For active substances with an insecticidal mode of action or which show insecticidal activity a second species shall be tested, for example Chironomid larvae or Mysid shrimps (Americamysis bahia).
Toimeainete puhul, mis toimivad insektitsiidina või millel ilmneb insektitsiidset toimet, tehakse katse veel ühe liigiga, näiteks surusääskede vastsete või lahekrevettidega (Americamysis bahia).