['OUTSIDE', 'REVIEWER:', 'SUSAN', 'BRYANT', '(CC:', 'DRS.', 'FELDMAN,', 'PIERCE,', 'MCALLISTER,', 'CIR', 'Su.', ' ', 'Title:', 'Digit', 'Regeneration', 'in', 'fetal', 'mice', 'PI:', 'Ken', 'Muneoka', 'Institution:', 'Tulane', 'University', 'This', 'is', 'a', 'proposal', 'to', 'study', 'molecular', 'aspects', 'of', 'digit', 'regeneration', 'in', 'pre-', 'term', 'mouse', 'embryos.', 'The', 'field', 'of', 'limb', 'development', 'is', 'currently', 'very', 'active,', 'with', 'rapid', 'progress', 'being', 'made', 'in', 'the', 'identification', 'of', 'key', 'molecules.', 'A', 'similar', 'level', 'of', 'activity', 'and', 'interest', 'has', 'yet', 'to', 'spill', 'over', 'into', 'the', 'related', 'field', 'of', 'limb', 'regeneration,', 'despite', 'its', 'obvious', 'relevance', 'for', 'human', 'health', 'and', 'welfare.', 'This', 'proposal', 'is', 'a', 'logical', 'and', 'well', 'thought', 'out', 'attempt', 'to', 'remedy', 'this', 'deficiency', 'by', 'using', 'the', 'regenerative', 'ability', 'of', 'fetal', 'mouse', 'digits', 'as', 'a', 'way', 'to', 'explore', 'the', 'molecules', 'and', 'events', 'that', 'are', 'essential', 'for', 'successful', 'regeneration.', 'Dr.', 'Muneoka', 'is', 'uniquely', 'qualified', 'to', 'carry', 'out', 'the', 'proposed', 'studies,', 'since', 'he', 'is', 'the', 'person', 'who', 'developed', 'the', 'demanding', 'exo', 'utero', 'techniques', 'for', 'surgery', 'on', 'post', 'implantation', 'mouse', 'embryos.', 'In', 'addition,', 'he', 'has', 'experience', 'in', 'all', 'the', 'other', 'necessary', 'techniques,', 'including', 'in', 'vitro', 'cell', 'culture,', 'molecular', 'biology', 'and', 'retroviral', 'transfection.', 'The', 'proposal', 'addresses', 'four', 'related', 'questions', 'concerning', 'regeneration', 'in', 'mice.', 'In', 'the', 'first', 'question,', 'the', 'expression', 'patterns', 'of', 'genes', 'involved', 'known', 'to', 'be', 'involved', 'in', 'pattern', 'formation', 'during', 'limb', 'outgrowth', 'will', 'be', 'examined', 'in', 'digits', 'that', 'are', 'either', 'regenerating', 'or', 'in', 'regenerative', 'decline,', 'to', 'determine', 'their', 'relationship', 'to', 'regeneration.', 'The', 'genes', 'chosen', 'for', 'analysis', 'are', 'logical.', 'The', 'expression', 'patterns', 'of', 'Msx-1', '&', '2,', 'possibly', 'the', 'critical', 'genes', 'for', 'outgrowth,', 'have', 'already', 'been', 'examined.', 'Members', 'of', 'the', 'HoxA', 'and', 'D', 'complexes', 'have', 'been', 'implicated', 'in', 'patterning', 'of', 'the', 'proximal-distal', 'and', 'anterior-posterior', 'limb', 'axes', 'respectively;', 'the', 'FGF', 'signaling', 'system', 'has', 'been', 'shown', 'to', 'be', 'able', 'to', 'substitute', 'for', 'the', 'permissive', 'AER', 'during', 'limb', 'outgrowth', 'in', 'chicks.', 'This', 'section', 'of', 'the', 'proposal', 'will', 'provide', 'important', 'background', 'information', 'for', 'subsequent', 'studies.', 'The', 'second', 'question', 'addressed', 'by', 'the', 'proposal', 'is', 'whether', 'FGF', 'can', 'induce', 'digit', 'regeneration', 'in', 'stages', 'that', 'are', 'normally', 'unable', 'to', 'regenerate.', 'This', 'is', 'likely', 'to', 'be', 'successful', 'because', 'Muneoka', 'and', 'colleagues', 'have', 'already', 'shown', 'that', 'FGF', 'can', 'support', 'regeneration', 'in', 'chick', 'embryos.', 'Nevertheless,', 'the', 'experiment', 'is', 'important,', 'and', 'it', 'is', 'always', 'a', 'possibility', 'that', 'there', 'will', 'be', 'more', 'than', 'one', 'barrier', 'to', 'regeneration', 'in', 'proximal', 'digits.', 'If', 'induction', 'occurs,', 'the', 'FGF-induced', 'regenerates', 'will', 'be', 'examined', 'for', 'changes', 'in', 'the', 'expression', 'of', 'genes', 'likely', 'to', 'be', 'necessary', 'for', 'regeneration', '(Msx-1', '&-2;', 'FGFR-', '7).', 'This', 'experiment', 'is', 'important', 'because', 'it', 'may', 'show', 'that', 'for', 'non-', 'regenerating', 'digits,', 'FGF', 'treatment', 'is', 'sufficient', 'to', 'induce', 'regeneration,', 'and', 'it', 'will', 'indicate', 'which', 'genes', 'are', 'correlated', 'with', 'regeneration.', 'The', 'third', 'question', 'uses', 'both', 'in', 'vitro', 'and', 'in', 'vivo', 'approaches', 'to', 'ask', 'whether', 'Msx-]', 'expression', 'in', 'digit', 'cells', 'is', 'inducible', 'by', 'a', 'wound', 'epithelium.', 'In', 'vitro,', 'regeneration', 'competent', 'and', 'incompetent', 'cells', 'will', 'be', 'cultured', ' ', 'CTR-CONFIDENTIAL', 'SUBJECT', 'TO', 'P.O.', 'INUS', 'V.', 'PM', 'ETAL.', '99CV2496', '(SCIENTIFIC', 'PEER-REVIEW', 'MATERIAL)', ' ']