canada (1849), rồi ở Thụy Điển và Đức(1847), ở Ấn Độ (1849), Thổ Nhĩ Kỳ (1855), ở Mỹ (1867), v.v...** **EA tổ chức những hội nghị quốc tế cứ bốn đến sáu năm một lần - ở London(1851), Berlin (1857), Geneva (1861), Amsterdam (1867), New York (1873), Basel(1879), Copenhagen (18840, Florence (1891), và một lần nữa ở London (1896, 1907 và 1912). Hội nghị London năm 1912 là lần cuối vì sự bùng nổ Thế Chiến I (1914~1918),buộc họ ngưng hội nghị quốc tế. Rồi sau đó, với sự bùng nổ Thế Chiến II (1927~1945)khiến cho tiến độ thuộc linh trì trệ, EA mất phương hướng tương lai của mình.** ![](https://encrypted-tbn3.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcQuyL0hcNxD_I_IJ4rCaYDGd6JZvzIOEVB7NHOHvKikp4AaKEiyzA)
**Về sau, khi các nhóm tự do thành lập WCC năm 1948, tình trạng trở nên khẩn cấp cho các Hội thánh Tin lành hiệp nhất và đáp trả với nó. Họ mang vấn đề sức sống mới cần cho những buổi nhóm giảng tin Lành. Cuối cùng, năm 1951, chín mươi mốt nhà lãnh đạo Tin Lành đại diện hai mươi mốt quốc gia họp lại tại Hòa Lan, thành lập Hội Thông Công Tin Lành Thế Giới (WEF). Hầu hết các nhà lãnh đạo từ Anh quốc (như John R. W. Scott, Jack Dain), Mỹ (như Elwin Wright, Clyde Taylor, Waldron Scott) và Canada (như Dennis Clark) nắm vài trò cột trụ. John Scott và Jack Dain của nước Anh đã phác họa “mục đích chính” với ba phương tiện : 1) Đẩy mạnh Tin Lành (vâng theo Đại Mạng Lịnh của Chúa Jesus), 2) Binh vực và củng cố Tin lành (ngăn Tin Lành khỏi bị hư hoại), 3) Thông Công các hệ phái Tin Lành.** **Chín năm trước khi WEF được thành lập năm 1951, các Hội thánh Tin Lành ở Mỹ đã vấp phải làn sóng mạnh mẽ của chủ nghĩa tự do. Vì vậy, họ thành lập Hiệp Hội Tin lành Quốc Gia (NAE – National association of Evanggelicals) năm 1942. Với NAE đóng vai trò quan trọng, họ tìm cách kiểm tra nguồn gốc ảnh hưởng tự do từ Âu Châu, và họ khởi sự hiệp nhất các nhóm Tin lành trong sự thông công. Kết quả, NAE sản sinh nhiều nhà lãnh đạo của WEF được thành lập năm 1951. Bây giờ, nước Mỹ trở thành lực lượng lèo lái phong trào Tin Lành Thế Giới.** **Nhưng thật sự, ảnh hưởng của WEF không đủ lớn để sánh với WCC. Lý do khó hiệp nhất những Hội Thánh Tin Lành, vì mỗi hội có một sự khác biệt giáo lý sâu sắc. Họ không có khả năng ngăn chặn làn sóng của chủ nghĩa tự do, đặc biệt từ các Hội thánh Anh quốc và Đức đang xuống cấp.** **Năm 1982, WEF thay đổi danh xưng sang Liên Hiệp Tin Lành Thế Giới (WEA).Sau đó, những nhà lãnh đạo từ Mỹ như David Howard và rồi Gary Edmonds nắm giữ vị trí giám đốc quốc tế. Về sau, Jun Vence của Phi-luật-tân, một người Á Châu, giữ vai trò giám đốc quốc tế từ năm 1992 đến 2001. Năm 2012, giám đốc quốc tế là Geoff Tunocliffe, một người Canada, đã giữ trọn vị trí từ 2005. Thành viên của WEA ước độ 460 triệu Cơ-Đốc nhân thuộc 100 Hội thánh các hệ phái từ 128 quốc gia và tổ chức truyền giáo.** ![](https://encrypted-tbn2.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcSXbyNISgSNDELbJUIVLLeU3AG5jUEtrLYUvEtmQk0mzUISppiYUA)
**Ảnh hưởng chính trị và kinh tế của WEA có thể yếu hơn WCC. Một trong những lý do là vì hầu hết lãnh đạo các hệ phái truyền thống trên thế giới Chánh Thống giáo phương Đông, Chánh Thống giáo Đông phương, hầu hết Hội Thánh Lutheran, hầu hết các hệ phái Bap-tít, v.v...) là thành viên của WCC, và Giáo hội Công giáo La Mã, đại diện 52% Cơ-Đốc nhân trên thế giới. Những người cộng tác với WCC là một thành viên hiệp hội, cho dù họ không phải là thành viên chính thức.** **Liên kết sức mạnh giữa các hệ phái Tin Lành chống lại các khuynh hướng tự do và tín đồ Đa Nguyên Tôn Giáo đang mỗi ngày bành trướng là điều hết sức quan trọng. Chúng ta là Cơ-Đốc nhân phải hiểu biết đầy đủ bản chất thực và những nguy hiểm của Đa Nguyên Tôn Giáo, phải trang bị Lời của Đức Chúa Trời, nổ lực hết sức để truyền bá Tin Lành chân thật.** **Thomas Hwang (Nguồn gốc các tôn giáo).**


markdown:
baodautu.vn
Vietnam Investment Review
Facebook Fanpage
Twitter
Google+
Chủ Nhật, 20/8/2017
. Cập nhật lúc
09:30
GMT+7.
Tin tức
Cổ phiếu
Trang chủ
Chứng khoán
Nhận định
Quốc tế
Trái phiếu
Bất động sản
Pháp luật
Cung - Cầu
Phong thủy - Kiến trúc
Thương trường
Doanh nhân
Tiêu dùng
Mua bán - Sáp nhập
360° Doanh nghiệp
Bảo hiểm
Cộng Đồng
Bảo hiểm xã hội
Tư vấn bảo hiểm
Tiền tệ
Sản Phẩm
Tư vấn tài chính
Thời sự
Chính trị
Đầu tư
Xã hội
Pháp luật
Pháp đình
Quốc tế
Tin ảnh/Video
Bên trong dinh thự 200 triệu USD của tỷ phú Bill Gates
Quốc tế
15:27, 01/05/2016
Nơi ở của tỷ phú Microsoft được xây theo phong cách thân thiện môi trường với suối nhân tạo để cá tha hồ bơi lội và bể bơi có hệ thống loa ngầm dưới nước (Theo Vnexpress).
BÌNH LUẬN
(0)
Gửi ý kiến
Tin liên quan
Tài sản choáng ngợp của tỷ phú Donald Trump
Facebook chi tới 4,26 triệu USD tiền an ninh cho Mark Zuckerberg
Tweet
Media nổi bật
Ô tô bay của Lilium Jet hoàn thành bay thử nghiệm, hoạt động bằng điện
Quốc tế
13:23, 19/08/2017
(ĐTCK) Lilium Jet, một công ty của Đức mới đây đã thực hiện thành công một số chuyến bay thử nghiệm với chiếc ô tô bay phiên bản mẫu của họ.
UFO 2.0 - Khách sạn trôi nổi bồng bềnh trên biển
Ehang 184 – drone có thể chở người, giá từ 200.000 - 300.000 USD
Ngôi nhà kỳ quặc có giá 2,8 triệu USD, lọt giữa khu nhà giàu nước Mỹ
Boeing 787-10 Dreamliner chiếc máy bay thế hệ mới nhất của Boeing
Video
Giải pháp giao thông công cộng giúp tránh kẹt xe ở các thành phố lớn
16:43, 17/08/2017
Tàu thủy có thiết kế đặc biệt giúp hành khách không còn bị say sóng
06:20, 17/08/2017
Máy scan cầm tay có thể chụp tài liệu kích cỡ lớn với công nghệ laser
06:20, 17/08/2017
'Tia chớp' Usain Bolt kiếm 100 triệu USD như thế nào
09:47, 16/08/2017
Ấn tượng với những ngôi nhà phong cách “Bảy viên ngọc rồng” được làm từ xốp
08:33, 16/08/2017
L7e, chiếc xe điện 2 chỗ tương lai của nhóm sinh viên đại học Thụy Điển
06:27, 16/08/2017
Toyota Hilux Tonka, “bò cạp sa mạc”
09:37, 15/08/2017
Hầm đường bộ đèo Cả trước ngày thông xe
20:05, 13/08/2017
Xem thêm
Ảnh
Xem thú chơi trên tiền của giới nhà giàu Dubai
08:26, 20/08/2017
HITO chuỗi tế bào màu sắc
18:00, 18/08/2017
Dubai tăng tốc xây tháp cao nhất thế giới
09:58, 18/08/2017
Bóng hồng đằng sau những người giàu nhất hành tinh
08:22, 18/08/2017
Nokia 8 sẽ về Việt Nam trong tháng 9
09:59, 17/08/2017
Bphone Gold 2017 cao cấp lộ diện
10:42, 15/08/2017
Gian nan nghề trồng na trên núi đá
20:07, 13/08/2017
Tỷ phú nhiều đất nhất nước Mỹ
10:11, 13/08/2017
Xem thêm
Chuyên đề
Báo cáo thường niên 2017 - 10 năm đột phá minh bạch hóa
Sẵn sàng vượt mọi ngưỡng cản
Kết quả kinh doanh 6 tháng 2017
Sức mạnh thông tin tài chính
Toàn cảnh ngân hàng Việt Nam 2017: Trở lại đường đua
Kỳ họp thứ 3, Quốc hội khóa 14
Bất động sản nghỉ dưỡng vào mùa
Môi trường làm việc hiệu quả
Kết quả kinh doanh quý I/2017
Chính phủ kiến tạo - Doanh nghiệp bứt phá
Xác lập đẳng cấp
Đại án Hà Văn Thắm
Diễn biến mùa Đại hội
Gieo niềm tin để vững tiến
Đại án Vinashinlines
Báo Đầu tư Tết Đinh Dậu: Sức mạnh niềm tin
[ X ]
[ X ]
## BÌNH LUẬN (0)

Cache-Control: private

Set-Cookie: .ASPXANONYMOUS=srAMla8GRMe0tKxDpG29FYzHHaVsH5kuXIT6646JZBK3yU2sxX6nJ9NjAbKa4i1vkW41amIE4Sp4Ytl4QhrucYjkI9wuCzYihMDG0fyvERD0fhCNqa0jo3MNdLsvekoN5sVKknnEIGfzjkV7SRVSdg2; domain=tinnhanhchungkhoan.vn; expires=Sat, 28-Oct-2017 13:10:49 GMT; path=/; HttpOnly

Access-Control-Allow-Headers: Content-Type

X-Cache: MISS from xCache11-01


markdown:
Đến nay, dịch vụ giao hàng theo yêu cầu, đặc biệt trong lĩnh vực thực phẩm, đã trở nên phổ biến tại nhiều nước trên thế giới. Có rất nhiều ứng dụng giao hàng phục vụ mọi nhu cầu của người tiêu dùng, từ chia sẻ phòng ốc đến chia sẻ lượt đi xe. Tuy nhiên, theo
*BBC*, thị trường 1,38 tỷ dân tại Trung Quốc và các ứng dụng phục vụ họ đã nâng khái niệm này lên một cấp độ hoàn toàn mới, có thể gọi nôm na là ngành công nghiệp "ngay bây giờ".
Theo một báo cáo của Trung tâm Thông tin mạng internet Trung Quốc, vào cuối tháng 6/2015, nước này có 688 triệu người sử dụng internet, tăng 18,9 triệu người so với cuối năm 2014. Đồng thời nhu cầu về các ứng dụng dịch vụ "ngay bây giờ" tại Trung Quốc cũng cao hơn nhiều so với phương Tây, nhờ vào sự gia tăng của tầng lớp trung lưu am hiểu công nghệ và sự ưu đãi mạnh tay từ các nhà bán lẻ trực tuyến.
Số lượng người dùng mà một ứng dụng Trung Quốc có thể thu hút được cũng cao hơn nhiều so với các nước khác. Với xu hướng O2O (online to offline - mô hình tìm kiếm khách hàng trên kênh trực tuyến, sau đó mang họ đến với cửa hàng thực), người dùng Trung Quốc chỉ cần yêu cầu sản phẩm hoặc dịch vụ trên kênh trực tuyến, sau đó nhận hàng tại nhà hoặc văn phòng.
Cách đây 8 năm, Ele.me bắt đầu hoạt động chỉ như một dịch vụ đặt thực phẩm trực tuyến giúp sinh viên đại học ở Thượng Hải có thể tìm kiếm những phần ăn hằng ngày một cách đơn giản và dễ dàng. Đến nay, ứng dụng này đã có đến 70 triệu người dùng và quản lý 5 triệu đơn hàng mỗi ngày.
Để thấy được sự khác biệt, có thể so sánh Ele.me với "đồng nghiệp" tại Mỹ là dịch vụ giao thức ăn trực tuyến Grubhub (ra đời cách đây 12 năm) với 7,4 triệu người dùng và quản lý trung bình 271.000 đơn hàng mỗi ngày.
"Yếu tố cốt lõi làm nên thành công trong ngành công nghiệp này là khả năng mang đến sự tiện lợi và hiệu quả đến khách hàng" - Mark Zhang - nhà sáng lập, CEO của Ele.me cho biết.
Sự phổ biến của smartphone cũng như dịch vụ thanh toán di động an toàn và dễ dàng đã góp phần thúc đẩy sự phát triển nhanh chóng các ứng dụng di động cung cấp sản phẩm, dịch vụ "ngay tức thì”. Nhiều dịch vụ cho phép người dùng thanh toán ngay trên ứng dụng trò chuyện phổ biến như WeChat hay PayPal của Trung Quốc là Alipay.
Wan Yuchen - chuyên gia phân tích tại Hãng Nghiên cứu thị trường China Market Research Group cho biết, một trong những yếu tố giúp doanh nghiệp cung cấp các dịch vụ theo yêu cầu tại Trung Quốc tốn ít chi phí hơn các doanh nghiệp tại những thị trường phát triển khác là chi phí hậu cần và giá nhân công thấp. Điều này còn tạo điều kiện để có mức giá cạnh tranh so với cửa hàng truyền thống. Trên thực tế, các dịch vụ giao thức ăn tận nơi ở Trung Quốc thường xuyên áp dụng ưu đãi miễn phí giao hàng, và mức phí trung bình cho một lần giao hàng cũng chỉ vào khoảng 1USD.
Ở giai đoạn mới phát triển, các dịch vụ giao thức ăn, mặt hàng bán lẻ và gọi xe nắm vai trò dẫn dắt thị trường, cũng giống như ở Mỹ và châu Âu. Tuy nhiên, hiện nay, trên thị trường Trung Quốc xuất hiện ngày càng nhiều dịch vụ tiện lợi đa dạng khác, như giải trí, làm đẹp, chăm sóc trẻ, du lịch, cưới hỏi...
"Những dịch vụ này đều rất cần thiết ở Trung Quốc, và nhu cầu của thị trường sẽ không ngừng tăng. Chẳng hạn, nhịp sống tại các thành phố lớn đang ngày càng nhanh hơn, người dùng Trung Quốc không có thời gian để tìm kiếm quản gia riêng, sẽ phải nhờ vào sự tiện lợi của các dịch vụ từ ứng dụng di động" - Wan Yong - CEO của Ayibang, một ứng dụng ra đời vào tháng 8/2013, chuyên cung cấp dịch vụ quản gia, bảo mẫu và sửa chữa nhà cửa, đồ nội thất, cho hay.
Ngoài các loại sản phẩm, dịch vụ phục vụ đời sống thường nhật, các ứng dụng di động tại Trung Quốc thậm chí còn có thể giúp người dùng tìm kiếm mạnh thường quân khi gặp phải hoàn cảnh ngặt nghèo.
*South China Morning Post* ngày 25/9 đưa tin về trường hợp của Wang Tao - một bà mẹ trẻ đã dùng ứng dụng gọi điện và nhắn tin miễn phí WeChat để kêu gọi sự giúp đỡ vì không có đủ tiền chi trả viện phí cho đứa con 4 tuổi. Chỉ trong vòng 30 ngày "cầu cứu", Wang Tao nhận được 44.000 nhân dân tệ (CNY) từ 700 mạnh thường quân mà phần lớn trong số đó là những người cô chưa từng quen biết.
Xu hướng sử dụng ứng dụng di động để được "phục vụ tận răng" còn giúp tạo việc làm cho nhiều lao động tự do tại Trung Quốc. Trả lời phỏng vấn của
*BBC*, Ye Xiaorong, một quản gia 43 tuổi ở Bắc Kinh chia sẻ: "Trước đây tôi chưa bao giờ có một công việc hay thu nhập ổn định. Từ khi đăng ký làm quản gia trên ứng dụng Ayibang, mỗi buổi sáng tôi đều nhận được lịch trình công việc cụ thể và làm việc ít nhất 7 giờ/ngày. Tôi yêu thích công việc hiện tại vì nó trao cho tôi ý thức trách nhiệm và nguồn thu nhập đều đặn".
Chuyên trang nghiên cứu iresearchchina.com dự báo đến năm 2018, thị trường O2O tại Trung Quốc có thể đạt giá trị 1,6 nghìn tỷ CNY, tăng gần gấp đôi so với con số được ghi nhận vào năm 2015 là 879,7 tỷ CNY.
Bài viết chưa có bình luận nào. Bạn nên dùng tiếng Việt có dấu khi bình luận.
Nhập bình luận tại đây

Set-Cookie: .ASPXANONYMOUS=jwylAcktf6qDeY93ULThbeo18XhEV1Scsb1oAJhZVgB6JdI6MIe8tAVQF-m1x93VVvGsbKhii-wRNGrEXCV5wTrWGRikMEiR9f_HdC4mUohwcHtlvdEjfX5AgTnviPBMI9lCUvLIxOstw0j2jQzjqQ2; domain=tinnhanhchungkhoan.vn; expires=Sat, 28-Oct-2017 13:10:26 GMT; path=/; HttpOnly

X-Cache: MISS from cache13


markdown:
Tại thị trường trong nước, giá vàng được điều chỉnh tăng mạnh theo diễn biến của thị trường quốc tế.
Vàng SJC lúc đầu ngày niêm yết ở 33,33 – 33,73 triệu đồng/lượng (mua vào – bán ra), tăng 20.000 đồng/lượng chiều mua vào và 120.000 đồng/lượng chiều bán ra so với ngày hôm qua. Về cuối ngày, giá được điều chỉnh tăng mạnh 490.000 đồng/lượng chiều mua vào và 250.000 đồng/lượng chiều bán ra, giao dịch ở 33,82 – 34,07 triệu đồng/lượng.
Vàng miếng rồng Thăng Long của Bảo Tín Minh Châu lúc đầu ngày mua vào – bán ra ở 33,44 – 33,89 triệu đồng/lượng, tăng 470.000 đồng/lượng mỗi chiều so với ngày hôm qua. Về cuối ngày, giá được điều chỉnh tăng hêm 180.000 đồng/lượng ở cả 2 chiều, mua vào – bán ra ở 33,62 – 34,07 triệu đồng/lượng.
Trên thị trường ngoại tệ, Vietcombank niêm yết tỷ giá USD ở mức 22.255 – 22.325 VND/USD (mua vào – bán ra), giảm 10 đồng mỗi chiều so với ngày hôm qua.
Trên thị trường tự do, USD hiện giao dịch ở 22.280 – 22.300 VND/USD (mua vào – bán ra), không đổi so với ngày hôm qua.
Trong phiên giao dịch tại thị trường châu Á hôm nay, giá vàng hầu như đi ngang trong suốt phiên.
Trên sàn Hong Kong, giá vàng mở cửa ở 1.263,90 USD/ounce, sau khi mở phiên, giá vàng chủ yếu đi ngang quanh mức này. Về cuối phiên, giá vàng theo đà leo dốc, đóng cửa ở 1.274,50 USD/ounce, tăng 10,6 USD/ounce so với giá mở cửa.
![ ảnh 1](http://image.tinnhanhchungkhoan.vn/w420/uploaded/trinhhang/2016_03_04/vang14-8_gbjy.gif)
Trên sàn new York, giá vàng mở cửa ở 1.244,20 USD/ounce. Sau khi mở phiên, giá vàng giữ vững đà tăng, đạt đỉnh ở giá đóng cửa 1.263,90 USD/ounce, tăng 19,7 USD/ounce so với giá mở cửa và tăng 24,4 USD/ounce so với chốt phiên trước đó.
Giá vàng giao sau tháng 4 trên sàn Comex tăng 16 USD/ounce, đóng cửa ở 1.257,80 USD/ounce.
Các thị trường tài chính đang chờ đợi báo cáo lao động từ Bộ Lao động Mỹ được công bố vào sáng thứ Sáu (3/3) theo giờ địa phương. Đây là số liệu kinh tế Mỹ quan trọng nhất trong tháng. Các chuyên gia kỳ vọng sẽ có khoảng 200.000 việc làm mới được tạo ra trong tháng 2.
Bài viết chưa có bình luận nào. Bạn nên dùng tiếng Việt có dấu khi bình luận.
Nhập bình luận tại đây

Set-Cookie: .ASPXANONYMOUS=M5ES6SA3kOzELp4djhDNW6i1qwquOozyt95jq4J1K5hccDQlfrpdHSHiHiET1saQE_JngB07K3l7DRa7tr4U0UTzi_q5_iDhpt2Vbjqbw19bPPVOhMLGVCTx1fkrSiLxo_Aag979H-_R0nMVMfGfnw2; domain=tinnhanhchungkhoan.vn; expires=Sat, 28-Oct-2017 13:10:35 GMT; path=/; HttpOnly


markdown:
## Hương Trà: Hội thi gia đình thể thao (Mở rộng) năm 2017
Hội thi gia đình thể thao năm nay quy tụ 60 VĐV đến từ 13 đơn vị gồm: Cơ quan Thị Ủy, Văn phòng HĐND&UBND, Công an, Viện Kiểm Sát, Trung tâm Dân số – Kế hoạch hóa gia đình, Đài truyền thanh, Kho bạc nhà nước thị xã và các đơn vị khối phường xã gồm: Tứ Hạ, Hương Văn, Hương Toàn, Bình Điền, Hương Thọ, Hồng Tiến. Các vận động viên tham gia tranh tài ở môn Cầu lông với 3 nội dung thi đấu: Đôi cha – con trai, đôi vợ – chồng và đôi nam (mở rộng); môn Bóng Bàn với 5 nội dung thi đấu gồm: Đôi cha – con trai, đôi nam, đôi nam nữ, đơn nam và đơn nữ; thi đấu theo thể thức loại trực tiếp một lần thua đối với các nội dung mở rộng và thi đấu theo thể thức vòng tròn tính điểm đối với 3 nội dung gia đình.
Sau 02 ngày thi đấu sôi nổi và hào hứng, Ban tổ chức đã trao 08 giải nhất ở cả 8 nội dung thi đấu cho các đơn vị: Đài Truyền thanh, Kho bạc Nhà nước thị xã Hương Trà, phường Hương Văn và phường Tứ Hạ. Ngoài ra, ban tổ chức còn trao giải cho các đơn vị đạt giải nhì và giải ba. Thông qua hội thi gia đình thể thao lần này, nhằm tăng cường quan hệ giao lưu, học tập kinh nghiệm giữa các vận động viên, qua đó nâng cao sức khỏe để học tập và lao động sản xuất.
**Nguồn:https://www.thuathienhue.gov.vn/vi-vn/Tin-so-nganh-dia-phuong/tid/Huong-Tra-Hoi-thi-gia-dinh-the-thao-Mo-rong-nam-2017/newsid/15DB2B23-51BC-485F-ADAD-A79700809BC7/cid/B978B3F3-05EF-45E4-BEE7-F47C2B99302B**
**Tin khác**
Bình luận

Set-Cookie: legatus_post_views_count_141748=1; expires=Wed, 20-Sep-2017 02:11:04 GMT; Max-Age=2678400


markdown:
### Danh mục sản phẩm
### Thống kê truy cập
![ ](/modules/mod_hit_counter/assets/Basic/2/0.gif)
![ ](/modules/mod_hit_counter/assets/Basic/2/0.gif)
![ ](/modules/mod_hit_counter/assets/Basic/2/0.gif)
![ ](/modules/mod_hit_counter/assets/Basic/2/4.gif)
![ ](/modules/mod_hit_counter/assets/Basic/2/6.gif)
![ ](/modules/mod_hit_counter/assets/Basic/2/1.gif)
![ ](/modules/mod_hit_counter/assets/Basic/2/2.gif)
IP: 54.166.174.48
Hôm nay 25
Tuần này 25
Tuần trước 672
Tháng này 2097
Tháng trước 2515
Tất cả 4612
We have 21 guests and no members online
### FaceBook Like Box
[Previous](/) [Next](/)
- 1
- 2
- 3
####
####
####
####
####
####
####
####
####
####
####
####

P3P: CP="NOI ADM DEV PSAi COM NAV OUR OTRo STP IND DEM"