3. Préparation d'échantillons pour la coloration de Gram, le test d'immunofluorescence et le test sur aubergines.
   3.1. Homogénéiser les cônes provenant du talon dans un diluant connu pour ne pas être toxique pour le C. m. subsp. sepedonicus (par exemple : un tampon au phosphate 0,05 M <TP> de pH 7,0) à une température inférieure à 30 °C jusqu'au moment où l'homogénéisation complète vient tout juste d'être obtenue ; il est conseillé d'ajouter un agent dispersant non toxique et il peut être nécessaire d'ajouter un agent antimousse non toxique (appendices 1 et 2). Il y a lieu d'éviter tout broyage excessif.
   3.2. Extraire la bactérie du liquide homogénéisé par l'une des méthodes suivantes (1) :
   A. - a) Centrifuger à 180 g au maximum pendant 10 minutes ;
   b) Centrifuger le liquide surnageant à au moins 4 000 g pendant 10 minutes ; décanter, puis éliminer le liquide surnageant ;
   B. - a) Laisser reposer pendant trente minutes le broyat pour permettre aux débris tissulaires de se déposer ; décanter le liquide surnageant sans remuer le sédiment ;
   b) Filtrer le liquide surnageant au moyen d'un papier filtre (Whatman n° 1) placé dans un filtre en verre fritté (n° 2 = 40-100 micro m) en utilisant une trompe à eau ; recueillir le filtrat dans un tube à centrifuger ; laver le filtre avec du tampon au phosphate stérile jusqu'à obtention d'une quantité maximale de filtrat de 35 ml ;
   c) Centrifuger le filtrat à au moins 4 000 g pendant vingt minutes.
   3.3. Remettre le culot (extrait concentré) en suspension dans un tampon au phosphate 0,01 M stérile de pH 7,2 (appendice 2) jusqu'à obtention d'environ 1 ml d'extrait concentré. Le diviser en deux parties égales et en conserver une à titre de référence en la congelant à - 20 °C (2) ou en la lyophilisant. Diviser l'autre moitié en deux parties égales destinées, l'une, au test d'immunofluorescence et à la réaction de Gram, et l'autre au test sur aubergines.
   3.4. Afin d'éviter toutes contaminations, il est impératif de traiter séparément les échantillons et les témoins positifs de C. m. subsp. sepedonicus, aussi bien pour les tests d'immunofluorescence que pour les tests sur aubergines.