Les 109 ont vu pour la première fois le service opérationnel pendant la guerre civile espagnole et étaient toujours en service à l'aube de l'ère des avions à réaction à la fin de la Seconde Guerre mondiale, période au cours de laquelle elle a été la colonne vertébrale de la force de chasse de la Luftwaffe.
C'est l'avion de chasse le plus fabriqué de l'histoire.