['230', 'D.L.', 'Chapman', 'and', 'D.', 'J.', 'Wolgemuth', 'from', 'eggs', 'of', 'various', 'organisms,', 'including', 'mouse,', 'has', 'been', 'shown', 'to', 'induce', 'meiotic', 'maturation', 'of', 'Xenopus', 'laevis', '(Sorenson', 'et', 'al.,', '1985)', 'or', 'starfish', 'oocytes', '(Hashimoto', 'and', 'ishimoto,', '1988),', 'demonstrating', 'that', 'the', 'meiosis-inducing', 'function', 'of', 'MPF', 'is', 'evolutionarily', 'conserved,', 'Cytoplasm', 'from', 'mitotically', 'active', 'embryonic', 'cells', '(Wasserman', 'and', 'Smith,', '1978)', 'and', 'mammalian', 'tissue', 'culiure', 'cells', 'at', 'the', 'G2', 'phase', 'of', 'the', 'cell', 'cycle', '(Sunkara', 'et', 'al..', '1979)', 'is', 'also', 'capable', 'of', 'inducing', 'meiotic', 'maturation', 'of', 'Xenepus', 'oocytes,', 'sug-', 'gesting', 'that', 'a', 'common', 'factor', 'is', 'capable', 'of', 'driving', 'cells', 'into', 'M', 'phase', 'of', 'mitotic', 'and', 'meiotic', 'cell', 'cycles.', 'MPF,', 'now', 'referred', 'to', 'as', 'either', 'the', 'maturation', 'or', 'M', 'phase', 'promoting', 'factor,', 'is', 'composed', 'of', 'two', 'subunits,', 'pa4ede2', 'and', 'cyclin', 'B', '(Dunphy', 'et', 'al.,', '1988;', 'Gautier', 'et', 'al.,', '1988;', 'Labbe', 'et', 'al.,', '1989),', 'edc2,', 'which', 'was', 'initially', 'identified', 'in', 'the', 'fis-', 'sion', 'yeast', 'Schizesaccharomyces', 'pombe,', 'encodes', 'a', '34x104', 'M,', 'serine/threonine', 'protein', 'kinase', '(Simanis', 'and', 'Nurse,', '986).', 'In', 'fission', 'yeast,', 'p34?', 'kinase', 'activity', 'is', 'required', 'at', 'two', 'points', 'in', 'the', 'cell', 'cycle,', 'the', 'G}-S', 'and', 'the', 'G2-M', 'phase', 'transitions', '(rev.', 'Nurse,', '1990).', 'Cyclins,', 'which', 'were', 'urigi-', 'nally', 'identified', 'in', 'marine', 'invertebrates,', 'have', 'since', 'been', 'identified', 'in', 'a', 'variety', 'of', 'species', 'ranging', 'from', 'yeast', '(o', 'man', '(rev.', 'Pines,', '1991).', 'The', 'association', 'of', 'cyclin', 'with', 'p34ede?', 'is', 'required', 'for', 'regulating', 'the', 'phosphorylation', 'state', 'of', 'p34?', 'which', 'in', 'tum', 'controls', 'its', 'kinase', 'activity', '(rev.', 'Clarke', 'and', 'Karsenti,', '1991;', 'Ficig', 'and', 'Gould,', '1991).', 'Cyclin', 'may', 'also', 'be', 'involved', 'in', 'conferring', 'substrate', 'specificity', 'on', 'the', 'cde?', 'kinase', '(rev.', 'Hunt,', '1991c).', 'Both', 'cde2', 'and', 'cyclin', 'B', 'are', 'members', 'of', 'gene', 'families.', 'cdc2-related', 'or', 'cyclin', 'dependent', 'kinases', '(cdk)', 'have', 'been', 'identified', 'in', 'a', 'number', 'of', 'different', 'species,', 'including', 'human', '(Elledge', 'and', 'Spottswood,', '1991;', 'Tsai', 'et', 'al.,', '1991;', 'Meyer-', 'son', 'et', 'al,,', '1992),', 'Xenopus', '(Blow', 'and', 'Nurse,', '1990;', 'Paris', 'et', 'al.,', '1991;', 'Gabrielli', 'et', 'al.,', '1992),', 'Drosophila', '(Lehner', 'and', "O'Farrell,", '1990)', 'and', 'goldfish', '(Hirai', 'et', 'al.,', '1992).', 'There', 'is', 'evidence', 'that', 'these', 'cdk', 'genes', 'function', 'earlier', 'than', '¢de2', 'in', 'the', 'cell', 'cycle,', 'during', 'Gi-S', 'phase', '(Fang', 'and', 'Newport,', '1991;', 'Elledge', 'et', 'al.,', '1992;', 'Rosenblatt', 'et', 'al.,', '1992).', 'Cyclins', 'have', 'been', 'divided', 'into', 'three', 'major', 'groups,', 'Gi,', 'A', 'and', 'B,', 'based', 'on', 'amino', 'acid', 'homology', 'and', 'timing', 'of', 'their', 'appearance', 'during', 'the', 'cell', 'cycle', '(rev.', 'Minshull', 'et', 'al.', '1989b;', 'Hunt.', '1991b;', 'Pines,', '1991).', 'Not', 'only', 'are', 'there', 'sev-', 'eral', 'groups', 'of', 'cyclins,', 'bul', 'there', 'are', 'multiple', 'members', 'in', 'at', 'least', 'two', 'of', 'the', 'groups,', 'including', 'the', 'B-type', 'cyclins', '(rev.', 'Pines,', '1991}.', 'Multiple', 'B-type', 'cyclins', 'have', 'been', 'identified', 'in', 'organisms', 'as', 'evolutionarily', 'divergent', 'as', 'Saccharomyces', 'cerevisiae,', 'Xenopus,', 'mouse', 'and', 'human.', 'Genetic', 'mapping', 'using', 'the', 'human', 'cyclin', 'B1', 'cDNA', 'as', 'a', 'probe', 'revealed', 'the', 'presence', 'of', 'at', 'least', 'nine', 'Bl-related', 'sequences', 'in', 'the', 'mouse', 'genome', '(Hanley-Hyde', 'et', 'al.,', '1992;', 'Lock', 'ct', 'al.,', '1992).', 'The', 'roles', 'of', 'the', 'different', 'B-type', 'cyclins', 'are', 'not', 'understood.', 'In', 'general,', 'the', 'B-type', 'cyclins', 'appear', 'during', 'the', 'G2/M', 'phase', 'transition', 'of', 'the', 'cell', 'cycle,', 'although', 'several', 'recently', 'iden-', 'tified', 'yeast', 'B-type', 'cyclins', 'have', 'been', 'shown', 'to', 'function', 'ear-', 'lier,', 'specifically', 'in', 'S', 'phase', '(Epstein', 'and', 'Cross,', '1992;', 'Fitch', 'et', 'al.,', '1992).', 'We', 'have', 'used', 'mouse', 'gametogenesis', 'as', 'a', 'model', 'system', 'in', 'which', 'to', 'study', 'genes', 'important', 'in', 'the', 'in', 'vivo', 'regulation', 'of', 'the', 'mammalian', 'mitotic', 'and', 'meiotic', 'cell', 'cycles,', 'in', 'par-', 'ticular,', 'the', 'cyclins,', 'Mouse', 'spermatogenesis', 'in', 'particular', 'provides', 'an', 'excellent', 'system', 'to', 'study', 'genes', 'involved', 'in', 'cell', ' ', ' ', ' ', ' ', 'cycle', 'control.', 'In', 'the', 'adult', 'testis,', 'one', 'can', 'examine', 'cells', 'in', 'various', 'stages', 'of', 'differentiation', 'within', 'a', 'single', 'lineage,', 'from', 'the', 'self-renewing', 'stem', 'cells,', 'the', 'spermatogonia,', 'to', 'the', 'meiotically', 'dividing', 'spermatocytes,', 'as', 'well', 'as', 'the', 'post-mei-', 'otic', 'germ', 'cells,', 'the', 'spermatids.', 'We', 'have', 'previously', 'observed', 'the', 'developmentally', 'regulated', 'pattern', 'of', 'expression', 'of', 'murine', 'cycB/', 'in', 'both', 'the', 'male', 'and', 'female', 'germ', 'cells', '(Chapman', 'and', 'Wolgemuth,', '1992).', 'We', 'now', 'describe', 'the', 'isolation', 'of', 'a', 'second', 'murine', 'B-type', 'cyclin.', 'cyclin', 'B2', '(cycB2).', 'The', 'pattern', 'of', 'cyeB2', 'expression', 'during', 'male', 'and', 'female', 'germ', 'cell', 'develupmment', 'was', 'assessed', 'by', 'northern', 'blot', 'and', 'in', 'situ', 'hybridization', 'analyses.', 'cveB2', 'is', 'also', 'expressed', 'in', 'a', 'regulated', 'pattern', 'in', 'the', 'testis', 'and', 'ovary,', 'but', 'in', 'a', 'pattern', 'quite', 'distinct', 'from', 'that', 'of', 'cycB/.', 'The', 'fate', 'of', 'the', 'cyeB/', 'and', 'cyeB2', 'transcripts', 'that', 'accumulate', 'in', 'the', 'fully', 'grown', 'oocytes.', 'during', 'meiotic', 'maturation,', 'al', 'fertil-', 'ization', 'and', 'during', 'early', 'embryogenesis', 'was', 'addressed', 'by', 'in', 'situ', 'hybridization', 'analysis.', ' ', 'MATERIALS', 'AND', 'METHODS', 'Source', 'of', 'tissues', 'Swiss', 'Webster', 'mice,', 'obtained', 'from', 'Charles', 'River', '(Wilmington,', 'DE)', 'or', 'C57BI/6)', 'mice,', 'obtained', 'from', 'Jackson', 'Laboratory', '(Bar', 'Harbor,', 'ME),', 'were', 'used', 'as', 'the', 'source', 'of', 'all', 'adult', 'tissues', 'and', 'cell', 'populations.', 'Adult', 'testes', 'and', 'ovaries', 'were', 'obtained', 'from', 'mice', 'older', 'than', '35', 'days.', 'Ovaries', 'obtained', 'from', 'mice', '22', 'days', 'p.', 'n.', 'were', 'also', 'used', 'for', 'in', 'situ', 'hybridization', 'analysis', 'as', 'indicated.', 'Embryos', 'were', 'collected', 'at', 'the', 'days', 'noted', '[day', '0.5', 'post-coitum', '(p.', 'c.)', 'being', 'the', 'day', 'the', 'vaginal', 'plug', 'is', 'detected]', 'and', 'dissected', 'free', 'of', 'extra-', 'embryonic', 'membranes', 'and', 'placentae.', 'The', 'mouse', 'mutant', 'strain', 'atrichosis', '(at)', '(ATEB/Le', 'a/a', 'dat/deb)', 'was', 'obtained', 'from', 'the', 'Jack-', 'son', 'Laboratory', '(Bar', 'Harbor,', 'ME).', 'Dissected', 'tissue', 'specimens', 'were', 'frozen', 'in', 'liquid', 'nitrogen', 'prior', 'to', 'RNA', 'isolation,', 'Dissected', 'tissues', 'for', 'in', 'situ', 'analysis', 'were', 'fixed', 'in', '46.', 'paraformaldehyde', 'in', 'Ix', 'PBS', '(1x', 'PBS:', '130', 'mM', 'NaCl,', '7', 'mM', 'NaHPOs.', '3', 'mM', 'NaH2POq4)', 'overnight', 'at', '4°C.', 'Collection', 'of', 'ovulated', 'and', 'fertilized', 'eggs', 'CS57BI/6J', 'females', 'were', 'superovulated', 'by', 'intraperitoneal', 'injection', 'with', '5', '[.', 'U.', 'pregnant', 'mare', 'serum', 'gonadotropin', '(PMSG,', 'Sigma)', 'and', '48', 'hours', 'later', 'with', '§', '1.', 'U.', 'human', 'chorionic', 'gonadotropin', '(HCG,', 'Sigma),', 'These', 'females', 'were', 'then', 'either', '(1)', 'killed', '24', 'hours', 'later', 'to', 'obtain', 'ovulated', 'eggs,', '(2)', 'mated', 'to', 'CS7BI/6J', 'males', 'and', 'killed', '24', 'hours', 'later', 'to', 'obtain', 'fertilized', 'eggs', 'or,', '(3)', 'mated', 'to', 'B6', 'males', 'and', 'killed', 'at', 'day', '3.5', 'p.', 'c.', 'to', 'obtain', 'blastocyst', 'stage', 'embryos.', 'Ovulated', 'eggs', 'were', 'dissected', 'trom', 'the', 'ampullae', 'into', 'M16', 'media', '(Hogan', 'et', 'al.,', '1986),', 'cumulus', 'cells', 'were', 'removed', 'by', 'ueatment', 'with', '300', 'ug/ml', 'hyaluronidase', '(Sigma)', 'in', 'M2', 'media', '(Hogan', 'et', 'al.,', '1986}', 'and', 'then', 'moved', 'to', 'fresh', 'M2', 'media', 'to', 'remove', 'the', 'hyaluronidase.', 'Fertilized', 'eggs', 'were', 'dissected', 'from', 'the', 'ampullac', 'into', 'M2', 'media', 'and', 'checked', 'visually', 'for', 'the', 'presence', 'of', 'two', 'pronu-', 'clei.', 'At', 'day', '3.5', 'p.', '¢..', 'blastocysts', 'were', 'flushed', 'from', 'the', 'uterus', 'into', '1x', 'PBS.', 'Ovulated', 'eggs,', 'fertilized', 'eygs', 'and', 'blastocysts', 'were', 'collected', 'with', 'a', 'micropipet', 'and', 'reinjected', 'into', 'host', 'ampullae.', 'The', 'ampullae', 'were', 'then', 'dissected', 'and', 'fixed', 'in', '4%', 'paraformaldehyde', 'overnight', 'at', '4°C', 'before', 'paraffin', 'embedding', 'for', 'in', 'situ', 'analysis.', 'Probes', 'All', 'DNA', 'probes', 'were', 'labeled', 'with', '{*°P|dCTP', '(DuPont,', 'Wilm-', 'ington,', 'DE)', 'using', 'Amersham’s', 'Multiprime', 'DNA', 'labeling', 'systems', '(Amersham,', 'Arlington', 'Heights,', 'IL)', 'to', 'a', 'specific', 'activily', 'preater', '50553129']