III - Détermination de la composition centésimale en acides gras.    Avant-propos.
   La présente méthode décrit une technique d'analyse de la matière grasse extraite au chapitre II. Elle consiste en une préparation d'esters méthyliques d'acides gras, suivie d'une chromatographie en phase gazeuse sur colonne remplie ou capillaire.
   A - Préparation des esters méthyliques d'acides gras.
   1. Principe.
   Méthanolyse des glycérides en milieu alcalin.
   2. Réactifs.
   Les réactifs doivent être de qualité analytique.
   2.1. Heptane ;
   2.2. Solution méthanolique d'hydroxyde de potassium environ 2 N :

 dissoudre 11,2 g d'hydroxyde de potassium dans 100 ml de méthanol ne contenant pas plus de 0,5 % d'eau.
   3. Appareillage.
   Matériel courant de laboratoire, et notamment :
   3.1. Tubes à essais de 5 ml à bouchons rodés.
   4. Mode opératoire.
   Dans le tube (3.1) peser environ 0,2 g de matière grasse préalablement fondue, ajouter 4 ml d'heptane (2.1) puis 0,1 ml de solution (2.2). Boucher le tube et mélanger par retournements successifs. Laisser décanter. La phase supérieure sera utilisée pour l'analyse chromatographique.
   B - Chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques d'acides gras.
   1. Principe.
   Séparation des différents constituants selon le principe général de la chromatographie en phase gazeuse.
   Chaque constituant est caractérisé par son temps de rétention, soit par comparaison avec un chromatogramme type ou une solution de référence, soit à l'aide des relations linéaires existant entre le volume de rétention réduit et le nombre d'atomes de carbone des constituants homologues d'une même série. On peut également utiliser des longueurs équivalentes de chaînes.
   B 1. Cas de colonnes remplies.
   Voir "Méthodes officielles d'analyse des matières grasses", annexe IV, arrêté du 24 décembre 1975, Journal officiel du 28 février 1976.    B 2. Cas des colonnes capillaires.
   1. Réactifs.
   Les réactifs doivent être de qualité analytique.
   1.1. Azote renfermant moins de 10 mg d'oxygène par kilogramme.
   1.2. Hydrogène à 99,99 p. 100 minimum exempt de produits organiques.
   1.3. Air comprimé pur et sec.
   1.4. Solution de référence : esters méthyliques d'une huile de composition connue renfermant de l'acide linoléique, préparés selon A du chapitre III (Exemple chromatogramme d'une huile de maïs joint).    2. Appareillage.
   2.1. Chromatographe comportant des volumes morts réduits au maximum.
   2.1.1. Injecteur-diviseur.
   2.1.2. Colonne capillaire en silice fondue ou en verre, longueur :

 25 à 50 mètres environ, diamètre interne : 0,25 à 0,40 mm, imprégnée d'une phase stationnaire type polyesters ou cyanosilicones (épaisseur du film 5 à 50 microns de m). Efficacité : colonne permettant de séparer convenablement l'acide oléique de l'acide linoléique.
   2.1.3. Détecteur.
   Type : ionisation de flamme.
   3. Mode opératoire.
   3.1. Réglages.
   3.1.1. Température du four : 180° C.
   3.1.2. Température de l'injecteur : 50° C au-dessus de la température du four, soit 230° C.
   3.1.3. Rapport de division de l'injecteur-diviseur : il doit se situer entre :
   1/60 et 1/90.
   3.1.4. Débit du gaz vecteur hydrogène.
   Pression d'entrée du gaz vecteur hydrogène : 0,4 bar, ce qui correspond à un débit de gaz de 1 à 2 ml/min..
   3.1.5. Débit des gaz auxiliaires hydrogène et air.
   3.1.5.1. Débit de l'hydrogène : 25 ml/min..
   3.1.5.2. Débit d'air : 350 à 400 ml/min..
   3.1.6. Température du détecteur : 230° C.
   3.2. Analyse.
   Injecter 1 micron de l de la solution de référence (1.4.).
   Injecter dans les mêmes conditions 1 micron de l de la solution représentant la phase supérieure obtenue en A point 4. Diluer si nécessaire.
   4. Expression des résultats.
   4.1. Analyse qualitative.
   L'identification de chaque constituant s'effectue à l'aide de sa distance ou de son temps de rétention, comparativement à la solution de référence.
   4.2. Analyse quantitative.
   Utiliser la méthode dite de normalisation interne, c'est-à-dire admettre que la totalité des composants de l'échantillon correspond à 100 p. 100 des constituants. Le pourcentage de chaque constituant est donné par la formule :
   p. 100 m/m du composé i = Ai / Sigma A x 100.

 où :
   Ai = aire du pic correspondant au compos i ;
   Sigma A = somme des aires de tous les pics.
   Nota - On retire de cette composition centésimale le pourcentage d'acide linoléique dans l'échantillon.