[' ', ' ', 'AN', 'Arthur', 'D.', 'Little,', 'Inc.', 'Metabolic', 'Activation', 'System:', 'Bacterial', 'Contaminant', 'Control:', 'Scoring:', ' ', 'Tubes', 'requiring', 'metabolic', 'activation', 'have,', 'in', 'addition', 'to', 'the', 'preceding', 'top', 'agar', 'ingredients,', 'an', 'S-9', 'fraction', 'of', 'rat', 'liver', 'homogenate', 'obtained', 'from', 'Aroclor', '1254', 'treated', 'Sprague', 'Dawley', 'rats.', 'The', 'activation', 'system', '(S-9)', 'mix', 'contains', 'the', 'following', 'per', '10', 'ml:', '0.4M', 'MgCl;', '1.65M', 'KCl', '0.2', 'mil', '1M', 'Glucose', '~', '6~Phosphate', '0.05', 'ml', '0.1M', 'NADP', '0.4', 'ml', '0.2M', 'Phosphate', 'buffer', 'pH', '7.4', '5.0', 'ml', 'Sterile', 'Distilled', 'H,0', '3.35', 'ml', 'S-9', 'Fraction', '1.0', 'ml', 'The', 'S-9', 'fraction', 'is', 'thawed', 'on', 'the', 'day', 'of', 'use', 'at', 'which', 'time', 'the', 'S9', 'mix', 'is', 'prepared', 'and', 'kept', 'cold', 'on', 'ice.', '0.5', 'ml', 'of', 'the', 'complete', 'S~9', 'mix', 'is', 'added', 'to', 'the', 'tubes', 'which', 'are', 'then', 'vortexed', 'and', 'poured', 'onto', 'minimal', 'glucose', 'plates.', 'The', 'plates', 'are', 'allowed', 'to', 'harden', 'for', 'several', 'minutes.', 'The', 'same', 'procedure', 'is', 'repeated', 'for', 'each', 'tester', 'strain.', 'Within', 'an', 'hour', 'the', 'plates', 'are', 'inverted', 'and', 'placed', 'in', 'a', 'dark', '37°C', '(+', '2°C)', 'incubator.', 'The', 'plates', 'are', 'incubated', 'for', '48', 'to', '72', 'hours,', 'checked', 'for', 'uniform', 'background', 'lawn', 'and', 'scored', 'by', 'counting', 'revertant', 'colonies.', 'To', 'insure', 'the', 'quality', 'of', 'aseptic', 'technique', 'during', 'the', 'assay', 'and', 'also', 'the', 'sterility', 'of', 'solvents,', 'compounds', 'and', 'equipment,', 'standard', 'contamination', 'checks', 'are', 'conducted', 'with', 'each', 'assay.', 'At', 'the', 'time', 'of', 'the', 'assay', 'the', 'following', 'are', 'tested', 'for', 'sterility', 'on', 'nutrient', 'agar', 'plates', 'and', 'incubated', 'at', '37°C', 'for', '48', 'hours:', 'All', 'solvents', 'used', 'Positive', 'controls', 'Test', 'samples', 'S-9', 'Mix', '(at', 'beginning', 'and', 'end', 'of', 'assay)', 'Complete', 'Top', 'Agar', 'Also,', 'an', 'uninoculated', 'nutrient', 'agar', 'plate,', 'Minimal', 'Glucose', 'agar', 'plate', 'and', 'nutrient', 'broth', 'Oxoid', 'Media', '#2', 'tube', 'are', 'incubated', 'at', '37°C', 'for', '48', 'hours.', 'In', 'scoring', 'the', 'assay,', 'the', 'positive', 'and', 'negative', 'controls', 'are', 'evaluated', 'first.', 'If', 'the', 'control', 'values', 'do', 'not', 'fall', 'within', 'one', 'standard', 'deviation', 'of', 'the', 'historical', 'means,', 'the', 'remaining', 'plates', 'are', 'not', 'scored', 'and', 'the', 'assay', 'is', 'repeated.', 'Scoring', 'is', 'by', 'use', 'of', 'the', 'Artek', '880', 'automated', 'colony', 'counter', 'unless', 'solubility', 'of', 'the', 'test', 'material.', 'is', 'such', 'that', 'particles', 'on', 'the', 'plates', 'would', 'make', 'this', 'invalid.', 'For', 'particulates,', 'scoring', 'is', 'manual,', 'A-5', 'of', '6', ' ', ' ', '6L21L', '0600S']