['Dilution', 'of', 'MAB*', '   ', 'ZA', '24T', 'fi', 'i2a', ' ', '  ', ' ', 'i)', '20', '40', '60', '80', '100', 'H®-', 'DNA', 'Binding', '(percent)', 'Figure', '1.', 'Inhibition', 'of', 'DNA', 'binding', 'to', 'human', 'PBMC', 'by', 'mAb', '12A', 'and', '24T', 'at', 'different', 'dilutions.', 'mAb', 'were', 'incubated', 'with', '2', 'x', '10°', 'PBMC.', '4°C,', '30', 'min;', 'after', 'washing', 'three', 'times', 'with', 'HBSS', 'the', 'ability', 'to', 'bind', '[H]DNA', 'was', 'assessed.', 'Results', 'are', 'expressed', 'as', 'the', 'mean', 'binding', 'of', 'three', 'repli-', 'cate', 'wells,', 'Maximal', 'binding', 'of', '(HJDNA', 'was', 'assessed', 'without', 'the', 'addition', 'of', 'mAb', 'and', 'with', 'the', 'addition', 'of', 'an', 'irrelevant', 'mAb.', 'giving', 'counts', 'of', '22,705', '+', '1033', 'and', '20,614', '+', '983/min.,', 'respectively.', 'The', 'original', 'concen-', 'trations', 'of', 'the', 'mAb', 'were', '3', 'mg/m].', 'This', 'experiment', 'is', 'representative', 'of', 'six', 'similar', 'experiments', 'done', 'over', 'a', '2-mo', 'period.', ' ', ' ', 'y', '100¢e', '=', 'Fy', '°', 'aor', 'iS', 'is', '22', 'cot', 'a6', 'ra', 'z@', 'b', '=@', '40', 'fe]', '@.', '2', 'cok', 'i', '2g', '—', 'e', 'Cy', '0)', ',', '10', '10°', '10°10', 'Seconds', 'Figure', '2,', 'Kinetics', 'of', 'loss', 'of', 'functional', 'receptor', 'from', 'the', 'surface', 'of', 'human', 'PBMC', 'exposed', 'to', 'mAb', '12A.', 'Cells', 'were', 'exposed', 'to', 'mAb', '1', '2A', '(conc.', '100', 'ng/ml)', 'for', 'various', 'times', 'periods.', 'before', 'assessing', 'binding', 'of', '[*H]', 'DNA.', 'Time', 'points', 'refer', 'to', 'timing', 'of', 'addition', 'of', '(°H|DNA', 'to', 'incubation', 'mixture.', 'Maximal', '[*H|DNA', 'binding', 'was', 'assessed', 'without', 'the', 'addition', 'of', 'mAb', '(24,231', '+', 'B61', 'cpm).', 'Results', 'are', 'expressed', 'as', 'the', 'percentage', 'of', 'maximal', 'binding', 'plotted', 'against', 'time.', 'Each', 'point', 'represents', 'the', 'mean', 'binding', 'in', 'three', 'replicate', 'wells.', 'Figure', '2', 'is', 'representative', 'of', 'two', 'identical', 'experiments.', 'saturable,', 'and', 'the', 'regression', 'line,', 'obtained', 'by', 'Scatchard', 'analysis,', 'is', 'linear,', 'indicating', 'a', 'single', 'population', 'of', 'bind-', 'ing', 'sites', '(Fig.', '3}.', 'The', 'Ka', 'and', 'maximal', 'number', 'of', 'mole-', 'cules', 'bound', 'were', 'similar', 'for', 'both', 'mAb', '(Table', 'I).', 'Three', 'identical', 'experiments', 'gave', 'similar', 'results', 'with', '<12%', 'variation.', 'Flow', 'cytometry.', 'Using', 'ascites-derived', '24T', 'and', 'elec-', 'tronically', '“gating”', 'on', 'either', 'lymphocytes', 'or', 'monocytes', 'based', 'on', 'forward', 'and', '90°', 'light', 'scatter,', '67%', 'of', 'lympho-', 'cytes', 'and', '95%', 'of', 'monocytes', 'were', 'found', 'to', 'bear', 'receptors', 'for', 'DNA', '(Fig.', '4).', 'Dual', 'labeling', 'studies', 'were', 'used', 'to', 'dissect', 'the', 'gated', 'lymphocyte', 'population;', 'they', 'showed', 'that', '90%', 'of', 'B', 'cells', '(CD19', 'positive),', 'and', '50%', 'of', 'T', 'cells', '(CD', '2', 'positive)', 'express', 'DNA', 'receptors', '(Fig.', '5).', 'Within', 'T', 'lym-', 'phocyte', 'subsets,', '50%', 'of', 'CD4*', 'and', 'CD8”', 'cells', 'bear', 'recep-', 'mAb', 'DNA', 'RECEPTOR', '2939', ' ', '   ', '  ', ' ', 'Bound', 'MAB', '12A', '(nM)', 'dound/Free', '3', '6', 'Molecutes', 'x', '10*', 'cell', 'th', '0', 'r', 'l', 'l', ')', '0.3', '0.6', '0.9', '1.2', 'MAB', '12A', '(uM)', 'Figure', '3.', 'Stoichiometric', 'anatysis', 'of', 'interaction', 'of', "'**I-labeled", 'mAb', '12A', 'with', 'human', 'monocytes,', 'Non-specific', 'binding', 'was', 'assessed', 'by', 'using', 'a', '10-fold', 'excess', 'of', 'unlabeled', 'mAb', 'for', 'each', 'concentration', 'of', 'labeled', 'mAb.', 'Saturable', 'binding', 'is', 'demonstrated,', 'Scatchard', 'transformation', 'of', 'the', 'data', 'results', 'In', 'a', 'linear', 'relationship', '{see', 'inset);', 'the', 'derived', 'Ka', 'for', 'monocytes', 'is', '}', 'x', '1077,', 'and', 'the', 'maxima!', 'number', 'of', 'bound', 'molecules', 'is', '0.5', 'x', '10%', 'cell,', ' ', ' ', ' ', ' ', ' ', 'TABLE', '|', 'Stoichiometry', '9)', 'mAb', 'I2A', 'and', '24T', 'binding', 'te', 'monocytes', 'and', 'T', 'cells', 'Monoeytes', 'T', 'Cells', 'mate', 'Bmax', '=', 'Bmax', 'ue', '116°', '/cell)', 'Halo', '“M)', '1208', '/cell)', 'mAb', '12A', '1.01', '§.12', '1.51', '5.95,', 'mAb', '247', '1.69', '5.32', '1.52', '5.96', '*125LLabeled', 'mAb', '12A', 'and', '24T', 'were', 'incubated', 'with', 'monocytes', 'and', 'T', 'cells', 'at', 'different', 'concentrations', '(10', 'min.', '4°C}.', 'After', 'washing', 'three', 'times,', 'the', 'cell', 'pellet', 'was', 'transferred', 'to', 'a', 'fresh', 'tube', 'for', 'counting.', 'For', 'each', 'concentrati2:', 'of', 'labeled', 'mAb', 'a', '10-fold', 'excess', 'of', 'unlabeled', 'mAb', 'was', 'used', 'in', 'a', 'pa', '.iliel', 'experiment', 'to', 'assess', 'non-specific', 'binding.', 'The', 'binding', 'results', '«', 'analyzed', 'using', 'a', 'derivative', 'of', 'Scatchard’s', 'linear', 'transformation:', '!-*¢', 'Ay', 'and', 'the', 'maximum', 'number', 'of', 'molecules', 'bound', 'per', 'cell', '(Bmax)', 'at’', 'shown', 'for', 'each', 'ceil.', '  ', ' ', 'CELL', 'MUMBER', 'x', '10!', '  ', '3', '1s', '25', 'LOG', 'INTERSITY', 'OF', 'GREEN', 'FLUORESCEMCE', 'Figure', '4.', 'Flow', 'cytometry', 'of', 'PBMC-bearing', 'DNA', 'receptors', 'as', 'assessed', 'by', 'FITC', 'conjugated', 'inAb', '24T.', 'Forward', 'and', '90°', 'light', 'scatter', 'parameters', 'were', 'used', 'to', 'Separate', 'lymphocytes', '(L)', 'and', 'monocytes', '(M).', 'A', 'control', 'used', 'a', 'non-specifie', 'mAb', 'conjugated', 'with', 'FITC.', 'A', 'total', 'of', '67%', 'of', 'lymphocytes', 'and', '95%', 'of', 'monocytes', 'displayed', 'a', 'fluorescence', 'intensity', '99%', 'greater', 'than', 'the', 'background', 'contral.', 'The', 'arrow', 'delineates', 'the', 'boundary', 'of', 'non-', 'specific', 'fluorescence.', 'tors.', 'Finally,', '98%', 'of', '“gated.”', 'My', '4-positive', 'monocytes', 'are', '24T', 'positive.', 'These', 'flow', 'cytometry', 'results', 'are', 'represent-', 'ative', 'of', 'six', 'separate', 'studies', 'done', 'over', 'a', 'period', 'of', '4', 'months,', 'Interestingly,', 'a', 'relatively', 'high', 'concentration', 'of', ' ']