['~~', '—', 'WR', 'rene', '4', 'Ave', 'Mor', 'che', 'W', 'CTR', 'Grant', 'No.', '814A', 'Progress', 'Report', '2', 'Une.', 'S.', 'Ryan,', 'Ph.D.', 'Papanicolaou', 'Cancer', 'Research', 'Inst,', '2/1/75', '-', '6/30/75', 'Miami,', 'Florida', '33123', 'ABSTRACT', 'RKEPS', 'F056', 'There', 'ate', 'two', 'major', 'aims', 'to', 'this', 'project:', 'the', 'first', 'is', 'to', 'obtain', 'direct', 'evidence', 'on', 'the', 'precise', 'subcellular', 'sites', 'of', 'pulmonary', 'angiotensin', 'converting', 'enzyme.', 'The', 'second', 'aim', 'is', 'to', 'develop', 'rapid,', 'simple', 'and', 'sensitive', 'assays', 'of', 'converting', 'enzyme', 'to', 'facilitate', 'physiologic', 'and', 'clinical', 'studies', 'of', 'the', 'effects', 'of', 'environmental', 'influences', '(e.g.', 'tobacco', 'smoke)', 'and', 'of', 'disease', 'states', '(e.g.', 'chronic', 'emphysema)', 'on', 'the', 'ability', 'of', 'the', 'lungs', 'to', 'con-', 'vert', 'angiotensin', 'I', 'to', 'its', 'potent', 'lower', 'homolog,', 'angiotensin', 'II.', 'Progress', 'can', 'be', 'reported', 'for', 'both', 'lines', 'of', 'study.', 'In', 'addition', 'it', 'has', 'been', 'possible', 'to', 'make', 'endothelial', 'cell', 'culture', 'both', 'routine', 'and', 'reliable,', 'a', 'project', 'supported', 'by', 'previous', 'CTR', 'funds,', 'Endothelial', 'cells', 'in', 'culture', 'have', 'provided', 'a', 'basis', 'for', 'much', 'of', 'the', 'progregs', 'reported', 'here.', 'We', 'have', 'raised', 'antibodies', 'to', 'pure', 'pig', 'lung', 'converting', 'enzyme.', 'The', 'anti-', 'bodies', 'were', 'partially-purified', 'by', '(NH4)9SO,', 'precipitation', 'and', 'by', 'chromato-', 'graphy', 'on', 'DEAE-cellulose', 'using', 'a', 'linear', 'salt', 'gradient.', 'The', 'antibodies', 'were', 'conjugated', 'via', 'glutaraldehyde', 'to', 'microperoxidase', '(11-MP,', 'a', 'heme-undecapeptide', 'of', 'cytochrome', 'c).', 'On', 'incubation', 'with', 'prefixed', 'lung', 'blocks,', 'the', 'conjugated', 'antibody', 'was', 'found', 'to', 'be', 'reactive', 'with', 'sites', 'along', 'the', 'luminal', 'surface', 'of', 'endothelial', 'cells,', 'especially', 'those', 'of', 'capillaries', 'and', 'venules..', 'A', 'description', 'of', 'these', 'preliminary', 'studies', 'has', 'been', 'published', '(Ryan,', 'et', 'al.,', 'Biochem.', 'J.,', '146:497-499,', '1975).', 'However,', 'several', 'technical', 'problems', 'suggest', 'that', 'our', 'efforts', 'to', 'localize', 'the', 'enzyme', 'can', 'be', 'greatly', 'improved.', 'Over', 'the', 'past', 'six', 'months', 'we', 'have', 'developed', 'means', 'of', 'conjugating', 'antibody', 'te', '8-MP', '(microperoxidase)', 'using', 'a', 'bi~', 'functional', 'active', 'ester', 'synthesized', 'in', 'this', 'laboratory.', 'The', 'conjugation', 'proce-', 'dure', 'is', 'highly', 'selective', 'and', 'does', 'not', 'lead', 'to', 'the', 'formation', 'of', 'complex', 'polymers', 'In', 'addition,', 'we', 'have', 'developed', 'an', 'immuncabsorbant', 'using', 'converting', 'enzyme', 'covalently', 'bound', 'to', 'glass', 'beads.', 'Pilot', 'experiments', 'indicate', 'that', 'we', 'can', 'purify', 'specific', 'antibody', 'conjugates', 'to', 'homogeneity.', 'We', 'have', 'developed', 'an', 'extremely', 'sensitive', 'radioassay', 'of', 'converting', 'enzyme', 'using', '(1251)', 'tyr8-bradykinin', 'as', 'substrate.', 'The', 'assay', 'has', 'enabled', 'us', 'to', 'measure', 'converting', 'enzyme', 'of', 'pulmonary', 'endothelial', 'cells', 'in', 'culture.', 'However,', 'the', 'assay', 'is', 'complex', 'and', 'we', 'have', 'begun', 'efforts', 'to', 'synthesize-a', 'simpler', 'substrate', '(38-Hip-Gly-Gly)', 'which', 'should', 'lend', 'itseif', 'to', 'rapid', 'simple', 'assays', 'of', 'high', 'sensitivity.', 'We', 'propose', 'to', 'use', 'the', 'new', 'substrate', 'to', 'examine', 'the', 'effects', 'of', 'inhalants', 'and', 'other', 'influences', 'on', 'the', 'endocrine', 'functions', 'of', 'the', 'lungs.', 'Page', '20']