ຄໍາອະທິບາຍກ່ຽວກັບຄໍາສັບຊີວະສາດໂມເລກຸນພື້ນຖານ
1. cDNA ແລະ cccDNA: cDNA ເປັນ DNA ສອງສາຍສັງເຄາະໂດຍ reverse transcriptase ຈາກ mRNA;cccDNA ເປັນ plasmid double-stranded ວົງປິດ DNA ທີ່ບໍ່ມີຈາກໂຄໂມໂຊມ.
2. ຫນ່ວຍພັບມາດຕະຖານ: ຫນ່ວຍງານໂຄງສ້າງຮອງຂອງທາດໂປຼຕີນ a-helix ແລະ B-sheet ສາມາດປະກອບເປັນຕັນໂຄງສ້າງທີ່ມີການຈັດການເລຂາຄະນິດພິເສດໂດຍຜ່ານ polypeptides ເຊື່ອມຕໍ່ຕ່າງໆ.ປະເພດຂອງການພັບທີ່ກໍານົດນີ້ມັກຈະເອີ້ນວ່າໂຄງສ້າງຮອງ super.ເກືອບທັງຫມົດໂຄງສ້າງຂັ້ນສາມສາມາດຖືກອະທິບາຍໂດຍປະເພດພັບເຫຼົ່ານີ້, ແລະແມ້ກະທັ້ງປະເພດລວມຂອງພວກເຂົາ, ດັ່ງນັ້ນພວກມັນຍັງເອີ້ນວ່າຫນ່ວຍພັບມາດຕະຖານ.
3. CAP: cyclic adenosine monophosphate (cAMP) receptor protein CRP (cAMP receptor protein), ສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນຫຼັງຈາກການປະສົມປະສານຂອງ cAMP ແລະ CRP ເອີ້ນວ່າ activating protein CAP (cAMP activated protein)
4. ລຳດັບ Palindromic: ລຳດັບການເສີມແບບປີ້ນກັບກັນຂອງສ່ວນຂອງຊິ້ນສ່ວນ DNA, ມັກຈະເປັນບ່ອນຈຳກັດຂອງເອນໄຊ.
5. micRNA: complementary interfering RNA ຫຼື antisense RNA, ເຊິ່ງປະກອບກັບລໍາດັບ mRNA ແລະສາມາດຍັບຍັ້ງການແປຂອງ mRNA.
6. Ribozyme: RNA ທີ່ມີກິດຈະກໍາ catalytic, ເຊິ່ງມີບົດບາດ autocatalytic ໃນຂະບວນການ splicing ຂອງ RNA.
7. Motif: ມີບາງເຂດທ້ອງຖິ່ນທີ່ມີຮູບຮ່າງສາມມິຕິຄ້າຍຄືກັນແລະ topology ໃນໂຄງສ້າງທາງກວ້າງຂອງໂມເລກຸນທາດໂປຼຕີນ.
8. peptide ສັນຍານ: peptide ທີ່ມີ 15-36 ອາຊິດ amino ຕົກຄ້າງຢູ່ທີ່ N-terminus ໃນລະຫວ່າງການສັງເຄາະທາດໂປຼຕີນ, ເຊິ່ງນໍາພາ transmembrane ຂອງທາດໂປຼຕີນ.
9. Attenuator: ລໍາດັບ nucleotide ລະຫວ່າງພາກພື້ນ operator ແລະ gene ໂຄງສ້າງທີ່ຢຸດການຖອດຂໍ້ຄວາມ.
10. Magic Spot: ເມື່ອເຊື້ອແບັກທີເຣັຍເຕີບໃຫຍ່ ແລະພົບກັບການຂາດອາຊິດອາມິໂນທີ່ສົມບູນ, ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍຈະຜະລິດການຕອບໂຕ້ສຸກເສີນເພື່ອຢຸດການສະແດງອອກຂອງເຊື້ອພະຍາດທັງໝົດ.ສັນຍານທີ່ສ້າງການຕອບສະຫນອງສຸກເສີນນີ້ແມ່ນ guanosine tetraphosphate (ppGpp) ແລະ guanosine pentaphosphate (pppGpp).ພາລະບົດບາດຂອງ PpGpp ແລະ pppGpp ບໍ່ພຽງແຕ່ຫນຶ່ງຫຼືຈໍານວນຫນ້ອຍ operons, ແຕ່ຜົນກະທົບຕໍ່ຈໍານວນຂະຫນາດໃຫຍ່ຂອງເຂົາເຈົ້າ, ດັ່ງນັ້ນເຂົາເຈົ້າເອີ້ນວ່າ super-regulators ຫຼືຈຸດ magic.
11. ອົງປະກອບຂອງໂປຣໂມຊັນ Upstream: ຫມາຍເຖິງລໍາດັບ DNA ທີ່ມີບົດບາດເປັນລະບຽບໃນກິດຈະກໍາຂອງຜູ້ສົ່ງເສີມເຊັ່ນ TATA ໃນພາກພື້ນ -10, TGACA ໃນພາກພື້ນ -35, ການປັບປຸງ, ແລະ attenuators.
12. DNA probe: ເປັນສ່ວນທີ່ຕິດສະຫຼາກຂອງ DNA ທີ່ມີລໍາດັບທີ່ຮູ້ຈັກ, ເຊິ່ງຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການກວດສອບລໍາດັບທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກແລະຫນ້າຈໍຂອງ genes ເປົ້າຫມາຍ.
13. ລໍາດັບ SD: ມັນເປັນລໍາດັບການຜູກມັດຂອງ ribosome ແລະ mRNA, ເຊິ່ງຄວບຄຸມການແປພາສາ.
14. Monoclonal Antibody: ພູມຕ້ານທານທີ່ເຮັດໜ້າທີ່ຕ້ານອະນຸມູນອິດສະລະອັນດຽວເທົ່ານັ້ນ.
15. Cosmid: ມັນເປັນ vector DNA exogenous ທີ່ສ້າງຂຶ້ນໂດຍປອມທີ່ຮັກສາພາກພື້ນ COS ຢູ່ທັງສອງປາຍຂອງ phage ແລະເຊື່ອມຕໍ່ກັບ plasmid.
16. ການກວດຈຸດສີຟ້າ-ສີຂາວ: LacZ gene (ເຂົ້າລະຫັດ B-galactosidase), enzyme ສາມາດ decompose substrate chromogenic X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-B-D-galactoside) ເພື່ອຜະລິດສີຟ້າ, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງເຮັດໃຫ້ສາຍພັນສີຟ້າ.ເມື່ອ DNA exogenous ໄດ້ຖືກໃສ່, gene LacZ ບໍ່ສາມາດສະແດງອອກໄດ້, ແລະສາຍພັນແມ່ນສີຂາວ, ເພື່ອກວດເບິ່ງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ປະສົມປະສານ.ອັນນີ້ເອີ້ນວ່າການກວດສີຟ້າ-ຂາວ.
17. Cis-acting ອົງປະກອບ: ລໍາດັບສະເພາະຂອງຖານໃນ DNA ທີ່ຄວບຄຸມການສະແດງອອກຂອງ gene.
18. ເອນໄຊ Klenow: ຊິ້ນສ່ວນໃຫຍ່ຂອງ DNA polymerase I, ຍົກເວັ້ນການເຄື່ອນໄຫວຂອງ exonuclease 5'3' ອອກຈາກ DNA polymerase I holoenzyme.
19. Anchored PCR: ໃຊ້ເພື່ອຂະຫຍາຍ DNA ຂອງຄວາມສົນໃຈທີ່ມີລໍາດັບທີ່ຮູ້ຈັກຢູ່ປາຍຫນຶ່ງ.ຫາງ poly-dG ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ປາຍຫນຶ່ງຂອງລໍາດັບທີ່ບໍ່ຮູ້ຈັກ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ poly-dC ແລະລໍາດັບທີ່ຮູ້ຈັກໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນ primers ສໍາລັບການຂະຫຍາຍ PCR.
20. ທາດໂປຼຕີນຈາກ Fusion: gene ຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ eukaryotic ແມ່ນເຊື່ອມຕໍ່ກັບ gene exogenous, ແລະທາດໂປຼຕີນທີ່ປະກອບດ້ວຍການແປຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ gene ຕົ້ນສະບັບແລະທາດໂປຼຕີນຈາກ exogenous ແມ່ນສະແດງອອກໃນເວລາດຽວກັນ.
ຂໍ້ກໍານົດຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນອື່ນໆ
1. ແຜນທີ່ທາງດ້ານຮ່າງກາຍຂອງ DNA ແມ່ນຄໍາສັ່ງທີ່ (ການຈໍາກັດ endonuclease-ຍ່ອຍອາຫານ) fragments ຂອງໂມເລກຸນ DNA ໄດ້ຖືກຈັດລຽງ.
2. ການແຕກແຍກຂອງ RNase ແບ່ງອອກເປັນສອງປະເພດ (autocatalysis) ແລະ (heterocatalysis).
3. ມີສາມປັດໃຈເລີ່ມຕົ້ນໃນ prokaryotes ຄື (IF-1), (IF-2) ແລະ (IF-3).
4. ທາດໂປຼຕີນຈາກ transmembrane ຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການຊີ້ນໍາ (peptides ສັນຍານ), ແລະພາລະບົດບາດຂອງ chaperones ທາດໂປຼຕີນແມ່ນ (ຊ່ວຍພັບລະບົບຕ່ອງໂສ້ peptide ເຂົ້າໄປໃນການສອດຄ່ອງພື້ນເມືອງຂອງທາດໂປຼຕີນ).
5. ອົງປະກອບໃນການສົ່ງເສີມໂດຍທົ່ວໄປສາມາດແບ່ງອອກເປັນ 2 ປະເພດຄື: (ອົງປະກອບສົ່ງເສີມຫຼັກ) ແລະ (ອົງປະກອບສົ່ງເສີມຂັ້ນຕົ້ນ).
6. ເນື້ອໃນການຄົ້ນຄວ້າຂອງຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນປະກອບມີສາມພາກສ່ວນ: (ຊີວະສາດໂມເລກຸນໂຄງສ້າງ), (ການສະແດງອອກຂອງເຊື້ອແລະລະບຽບການ), ແລະ (ເຕັກໂນໂລຊີການປະສົມ DNA).
7. ສອງການທົດລອງຫຼັກທີ່ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ DNA ເປັນວັດຖຸພັນທຸກໍາແມ່ນ (ການຕິດເຊື້ອ pneumococcus ຂອງຫນູ) ແລະ (ການຕິດເຊື້ອ T2 phage ຂອງ Escherichia coli).ທ່າແຮງ).
8. ມີສອງຄວາມແຕກຕ່າງຕົ້ນຕໍລະຫວ່າງ hnRNA ແລະ mRNA: (hnRNA ຖືກແຍກຢູ່ໃນຂະບວນການປ່ຽນເປັນ mRNA), (ປາຍ 5' ຂອງ mRNA ຖືກເພີ່ມດ້ວຍຝາອັດປາກມົດລູກ m7pGppp, ແລະມີ polyadenylation ພິເສດຢູ່ທີ່ 3'. ທ້າຍຂອງອາຊິດ mRNA (polyA) ຫາງ).
9. ຂໍ້ດີຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກຮູບແບບຫຼາຍ subunit ແມ່ນ (subunit ເປັນວິທີການປະຫຍັດສໍາລັບການນໍາໃຊ້ DNA), (ສາມາດຫຼຸດຜ່ອນຜົນກະທົບຂອງຄວາມຜິດພາດ Random ສັງເຄາະທາດໂປຼຕີນຈາກກິດຈະກໍາຂອງທາດໂປຼຕີນ), (ກິດຈະກໍາສາມາດປະສິດທິພາບຫຼາຍແລະໄວແມ່ນເປີດ. ແລະປິດ).
10. ເນື້ອໃນຕົ້ນຕໍຂອງກົນໄກການພັບທາດໂປຼຕີນຈາກທິດສະດີ nucleation ທໍາອິດປະກອບມີ (nucleation), (ການເສີມສ້າງໂຄງສ້າງ), (ການຈັດລຽງສຸດທ້າຍ).
11. Galactose ມີຜົນກະທົບສອງຢ່າງຕໍ່ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ;ໃນອີກດ້ານຫນຶ່ງ (ມັນສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເປັນແຫຼ່ງກາກບອນສໍາລັບການເຕີບໃຫຍ່ຂອງເຊນ);ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ (ມັນຍັງເປັນອົງປະກອບຂອງກໍາແພງຫີນ).ດັ່ງນັ້ນ, cAMP-CRP-independent promoter S2 ແມ່ນຈໍາເປັນສໍາລັບການສັງເຄາະຖາວອນໃນລະດັບພື້ນຖານ;ໃນເວລາດຽວກັນ, ຜູ້ສົ່ງເສີມທີ່ຂຶ້ນກັບ cAMP-CRP S1 ແມ່ນຈໍາເປັນເພື່ອຄວບຄຸມການສັງເຄາະລະດັບສູງ.ການຖອດຂໍ້ຄວາມເລີ່ມຕົ້ນຈາກ ( S2 ) ກັບ G ແລະຈາກ ( S1 ) ໂດຍບໍ່ມີ G.
12. ເທກໂນໂລຍີ DNA ປະສົມກັນຍັງເປັນທີ່ຮູ້ຈັກກັນໃນນາມ (ການໂຄລນ gene) ຫຼື (ການໂຄນໂມເລກຸນ).ເປົ້າຫມາຍສຸດທ້າຍແມ່ນ (ເພື່ອໂອນຂໍ້ມູນພັນທຸກໍາ DNA ໃນອະໄວຍະວະຫນຶ່ງໄປສູ່ອົງການຈັດຕັ້ງອື່ນ).ການທົດລອງການປະສົມພັນ DNA ປົກກະຕິໂດຍປົກກະຕິປະກອບມີຂັ້ນຕອນດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້: (1) ສະກັດ gene ເປົ້າຫມາຍ (ຫຼື gene exogenous) ຂອງອົງການຈັດຕັ້ງຜູ້ໃຫ້ທຶນ, ແລະ enzymatically ເຊື່ອມຕໍ່ມັນກັບໂມເລກຸນ DNA ອື່ນ (cloning vector) ເພື່ອສ້າງເປັນໂມເລກຸນ DNA ໃຫມ່.② ໂມເລກຸນ DNA ທີ່ປະສົມກັນໄດ້ຖືກໂອນເຂົ້າໄປໃນເຊນຜູ້ຮັບແລະຈໍາລອງຢູ່ໃນຈຸລັງຜູ້ຮັບ.ຂະບວນການນີ້ເອີ້ນວ່າການຫັນປ່ຽນ.③ ກວດສອບແລະລະບຸຈຸລັງຜູ້ຮັບເຫຼົ່ານັ້ນທີ່ໄດ້ຮັບການດູດຊຶມ DNA recombinant.④ ປູກຝັງຈຸລັງທີ່ມີ DNA ປະສົມກັນໃນປະລິມານຫຼາຍເພື່ອກວດຫາວ່າ gene ການຊ່ວຍເຫຼືອຕ່າງປະເທດສະແດງອອກຫຼືບໍ່.
13. ການຈໍາລອງ plasmid ມີ 2 ປະເພດ: ທີ່ຖືກຄວບຄຸມຢ່າງເຂັ້ມງວດໂດຍການສັງເຄາະທາດໂປຼຕີນຈາກເຊນເຊນເອີ້ນວ່າ (plasmids ແຫນ້ນ), ແລະຜູ້ທີ່ບໍ່ໄດ້ຄວບຄຸມຢ່າງເຂັ້ມງວດໂດຍການສັງເຄາະທາດໂປຼຕີນຈາກເຊນເຊນເອີ້ນວ່າ (plasmids ຜ່ອນ).
14. ລະບົບປະຕິກິລິຍາ PCR ຄວນມີເງື່ອນໄຂດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້: a.DNA primers (ປະມານ 20 ຖານ) ທີ່ມີລໍາດັບເສີມຢູ່ແຕ່ລະປາຍຂອງສອງ strands ຂອງ gene ເປົ້າຫມາຍທີ່ຈະແຍກອອກ.ຂ.Enzymes ທີ່ມີຄວາມຫມັ້ນຄົງດ້ານຄວາມຮ້ອນເຊັ່ນ: TagDNA polymerase.c, dNTPd, ລໍາດັບ DNA ຂອງຄວາມສົນໃຈເປັນແມ່ແບບ
15. ຂະບວນການປະຕິກິລິຍາພື້ນຖານຂອງ PCR ປະກອບມີສາມຂັ້ນຕອນ: (denaturation), (annealing), ແລະ (ການຂະຫຍາຍ).
16. ຂະບວນການພື້ນຖານຂອງສັດປ່ຽນພັນທຸກໍາໂດຍປົກກະຕິແລ້ວປະກອບມີ: ①ການນໍາເຊື້ອພັນທຸກໍາຕ່າງປະເທດທີ່ໂຄນເຂົ້າໄປໃນແກນຂອງໄຂ່ທີ່ໃສ່ປຸ໋ຍ ຫຼືຈຸລັງລໍາຕົ້ນຂອງຕົວອ່ອນ;②ການປູກເອົາໄຂ່ທີ່ໃສ່ປຸ໋ຍທີ່ບໍ່ມີເຊື້ອຫຼືຈຸລັງລໍາຕົ້ນຝັງຕົວເຂົ້າໄປໃນ uterus ຂອງແມ່ຍິງ;③ການພັດທະນາຂອງ embryonic ທີ່ສົມບູນແລະການຂະຫຍາຍຕົວສໍາລັບລູກຫລານທີ່ມີພັນທຸກໍາຕ່າງປະເທດ;④ ໃຊ້ສັດເຫຼົ່ານີ້ທີ່ສາມາດຜະລິດທາດໂປຼຕີນຈາກຕ່າງປະເທດເປັນຫຼັກຊັບການປັບປຸງພັນເພື່ອສາຍພັນ homozygous ໃຫມ່.
17. ເສັ້ນຈຸລັງ Hybridoma ຖືກສ້າງຂຶ້ນໂດຍການປະສົມ (spleen B) ຈຸລັງທີ່ມີ (myeloma) ຈຸລັງ, ແລະນັບຕັ້ງແຕ່ (ຈຸລັງ spleen) ສາມາດນໍາໃຊ້ hypoxanthine ແລະ (ຈຸລັງກະດູກ) ສະຫນອງຫນ້າທີ່ການແບ່ງຈຸລັງ, ພວກມັນສາມາດປູກຢູ່ໃນຂະຫນາດກາງ HAT.ເຕີບໃຫຍ່.
18. ດ້ວຍການຄົ້ນຄວ້າຢ່າງເລິກເຊິ່ງ, ລຸ້ນທຳອິດຂອງພູມຕ້ານທານເອີ້ນວ່າ (ພູມຕ້ານທານ polyclonal), ລຸ້ນທີສອງ (ພູມຕ້ານທານ monoclonal), ແລະລຸ້ນທີ 3 (ພູມຕ້ານທານທາງພັນທຸກໍາ).
19. ໃນປັດຈຸບັນ, ວິສະວະກໍາພັນທຸກໍາຂອງເຊື້ອໄວຣັສແມງໄມ້ແມ່ນສຸມໃສ່ການ baculovirus ຕົ້ນຕໍ, ເຊິ່ງສະແດງອອກໃນການນໍາ (gene toxin exogenous);(ພັນທຸກໍາທີ່ລົບກວນວົງຈອນຊີວິດປົກກະຕິຂອງແມງໄມ້);(ການດັດແກ້ຂອງເຊື້ອໄວຣັສ).
20. ປັດໄຈທາດໂປຼຕີນທີ່ເຮັດໜ້າທີ່ຂ້າມຜ່ານທີ່ສອດຄ້ອງກັບອົງປະກອບທົ່ວໄປ TATA, GC, ແລະ CAAT ໃນສັດລ້ຽງລູກດ້ວຍນົມແມ່ຂອງ RNA polymerase II ແມ່ນ (TFIID), (SP-1) ແລະ (CTF/NF1), ຕາມລໍາດັບ.
ຊາວເອັດ.ປັດໄຈການຖອດຂໍ້ຄວາມພື້ນຖານຂອງ RNA polymerase Ⅱແມ່ນ, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, ແລະລໍາດັບການຜູກມັດຂອງພວກມັນແມ່ນ: (D, A, B, E).ໃນນັ້ນ, ຫນ້າທີ່ຂອງ TFII-D ແມ່ນ (ຜູກມັດກັບກ່ອງ TATA).
ຊາວສອງ.ປັດໃຈການຖອດຂໍ້ຄວາມສ່ວນໃຫຍ່ທີ່ຜູກມັດກັບ DNA ເຮັດວຽກໃນຮູບແບບຂອງ dimers.ໂດເມນທີ່ເປັນປະໂຫຍດຂອງປັດໃຈການຖອດຂໍ້ຄວາມທີ່ຜູກມັດກັບ DNA ໂດຍທົ່ວໄປແມ່ນຕໍ່ໄປນີ້ (helix-turn-helix), (zinc finger motif), (basic-leucine) zipper motif).
ຊາວສາມ.ມີສາມປະເພດຂອງການຈໍາກັດ endonuclease cleavage modes: (ຕັດຢູ່ດ້ານ 5 'ຂອງແກນ symmetry ເພື່ອສ້າງ 5' ສົ້ນຫນຽວ), (ຕັດຢູ່ທີ່ 3' ຂ້າງຂອງແກນ symmetry ເພື່ອສ້າງ 3' ປາຍຫນຽວ (ຕັດຢູ່ທີ່. ແກນ symmetry ເພື່ອສ້າງພາກສ່ວນຮາບພຽງ).
ຊາວສີ່.Plasmid DNA ມີສາມການຕັ້ງຄ່າທີ່ແຕກຕ່າງກັນ: (SC configuration), (oc configuration), (L configuration).ທໍາອິດໃນ electrophoresis ແມ່ນ (SC configuration).
25. ລະບົບການສະແດງອອກຂອງ gene exogenous, ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນ (Escherichia coli), (ເຊື້ອລາ), (ແມງໄມ້) ແລະ (ຕາຕະລາງຈຸລັງ Mammalian).
26. ວິທີການທີ່ໃຊ້ກັນທົ່ວໄປສໍາລັບສັດປ່ຽນພັນແມ່ນ: (ວິທີການຕິດເຊື້ອ retroviral), (ວິທີ DNA microinjection), (ວິທີການ embryonic stem cell).
ການນຳໃຊ້ຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນ
1. ຕັ້ງຊື່ໜ້າທີ່ຂອງ RNA ຫຼາຍກວ່າ 5 ອັນ?
Transfer RNA tRNA Transfer amino acid Ribosome RNA rRNA Ribosome constitutes messenger RNA mRNA Protein synthesis template Heterogeneous nuclear RNA hnRNA Precursor of mRNA mature nuclear RNA snRNA ຂະຫນາດນ້ອຍມີສ່ວນຮ່ວມໃນ hnRNA splicing ທາດໂປຼຕີນຈາກຂະຫນາດນ້ອຍ cytoplasmic RNA-sclo-nrna-sclo-nrna-scaltic-rNA-scultic ແລະ 7. ອົງປະກອບຂອງຮ່າງກາຍ Antisense RNA anRNA/micRNA ຄວບຄຸມການສະແດງອອກຂອງ gene Ribozyme RNA ທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວຂອງ Enzymatically RNA
2. ຄວາມແຕກຕ່າງຕົ້ນຕໍລະຫວ່າງຜູ້ສົ່ງເສີມ prokaryotic ແລະ eukaryotic ແມ່ນຫຍັງ?
Prokaryotic TTGACA---TATAAT------ສະຖານທີ່ລິເລີ່ມ-35 -10 Eukaryotic Enhancer---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-ສະຖານທີ່ລິເລີ່ມ-110 -70 -25
3. ລັກສະນະຕົ້ນຕໍຂອງການກໍ່ສ້າງປອມຂອງ plasmids ທໍາມະຊາດແມ່ນຫຍັງ?
plasmids ທໍາມະຊາດມັກຈະມີຂໍ້ບົກພ່ອງ, ດັ່ງນັ້ນພວກມັນບໍ່ເຫມາະສົມສໍາລັບການນໍາໃຊ້ເປັນສາຍພັນສໍາລັບວິສະວະກໍາພັນທຸກໍາ, ແລະຕ້ອງໄດ້ຮັບການດັດແປງແລະກໍ່ສ້າງ: a.ເພີ່ມພັນທຸກໍາຂອງເຄື່ອງຫມາຍການເລືອກທີ່ເຫມາະສົມ, ເຊັ່ນ: ສອງຫຼືຫຼາຍກວ່ານັ້ນ, ທີ່ງ່າຍຕໍ່ການນໍາໃຊ້ສໍາລັບການຄັດເລືອກ, ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວແມ່ນພັນທຸກໍາຂອງຢາຕ້ານເຊື້ອ.ຂ.ເພີ່ມຫຼືຫຼຸດລົງສະຖານທີ່ຕັດ enzyme ທີ່ເຫມາະສົມເພື່ອຄວາມສະດວກໃນການປະສົມໃຫມ່.ຄ.ຫຼຸດຄວາມຍາວ, ຕັດຊິ້ນສ່ວນທີ່ບໍ່ຈໍາເປັນ, ປັບປຸງປະສິດທິພາບການນໍາເຂົ້າແລະເພີ່ມຄວາມສາມາດໃນການໂຫຼດ.ງ.ປ່ຽນການພິມຈໍາໜ່າຍ, ຈາກແໜ້ນຫາວ່າງ, ຈາກສຳເນົາໜ້ອຍລົງໄປເປັນຫຼາຍສະບັບ.e.ເພີ່ມອົງປະກອບທາງພັນທຸກໍາພິເສດຕາມຄວາມຕ້ອງການພິເສດຂອງວິສະວະກໍາພັນທຸກໍາ
4. ໃຫ້ຕົວຢ່າງຂອງວິທີການກວດຄວາມແຕກຕ່າງຂອງ cDNA ສະເພາະເນື້ອເຍື່ອບໍ?
ປະຊາກອນສອງຈຸລັງໄດ້ຖືກກະກຽມ, gene ເປົ້າຫມາຍສະແດງອອກຫຼືສະແດງອອກສູງໃນຫນຶ່ງຂອງຈຸລັງ, ແລະ gene ເປົ້າຫມາຍບໍ່ໄດ້ຖືກສະແດງອອກຫຼືສະແດງອອກຕ່ໍາໃນເຊນອື່ນ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ gene ເປົ້າຫມາຍໄດ້ຖືກພົບເຫັນໂດຍການປະສົມແລະການປຽບທຽບ.ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, ໃນລະຫວ່າງການປະກົດຕົວແລະການພັດທະນາຂອງເນື້ອງອກ, ຈຸລັງ tumor ຈະນໍາສະເຫນີ mRNAs ທີ່ມີລະດັບການສະແດງອອກທີ່ແຕກຕ່າງກັນກ່ວາຈຸລັງປົກກະຕິ.ດັ່ງນັ້ນ, ພັນທຸ ກຳ ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບເນື້ອງອກສາມາດຖືກກວດສອບໂດຍການປະສົມຄວາມແຕກຕ່າງ.ວິທີການ induction ຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກວດກາເບິ່ງພັນທຸກໍາທີ່ມີການສະແດງອອກແມ່ນ induced.
5. ການສ້າງ ແລະ ການກວດສອບສາຍເຊລ hybridoma?
ຈຸລັງ Spleen B + ຈຸລັງ myeloma, ເພີ່ມ polyethylene glycol (PEG) ເພື່ອສົ່ງເສີມການ fusion ຂອງເຊນ, ແລະຈຸລັງ splenic B-myeloma fusion ຂະຫຍາຍຕົວຢູ່ໃນຂະຫນາດກາງ HAT (ປະກອບດ້ວຍ hypoxanthine, aminopterin, T) ສືບຕໍ່ຂະຫຍາຍການບໍາລຸງລ້ຽງ.ຈຸລັງ fusion ປະກອບມີ: spleen-spleen fusion cells: ບໍ່ສາມາດເຕີບໂຕໄດ້, ຈຸລັງ spleen ບໍ່ສາມາດປູກຝັງຢູ່ໃນ vitro.ຈຸລັງ fusion ກະດູກ: ບໍ່ສາມາດໃຊ້ hypoxanthine, ແຕ່ສາມາດສັງເຄາະ purine ຜ່ານທາງທີສອງໂດຍໃຊ້ folate reductase.Aminopterin inhibits folate reductase ແລະດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງບໍ່ສາມາດເຕີບໂຕໄດ້.ຈຸລັງ fusion ກະດູກ - spleen: ສາມາດເຕີບໂຕໃນ HAT, ຈຸລັງ spleen ສາມາດນໍາໃຊ້ hypoxanthine, ແລະຈຸລັງກະດູກສະຫນອງການແບ່ງຈຸລັງ.
6. ຫຼັກການແລະວິທີການກໍານົດໂຄງສ້າງຫຼັກຂອງ DNA ໂດຍວິທີການສິ້ນສຸດຂອງ dideoxy terminal (Sanger method) ແມ່ນຫຍັງ?
ຫຼັກການແມ່ນໃຊ້ຕົວສິ້ນສຸດລະບົບຕ່ອງໂສ້ nucleotide—2,,3,-dideoxynucleotide ເພື່ອຢຸດການຂະຫຍາຍຂອງ DNA.ເນື່ອງຈາກມັນຂາດ 3-OH ທີ່ຕ້ອງການສໍາລັບການສ້າງຕັ້ງພັນທະບັດ 3/5 / phosphodiester, ເມື່ອຖືກລວມເຂົ້າໃນລະບົບຕ່ອງໂສ້ DNA, ລະບົບຕ່ອງໂສ້ DNA ບໍ່ສາມາດຂະຫຍາຍອອກໄປຕື່ມອີກ.ອີງຕາມຫຼັກການຂອງການຈັບຄູ່ພື້ນຖານ, ທຸກຄັ້ງທີ່ DNA polymerase ຕ້ອງການ dNMP ເພື່ອເຂົ້າຮ່ວມໃນລະບົບຕ່ອງໂສ້ DNA ຂະຫຍາຍປົກກະຕິ, ມີສອງຄວາມເປັນໄປໄດ້, ຫນຶ່ງແມ່ນການມີສ່ວນຮ່ວມໃນ ddNTP, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ການຢຸດເຊົາການຂະຫຍາຍຕ່ອງໂສ້ deoxynucleotide;ອີກອັນຫນຶ່ງແມ່ນການມີສ່ວນຮ່ວມໃນ dNTP, ດັ່ງນັ້ນລະບົບຕ່ອງໂສ້ DNA ຍັງສາມາດສືບຕໍ່ຂະຫຍາຍຈົນກ່ວາ ddNTP ຕໍ່ໄປຈະຖືກລວມເຂົ້າ.ອີງຕາມວິທີການນີ້, ກຸ່ມຂອງຊິ້ນ DNA ທີ່ມີຄວາມຍາວແຕກຕ່າງກັນທີ່ສິ້ນສຸດດ້ວຍ ddNTP ສາມາດໄດ້ຮັບ.ວິທີການແມ່ນແບ່ງອອກເປັນສີ່ກຸ່ມຕາມລໍາດັບ ddAMP, ddGMP, ddCMP, ແລະ ddTMP.ຫຼັງຈາກປະຕິກິລິຍາ, electrophoresis polyacrylamide gel ສາມາດອ່ານລໍາດັບ DNA ຕາມແຖບລອຍ.
7. ຜົນກະທົບທາງບວກຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ activator (CAP) ໃນການຖອດຂໍ້ຄວາມແມ່ນຫຍັງ?
Cyclic adenylate (cAMP) receptor protein CRP (cAMP receptor protein), ສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ເກີດຂື້ນໂດຍການລວມກັນຂອງ cAMP ແລະ CRP ເອີ້ນວ່າ CAP (cAMPactivated protein).ເມື່ອ E. coli ເຕີບໃຫຍ່ຢູ່ໃນຂະຫນາດກາງທີ່ຂາດແຄນ glucose, ການສັງເຄາະ CAP ເພີ່ມຂຶ້ນ, ແລະ CAP ມີຫນ້າທີ່ກະຕຸ້ນການສົ່ງເສີມເຊັ່ນ lactose (Lac).ບາງຜູ້ສົ່ງເສີມທີ່ຂຶ້ນກັບ CRP ຂາດຄຸນສົມບັດລໍາດັບພາກພື້ນ -35 ປົກກະຕິ (TTGACA) ທີ່ຜູ້ສົ່ງເສີມທົ່ວໄປມີ.ດັ່ງນັ້ນ, ມັນເປັນການຍາກສໍາລັບ RNA polymerase ທີ່ຈະຜູກມັດກັບມັນ.ການປະກົດຕົວຂອງ CAP (ຫນ້າທີ່): ສາມາດປັບປຸງການຜູກມັດຄົງທີ່ຂອງ enzyme ແລະໂປໂມຊັ່ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ.ມັນສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນສະແດງໃຫ້ເຫັນສອງລັກສະນະດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້: ① CAP ຊ່ວຍໃຫ້ໂມເລກຸນ enzyme ເພື່ອທິດທາງຢ່າງຖືກຕ້ອງໂດຍການປ່ຽນແປງການສອດຄ່ອງຂອງໂປໂມຊັ່ນແລະປະຕິສໍາພັນກັບ enzyme ໄດ້, ເພື່ອສົມທົບກັບພາກພື້ນ -10 ແລະມີບົດບາດໃນການທົດແທນການທໍາງານຂອງ. -35 ພາກພື້ນ.②CAP ຍັງສາມາດຍັບຍັ້ງການຜູກມັດຂອງ RNA polymerase ກັບສະຖານທີ່ອື່ນໆໃນ DNA, ດັ່ງນັ້ນການເພີ່ມຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການຜູກມັດກັບຕົວສົ່ງເສີມສະເພາະຂອງມັນ.
8. ຂັ້ນຕອນໃດແດ່ທີ່ຖືກລວມເຂົ້າໃນການທົດລອງການປະສົມ DNA ປົກກະຕິ?
ກ.ສະກັດ gene ເປົ້າຫມາຍ (ຫຼື gene exogenous) ຂອງອົງການຈັດຕັ້ງຜູ້ໃຫ້ທຶນ, ແລະ enzymatically ເຊື່ອມຕໍ່ມັນກັບໂມເລກຸນ DNA ອື່ນ (cloning vector) ເພື່ອສ້າງເປັນໂມເລກຸນ DNA ໃຫມ່.ຂ.ໂອນໂມເລກຸນ DNA ທີ່ປະສົມເຂົ້າກັນເຂົ້າໄປໃນເຊນຜູ້ຮັບ ແລະເຮັດເລື້ມຄືນ ແລະຮັກສາມັນຢູ່ໃນຈຸລັງຜູ້ຮັບ.ຂະບວນການນີ້ເອີ້ນວ່າການຫັນປ່ຽນ.ຄ.ກວດສອບແລະລະບຸຈຸລັງຜູ້ຮັບເຫຼົ່ານັ້ນທີ່ໄດ້ຮັບການດູດຊຶມ DNA recombinant.ງ.ວັດທະນະທໍາມະຫາຊົນຂອງຈຸລັງທີ່ມີ DNA ປະສົມເພື່ອກວດພົບວ່າເຊື້ອການຊ່ວຍເຫຼືອຕ່າງປະເທດສະແດງອອກ.
9. ການກໍ່ສ້າງຫ້ອງສະຫມຸດ gene ສາມວິທີການສໍາລັບການຄັດເລືອກຂອງ recombinants ໄດ້ຖືກມອບໃຫ້ແລະຂະບວນການໄດ້ຖືກອະທິບາຍໂດຍຫຍໍ້.
ການກວດຫາການຕ້ານເຊື້ອຢາຕ້ານເຊື້ອ, inactivation inactivation ຂອງຄວາມຕ້ານທານ, ການກວດຈຸດສີຟ້າສີຂາວຫຼື PCR, ການກວດສອບຄວາມແຕກຕ່າງ, DNA probe vectors cloning ສ່ວນໃຫຍ່ມີ genes ຕ້ານຢາຕ້ານເຊື້ອ (anti-ampicillin, tetracycline).ເມື່ອ plasmid ຖືກໂອນເຂົ້າໄປໃນ Escherichia coli, ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍຈະໄດ້ຮັບຄວາມຕ້ານທານ, ແລະຜູ້ທີ່ບໍ່ມີການຖ່າຍທອດຈະບໍ່ມີຄວາມຕ້ານທານ.ແຕ່ມັນບໍ່ສາມາດຈຳແນກໄດ້ວ່າໄດ້ຖືກຈັດຕັ້ງຄືນໃໝ່ຫຼືບໍ່.ໃນ vector ທີ່ປະກອບດ້ວຍສອງພັນທຸ ກຳ ທີ່ຕ້ານທານ, ຖ້າຊິ້ນ DNA ຕ່າງປະເທດຖືກໃສ່ເຂົ້າໄປໃນພັນທຸກໍາອັນໃດອັນ ໜຶ່ງ ແລະເຮັດໃຫ້ gene ຖືກກະຕຸ້ນ, ການຄວບຄຸມແຜ່ນສອງອັນທີ່ບັນຈຸຢາທີ່ແຕກຕ່າງກັນສາມາດຖືກ ນຳ ໃຊ້ເພື່ອກວດເບິ່ງສານປະສົມໃນທາງບວກ.ສໍາລັບຕົວຢ່າງ, pUC plasmid ປະກອບດ້ວຍ gene LacZ (ການເຂົ້າລະຫັດ B-galactosidase), ເຊິ່ງສາມາດ decompose substrate chromogenic X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-B-D-galactoside) ເພື່ອຜະລິດສີຟ້າ, ດັ່ງນັ້ນ. ປ່ຽນເປັນສີຟ້າ.ເມື່ອ DNA ຕ່າງປະເທດຖືກໃສ່, gene LacZ ບໍ່ສາມາດສະແດງອອກໄດ້, ແລະສາຍພັນແມ່ນສີຂາວ, ເພື່ອກວດເບິ່ງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍທີ່ປະສົມກັນ.
10. ອະທິບາຍຂະບວນການພື້ນຖານຂອງການໄດ້ຮັບສັດປ່ຽນພັນທຸກໍາໂດຍຜ່ານຈຸລັງລໍາຕົ້ນຂອງ embryonic?
ຈຸລັງ embryonic stem cells (ES) ແມ່ນຈຸລັງ embryonic ໃນລະຫວ່າງການພັດທະນາຂອງ embryonic, ເຊິ່ງສາມາດລ້ຽງລູກດ້ວຍທຽມແລະ proliferated ແລະມີຫນ້າທີ່ຂອງຄວາມແຕກຕ່າງຂອງຈຸລັງປະເພດອື່ນໆ.ວັດທະນະທໍາຂອງຈຸລັງ ES: ມະຫາຊົນຈຸລັງພາຍໃນຂອງ blastocyst ຖືກແຍກອອກແລະວັດທະນະທໍາ.ເມື່ອ ES ໄດ້ຖືກລ້ຽງຢູ່ໃນຊັ້ນທີ່ບໍ່ມີ feeder, ມັນຈະແຕກຕ່າງກັນເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງທີ່ເຮັດວຽກຕ່າງໆເຊັ່ນ: ຈຸລັງກ້າມຊີ້ນແລະຈຸລັງ N.ເມື່ອປູກຝັງຢູ່ໃນຂະຫນາດກາງທີ່ມີ fibroblasts, ES ຈະຮັກສາຫນ້າທີ່ຄວາມແຕກຕ່າງ.ES ສາມາດຖືກດັດແປງພັນທຸກໍາ, ແລະຫນ້າທີ່ຄວາມແຕກຕ່າງຂອງມັນສາມາດຖືກລວມເຂົ້າກັນໄດ້ໂດຍບໍ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ການທໍາງານຂອງຄວາມແຕກຕ່າງຂອງມັນ, ເຊິ່ງແກ້ໄຂບັນຫາຂອງການເຊື່ອມໂຍງແບບສຸ່ມ.ນໍາເອົາພັນທຸກໍາທີ່ເກີດອອກມາເປັນຈຸລັງລໍາຕົ້ນຂອງຕົວອ່ອນ, ຫຼັງຈາກນັ້ນນໍາໄປຝັງເຂົ້າໄປໃນມົດລູກຂອງໜູທີ່ຖືພາ, ພັດທະນາເປັນລູກ, ແລະຂ້າມເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຮອກແລະຫນູທີ່ເປັນ homozygous.