1. Définition.
   La teneur en azote total est le résultat obtenu par l'application de la méthode décrite ci-après. Elle est exprimée en pourcentage en masse.
   2. Principe.
   Minéralisation selon la méthode de Kjeldahl, distillation après alcalinisation et titrimétrie de l'hydroxyde d'ammonium formé.
   3. Réactifs.
   Les réactifs doivent être de qualité analytique. L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou de l'eau de pureté au moins équivalente.
   3.1. Acide sulfurique solution titrée 0,05 M.
   3.2. Acide sulfurique concentré (r20 = 1,83).
   3.3. Hydroxyde de sodium, solution concentrée (r20 = 1,33).
   3.4. Solution d'acide borique et d'indicateur :
   Dissoudre 40 g d'acide borique dans un litre d'eau bouillante. Après refroidissement, ajouter 10 ml d'une solution d'indicateur approprié (par exemple, dissoudre, dans 100 ml d'éthanol à 70 p. 100 vol., 0,01 g de rouge de méthyle, 0,06 g de vert de bromocrésol et 0,02 g de bleu de bromothymol).
   3.5. Mélange catalyseur :
   Sulfate de cuivre cristallisé Cu SO4, 5 H2 O : 10 g ;
   Sulfate de potassium K2 SO4 : 100 g.
   4. Appareillage.
   Matériel courant de laboratoire, et notamment :
   4.1. Matras de Kjeldahl de 300 ml et boule pédiculée ou appareil muni d'un dispositif d'absorption de vapeur.
   4.2. Dispositif de chauffage permettant la minéralisation.
   4.3. Appareil pour distillation de l'ammoniac, de préférence par entraînement à la vapeur d'eau.
   4.4. pH mètre avec électrode spécifique.
   5. Mode opératoire.
   5.1. Prise d'essai :
   Peser rapidement, à 1 cg près, 2 à 3 g d'échantillon pour essai dans une nacelle appropriée.
   Introduire cette prise d'essai dans le dispositif de minéralisation (4.1).
   5.2. Minéralisation :
   Ajouter 5 à 6 g de catalyseur (3.5), 20 ml d'acide sulfurique concentré (3.2) et une bille de verre de 5 à 7 mm de diamètre. Agiter et placer ensuite le matras sur le dispositif de chauffage (4.2). Chauffer d'abord doucement en agitant de temps en temps. Lorsque l'eau s'est évaporée, augmenter le chauffage jusqu'à ébullition modérée du mélange acide et, lorsque des fumées blanches commencent à se produire, obturer le col du matras avec la boule pédiculée ou le raccorder à un dispositif d'absorption des vapeurs. Agiter de temps en temps de façon à ramener dans le fond du matras les parcelles de substances qui adhèrent aux parois.
   Lorsque le liquide est devenu limpide, régler le chauffage de manière à condenser les vapeurs d'acide vers le milieu du col du matras et poursuivre le chauffage pendant au moins quatre-vingt-dix minutes.
   Laisser refroidir le matras obturé pour éviter un contact éventuel avec les vapeurs ammoniacales présentes dans le laboratoire. Ainsi protégé, le matras peut être conservé quelque temps en attendant la distillation de l'ammoniac.
   5.3. Distillation et dosage de l'ammoniac :
   Il y a intérêt à conduire simultanément ces deux opérations pour apprécier avec netteté la fin de l'entraînement de l'ammoniac. Si on utilise l'entraînement par la vapeur d'eau, le matras de minéralisation pourra être adapté directement à l'appareil.
   Diluer le contenu du matras par addition de 30 à 50 ml d'eau qui servent en même temps à rincer les parois du col du matras et la boule pédiculée.
   Laisser refroidir.
   Placer un bécher de 400 ml dans lequel on aura introduit environ 40 ml de la solution d'acide borique et d'indicateur (3.4), sur un agitateur magnétique et de façon que l'extrémité de l'allonge du réfrigérant plonge dans la solution (3.4).
   Raccorder le matras de minéralisation à l'appareil à entraînement à la vapeur d'eau (4.3). Alcaliniser le contenu du matras en introduisant lentement, en agitant, 70 à 80 ml de la solution concentrée d'hydroxyde de sodium (3.3).
   Effectuer la distillation dans les conditions prévues pour l'appareil utilisé. L'entraînement de l'ammoniac commence presque aussitôt et se fait très rapidement, aussi l'indicateur contenu dans le becher vire à sa teinte alcaline (bleu-vert).
   Recueillir environ 200 ml de distillat, le becher contient alors un volume total voisin de 250 ml. Titrer par la solution (3.1) jusqu'à pH 4,7 7 0,1 ou jusqu'à l'apparition d'une teinte identique à celle d'un témoin obtenu dans les mêmes conditions.
   6. Expression des résultats.
   6.1. Mode de calcul et formule :
   La teneur en azote total est donnée par la relation suivante :
   Azote total en % m/n = V . 0,14m / m
   où
   V est le volume, en millilitre, de la solution d'acide sulfurique (3.1) utilisé en 5.3 ;
   m est la masse, en gramme, de la prise d'essai 5.1.
   6.2. Répétabilité.
   La différence entre les résultats de deux déterminations effectuées simultanément ou rapidement l'une après l'autre par le même analyste ne doit pas excéder 0,01.
   6.3. Remarque.
   Par convention, le résultat peut être exprimé en matières protéiques totales en multipliant le chiffre d'azote total par le coefficient 6,38.
   7. Essais.
   7.1. Essai à blanc.
   Cet essai doit être effectué pour chaque série d'analyses.
   L'essai à blanc comporte tous les temps du mode opératoire en remplaçant la prise d'essai par 0,1 g de saccharose en solution dans 5 ml d'eau distillée. Il doit nécessiter un très faible volume de solution (3.1) qui sera pris en compte pour corriger le volume V en 6.1.
   7.2. Essais témoins.
   7.2.1. Contrôle du rendement de distillation.
   Introduire dans le matras une quantité connue d'un sel d'ammonium de qualité analytique, par exemple 0,150 g de sulfate d'ammonium.
   Suivre le mode opératoire décrit à partir de 5.3 ; toutefois, l'alcalinisation doit être effectuée avec environ 20 ml d'hydroxyde de sodium (3.3). Le pourcentage d'azote trouvé par rapport à la valeur théorique doit être supérieur à 99 p. 100.
   7.2.2. Contrôle du rendement de minéralisation.
   Faire un essai en utilisant 0,200 g de tryptophane de qualité analytique et suivre le mode opératoire décrit à partir de 5.2. Le pourcentage d'azote trouvé par rapport à la valeur théorique doit être supérieur à 98 p. 100.