['be', 'boa', 'tM', ' ', 'oe', '|', 'a}', '39°', '33°', 'Replicating', 'Plasmid', 'j', ':', 'SMOAL4', 'SITES', ' ', 'pve', 'iis', '‘onz', 'Py', '5262', 'asso', 'Activators', 'GALA', 'GAL4', '(4-903)', 'GALS', '(4-147)', 'Ona', '(1-247),', 'Fig.', '1', 'Keclibation', "areove.of'w", 'plasuiil', 'commining', 'a', 'polvomavirus', 'origin', 'core', 'and', 'a', 'venst', 'anid', 'upstream', 'sequence', 'element-', 'activation', 'of', 'the', 'origin', 'by', 'the', 'gal4', 'transactivator', 'protein.', 'Three', 'plasmids', 'were', 'used', 'for', 'these', 'assays', 'and', 'were', 'designated', 'No.', '101,', 'gal4', 'and', 'gal4', '(1-', '147).', 'Schematic', 'drawings', 'of', 'relevant', 'features', 'of', 'their', 'maps', 'are', 'shown', 'at', 'the', 'bottom', 'of', 'the', 'plate.', 'In', 'the', 'plasmid', 'No.', '101,', 'the', 'Py', 'enhancer', 'has', 'been', 'replaced', 'by', '5', 'repeats', 'of', 'a', '17-mer', 'including', 'the', 'yeast', 'gal4', 'upstream', 'sequence', 'element.', 'The', 'other', 'two', 'plasmids', 'were', 'obtained', 'from', 'M.', 'Ptashne,', 'J.', 'Lillie', 'and', 'M.', 'Green', '(see', 'ref,', '31,33).', 'These', 'plasmids', 'include', 'the', 'genes', 'encoding', 'the', 'gal4', 'proteins', 'shown', 'at', 'the', 'bottom', 'of', 'the', 'plate;', 'transcription', 'of', 'these', 'genes', 'is', 'under', 'the', 'control', 'of', 'the', 'Adenovirus', 'major', 'late', 'promotor.', 'One,', 'two,', 'or', 'all', 'three', 'plasmids', 'were', 'transfected', '(or', 'cotransfected)', 'into', 'mouse', 'cells', 'which', 'synthesize', 'a', 'temperature', 'sensitive', 'Py', 'large', 'T', 'antigen', '(obtained', 'from', 'C.', 'Basilico;', 'see', 'ref.', '27).', 'The', 'cells', 'were', 'grown', 'in', '60', 'mm', 'plates.', 'The', 'amounts', 'of', 'plasmid', 'No.', '101,', 'gal', '4', 'and', 'gal', '4', '(1-147)', 'used', 'for', 'transfection', 'were', '1.0', 'pg,', '2.0', 'pg', 'and', '2.0', 'ng,', 'respectively,', 'per', 'plate.', 'In', 'each', 'of', 'the', 'assays,', 'plasmid', 'pUC119', 'DNA', 'was', 'added,', 'such', 'that', 'the', 'total', 'amount', 'of', 'plasmid', 'DNA', 'used', 'for', 'transfection', 'was', '10', 'pg/plate.', 'The', 'modified', 'Ca-phosphate', 'technique', 'described', 'by', 'Chen', 'and', 'Okayama', '(29)', 'was', 'use', 'Ear', 'transfecti,', 'se”.', 'At', 'the', 'end', 'of', 'the', 'transfection,', 'the', 'cells', 'were', 'incubated', '48', 'hrs', 'either', 'at', '33°%,', 'or', 'at', '39°,', 'as', 'specified.', 'Small', 'molecular', 'weight', 'DNA', 'was', 'selectively', 'extracted', 'from', 'these', 'celis', 'by', 'the', 'method', 'of', 'Hirt', '(36).', 'The', 'DNA', 'was', 'cut', 'with', 'the', 'enzymes', 'BamHI', '(that', 'cleaves', 'the', 'plasmid', 'No.', '101', 'once)', 'and', 'Dpnl.', 'The', 'digests', 'were', 'analysed', 'by', 'electrophoresis', 'in', '1%', 'agarose', 'gels,', 'followed', 'by', 'Southern', 'blotting,', 'hybridization', 'with', 'a', 'pBR322', 'probe', 'and', 'autoradiography,', 'as', 'described', '(3).', 'The', 'arrow', 'shows', 'the', 'position', 'of', 'a', 'linear', 'form', 'of', 'the', 'plasmid', 'No.', '101.', ' ', ' ']