في 10 فبراير 1525، تزوجت أخت كارلوس الصغرى كاترين ملكة النمسا (1507 – 1578) من جون الثالث ملك البرتغال وفي 11 مارس 1526، تزوج كارلوس الخامس من أخت الملك جوان إيزابيل أفيس.
On February 10, 1525 Charles V's younger sister Catherine of Austria married John III of Portugal and on March 11, 1526, Charles V married king John's sister Isabella of Portugal.