['vascular', 'pathology', 'whereas', 'those', 'flanking', 'the', 'AS', 'domain', 'indicated', 'more', 'parenchymal', 'pathology', 'in', 'human', 'kindreds.', 'Collectively,', 'these', 'preliminary', 'findings', 'are', 'in', 'accord', 'with', 'the', 'proposai', 'that', 'CAA', 'represents', 'an', 'independent', 'process', 'from', 'that', 'of', 'parenchymal', 'amyloid', 'deposition.', 'EXPERIMENTAL', 'DESIGN', 'AND', 'METHODS:', 'Tissue:', 'Qualitative', 'or', 'quantitative', 'study', 'of', 'the', 'proteins', 'localized', 'to', 'blood', 'vessels', 'and', 'their', '-', 'processing', 'in', 'vivo', 'is', 'difficult,', 'especially', 'in', 'humans.', 'One', 'approach', 'that', 'we', 'have', 'used', 'successfully', 'in', 'our', 'laboratories', 'to', 'enhance', 'our', 'understanding', 'of', 'the', 'brain', 'microvasculature', 'and', 'BBB', 'functions,', 'is', 'the', 'study', 'of', 'the', 'basic', 'biochemical,', 'pharmacological', 'and', 'immunochemical', 'properties', 'of', 'brain', 'microvessels', 'in', 'vitro.', 'We', 'have', 'used', 'these', 'methods,', 'with', 'modifications,', 'to', 'obtain', 'preparations', 'highly', 'enriched', 'in', 'brain', 'microvessels', 'from', 'experimental', 'animals', 'as', 'well', 'as', 'from', 'human', 'brains', 'at', 'autopsy,', 'which', 'allowed', 'us', 'to', 'set', 'up', 'methods', 'to', 'study', 'enzymes,', 'transmitter', 'and', 'hormonal', 'receptors', 'and', 'transport', 'proteins.', 'In', 'addition', 'to', 'this', 'in', 'vitro', 'approach', 'on', 'isolated', 'vessels,', 'of', 'course,', 'endothelial', 'cells', 'and', 'smooth', 'muscle', 'cells', 'in', 'culture', 'are', 'widely', 'used', 'to', 'study', 'vascular', 'biology.', ' ', 'AB', 'protein', 'immunoassays,', 'radioiodination', '(aim', 'la', 'and', '2).', 'To', 'obtain', 'relative', 'quantification', 'of', 'microvessel', 'AB', 'protein,', 'a', 'double-antibody', 'technique', 'will', 'be', 'used', 'essentially', 'as', 'described', 'recently', '(Seubert', 'et', 'al,', '1992).', 'Iodination', 'of.', 'AB', '(1-40)', 'peptide', '(Dr.', 'Glabe', 'or', 'BACHEM)', 'with', 'Na!{', '(New', 'England', 'Nuclear)', 'will', 'be', 'performed', 'using', 'the', 'iodobeads', '(PIERCE)', 'and', 'then', '.', 'separated', 'from', 'free', 'iodide', 'by', 'gel', 'filtration', 'on', 'Sephadex', 'G25.', '(PD10', 'column;', 'Pharmacia', 'Inc.).', 'Prior', 'to', 'assay,', 'the', 'immunoreactivity', 'of', 'iodinated', 'AB', 'peptide', 'will', 'be', 'tested', 'using', 'an', 'antiserum', 'to', 'A®', 'protein.', 'AB', 'binding', 'experiments', '(aim', '1a).', 'To', 'characterize', 'the', 'interaction', 'of', 'amyloid', 'to', 'the', 'BM,', 'the', 'binding', 'of', 'iodinated', 'A8', 'protein', 'to', 'microvessel', 'fractions', 'from', 'AD', 'and', 'control', 'subjects', 'will', 'be', 'tested', 'under', 'various', 'conditions.', 'The', 'interaction', 'between', 'AB', 'protein', 'and', 'the', 'Biv', 'will', 'be', 'studied', 'by', 'immobilizing', 'A8&', 'protein', 'on', 'affinity', 'gel', 'columns.', 'General', 'Methods', 'and', 'Materials', 'Protein', 'methods', '(ELISA)', 'and', 'Molecular', 'analyses', '(all', 'aims):', 'A', 'number', 'of', 'the', 'techniques', 'to', 'be', 'used', 'are', 'ongoing', 'in', 'our', 'laboratory', 'and', 'details', 'of', 'some', 'of', 'the', 'common', 'methods', 'such', 'SDS-', 'PAGE,', 'and', 'Western', 'or', 'immunoblotting,', 'semi-quantitative', 'immunocytochemistry', 'and', 'in', 'situ', 'hybridization', 'methods', '(PAP', 'and', 'ABC', 'techniques).', 'will', 'not', 'be', 'described', '(see', 'Sambrook', 'J,', 'Fritsch', 'EF.', 'Maniatis', 'T,', 'Molecular', 'Cloning:', 'A', 'Laboratory', 'Manual,', 'Cold', 'Spring', 'Harbor,', 'NY,', '1989).', 'The', 'ELISA', 'for', 'endoperoxides', 'will', 'be', 'carried', 'out', 'using', 'rabbit', 'antisera', 'raised', 'to', 'covalent', 'adducts', 'of', 'the', 'endoperoxide', 'levuglandin', 'E2', '(Murthi', 'et', 'al,', '1993).', ' ', '0c0', 'TOGSTSIz0z']