1. Objet et domaine d'application.
   Cette méthode a pour objet de décrire une technique permettant de déterminer la teneur en acide sorbique des laits fermentés et des yaourts aux fruits.
   2. Définition.
   La teneur en acide sorbique est le résultat obtenu par l'application de la méthode décrite ci-après. Elle est exprimée en milligramme par kilogramme.
   3. Principe.
   Extraction de l'acide sorbique en milieu acide par entraînement à la vapeur. Séparation et dosage par chromatographie liquide haute performance en phase inversée.
   4. Réactifs.
   Les réactifs utilisés doivent être de pureté analytique. L'eau doit être de l'eau distillée ou de l'eau de pureté au moins équivalente.
   4.1. Acide orthophosphorique à 85 p. 100 m/m.
   4.2. Méthanol pour chromatographie liquide haute performance.
   4.3. Solution tampon acétate d'ammonium 0,005 M à pH 4,4 :
   Dissoudre 0,385 g d'acétate d'ammonium dans un litre d'eau.
   Ajuster à pH 4,4 à l'aide d'acide acétique.
   4.4. Solution de sorbate de potassium à 133,9 mg/l (soit 100 mg d'acide sorbique par litre).
   5. Appareillage.
   Matériel courant de laboratoire, et notamment :
   5.1. Appareil de chromatographie liquide haute performance équipé :
   - d'une colonne en acier inox de 4 mm de diamètre intérieur et de 15 à 25 cm de longueur, garnie de silice greffée C8 ou C18 ;
   - d'un détecteur spectrophotomètre réglé à 254 nm.
   5.2. Appareil pour entraînement à la vapeur d'eau.
   5.3. Dispositif de filtration muni d'une membrane filtrante de 0,45 mm de diamètre de pore.
   6. Mode opératoire.
   6.1. Extraction.
   Peser à 0,1 g près, dans un récipient pouvant s'adapter à l'appareil (4.2), 20 g environ de l'échantillon pour essai.
   Ajouter 30 ml d'eau et 5 ml d'acide orthophosphorique (4.1).
   Adapter à l'appareil (5.2), entraîner à la vapeur et recueillir 500 ml de distillat dans une fiole jaugée.
   6.2. Courbe d'étalonnage.
   Entraîner à la vapeur selon 6.1, 10, 20 et 30 ml de la solution (4.4). Les distillats obtenus, contenant respectivement 2, 4 et 6 mg/l d'acide sorbique, sont injectés dans l'appareil (5.1).
   Les conditions opératoires sont, à titre indicatif :
   - colonne de 15 cm garnie de silice greffée C8 (dp = 7mm) ;
   - phase mobile : 50 volumes de méthanol (4.2), 50 volumes de solution (4.3) ;
   - débit : 1,5 ml/minute ;
   - volume d'injection : 20 ml ;
   - détection à 254 nm ;
   - temps de rétention : 8 minutes environ.
   Mesurer l'aire ou la hauteur du pic et tracer la courbe en fonction des concentrations des solutions-étalons.
   6.3. Identification et dosage.
   Filter sur le dispositif (5.3) le distillat obtenu en 6.1.
   Injecter 20 ml de filtrat dans l'appareil (5.1).
   Mesurer l'aire ou la hauteur du pic de l'acide sorbique identifié par son temps de rétention.
   Déterminer sur la courbe obtenue en 6.2 la concentration du filtrat.
   7. Expression des résultats.
   7.1. Mode de calcul et formule.
   La teneur en acide sorbique est donnée par la relation suivante :
   Acide sorbique mg/kg = C.500 / m
   où
   C est la concentration, en milligramme, par litre déterminée en 6.3.,
   m est la masse, en gramme, de la prise d'essai (6.1).
   7.2. Répétabilité.
   La différence entre les résultats de deux déterminations effectuées simultanément ou rapidement l'une après l'autre par le même analyste ne doit pas excéder 3.
   Nota - On peut identifier et doser l'acide benzoïque dans les mêmes conditions opératoires en réglant le spectrophotomètre à 227 nm. Temps de rétention : six minutes environ.