[' ', ' ', 'with', 'normal', 'horse', 'serum', '(Vector', 'Laboratories,', 'Burlingame,', 'CA)', 'for', '20', 'minutes', 'at', 'room', 'temperature.', 'The', 'horse', 'serum', 'was', 'not', 'rinsed', 'from', 'the', 'slide', 'before', 'application', 'of', 'the', 'BrdU', 'antibody.', 'Immunostaining', 'for', 'the', 'presence', 'of', 'BrdU', 'incorporated', 'into', 'DNA', 'used', 'Alkaline', 'Phosphatase', 'Supersensitive®', 'reagents', '(Biogenics,', 'San', 'Ramon,', 'CA).', 'The', 'BrdU', 'primary', 'antibody', 'was', 'applied', 'at', 'a', 'dilution', 'of', '1:100', 'for', 'the', 'nasal', 'sections.', 'All', 'other', 'sections', 'used', 'a', '1:200', 'dilution.', 'The', 'primary', 'antibody', 'was', 'allowed', 'to', 'react', 'overnight', 'at', '4°C.', 'The', 'antibody', 'was', 'removed', 'with', 'two', '5', 'minute', 'rinses', 'in', 'PBS.', 'A', '1:10', 'dilution', 'of', 'Supersensitive', 'LINK®', '(Biogenics,', 'San', 'Ramon,', 'CA)', 'was', 'then', 'applied', 'to', 'the', 'sections', 'for', '30', 'minutes', 'at', 'room', 'temperature.', 'Slides', 'were', 'then', 'rinsed', 'twice', 'for', '5', 'minutes', 'in', 'PBS.', 'A', '1:10', 'dilution', 'of', 'Supersensitive', 'LABEL®', '(Biogenics,', 'San', 'Ramon,', 'CA)', 'was', 'then', 'applied', 'to', 'the', 'sections', 'for', '20', 'minutes', 'followed', 'by', 'two', '5', 'minute', 'rinses', 'in', 'PBS.', 'Supersensitive', 'CHROMOGEN®', '(Biogenics,', 'San', 'Ramon,', 'CA)', 'was', 'then', 'applied', 'to', 'the', 'sections', 'for', '10', 'minutes.', 'Sections', 'were', 'then', 'rinsed', 'in', 'distilled', 'water', 'and', 'allowed', 'to', 'dry.', 'Sections', 'were', 'counterstained', 'with', "Mayer's", 'hematoxylin', 'as', 'needed', 'to', 'visualize', 'the', 'non-', 'stained', 'tissues.', 'Sections', 'were', 'covered', 'with', 'Crystal', 'Mount®', '(', 'Biomeda', 'Corp.,', 'Foster', 'City,', 'CA)', 'prior', 'to', 'scoring', 'labeled', 'cells.', 'Scoring', 'of', 'BrdU', 'Labeled', 'Cells', 'Regions', 'of', 'interest,', 'as', 'defined', 'below,', 'were', 'initially', 'scored', 'with', 'knowledge', 'of', 'the', 'treatment', 'group.', 'Respiratory', 'tract', 'epithelia,', 'except', 'where', 'noted,', 'were', 'scored', 'on', 'a', 'unit', 'length', 'labeling', 'index', 'basis', '(', 'Monticello', 'et', 'al.,', '1989).', 'As', 'described', 'by', 'Monticello', 'et', 'al.,', '1989,', 'the', 'length', 'of', 'nasal', '“section', '1"', 'cuboidal', 'epithelium', 'of', 'the', 'dorsal', 'nasal', 'concha', 'encompasses', '4-7', 'mm.', 'In', 'this', 'study,', 'a', 'more', 'conservative', 'approach', 'was', 'used', 'whereby,', 'only', 'the', 'tip', 'of', 'the', 'dorsal', 'nasal', 'concha', 'was', 'evaluated', 'because', 'it', 'previously', 'had', 'been', 'identified', 'as', 'a', 'sensitive', 'site', '(Coggins', 'et', 'al.,', '1993).', 'Scoring', 'of', 'cells', 'only', 'at', 'the', 'tip', 'of', 'the', 'dorsal', 'nasal', 'concha', 'maximized', 'detection', 'of', 'effects', 'by', 'exclusion', 'of', 'cells', 'from', 'a', 'non-sensitive', 'region.', 'Right', 'ventricle', 'heart', 'epicardium', 'and', 'endocardium', 'were', 'also', ' ', 'LZL8', 'GBSTS']