title: Stress cellulaire et modulation de l'activité des cytidines désaminases APOBEC3
text: Eu k a r y o tC e l l,2( 2 ),2 5 6 -2 6 4. -X X u,J.,L v,S.,Q i n,Y.,Sh u,F.,X u,Y.,Ch e n,J.,
  
  ...
  
  Wu,J.(
  
  2
  
  0
  
  0 7
  
  ).TRB 3i n t e r a c t sw i thC t IP a ndi so v e r e xp
  
  r e s s e di nc e r t a i nc a n c e r s.B i o c h imB i o p h y sA c t a,1 7 7 0( 2 ),2 73 2 7 8.d o i : S03 0 4 4 1 6 5 ( 0 6 ) 0 0 2 9 8 4[p i i ] 1 0.1016 / j.b b a g e n. 2 0 0 6. 09. 0 2 5 X u,R.,Z h a ng,X.,Z h a ng,W.,F a n g,Y.,Z h e ng,S. ,&Y u,X.F.( 2 0 0 7 ).A s so c i a t i o no fh um a n APOBEC 3cy t id i n ed e am in a s e sw i t hth eg e n e r a t io no fh e p a t i t i sv i r u sBxa n t ig e n mu t a n t sa n dh e p a t o c e l lu l a rc a r c i n om a.H e p a t o lo g y,4 6( 6 ),1 8 1 0 1 8 2 0.d o i : 10.1 0 0 2 / h e p. 2 1 8 9 3 X u a n,D.,L i,G.,C a i,Q.,D em in g -H a l v e r s o n,S.,Sh r u b s o l e,M.J.,Sh u,X.O.,...L o ng,J. (20 1 3 ).APOBEC 3d e l e t i o np o lym o r p h i smi sa s s o c i a t e dw i t hb r e a s tc a n c e rr i s kam o n g wom e no fE u r o p e a na n c e s t ry.Ca r c i n o g e n e s i s,3 4(1 0 ),2 2 4 0 2 2 4 3.d o i : 10.1 0 9 3 / c a r c i n /bg t 1 8 5 -Y Y am a n a k a,S.,B a l e s t r a,M.E.,F e r r e l l,L.D.,F a n,J.,A r n o l d,K.S.,T ay l o r,S.,...I n n e r a r i ty, T.L.( 1 99 5 ).A p o l ip o p r o t e i nBmRNA e d i t i ngp ro t e i ni n d u c e sh e p a t o c e l lu l a r c a r c i n om aa n ddy s p l a s i ai nt r a n s g e n i ca n im a l s.P ro cNa t lA c a dS c iU SA,92( 1 8
  
  ), 848 3 8 4 8 7.
  
  Y a ng,P.,A n,H.,L i u,X.,W e n,M.,Z h e ng,Y.,R u i,Y. ,&C a o,X.( 2 0 1 0 ).T h ecy t o s o l i c nu c l e i ca c i ds e n s o rLRRF IP1m e d i a t e st h ep r o d u c t io no fty p eIi n t e r f e r o nv i aab e t a tImm u n o l,1 1( 6 ),4 8 7 4 9 4.d o i :1 0. 1 0 3 8 / n i. 1 8 7 6 c a t e n i n d e p e n d e n tp a t hw ay.Na 1 3 4 B IBL IOGRAPH IE Y a ng,Y.,S ow d e n,M.P.,Y a ng,Y., &Sm i t h,H.C.( 2 0 0 1 ).I n t r a c e l lu l a rt r a f f i c k i ng d e t e rm in a n t sinAPOBEC 1,t h ec a t a ly t i cs u b u n i tf o rcy t id i n et ou r i d in ee d i t i n go f a p o l ip o p r o t e i nBmRNA.E x pC e l lR e s,26 7( 2 ),1 53 1 6 4.d o i :1 0. 1 0 0 6 / e x c r. 2 0 0 1.
  
  5 2 55 -Z Z a r emb e r,K.A. , &G o dow s k i,P.J.( 2 0 0 2 ).T i s su ee xp r e s s io no fh um a nTo l l l ik er e c e p t o r s a n dd i f f e r e n t i a lr eg u l a t i ono fT o l l l ik er e c e p t o rmRNA si nl e u k o cy t e si nr e s p o n s et o m i c r o b e s,t h e i rp r o d u c t s,a n dcy t o k in e s. JImm u n o l,1 6 8 ( 2 ),5 5 4 5 6 1. Z h a ng,T.,C a i,J.,Ch a n g,J.,Y u,D., Wu,C.,Y a n,T.,...L i n,D.( 2 0 1 2 ).Ev i d e n c eo f a s s o c i a t io n so fAPOBEC3Bg e n ed e l e t i o nw i ths u s c e p t ib i l i ty t op e r s i s t e n tHBV i n f e c t io na n dh e p a t o c e l lu l a rc a r c i n om a.H um M o lG e n e t,2 2( 6 ),1 2 6 2 1 2 6 9.d o i : 1 0. 1 0 9 3 / hmg / d d s 51 3
  
  Z h a ng,W.,Z h a ng,X.,T i a n,C.,W a n g,T.,S a r k i s,P.T.,F a ng,Y.,...X u,R.( 2 0 0 8 ).Cy t id i n e d e am in a s eAPOBEC 3Bin t e r a c t sw i thh e t e r og e n eo u sn u c l e a rr i b o n u c l e o p ro t e i nKa nd s u p p r e s s e sh e p
  
  
  
  a t
  
  
  
  i t
  
  
  
  i
  
  
  
  s
  
  B
  
  v
  
  
  
  i
  
  
  
  r
  
  
  
  u se xp
  
  
  
  r
  
  e 
  
  s
  
  
  
  s
  
  io n.
  
  C e l l
  
  M
  
  i c
  
  
  
  r o b
  
  
  
  i o l,
  
  1
  
  0
  
  (
  
  1 ),1 1 2 1 2 1.d o i : 1 0. 1 1 1 1 / j. 1 4 6 2 5 8 2 2. 2 0 0 7. 0 1 0 2 0. x Z i e l onk a,J.,B r a v o,I.G.,M a r i n o,D.,Co n r a d,E.,P e r k o v i c,M.,B a t t e n b e rg,M.,... M u n k,C. ( 2 0 0 9 ).R e s t r i c t i o no fe qu i n ei n f e c t io u sa n em i av i r u sbye q u i n eAPOBEC 3cy t id i n e d e am in a s e s.JV i r o l,8 3 ( 15 ),7 5 4 7 7 5 5 9.d o i :10. 1 1 2 8 / JV I. 0 0 0 1 50 9 1 35 ANNEXES 1 36 1 PL oSP a t h o g en s,6F ig s,1ST ab l e 2 SOUM IS 3 APOBEC3DEan t agon i z e sH ep a t i t i sBV i ru sr e s t r i c t ionf a c to r s 4 APOBEC3FandAPOBEC3G 5 6 1 1 2 Moh am edS.Bou z id i1,V in c en tC av a l,Rodo lph eSu sp èn e,P a s c a lP in e au 7 1* S imon W a in -Hob son1 andJ e an -P i e r r eV a r t an i an 8 9 1 Mo l e cu l a rR e t rov i ro logyUn i t,In s t i tu tP a s t eu r 1 0 CNRSURA3015,28ru eduD r.Roux, 1 1 75724P a r i sc ed ex15,F r an c e 1 2 1 3 2Nu c l e a rO rg an i z a t ionandOn cog en e s i sUn i t,In s t i tu tP a s t eu r 1 4 INSERMU579,28ru eduD r.Roux, 1 5 75724P a r i sc ed ex15,F r an c e 1 6 1 7 *C o r r e s p o n d en c eto :JPV, Mo l e cu l a rR e t r o v i r o l o g yU n i t,I n s t i t u tP a s t e u r,2 8r u ed uD r.R o u x, 1 8 7 5 7 2 4P a r i sc ed ex15,F r an c e.T+3314 43 89 44 5 ;F+ 3 314 56 88 87 4 ; 1 9 em a i l :j e a n -p i e r r e.v a r t an i an@p a s t eu r. f r 2 0 2 1 R u n n i n gt i t l e :APOBEC3DEmodu l a t e sHBVm u t a g e n e s i s 2 2 2 3 K e yw o r d s :APOBEC3DE,APOBEC3F,APOBEC 3G,HBV,d im e r i z a t i o n 2 4 A b s t ra c t 2 5 T h eAPOBEC3lo cu scon s i s t so fs ev e ng e n e s( A 3A -A 3C,A 3DE,A 3F -A 3H)t h a te n c o d eDNA 2 6 c y t i d i n ed e am in a s e s. Th e s een zym e sd e am i n a t es i n g l es t r a n d DNA,t h er e s u l tb e i n g DNA 2 7 p e p p e r e dw i thCG ->TA mu t a t ion sp r e f e r e n t i a l l yi nt h ec o n t e x to fT pC w i t ht h ee x c e p t i o no f 2 8 APOBEC3G(A3G ),wh i chp r e f e r sC pCd i n u c l e o t i d e s.H e p a t i t i sBv i r u s(HBV )i sv u l n e r a b l e 2 9 t og e n e t i ced i t ingo fs ing l es t r and ed DNAb y APOBEC 3c y t i d i n ed e am i n a s e s,A 3Gb e i n ga 3 0 m a j o rr e s t r i c t ionf a c to rfo r HBVr ep l i c a t i o n. 3 8 3 9 A u tho rsumma ry 4 0
  
  T h eAPOBEC3lo cu scon s i s t so fs ev e ng e n e st h a te n c o d eDNAc y t i d i n ed e am i n a s e sl o c a l i z e d 4 1 o nc h r omo som e22. Th e s een zym e sd e am i n a t es i n g l es t r a n d DNA,p r e f e r e n t i a l l yi nt h e 4 2 c o n t e x to f TpC.R e t rov i ru s e sand h e p a d n a v i r u s e ss u c ha sh e p a t i t i s Bv i r u s(HBV )a r e 4 3 v u l n e r a b l etoth en eg a t iv ee f f e c t so ft h eAPOBEC 3Fa n d3GDNAh y p e rm u t a t o re n z ym e s.I t 4 4 t u r n so u tth a tth eAPOBEC3DEp ro t e i na n t a g o n i z e st h en e g a t i v ee f f e c t so ft h e s etw om u t a t o r 4 5 e n z ym e ssoh e lp ingHBVtor ep l i c a t e. 4 6 4 7 4 8 2 4 9 In t rodu c t ion 5 0
  
  I nt h eu n e nd ingb a t t l ew i th m i c rob e s,t h eh um a ng e n om eh a se v o l v e dad i v e r s er a n g eo f 5 1 i n n a t er e s t r i c t ionf a c to r sinadd i t iontoi n t e r f e r o ns t im u l a t e dg e n e s( ISG s ).T h eAPOBEC 3 5 2 ( A 3)l o c u scon s i s t so fs ev eng en e s( A 3A -A 3C,A 3DE,A 3F -A 3H)(A 3 )t h a te n c o d e DNA 5 3 c y t i d i n ed e am in a s e s[1 ]anda ro s ebydu p l i c a t i o na n ds u b s e q u e n te x p a n s i o no ft h ea c t i v a t i o n - 5 4 A ID)g en einp l a c e n t a lm amm a l s[ 2 ].A 3e n z ym e sim p a c tr e p l i c a t i o no f i n d u c e dd e am in a s e( 5 5 m a j o rv i r u s e ssu cha sH IV[3 -7 ], HBV[ 8 1 2 ],h e r p e s v i r u s e s[ 1 3 ]a n dp a p i l l om a v i r u s e s[ 1 4 - 5 6 1 6 ]a sw e l la ss ev e r a lr e t ro e l em en t s[ 1 7 1 9 ].T h e yp r e f e r e n t i a l l yd e am i n a t es i n g l es t r a n d 5 7 DNA( s sDNA ),r e su l t ingDNAp epp e r edw i t hCG ->TAc h a n g e s,t h ep r o c e s sb e i n gr e f e r r e dt o 5 8 a sg e n e t i ced i t inga sth ech ang e so c cu rp o s tr e p l i c a t i o n[ 3 6,2 0 ]. 6 4 [ 6 5 6
  
  T h ee n z ym e sa r ee i th e rm ad eupo faz in cf i n g e rs i n g l es t r a n dDNAb i n d i n gd om a i n,w h i c hi s 6 7 a ni n t e g r a lp a r to fth ec a t a ly t i cs i t e(A3A,A 3Ca n dA 3H ),o rtw os u c hd om a i n sw i t ha nN - 6 8 t e rm i n a ln on c a t a ly t i cz in cf ing e rdom a i na n da C t e rm i n a lc a t a l y t i cd om a i n(A 3B,A 3DE, 6 9 A 3Fa n dA 3G )[1,38,39 ]. Wh i l ein a c t iv e,t h eN t e rm i n a ld om a i nm a yi n c r e a s et h ee f f i c i e n c y 7 0 o ft h ee n z ym e[40 ],m any A3en zym e sc a nh om o -a n dh e t e r o d im e r i z e[ 4 1 4 6 ]e v e nt h o u g h 7 1 i t r oa sm o n om e r s[ 2 1,4 7,4 8 ].A 3G,o n eo ft h em a i n A ID,A 3Aand A3Ga r ea c t iv e inv 7 2 r e s t r i c t i o nf a c to r sag a in s thum animmu n o d e f i c i e n c yv i r u st y p e1(H IV 1 )a n dHBV,c a na l s o 7 3 f o rmh i g hmo l e cu l a rw e igh tcomp l ex e s[ 2 1,4 7 5 1 ]. e.[ [ [A 3D,A 3F n ]A 3B n ]A 3G n ],w h i l et h eC d om a i n(A 3E ) 8 2 g r o u p sw i thth eC t e rm in a ldom a ino fA 3Fa n dA 3C,i. e.[ [A 3E,A 3F c ]A 3C ][ 2,4 0,5 6 ]. 8 3 8 4 A 3Gr e p r e s en tth em a jo rr e s t r i c t ionf a c t o rf o r HBVr e p l i c a t i o nw i t hu pt o3 5%o f HBV 8 5 g e n om e sb e inged i t edinv i vo[12 ].A 3DE,A 3Fa n dA 3Ga r ec o e x p r e s s e di naw i d er a n g eo f 8 6 h um a nt i s su e s[23,57,58 ]ands ign i f i c a n t l yu p r e g u l a t e di nv i r u s a s s o c i a t e dc i r r h o t i cl i v e r 8 7 [ 1 2 ]w h i ch w a sal i t t l esu rp r i s ingfo rA 3DEg i v e nt h a tt h ep r o t e i ni sn o tf u n c t i o n a l[ 5 7,5 9, 8 8 6 0 ].A sA3B,A3FandA3Gc anfo rmh om o -a n dh e t e r o d im e r s,t h eim p a c to fA 3DEo nHBV 8 9 r e p l i c a t ionv i a modu l a t iono fo th e rA 3r e s t r i c t i o nf a c t o r sw a si n v e s t i g a t e d.W es h owh e r et h a t 9 0 A 3DEa n t agon i z e sth ea c t iv i tyo ft h eA 3Fr e s t r i c t i o nf a c t o ra n dt oal e s s e re x t e n tA 3G 9 1 r e s u l t i n ginin c r e a s edHBVr ep l i c a t i o n. 1 0 5 1 0 6 I no r d e rt ocon f i rmth e GSTpu l l -downi n t e r a c t i o n s,t h ei n t r a c e l l u l a rl o c a l i z a t i o no fA 3 -V 5 1 0 7 p r o t e i n sw i than N t e rm in a l3x -FLAGt a g g e dA 3DEc o n s t r u c tw a sa n a l y z e db yc o n f o c a l 1 0 8 m i c r o s c o p y(F ig2 ). As t rongands ign i f i c a n tc o l o c a l i z a t i o no fA 3DE w i t hi t s e l f,A 3Fa n d 1 0 9 A 3G w a so b s e rv edbu tno tw i th A3B(F i g2 )a n dA 3A,A 3Ca n dA 3H( d a t an o ts h ow n ). 1 1 0 H ow e v e r, wh enth e A3BnAcon s t ru c tw a su s e d,c o l o c a l i z a t i o nb e tw e e ni ta n dA 3DE w a s 1 1 1 e v i d e n t(F i g2 ). 1 1 2 1 1 3
  
  T h en e g a t i v ef ind ing sfo r A3B, A3Aan dp o s i t i v ef i n d i n gf o rA 3B nAs h owt h a tt h eh e t e r o 1 1 4 d im e r i z a t i o nw i thA3DEi sm ed i a t edbyt h eA 3BN t e rm i n a ld om a i nw h i l es e q u e n c e si nA 3B 1 1 5 C t e rm i n a lcon t r ibu t etob lo ck ingd im e r i z a t i o n.A ss e v e r a lr e s i d u e sh a v eb e e nd e s c r i b e dt ob e 1 1 6 c r u c i a lf o rA3Gd im e r i z a t ion[51,61 -63 ],w em a d ea n a l o g o u sm u t a n t si nt h eA 3Dd om a i no f 1 1 7 A 3DE.T y r 28A l a,T rp94A l a,Ty r124A l aa n dT y r 1 2 6A l am u t a n t s,a l lf a i l e dt ob l o c kA 3DE /F 1 1 8 o rA 3DE /Gh e t e rod im e rfo rm a t ion(d a t an o ts h ow n ). 1 1 9 1 2 0 A st h ei n a c t iv a t ingA3DECy s320s i t em a p saw a yf r omt h ec a t a l y t i cs i t ey e tc l o s et or e s i d u e s 1 2 1 i n v o l v e di ns sDNAsub s t r a t eb ind ing,w et e s t e dh e t e r o d im e rf o rm a t i o no ft h eA 3DE C320Y 1 2 2 m u t a n tw i t h A3Fand A3G.By GST -pu l l d ow n sA 3DEC320Y i n t e r a c t e dw i t hi t s e l f,w i l dt y p e 1 2 3 A ig3A ).Byc o n f o c a lm i c r o s c o p yt h eA 3DE u t a n tb e h a v e d 3DEC320, A3Fand A3G(F C320Y m 5 1 2 4 l i k eA 3DEandin t e r a c t ed w i thi t s e l f,A 3Fa n dA 3G(F i g3B )i n d i c a t i n gt h a tf u n c t i o n a l 1 2 5 i n a c t i v a t iono fA3DEw a sun r e l a t edt oh e t e r o d im e rf o rm a t i o no rf a i l u r et oe n g a g ew i t hA 3B. 1 2 6 1
  
  2 7 APOBEC3DEinh ib i t sAPOBEC3FandAPOBEC 3Ged i t in go fHBVDNA 1 2 8 T od em on s t r a t eth eimp a c to fA3DE /A 3Fa n dA 3DE /A 3Gh e t e r o d im e r i z a t i o no nHBVDNA 1 2 9 s y n t h e s i s,QT6w e r eco t r an s f e c t edw i t hpC a yw( am o l e c u l a rc l o n eo ft h eHBV )a n dA 3Fo r 1 3 0 A 3G w i thin c r e a s ingamoun t so fA 3DE. QT 6c e l l sw e r eu s e da st h e yd on o tg i v ea n 1 3 1 e n d o g e nou sDNAed i t ingb a ckg roun d[ 1 2,3 0,4 0 ].T o t a lDNAw a sr e c o v e r e da t4 8h o u r sa n d 1 3 2 a n a l y z e dby3DPCR,at e chn iqu eth a tr e c o v e r sA 3 e d i t e d DNAa tl ow e rPCRd e n a t u r a t i o n 1 3 3 t em p e r a tu r e s(Td )[64 ].A sc an b es e e ni nF i g4Aa n d4B,A 3DEe x p r e s s i o ns h i f t e dt ol ow e r 1 3 4 t em p e r a tu r e sth el a s tTda t wh i ch DNAc o u l db er e c o v e r e di nad o s ed e p e n d e n tm a n n e r– 1 3 5 s am p l e sh igh l igh t ed by an a s t e r i s k. e.ap r e f e r e n c ef o re d i t i n ga t5 ’T pCf o rA 3B,A 3B nA 1 4 0 a n dA 3Fand5 ’CpCfo rA3G(d a t an o ts h ow n ). 1 4 1
  
  1 4 2 APOBEC3DEenhan c e sHBVr ep l i c a t i on 1 4 3 T oa s s e s sth er e l a t iv eexp r e s s ionl ev e l
  
  so fA 3
  
  g
  
  e
  
  n
  
  
  
  e si
  
  nH
  
  u
  
  h 7,aT
  
  
  
  a
  
  q
  
  M
  
  
  
  a nt r a n s c r i p t i o n a ls t u d y 1 4 4 w a sm a d einp r e s en c eo rab s en c eo f HBV(F i g5A ).O ft h es e v e nA 3g e n e sa n a l y s e d,u s i n g 1 4 5 RPL 1 3A a sr e f e r en c e, Huh7c e l l ss h ow e ds i g n i f i c a n t l yh i g h e rA 3B -A 3Ga n dl ow e rA 3A a n d 1 4 6 A 3H e xp r e s s ion.In t e r e s t ing ly,th er e l a t i v eA 3g e n e se x p r e s s i o nw a ss im i l a ri np r e s e n c ea n d 1 4 7 a b s e n c eo fHBV,sugg e s t ingth a tv i r a lp r o t e i n s d on o ti n d u c eA 3g e n e se x p r e s s i o n.M o r e o v e r, 6 1 4 8 w eo b s e r v e danid en t i c a lexp r e s s iono fA 3DE,A 3F a n dA 3G,s h ow i n gt h a te n d o g e n o u sl e v e l 1 4 9 o fA 3DEw a sno tsu f f i c i en ttocoun t e r a c tA 3Go rA 3Fl e v e l s. 1 5 0 1 5 1 I no r d e rt oqu an t i t a t eth eimp a c to f A3DEe x p r e s s i o no n HBVl e v e l s,H u h 7c e l l sw e r ec o - 1 5 2 t r a n s f e c t e dbypC ayww i thin c r e a s ingam o u n t so fA 3DE.A sc a nb es e e no nF i g5B,0. 2 5μg 1 5 3 a n d0. 7 5μgo f A3DEin c r e a s ed HBV DNAl o a di nc u l t u r es u p e r n a t a n t s,p r e s um a b l yb y 1 5 4 c o u n t e r a c t i ngendog enou sl ev e l so f A3e n z ym e s. W h e nA 3Fo rA 3G w a sc o t r a n s f e c t e d, 1 5 5 HBVDNAl ev e l sd ropp edbyf a c to r so f5 7(F i g5B ).I n c r e a s i n gam o u n t so fA 3DEc o u n t e r e d 1 5 6 w e l lr e s t r i c t ionbyA3Fandtoal e s s e re x t e n tA 3G,(F i g5B ),i nk e e p i n gw i t ht h eam i n oa c i d 1 5 7 h om o l o g yb e tw e en A3Dv s. 1 6 5 1 6 6 APOBEC e r ed i t sHBVDNA 3DEC320Y hyp a r l yr e p o r t ssugg e s t edth a tth
  
  e
  
  A3DEC320 p 1
  
  6 7 E r o t e i nc o u l dr e s t r i c th um a nimm u n o d e f i c i e n c y 1 6 8 t y p e1r e p l i c a t ionandev ened i ts sDNA[ 5 7,6 5,6 6 ].N oh y p e rm u t a t e dv i r a ls e q u e n c e sw e r e 1 6 9 g i v e nt os u ppo r tth econ t en t ion,a l thou g he d i t i n gf r e q u e n c i e so ft h eo r d e ro f~ 0. 0 2% w e r e 1 7 0 r e p o r t e d[ 5 7 ], mo r eth an~1000fo ldlow e rt h a nf o rc l a s s i c a lh y p e rm u t a n t s.T oe x p l o r et h i s, 1 7 1 w eu s e dv e rys en s i t iv e3DPCR[64 ],w h i c hi sa b l et op i c ku pah i g h l yA 3 e d i t e dm o l e c u l e 1 7 2 4 am o n gu pto 10 un ed i t ed mo l e cu l e s.T r a n s f e c t i o no f QT 6c e l l sw i t h pC a yw a n da n 7 1 7 3 A r e s s ioncon s t ru c tf a i l e dt or e c o v e rh y p e r e d i t e d HBV Xg e n e DNA.B y 3DEC320–V5exp 1 7 4 c o n t r a s t,fo ranA3DE on s t ru c t,3DPCRp r o d u c t sc o r r e s p o n d i n gw e r er e c o v e r e da sl ow C320Y c 1 7 5 a omp a r e dt o8 9. 6 °Cf o rt h eA 3DEo rt h eem p t yp l a sm i dc o n t r o l s8 4. 8 °Cfo rth eA3DE C320Y c 1 7 6 (F i g6A ).3DPCRp rodu c t sf rom8 8. 1 °Ca n d8 6. 5 °Cr e a c t i o n sw e r ec l o n e da n ds e q u e n c e d. 1 8 6 1 8 7 o e sn o te d i t HBV DNA. An o n e d i t i n gr e s t r i c t i o n T h ea b o v ef ind ing sshowth a t A3DEC320 d 1 8 8 p h e n om enona longth el in e so fsom ec a t a l y t i c a l l yi n a c t i v eA 3G m u t a n t sc a n n o tb ee x c l u d e d 1 8 9 [ 3 9,5 3 -55 ]. How ev e r,inth econ t e x to f HBV,t h i si su n l i k e l yt ob es t r o n gf o rA 3DEo v e r 1 9 0 e x p r e s s ionl edtoh igh e rHBVDNAl e v e l s(F i g5A ).A l t e r n a t i v e l y,a n yn o n e d i t i n gr e s t r i c t i o n 1 9 1 e f f e c ti sl e s sp ronoun c edth anan t ago n i smo ft h eA 3Fa n dA 3Gr e s t r i c t i o nf a c t o r s. 1%(www. 1 0 0 0 g e n om e s. o r g )i n d i c a t i n g 2 0 1 t h a tA 3DEi sno tpo lymo rph i ca tth i ss i t e. 2 1 1
  
  W h i l en o tf u l lyt i t r a t edou t, A3DEenh a n c em e n to f HBV DNAi nF i g5Ai s~ 7 0%.T h e 2 1 2 A 3DEC320Y po lymo rph i sms e em stob ef u l l yf i x e di nt h eh um a np o p u l a t i o ns u g g e s t i n gt h a t 2 1 3 t h e r ea r ee vo lu t ion a ryadv an t ag e stob e i n gc a t a l y t i c a l l yi n a c t i v e.A l t e r n a t i v e l y,i tc o u l dh a v e 2 1 4 b e e nf i x e dv i ath es t rongbo t t l en e ckth a th um a np r e c u r s o rp o p u l a t i o n sw e n tt h r o u g h[ 6 9 ].I ti s 2 1 5 ar e c e n te x p e r im en tinevo lu t ionfo ron l yt h eg o r i l l ah a r b o r sas im i l a rs u b s t i t u t i o n(C 3 2 0 ).A l l 2 1 6 o t h e rm o n k ey sandap e sen cod e Y320 w i t ht h em a c a q u eA 3DEp r o t e i nb e i n gd em o n s t r a b l y 2 1 7 c a t a l y t i c[ 60 ]. 2 1 9 2 2 0
  
  W i t hc r o s s t a lkb e tw e en A3DE, A3Fan dA 3G,t h er o l eo fs om eo ft h e s ei n n a t er e s t r i c t i o n 2 2 1 f a c t o r si sc l e a r ly mo r esub t l eth anp r e v i o u s l yt h o u g h t.T h eA 3DEp r o x im a lp r om o t e ri s 2 2 2 c l o s e s tt ot h a to fA3C(53%id en t i tyov e rt h ep r o x im a l7 0 0b p )n e i t h e ro fw h i c ha r ei n t e r f e r o n 9 2 2 3 s e n s i t i v eso m a rk ingi tou tf rom A 3Aa n dA 3G,w h i c ha r ec l e a r l yISG s[ 2 1 2 5 ].P o s s i b l y 2 2 4 i n t e r f e r onindu c t iono f A3Gi sa m e a n so fo v e r c om i n gb a s a ll e v e l so fA 3DE.L i k et h eo t h e r 2 2 5 A 3g e n e s,A3DEi sp a r
  
  t i cu l a r lyw e l le x p r e s s e di nh em a t o p o i e t i cc e l l s(www. b i o g p s. o r g ).I ti s 2 2 6 p o s s i b l eth a ti tlow e r sth eth r e sho ld sl e v e l so fA 3Fa n dA 3Gs of a c i l i t a t i n gt h ef u n c t i o no ft h e 2 2 7 H IVV i fp ro t e in.