['92', ';', 'STRAYER,', 'PINDER,', 'AND', 'CHANDER', 'concentrations', 'of', "'*]-SP-A,", 'and', 'the', 'free', 'and', 'bound', 'pools', 'were', 'measured', '[7].', 'We', 'observed', 'a', 'monophasic', 'SP-A', 'binding', 'curve', '(Figs.', '3a', 'and', '3b),', 'indicating', 'that', 'the', 'SP-A', 'receptors', 'on', 'our', 'type', 'II', 'cell', 'preparations', 'bind', 'SP-A', 'with', 'uniform', 'affinity', '(Kz', '=', '1.20', '+', '0.13', 'ug/ml)', 'and', 'that', 'there', 'are', '10°', 'SP-A', 'binding', 'molecules', 'for', 'each', 'type', 'II', 'cell.', 'The', 'shape', 'of', 'the', 'binding', 'curve,', 'indicating', 'positive', 'cooperativity,', 'and', 'the', 'Kz', 'and', 'receptor', 'num-', 'bers', 'are', 'virtually', 'identical', 'to', 'those', 'reported', 'by', 'Kuroki', 'et', 'al.', '[7],', 'indicating', 'that', 'our', 'type', 'II', 'cell', 'preparations', 'are', 'comparable', 'to', 'those', 'reported', 'by', 'others.', 'To', 'characterize', 'further', 'the', 'reactivity', 'of', 'A2C', 'and', 'A2R', 'with', 'type', 'II', 'cell', 'membrane', 'proteins,', 'the', 'inhibition', 'of', 'SP-A', 'binding', 'by', 'these', 'aiMAbs', 'was', 'examined.', 'Iodin-', 'ated', 'SP-A', '(5', 'pg/ml)', 'and', 'various', 'concentrations', '(be-', 'tween', '0', 'and', '10', 'pg/ml)', 'of', 'unlabeled', 'SP-A,', 'A2C,', 'and', 'A2R', 'were', 'added', 'as', 'potential', 'competitive', 'inhibitors', 'of', 'the', 'SPAR—°]-SP-A', 'interaction.', 'These', 'inhibitors', 'were', 'incubated', 'with', 'the', 'alveolar', 'type', 'II', 'cells', 'for', '4', 'h.', 'Both', 'antibodies', 'reduce', 'binding', 'of', 'iodinated', 'SP-A', 'to', 'isolated', 'alveolar', 'type', 'II', 'cells', '(Fig.', '3c).', 'The', 'reduction', 'in', 'binding', 'of', '1*]-SP-A', 'to', 'alveolar', 'type', 'II', 'cells', 'was', 'dose-depen-', 'dent.', 'At', 'high', 'concentrations', 'of', 'inhibitor,', 'the', 'percent-', 'ages', 'of', 'inhibition', 'were', 'comparable', 'for', 'A2R,', 'A2C,', 'and', 'unlabeled', 'competing', 'SP-A.', 'Furthermore,', 'maximal', 're-', 'duction', 'of', '*°]-SP-A', 'binding', 'was', 'seen', 'with', '1', 'pg/ml', 'of', 'A2C,', '0.5', 'ug/ml', 'of', 'A2R,', 'and', '10', 'ug/ml', 'of', 'SP-A.', 'A2R', 'and', 'A2C', 'Reverse', 'SP-A', 'Inhibition', 'of', 'Type', 'II', 'Cell', 'Phospholipid', 'Secretion', 'Anti-idiotype', 'MAbs', 'A2C', 'and', 'A2R', 'bind', 'a', '~32-kDa', 'type', 'II', 'cell', 'membrane', 'protein', 'and', 'inhibit', 'the', 'binding', 'of', 'SP-A', 'to', 'isolated', 'alveolar', 'type', 'II', 'cells.', 'The', 'function', 'of', 'this', 'SP-A', 'binding', 'protein', 'remained', 'to', 'be', 'determined.', 'Thus,', 'we', 'tested', 'whether', 'this', '~32-kDa', 'protein', 'also', 'performed', 'the', 'recognized', 'SP-A', 'receptor', 'function', 'for', 'type', 'Il', 'cells:', 'regulation', 'of', 'surfactant', 'secretion.', 'When', 'isolated', 'alveolar', 'type', 'II', 'cells', 'are', 'incubated', 'with', 'SP-A,', 'they', 'do', 'not', 'secrete', 'as', 'much', 'phospholipid', 'in', 'response', 'to', 'various', 'secretagogues-(e.g.,', 'ATP)', 'as', 'do', 'cells', 'incubated', 'without', 'SP-A', '[8].', 'To', 'determine', 'whether', 'the', 'w32-kDa', 'protein', 'bound', 'by', 'A2C', 'and', 'AQR', 'is', 'a', 'functional', 'receptor,', 'we', 'preincubated', 'alveolar', 'type', 'II', 'cells', 'with', '[methyl-', '*H]choline', 'to', 'label', 'cellular', 'lipids', 'and', 'then', 'treated', 'them', 'with', 'antibody', 'or', 'normal', 'IgG,', 'followed', 'by', 'SP-A', '(100', 'ng/ml)', 'and', 'ATP', '(1', 'mM).', 'This', 'dose', 'of', 'SP-A', 'blocked', 'type', 'II', 'cell', 'phospholipid', 'secretion.', 'Antibodies', 'A2C', '(Fig.', '4)', 'and', 'A2R', '(not', 'shown)', 'reversed', 'this', 'inhibition', 'in', 'a', 'dose-', 'dependent', 'fashion', '(P', '<', '1074', 'by', 'x’?', 'analysis).', 'Maximal', 'reversal', 'of', 'inhibition', 'was', 'observed', 'at', 'A2C', 'concentra-', 'tions', '>', '50', 'pg/ml,', 'but', 'Statistically', 'highly', 'significant', 'increases', 'in', 'secretion', 'occurred', 'at', 'A2C', 'concentrations', '=', '1', 'pg/ml.', 'Normal', 'rat', 'IgG', 'had', 'no', 'effect', 'on', 'SP-A', 'inhibi-', 'tion', 'of', 'phospholipid', 'secretion.', 'These', 'results', 'are', 'consis-', 'tent', 'with', 'the', 'conclusion', 'that', 'A2C', '(and', 'A2R)', 'binds', 'to', 'an', 'SP-A', 'receptor', 'and', 'blocks', 'its', 'inhibitory', 'function.', 'The', 'dose-response', 'curves', 'shown', 'in', 'Fig.', '4', 'were', 'pro-', 'duced', 'using', 'isolated', 'alveolar', 'type', 'II', 'cells', 'treated', 'with', 'ATP.', 'A', 'number', 'of', 'compounds', 'are', 'known', 'to', 'stimulate', 'surfactant', 'secretion', '[2].', 'SP-A', 'inhibits', 'the', 'action', 'of', 'these', 'secretagogues', '[8].', 'However,', 'these', 'secretagogues', 'act', 'through', 'different', 'mechanisms.', 'Thus,', 'it', 'is', 'im-', 'portant', 'to', 'determine', 'whether', 'A2C', 'and', 'A2R', 'also', 're-', 'verse', 'the', 'SP-A', 'induced', 'inhibition', 'of', 'surfactant', 'secre-', 'tion', 'elicited', 'by', 'other', 'secretagogues.', 'The', 'secretagogues', 'tested', '(ATP,', 'dibutyryl', 'cAMP,', 'terbutaline,', 'and', 'iono-', 'mycin)', 'were', 'selected', 'to', 'represent', 'the', 'variety', 'of', 'modu-', 'lators', 'known', 'to', 'stimulate', 'surfactant', 'secretion.', 'Regard-', 'less', 'of', 'the', 'secretagogue', 'used,', 'alveolar', 'type', 'II', 'cells', 'incu-', 'bated', 'with', '100', 'ng', 'exogenous', 'SP-A', 'secreted', 'less', 'phospholipid', 'than', 'did', 'cells', 'incubated', 'without', 'SP-A', '(Fig.', '5).', 'A2C', 'reversed', 'the', 'inhibition', 'of', 'secretion', 'by', 'SP-A', 'regardless', 'of', 'the', 'secretagogue,', 'although', 'in', 'some', 'cases', 'A2C', 'did', 'not', 'restore', 'surfactant', 'secretion', 'com-', 'pletely', '(Fig.', '5).', 'DISCUSSION', 'Surfactant', 'secretion', 'by', 'alveolar', 'type', 'II', 'cells', 'is', 'regu-', 'lated', 'by', 'complex', 'mechanisms', 'that', 'respord', 'to', 'a', 'wide', 'variety', 'of', 'stimuli.', 'Both.', 'physical', '(e.g.,', 'deep', 'inflation)', 'and', 'chemical', '(e', 'g.,', 'purines,', 'adrenergic', 'agonists,', 'and', 'calcium', 'ionophores)', 'stimuli', 'reportedly', 'affect', 'surfac-', 'tant', 'secretion', '(reviewed,', 'ref.', '2).', 'The', 'means', 'by', 'which', 'physical', 'stimuli', 'increase', 'surfactant', 'secretion', 'are', 'un-', 'known.', 'The', 'cytokines', 'and', 'biologically', 'active', 'chemicals', 'that', 'are', 'surfactant', 'secretagogues', 'may', 'act', 'through', 'at', 'least', 'three', 'different', 'intracellular', 'signaling', 'systems', '(e.g.,', 'increasing', 'Ca?*', 'and', 'cAMP', 'and', 'activating', 'PKC).', 'The', 'mechanisms', 'by', 'which', 'these', 'various', 'secretagogues', 'modulate', 'surfactant', 'secretion', 'are', 'being', 'elucidated', 'and', 'are', 'still', 'unclear.', 'However,', 'very', 'little', 'is', 'known', 'about', 'the', 'regulation', 'of', 'surfactant', 'secretion', 'by', 'SP-A.', 'Surfac-', 'tant', 'secretion', 'is', 'regulated', 'by', 'a', 'negative', 'feedback', 'loop', 'in', 'which', 'SP-A,', 'a', 'protein', 'produced', 'by', 'alveolar', 'type', 'II', 'cells,', 'binds', 'to', 'a', 'specific', 'receptor', 'on', 'type', 'II', 'cell', 'mem-', ' ', 'FIG.', '1.', 'A2C', 'and', 'A2R', 'antibodies', 'recognize', 'a', 'rat', 'tyy', '°', 'Ul', 'cell', 'membrane', 'protein.', 'Type', 'II', 'alveolar', 'pneumocytes', 'were', 'isolated', 'according', 'to', '[14]', 'and', 'allowed', 'to', 'adhere', 'as', 'usual.', 'The', 'cultures', 'were', 'fixed', 'with', 'acetone,', 'then', 'treated', 'with', 'affinity-purified', 'rat', 'monoclonal', 'anti-idiotype', 'antibody', 'A2R', '(a,', 'x1100),', 'A2C', '(b,', '1100),', 'or', 'normal', 'rat', 'IgG', '(c,', 'x600)', '(original', 'magnifications).', 'ABC', 'technique', '(see', 'Materials', 'and', 'Methods).', 'Slides', 'were', 'counterstained', 'with', 'hematoxylin.', 'The', 'aiMAb', 'bound', 'at', 'the', 'plasma', 'membrane', 'of', 'isolated', 'rat', 'type', 'II', 'cells.', 'PUBLICATIONS', ' ', 'Q054775', ' ']