5. Appareillage.
Matériel courant de laboratoire et notamment :
5.1. Balance analytique.
5.2. Bécher d'une capacité de 50 ml.
5.3. Fiole jaugée d'une capacité de 100 ml, classe B.
5.4. Pipettes de précision permettant de délivrer 2 - 1 - 0,2 - 0,05 et 0,02 ml.
5.5. Pipettes de 5 ml graduées au 1/10.
5.6. Entonnoir, diamètre 7 cm.
5.7. Papier filtre, diamètre 15 cm, Whatman n° 40 ou équivalent.
5.8. Film plastique étirable (type parafilm) pour obturation des cuves.
5.9. Spectrophotomètre réglé à 340 nm et équipé de cuves de 10 mm de parcours optique.
6. Mode opératoire.
6.1. Essai de contrôle.
Si un nouveau lot de réactifs (4.4 à 4.9 inclus) est utilisé, si les réactifs ont été conservés au réfrigérateur sans avoir été utilisés pendant plus de deux semaines, si le travail analytique recommence après une période d'inactivité ou si d'autres conditions peuvent le justifier, l'essai de contrôle suivant doit être effectué.
6.1.1. Introduire, à la pipette, 1 ml de la solution de lactose (4.9) dans deux fioles jaugées de 100 ml (5.3) et déterminer la teneur en lactose dans les deux fioles jaugées en appliquant le mode opératoire décrit en 6.3.2, 6.3.3, 6.4 et 6.6.
6.1.2. Calculer la teneur en lactose exprimée en gramme pour 100 ml selon la formule suivante :
18,873 . delta A
delta A est la différence d'absorbance à 340 nm calculée comme indiqué au point 6.6.
6.1.3. Compte tenu de la pureté du lactose, la valeur retrouvée dans chacune des fioles doit être de 100 7 2 %.
Dans le cas contraire, les réactifs, le mode opératoire, la précision des pipettes, les conditions d'utilisation du spectrophotomètre doivent être vérifiés et les corrections adéquates effectuées. L'essai de contrôle doit être répété jusqu'à obtention de résultats satisfaisants.
6.2. Prise d'essai.
Peser, 1 mg près dans le bécher (5.2), 0,7 à 0,8 g de l'échantillon pour essai.
6.3. Préparation de la solution à doser.
6.3.1. Diluer la prise d'essai dans environ 20 ml d'eau chaude (40 à 50 °C) tout en remuant avec une baguette en verre.
Verser quantitativement le contenu du bécher dans une fiole jaugée (5.3).
6.3.2. Ajouter à la solution (6.3.1) dans l'ordre suivant : 1,0 ml de la solution d'hexacyanoferrate (II) de potassium (4.1), 1,0 ml de la solution de sulfate de zinc (4.2) et 5,0 ml de la solution d'hydroxyde de sodium (4.3), en mélangeant soigneusement après chaque addition. Refroidir le contenu de la fiole à environ 20 °C. Compléter à 100 ml avec de l'eau, mélanger.
6.3.3. Après trente minutes environ, filtrer sur papier filtre (5.7).
Rejeter les premiers millilitres de filtrat.
6.4. Essai à blanc.
Effectuer un essai à blanc en appliquant le mode opératoire décrit à partir de 6.3 en utilisant tous les réactifs mais en remplaçant la prise d'essai par de l'eau.
6.5. Solution étalon de lactose.
Effectuer un essai avec 1 ml de solution standard (4.9) en appliquant le mode opératoire décrit à partir de 6.3.
6.6. Détermination.
Introduire à la pipette dans trois cuves de mesure (5.9) les filtrats ou les réactifs selon les indications portées dans le tableau ci-après, toutes les mesures étant effectuées contre l'air.
La quantité de lactose dans la cuve du spectrophotomètre doit être comprise entre 5 et 50 mg.
(tableau non reproduit, voir au Journal officiel).