Comme d'autres jeux de la série, Mario Kart DS met en vedette des personnages de la série Mario et les oppose les uns aux autres en se disputant des karts sur des pistes basées sur des endroits de la série Mario.
Comme d'autres jeux de la série Mario Kart, Mario Kart DS implique des personnages de jeux de Mario qui s'affrontent dans des go-karts sur des pistes thématiques de la série Mario.