['SIDESTREAM', 'SMOKE.', 'AND:', 'DNA:', 'ADDUCTS', ' ', 'FIG..1.', 'TLC', 'maps', 'of', 'B(a)P-DNA.and', 'CSC-DNA', 'adducts', 'developed', 'by.', 'AMBIS', 'scanning', 'and', 'autoradiography.', 'B(a)P-DNA', 'adducts', '(A,', 'B)', 'were', 'prepared', 'from', 'liver', 'of', 'B6C3F1', 'mouse', 'injected', 'ip:', 'with', '40', 'mg/kg', 'of', 'B{a)P', '‘and', 'assayed', 'by', 'P1', 'nuclease:enhancement.', 'CSC-DNA', 'adducts', '(C,', 'D)', 'were', 'prepared', 'in', 'vitro', 'as', 'described', '‘under', 'Matemials', 'and', 'Methods.', 'The', 'adduct', 'assays', 'were', 'done', 'with.', '1.6', 'ug', 'of', 'B(a)P-modified', 'DNA', 'and', '4|ug', 'of', 'CSC-modified', 'DNA..', 'TLCs', 'were', 'scanned', '2', 'and', "10'", 'hr', 'with', 'AMBIS:', 'radioanalytic', 'imaging', 'system', 'for', 'Bla)P-DNA', '(A)', 'and', 'CSC-DNA', '(C),', 'respectively.', 'For', 'autoradiography,', 'Kodak', 'XA‘R-5:', 'diagnostic.', 'films:', 'were', 'exposed', 'for', '7', 'and', '24', 'hr', 'for', 'B(aJP-DNA', '(B).and', 'CSC-DNA', '(D),', 'respec-', 'tively,', 'at', '—80°C.', 'heart', 'were:removed:and', 'placed', 'in', 'ice-cold', 'HBSS', '(Ca’*', 'and', 'Mg?*', 'free)', 'for', '30', 'min.', 'The', 'lungs', 'were', 'lavaged', 'and!', 'massaged', 'repeatedly', 'using', 'a', '10-ml.', 'syringe', 'filled', "with'7'ml", 'ofiice-cold', 'HBSS.', 'The', 'lavage', 'fluid', 'was', 'collected', 'in:', 'a.50-ml', 'centrifuge', 'tube', 'on', 'ice.', 'The', 'lavage', 'fluid', 'was', 'centrifuged', 'and', 'the', 'supernatant', 'fluid', 'drawn', 'off.', 'The.', 'pellet:', 'was.', 'resuspended', 'in', 'prewarmed', '(37°C)', '75.mM', 'KCl', 'and', 'incubated', 'at.', '37°C', 'for', '25', 'min:', 'One', 'milliliter', 'of', 'modified!', 'Carnoy’s', '(6:1!', 'absolute', 'methanol/glacial', 'acetic', 'acid,', 'v/v)', 'was.', 'added', 'to', 'the', 'tubes:', 'before', 'centrifugation.', 'After', 'centrifugation', 'the', 'cells', 'were', 'fixed', 'firstiwith', 'modified', 'Cannoy’s', 'and!then', 'three', 'more', 'times:with', 'Carnoy’s', 'fixative', ':(3:):', 'Metaphase', ':spreads:were', 'prepared.', 'Slides.', 'were', 'then', 'stained', 'for.', '5:', 'min', 'with', 'Giemsa', 'diluted', 'to:1:20.', 'Fifty', 'metaphases', 'for', 'each', 'animal', 'were', 'scored', 'forchramosome', 'aberrations.', 'Scoring', 'was-done', 'without', 'knowl', 'edge', 'of', 'treatment', 'group.', 'Statistical', 'analysis:', 'For', 'DNA', 'adduct', 'data,', 'Levene’s', 'test', 'for', 'equality', 'of', 'variance', 'was', 'conducted.', 'Since', 'unequal', 'variances', 'were', 'found,', 'data', 'were', 'log-transformed.', 'Statistical', 'significance', '(p', '<', '005)', 'was', 'evaluated', 'by.analy-', 'sis', 'ofivariance', 'followed', 'by', 'pairwise', "student's,", 'tests', 'with', 'Bonferroni.adjust-', 'ment.', 'Fisher’s', "exact'test", 'wasiused', 'to', 'determine', 'tHe', 'level', 'of', 'statistical', 'signifi-', 'cance', 'for.', 'chromosomal.abenrration', 'data.', 'RESULTS', 'Inhalation', 'of', 'the', 'ADSS', 'by.', 'the', 'rats', 'was', 'confirmed', 'by', 'measurement', 'of', 'blood', 'carboxyhemoglobin', 'and', 'plasma', 'nic-', 'otine/cotinine', '(Coggins', 'et.al,', '1993).', 'No', 'oventisigns', 'of', 'toxic-', '395', 'ity', 'were:', 'observed', 'and', 'no', 'significamt', 'body.', 'weight', 'differ--', 'ences.', 'were', 'noted', 'between', 'any.', 'of', 'the', 'exposed', 'groups', 'and', 'the', 'sham', 'controls:', 'All', 'lungs,', 'including', 'the', 'ones.', 'from:', 'the', 'high-cxposure:', 'group,,', 'appeared', 'normal', 'at', 'necropsy.', 'The', 'only', 'histopathological', 'changes', 'observed', 'were', 'mild', 'hyper-', 'plasia', 'of', 'the', 'epithcliumi', 'of', 'the', 'nasoturbinates,', 'in', 'one', 'sec-', 'tion', 'of', 'the', 'nose,', 'in', 'the', 'high-cxposure:', 'group', 'only:', 'These', 'histopathologicall', 'changes.did', 'not', 'progress.', 'with:', 'increased’', 'exposure', 'and', 'they', 'were', 'reversed', 'afier', 'cessation', 'of', 'ADSS', 'exposure', '(Coggins', '¢', 'a/.,', '1992,', '1993):', 'After', '28', 'days', 'of', 'exposure,', 'adduct', 'levels', 'in', 'alllthe', 'organs', 'tested', '(lung;', 'heart,', 'larynx,', 'liver):in', 'animals', 'fromilow-', 'and', 'medium-exposure', 'groups', 'were:', 'similar', 'to', 'those', 'of', 'sham', 'control', 'animals:(adduct.', 'maps', 'not', 'shown).', 'A', 'few.', 'discrete', 'adduct', 'spots,', 'thought', 'to', 'represent', 'endogenous.', 'DNA.', 'ad-', 'ducts,', 'were', 'visible', 'in', 'both', 'groups', 'and', 'the', 'sham', 'controls:', 'Significantly', 'elevated', 'levels.of', 'DNA', 'adducts', '(Fig.', '4)', 'werc', 'observed', 'in', 'lung,', 'heart,', 'and!', 'larynx', 'DNA:', 'of', 'animals.from', 'the', 'high-exposure', 'group', '(10', 'mg/im?).', 'P', 'maps', '(not', 'shown):', 'of', 'these', 'DNA', 'samples:exhibited', 'afew.', 'discrete', 'adduct', 'spots,', 'more', 'intense', 'than', 'found', 'in', 'the', 'sham', 'and', 'low-', 'and', 'me-', 'dium-exposure', 'groups,', 'and', 'diffuse', 'diagonal:', 'radioactive', 'zones', '(DRZ)', 'extending', 'from', 'close', 'to', 'the', 'origin', 'tio', 'the', 'mid-', 'dle', 'right-hand', 'margin:of', 'the', 'TLC', 'sheet.', 'The', 'DRZ,', 'presum-', 'ably', 'consisting', 'of', 'numerous:', 'incompletely', 'resolved', 'DNA.', 'adducts,', 'appears', 'to', 'be', 'characteristic', 'of', 'DNA', 'adducts', 'ob-', 'served!', 'afiter', 'tobacco', 'smoke:', 'exposure', '(Randerath', 'ef’', 'al.,', '1988).', 'DRZs', 'were', 'observed', 'in', 'the', 'adduct', 'maps.of', 'CSC-', 'DNA.', 'adduct.', 'prepared', 'in.', 'vitro.', 'but', 'not', 'in', 'the', 'benzo[a]pyrene-DNA', 'adduct', 'as', 'shown', 'in', 'Fig.', '1.', 'After', '90:', 'days', 'of', 'exposure,', 'the', 'same', 'organs', "cited'above,", 'as', 'well.as', 'bladden;', 'were', 'examined', 'for', 'IDNA.adducts.', 'Again,', "all'organs", 'from', 'the', 'low-.and', 'medium-exposure', 'groups', 'had', 'levels', 'of', 'DNA', 'adducts', 'which', 'were', 'not', 'visually', 'or', 'statisti-', 'cally', 'different', 'from', 'those', 'of', 'sham', 'controls.', 'Doubling:', 'the', 'amount', 'of', 'DNA', 'used', 'for', 'TLC', 'developmentito', '8', 'yg', 'did', 'not', 'produce', 'any.', 'exposure-related', 'adducts', '(ile.,', 'a', "DRZ)'in", 'the', 'low-', 'and', 'medium-exposure', 'groups', '(data', 'notishown):', 'Lung,,', 'heart,', 'and', 'larynx', 'DNA', 'from', 'the', 'high-exposure', 'group', 'exhib-', 'ited', 'elevated', 'levels', 'of', 'DNA.', 'adducts', 'with', 'DRZ', 'and', 'a', 'few', 'discrete', 'spots.', 'Some', 'of', 'the', 'discrete:', 'spots', 'appearedi', 'in', 'all', 'exposure:', 'and', 'sham', 'groups:', 'The', 'RAL', 'values', 'of', 'total', 'ad-', 'ducts', 'were', 'higher', 'than', 'those', 'in:the', 'same', 'organs', 'at', '28', 'days.', 'The', "liver'and", 'bladder', 'DNA,', 'however,', 'remained', 'negative', 'even', 'at', 'the', 'high', 'exposure.', 'Representative', 'adduct', 'maps', 'of', 'lung,', 'heart,', 'and', '‘larynx:', 'tissues', 'from', '90-day:', 'necropsies:', 'are', 'shown', 'in', 'Fig:', '2.', 'The', 'scanning', 'time', 'for', 'these', 'samples', 'was.8', 'hr.', 'Increasing', 'scanning', 'times', 'to:as:', 'long:', 'as', '30', 'hr', 'did', 'not', "reveal'any", 'additional', 'adducts', '(data', 'not', 'shown).', 'In', 'addition', 'to', 'the', 'P1', 'nuclease', 'method', 'for', 'adductienrichment,', 'butanol', 'extraction', 'was', 'also', 'usedifor', 'both', 'lung', 'and', 'heart', 'DNA', 'from', 'the', '90-day', 'samples.', 'The', 'results.(data', 'not', 'shown)', 'were', 'simi-', 'lar.', 'The', 'butanol', 'method', 'did', 'not', 'reveal', 'any', 'adduct', 'spots.on', 'y', 'SEER', 'Spzo0z']