Mary sündis 8. detsembril 1542 Šotimaa Linlithgow palees kuningas James V ja tema prantsuse teise naise Mary of Guise'i lapsena. Ta oli Inglismaa kuninga Henry VIII vanavennapoeg, sest tema vanaema, Margaret Tudor, oli Henry VIII õde. 14. detsembril, kuus päeva pärast tema sündi, sai ta Šotimaa kuningannaks, kui tema isa suri, võib-olla Solway Mossi lahingus toimunud närvisõnnetuse tagajärjel või saastunud vee joomise tagajärjel kampaanias. Populaarne lugu, mille esmakordselt kirjutas John Knox, ütleb, et James, kuulnud, et tema naine oli sünnitanud tütrele, kuulutas: "See on jõhker ja see on tema abikaasa, kes ei elanud enne ja oli ainus seaduslik laps James'ist, kes jäi ellu.
kroon